3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯及其制备方法与应用与流程

本发明属于抗肺癌技术领域，具体涉及一种3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯及其制备方法与应用，其为尼达尼布原料或制剂工艺中的重要杂质。

背景技术：

乙磺酸尼达尼布(nintedanibesylate)是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，抑制多种受体酪氨酸激酶(rtks)：血小板衍生生长因子受体(pdgfr)α和β，成纤维细胞生长因子受体(fgfr)1-3，血管内皮生长因子受体(vegfr)1-3和fmas-样酪氨酸激酶-3(flt3)。乙磺酸尼达尼布由勃林格殷格翰制药公司原研开发，上市剂型为软胶囊剂。2014年10月经fda批准首先在美国上市，2015年1月经ema批准在欧盟上市，用于治疗特发性肺纤维化(ipf)，商品名规格为100mg和150mg(以尼达尼布计)。此外，2014年11月经ema批准，乙磺酸尼达尼布联合多西紫杉醇用于一线化疗后腺癌肿瘤学为局部晚期或转移性复发性非小细胞肺癌患者的治疗，商品名规格为100mg和150mg(以尼达尼布计)。

尼达尼布的化学结构式如式1所示：

尼达尼布合成路线主要有勃林格殷格翰制药公司申请的专利文献，专利zl03817530.4报道了合成路线1，专利zl0880119068.4报道了路线2，具体合成路线如下。

合成路线1：

合成路线2：