本发明涉及中草药活性成分和药物
技术领域：
：，更具体地，涉及一种野菊花提取物及其制备方法和在制备治疗鼻咽癌药物中的应用。
背景技术：
：：鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，npc)是我国华南地区一种高发的恶性肿瘤疾病，在全国癌症人群中约占18％。鼻咽癌的形成可能与eb病毒(epstein-barrvirus，ebv)感染、环境因素和遗传因素有关。临床表现为头痛、听力下降、鼻塞和涕中带血等。鼻咽癌的治疗主要以放射治疗为主，常辅以化学药物联合治疗，化疗常用广谱抗肿瘤药物，如5-氟尿嘧啶、顺铂和吉西他滨等。但是，放疗与化疗会给病人带来许多的副反应，如头痛、口干和发热，心脏和肾脏毒性等，严重影响了人们的生活质量。而且，鼻咽癌治疗常出现局部复发和鼻咽癌细胞易向远端转移现象。天然产物是药物研发过程中先导化合物的重要来源。国内外已经报道了一些天然化合物具有抗鼻咽癌活性，包括生物碱、三萜、黄酮类等。野菊花为菊科菊属多年生草本植物野菊(chrysanthemumindicuml.)的干燥头状花序，其野生资源比较丰富。广泛分布于我国东北、华北、西北、华东、西南等地。现代研究表明，野菊花主要含有挥发油、黄酮、萜类和有机酸等化学成分，具有广谱抗菌、抗病毒、降压等活性。本发明报道一种野菊花提取物的抗鼻咽癌活性。技术实现要素：本发明目的之一是提供一种野菊花提取物。本发明的另一目的在于提供上述野菊花提取物的制备方法。本发明的再一目的在于提供上述野菊花提取物在制备治疗鼻咽癌药物中的应用。本发明采用以下技术方案实现上述技术目的：一种野菊花提取物，所述野菊花提取物的结构式如式(i)和式(ii)所示：其中，r1为氢、羟基或c1～c5饱和或不饱和烷基，其中r1中的氢可被氰基、硝基、羧基、酰胺或酯取代，r2为氢、羟基或c1～c5饱和或不饱和烷基，其中r2中的氢可被氰基、硝基、羧基、酰胺或酯取代，r3为氢、羟基或c1～c5饱和或不饱和烷基。作为一种优选的技术方案，r1为氢、羟基或c1～c5饱和烷基，其中r1中的氢可被-co-r’取代，r’为c1～c5饱和烷基或c1～c5不饱和烷基；r2为氢、羟基或c1～c5饱和或不饱和烷基，其中r2中的氢可被-co-r’取代，r’为c1～c5饱和烷基或c1～c5不饱和烷基。作为一种优选的技术方案，不饱和烷基为烯基。作为一种优选的技术方案，r’为-c(ch3)＝ch(ch3)或-ch＝c(ch3)2。作为一种优选的技术方案，当所述野菊花提取物为式(i)所示结构式时，r1为氢、羟基或c1～c3饱和烷基，其中r1中的氢可被-co-r’取代，r’为-c(ch3)＝ch(ch3)或-ch＝c(ch3)2；r2为氢、羟基或c1～c3饱和烷基，其中r2中的氢可被-co-r’取代，r’为-c(ch3)＝ch(ch3)或-ch＝c(ch3)2，r3为h、c1～c3饱和烷基或＝ch2。作为一种优选的技术方案，当所述野菊花提取物为式(ii)所示结构式时，r1为氢、羟基或c1～c3饱和烷基，其中r1中的氢可被-co-r’取代，r’为-c(ch3)＝ch(ch3)或-ch＝c(ch3)2；r2为h、c1～c3饱和烷基或＝ch2。作为一种优选，所述野菊花提取物为如下结构式中的一种：本发明同时提供所述野菊花提取物的制备方法，所述制备方法为：将野菊花地上部分，晒干，粉碎，用95％乙醇水室温浸提四次，每次72小时，合并浓缩液，用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯部分浸膏。乙酸乙酯部分过正相硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯分别按百分比10:0、9:1、4:1、2:1、0:1过柱，馏分再经反复分离得到。本发明同时保护所述野菊花提取物在制备防治鼻咽癌药物中的应用。进一步地，所述药物还包括制药学上可接受的载体或辅料。本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。所述药物组合物优选含有重量比为0.1～99％的活性成分即本发明化合物式(i)和式(ii)，最优选含有重量比为0.5～90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～10mg/kg体重，优选0.1～5mg/kg体重。可以一次或多次使用。相对于现有技术，本发明具有如下的优点及效果：本发明提供的野菊花提取物对于抑制鼻咽癌细胞的生长具有明显的效果，且能将鼻咽癌细胞hone-1阻滞在g2/m期，并能诱导鼻咽癌细胞凋亡，成分安全可靠，可应用于制备治疗鼻咽癌的药物。附图说明图1为化合物5对鼻咽癌hone-1细胞凋亡影响结果。图2为化合物5对鼻咽癌hone-1细胞周期阻滞实验结果。图3为本发明方法分离所得化合物结构图。图4为化合物1的nmr谱图中关键的1h-1h的cosyhmbc和noesy关系图。图5为化合物1的单晶结构图。图6为化合物2，10和12的实验及计算ecd图谱。图7为化合物7,10-12中nmr谱图中关键的1h-1h的cosyhmbc和noesy关系图。具体实施方式以下结合具体实施例和附图来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
：常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。实施例1：从野菊花(chrysanthemumindicum)中制备化合物式(i)和式(ii)的方法：1、野菊花(chrysanthemumindicum)地上部分(6kg)，晒干，粉碎，95％乙醇水室温浸提四次，每次72小时，合并浓缩液，得粗提物(700g)，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯(300g)部分直接经硅胶柱层析(2500g，200-300目，7.0×100cm)，石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱(10:0、9:1、4:1、2:1、0:1)，每500ml收集一份，tlc检测合并相同部分，共得到5个流分fr.a-e。2、fr.d(30g)部分经c18反向柱分离得到fr.d1-d3三个流分。其中，fr.d1组分经硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯(4:1-1:1)洗脱，得到5个流分fr.d1a-d1e。fr.d1a部分通过半制备液相分离得到式(ii)8(1g),9(600mg).fr.d1a部分通过半制备液相分离得到式(ii)17(162mg)。3、fr.d2经石油醚-乙酸乙酯(5:1-1:1，v/v)洗脱，得到4个流分fr.d2a-d2d。fr.d2d经半制备液相分离得到式(ii)16(5mg)。4、fr.e(100g)部分经c18反相柱柱层析(meoh/h2o,50％→100％)得到fr.e1-e3。fr.e1用石油醚-乙酸乙酯(4:1-1:2，v/v)洗脱，得到3个流分fr.e1a-e1c。fr.e1a经sephadexlh-20，用二氯甲烷-甲醇(1:1)洗脱得fr.e1a-1-fr.e1a-3。fr.e1a-1经半制备液相分离得到式(ii)10(29.5mg),11(24.3mg)和12(15mg)。fr.e1a-2经半制备液相分离得到式(ii)7(15mg)和15(34.3mg)。fr.e2用石油醚-乙酸乙酯(4:1-1:2，v/v)洗脱，得到5个流分fr.e2a-e2e。fr.e2b经sephadexlh-20，用二氯甲烷-甲醇(1:1)洗脱得fr.e2b′，通过半制备液相分离得到式(i)1(9mg),2(11mg),3(10.8mg),4(7mg),5(24.4mg),6(181mg),13(10mg),14(5mg)。结构式如式(i)和式(ii)所示。新化合物结构鉴定：表1：新化合物1-4的核磁数据表2.新化合物5-8的核磁数据表3.新化合物9-12的核磁数据化合物1为无色晶体，根据质谱给出的加钠离子峰533.2507[m+na]+(calcd.forc30h38o7na,533.2510)，推测分子式为c30h38o7，不饱和度为12。化合物1的红外光谱表明存在羟基(3414cm-1)、羰基(1767,1736cm-1)和双键(1459cm-1)。化合物1的氢谱和碳谱图谱(表1)揭示，化合物结构中含有30个碳，包括4个甲基(δh1.26,1.27,1.43和1.84)，3个含氧次甲基(δc/h68.7/4.04,79.6/3.84,80.5/4.14)，2个含氧叔碳(δc73.4和75.7)，一个环外双键[δh5.32,d,j＝3.2hz,6.04,overlap；δc118.8]，2个羰基碳(δc171.2和179.5)。根据已报道的野菊中化学结构类型，推测化合物1是一个愈创木烷型倍半萜二聚体。通过一维和二维核磁图谱分析，化合物1与从凤毛菊中分离得到的deacetylhandelin具有相同的平面结构。noesy谱中，h-7/h-5,h-5/h-1,h-6/h-8,h-8/h2-13,h3-15′/h-6′和h-5′/h-7′有相关，表明h-1,h-5,h-7,h-5′和h-7′处于同一平面，定为α朝向，则h-6,h-8,h2-13,h-6′和h3-15′为β朝向。通过在甲醇/水中培养得到的单晶，借助x-射线单晶衍射确定了其绝对构型为1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r,1′r,4′r,5′s,6′s,7′s,10′r。根据质谱给出的加钠离子峰633.3046[m+na]+(calcd.forc35h46o9na,633.3034)，得出化合物2的分子式为c35h46o9。通过分析核磁数据发现化合物2与化合物1的结构很相似，化合物2中没有环外双键，多了一个双峰甲基和一个tigloyl侧链取代基[δh1.79,d(j＝7.2hz),1.82,s,6.85,m；δc167.1,128.6,138.7,14.8和12.3]。通过hmbc谱中h-8′(δh5.13)与c-1″(δc167.1)及c-11′(δc42.4)相关，说明tigloyl单元连在c-8′位。1h-1hcosy谱中，h-11′与h-7′/h3-13′相关以及hmbc谱中h3-13′(δh1.14,d,j＝7.2hz)/c-12′(δc178.8)和h3-13′(δh1.14)/c-7′(δc51.1)相关信号均表明甲基连在c-11′位。通过noesy谱中h-7/h-5,h-5/h-1,h-6/h-8,h-8/h2-13,h3-15′/h-6′,h-8′/h-6′,h3-13′/h-7′,h-11′/h-8′和h-5′/h-7′的相关信号，表明化合物2的相对构型为rel-1r,5r,6r,7r,8s,11r,1′r,4′r,5′s,6′r,-7′r,8′s,11′s，再结合其实验ecd和计算ecd图谱，证实该化合物绝对构型为1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r,1′r,4′r,5′s,6′r,7′r,8′s,10′r,11′s。化合物3，取名8'-tigloylchrysanolided，通过质谱确定其分子式为c35h44o9。通过比较化合物3与2的核磁数据发现，化合物3中除了多了一个环外双键(δh5.34,d,j＝3.2hz；6.06,d,j＝3.2hz；δc120.7)以及少了一个双峰甲基(δh1.14,d,j＝7.2hz；δc14.8)，其余都几乎一样。通过hmbc图谱中h2-13′(δh5.34,6.06)与c-7′(δc51.1)及c-12′(δc170.1)相关，确定该环外双键位于c-11′。同样，通过noesy相关信号h-7/h-5,h-5/h-1,h-6/h-8,h-8/h2-13,h3-15′/h-6′,h-8′/h-6′,和h-5′/h-7′确定了该化合物的相对构型为rel-1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r,1′r,4′r,5′s,6′r,7′r,8′s,10′r。化合物4(8-angeloyl-8'-hydroxychrysanolided)的分子式可通过质谱碎片离子峰m/z631.2890[m+na]+(calcd.forc35h44o9na,631.2878)确定为c35h44o9.其核磁数据与化合物3非常相似，不同点在于化合物4中侧链取代为angeloyl单元，而化合物3中为tigloyl。通过noe相关信号h-3″/h-4″和h-3″/h-5″以及cosy图谱h-7和h-8相关，并结合γ-旁氏效应可证明angeloyl的存在，其中两个甲基处于反式的位置。基于noesy相关信号h-7/h-5,h-5/h-1,h-6/h-8,h-8/h2-13,h3-15′/h-6′,h-8′/h-6′和h-5′/h-7′,化合物4的相对构型鉴定为rel-1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r,1′r,4′r,5′s,6′r,7′r,8′s,10′r。基于高分辨质谱，化合物5(8,8'-ditigloylchrysanolided)的分子式确定为c40h50o10。通过一维核磁数据(表2)分析，发现该化合物与化合物3相似,不同点在于该化合物c-8位连了一个tigloyl单元(δh1.72,d,j＝7.2hz,1.79,s,6.85,overlap；δc166.6,129.0,139.8,14.8和12.2),hmbc相关信号h-8(δh5.51)/c-1″(δc166.6)可证明这点。化合物5的noesy相关与化合物3一样,所以该化合物的相对构型定为rel-1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r,1′r,4′r,5′s,6′r,7′r,8′s,10′r。化合物6的分子式通过加钠离子峰m/z615.2939[m+na]+(calcd.forc35h44o8na,615.2928)确定为c35h44o8。通过一维核磁数据分析(表2)发现该化合物与1的结构相似，其中化合物6较1中c-8位多了一个tigloyl片段该片段的取代可通过hmbc谱中相关信号h-8/c-1″/c-11证明。noesy相关表明化合物6与化合物1具有同样的相对构型。因此化合物6的结构鉴定为rel-1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r,1′r,4′r,5′s,6′s,7′s,10′r，取名8-tigloylchrysanolided。化合物7(chrysanolidef)为无色粉末，其分子式通过高分辨质谱给出的加钠离子峰m/z289.1405[m+na]+(calcd.forc15h22o4na,289.1410)确定为c15h22o4，共计5个不饱和度。其一维核磁数据(表2)表明化合物7是已知化合物chrysanolideb的差向异构体。noesy相关信号h3-13/h-8,h-6/h3-13,h-5/h-7和h-5/h-1表明h-1,h-5,h-7和h-11共平面，为α朝向，则h-6,h-8和h3-13(图7)为β朝向。因此，化合物7的结构定为rel-1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r。化合物8为无色油状化合物，其分子式为c20h28o5。通过分析一维核磁数据(表2)发现化合物8为已报道化合物8α-angeloyloxy-10β-hydroxy-slov-3-en-6,12-olided的差向异构体。不同点在于该化合物c-8位连有一个tigloyl单元。基于noesy相关信号h3-13/h-8,h-6/h3-13,h-5/h-7和h-5/h-1,化合物8可鉴定为rel-1r,5r,6r,7r,8s,10r,11r,命名为8-tigloylchrysanolidef。基于高分辨质谱的碎片离子峰m/z369.1656[m+na]+(calcd.forc20h26o5na,369.1672)，化合物9的分子式确定为c20h26o5。其氢谱和碳谱数据(表3)该化合物与已报道的化合物angeloylcumambrinb(16)很相似，除了化合物9中c-8位多了一个tigloyl片段而在化合物16中为angeloyl。通过化合物9的二维核磁图谱发现，该化合物为1-6和13的单倍体。因此通过noesy相关信号h-5/h-7,和h-5/h-1，化合物9确定为rel-1r,5r,6r,7r,8s,10r并命名为chrysanolideg。化合物10(chrysanolideh)的分子式为c20h26o6。其氢谱和碳谱数据表明该化合物存在5个甲基,两个连氧的次甲基,一个连氧叔碳,一个烯碳质子,两个亚甲基,三个次甲基,一个酮基和两个羰基。这些数据表明化合物10是化合物8的类似物。化合物c-3位的酮基以及c-4/c-5位间的双键可经hmbc中相关信号h-15/c-3/c-5证实(图7)。noesy谱中h3-13/h-7,h-11/h-8,h-11/h-6,h-8/h-6与h-1/h-7相关信号表明h-1和h-7为α朝向。h-6,h-8和h-11则为β朝向。通过计算ecd与实验ecd图谱比对，确定该化合物绝对构型为1r,6s,7r,8s,10r,11s。化合物11分子式为c20h26o6。通过核磁数据(table4)分析发现该化合物的结构与10相似,区别在于化合物11中c-8位为angeloyl单元。同样的noesy相关(图7)表明这两个化合物具有同样的相对构型。所以化合物11(8-angeloylchrysanolideh)被确定为rel-1r,6s,7r,8s,10r,11s。化合物12(chrysanolidei)1h谱和13c谱数据(table3)表明该化合物含有五个甲基，三个连氧次甲基，一个连氧叔碳，一个烯碳质子，两个亚甲基，三个次甲基和两个羰基。化合物12的核磁数据与indicumolidea极为相似。除了化合物indicumolideac-8位的angeloyl单元被tigloyl取代。图7中相关hmbc信号可证实这点。noesy谱中信号h3-13/h-7,h-11/h-8,h-11/h-6,h-6/h-8,h3-15/h-5,h-5/h-7和h-3/h3-15表明h-3,h-5,h-7,h3-13和h3-15为同一平面，定为α朝向，则h-6,h-8和h-11为β朝向。基于同样的生源合成途径，化合物12确定为3s,4r,5s,6s,7r,8s,11s，通过计算和实验ecd图谱可证实(图6)。chrysanolided(1):无色晶体；[α]20d+9.4(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)202(4.23)nm；ecd(meoh)λmax(logε)222(-0.43)nm；ir(kbr)νmax3414,2963,2927,2858,1767,1736,1459,1378,1261,1088,1025,914,796,732,and522cm-1；1hand13cnmrdata,seetable1；hresimsm/z533.2507[m+na]+(calcd.forc30h38o7na,533.2510).chrysanolidee(2):无色油状；[α]20d+41.5(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)203(4.12)nm；ecd(meoh)λmax(logε)214(-0.18)nm；ir(kbr)νmax3474,2968,2924,2854,1756,1699,1455,1377,1261,1082,1015,919,863,799,737,and545cm-1；1hand13cnmrdata,seetable1；hresimsm/z633.3046[m+na]+(calcd.forc35h46o9na,633.3034).8'-tigloylchrysanolided(3):无色油状；[α]20d+42.1(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)202(4.52)nm；ecd(meoh)λmax(logε)210(-0.44),225(+0.13)nm；ir(kbr)νmax3474,2968,2931,2860,1756,1703,1458,1379,1262,1082,1021,913,797,731,and545cm-1；1hand13cnmrdata,seetable1；hresimsm/z631.2876[m+na]+(calcd.forc35h44o9na,631.2878).8-angeloyl-8'-hydroxychrysanolided(4):无色油状；[α]20d+24.1(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)202(4.25)nm；ecd(meoh)λmax(logε)219(-0.78)nm；ir(kbr)νmax3482,2968,2927,2854,1748,1705,1457,1375,1354,1261,1157,1091,1022,969,908,797,732,667,and548cm-1；1hand13cnmrdata,seetable1；hresimsm/z631.2890[m+na]+(calcd.forc35h44o9na,631.2878).8,8'-ditigloylchrysanolided(5):无色油状；[α]20d+54.4(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)202(4.40)nm；ecd(meoh)λmax(logε)210(-0.98),229(+0.25)nm；ir(kbr)νmax3489,2966,2927,2860,1766,1688,1641,1457,1415,1377,1261,1085,1015,866,797,736,and699cm-1；1hand13cnmrdata,seetable2；hresimsm/z713.3300[m+na]+(calcd.forc40h50o10na,713.3296).8-tigloylchrysanolided(6):无色油状；[α]20d+4.0(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)202(4.37)nm；ecd(meoh)λmax(logε)217(-0.99)nm；ir(kbr)νmax3499,2963,2933,1753,1699,1648,1454,1378,1345,1260,1146,1086,1030,908,804,727,and521cm-1；1hand13cnmrdata,seetable2；hresimsm/z615.2939[m+na]+(calcd.forc35h44o8na,615.2928).chrysanolidef(7):无色固体；[α]20d+92.4(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)201(3.76)nm；ecd(meoh)λmax(logε)213(-0.12)nm；ir(kbr)νmax3258,2966,2921,2854,1772,1684,1454,1384,1261,1217,1146,1033,1000,924,798,721,and539cm-1；1hand13cnmrdata,seetable2；hresimsm/z289.1405[m+na]+(calcd.forc15h22o4na,289.1410).8-tigloylchrysanolidef(8):无色油状；[α]20d+86.3(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)203(4.07)nm；ecd(meoh)λmax(logε)204(+0.25)nm；ir(kbr)νmax3455,3401,2962,2929,2913,2854,1772,1753,1702,1648,1446,1376,1267,1224,1182,1147,1116,1074,1024,1002,941,806,738,and673cm-1；1hand13cnmrdata,seetable2；hresimsm/z371.1804[m+na]+(calcd.forc20h28o5na,371.1829).chrysanolideg(9):无色油状；[α]20d+116.2(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)203(4.37)nm；ecd(meoh)λmax(logε)209(+0.42),222(+5.22),264(-0.46)nm；ir(kbr)νmax3434,2964,2921,2850,1760,1741,1702,1687,1646,1450,1382,1336,1263,1157,1133,1070,1010,941,912,815,740,and674cm-1；1hand13cnmrdata,seetable3；hresimsm/z369.1656[m+na]+(calcd.forc20h26o5na,369.1672).chrysanolideh(10):无色油状；[α]20d+143.9(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)201(3.88),230(3.95)nm；ecd(meoh)λmax(logε)236(+0.62),323(-0.30)nm；ir(kbr)νmax3493,2969,2936,1787,1693,1643,1459,1373,1253,1192,1095,1060,1009,973,797,734,and545cm-1；1hand13cnmrdata,seetable3；hresimsm/z385.1613[m+na]+(calcd.forc20h26o6na,385.1622).8-angeloylchrysanolideh(11):无色油状；[α]20d+114.3(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)201(3.95),231(4.16)nm；ecd(meoh)λmax(logε)208(-0.36),238(+0.95),323(-0.06)nm；ir(kbr)νmax3482,2963,2937,2880,1784,1681,1639,1448,1373,1302,1207,1160,1091,1004,949,798,737,and556cm-1；1hand13cnmrdata,seetable3；hresimsm/z385.1624[m+na]+(calcd.forc20h26o6na,385.1622).chrysanolidei(12):无色油状；[α]20d+9.3(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)202(4.11)nm；ecd(meoh)λmax(logε)206(-0.94),222(+0.75)nm；ir(kbr)νmax3570,2968,2942,2856,1756,1700,1505,1446,1383,1259,1171,1083,1048,1014,971,925,801,733,627,and522cm-1；1hand13cnmrdata,seetable3；hresimsm/z387.1790[m+na]+(calcd.forc20h28o6na,387.1778).化合物1x-射线单晶衍射分析：化合物1的晶体结构及其绝对构型由单晶衍射分析确定。晶体通过xcalibur,onyx,nova衍射仪，在100k温度下搜集数据。通过xs和olex2.refine软件对晶体进行处理和优化。单晶图形采用ortep绘制。化合物1的单晶数据如下：c30h38o7(m＝510.60)；无色块状,空间群p212121(no.0),z＝2,t＝100k,μ(cukα)＝0.755mm-1,dcalc＝1.320g/cm3,24724反射测量,5045unique(rint＝0.0512)。适用于所有计算。最终的r1值为0.0326,wr2为0.0849(所有数据)。flackparameter＝-0.10(7)。实施例2按实施例1的方法先制得式(i)和式(ii)，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。实施例3按实施例1的方法先制得式(i)和式(ii)，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤。再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。实施例4按实施例1的方法先制得式(i)和式(ii)，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制粒压片。实施例5按实施例1的方法先制得式(i)和式(ii)，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。实施例6按实施列1的方法先制得式(i)和式(ii)，按其与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。应用试验例：本发明化合物式(i)和式(ii)对鼻咽癌细胞抑制活性测定。(1)细胞培养。体外培养鼻咽癌细胞株cne1，cne2，hone-1和sune1细胞。使用含有10％胎牛血清，链霉素(100微克/毫升)，青霉素(100单位/毫升)的rpmi1640培养基，在37℃，5％二氧化碳浓度条件下进行常规维持培养和传代。(2)细胞毒活性测试方法。96孔板种板前，对细胞计数(2000-4000个/孔)，每孔加100μl培养基，孵育1天后，加药，其中空白对照组为培养基，阴性对照组为不加药处理的细胞，加顺铂处理作为阳性对照组。48小时后，加入用pbs配置好的5mg/ml的mtt20μl，处理4小时。再弃去培养基，每孔加入120μl的dmso，振荡10min，最后用酶标仪测定其在492nm处的od值。根据od值计算出各药物浓度对细胞的抑制率，通过graphpadprism软件，采用非线性回归计算出各化合物的ic50值。(3)细胞凋亡实验方法。将处于对数生长期的hone1细胞以2×105/孔，每孔10％fbs培养基，铺于6孔板中，置于37℃、5％co2的培养箱中，孵育24h；换液并添加不同浓度的化合物孵育细胞48h；吸去上清液(保存在5ml离心管中)，200μl每孔4℃pbs洗两次，每孔加入200μl不含edta的胰酶消化，离心，收集细胞；每管加入1mlbindingbuffer混悬；取400μl细胞混悬液，加入fitc、pi各5μl；每管加入400μlbindingbuffer贝克曼流式细胞仪分析，每个样品收集10000个细胞。实验结果用flowjo软件分析。(4)细胞周期实验方法。2×105/孔hone1细胞种于6孔板中培养24h。化合物以不同浓度处理hone1细胞48h，随后不含edta的胰酶消化，离心，收集细胞。用冰冻70％乙醇在4℃下固定过夜，随后用冷pbs洗涤，然后用细胞周期和凋亡检测试剂盒在37℃避光染色30分钟。处理好的样品用贝克曼流式细胞仪分析，每个样品收集10000个细胞。实验结果用modfit软件分析。活性列表见表4。表4化合物式(i)和式(ii)的抑制鼻咽癌细胞增殖活性如表4、图1和图2所示，本发明提供的化合物对鼻咽癌细胞有很好的抑制活性，尤其是有些化合物的效果要优于顺铂。从图1中可知，经0、1、3、5、10、20μm化合物5处理48h后，hone1细胞凋亡率分别为3.61％、3.34％、3.46％、17.61％、33.99％、37.18％，凋亡率明显高于空白组，呈现剂量依赖性，提示化合物有促进鼻咽癌细胞凋亡的作用。从图2中可知，经0、1、3、5、10、20μm化合物5处理48h后，g0/g1期细胞比例分别为55％、44.75％、50.22％、40.89％、14.01％，整体比例呈下降趋势，而s期细胞比例基本不变，g2/m期细胞所占百分比分别为0.3％、5.93％、7.52％、16.52％、38.22％，呈现剂量依赖性增加，提示化合物5能诱导鼻咽癌细胞于g2/m期阻滞。当前第1页12当前第1页12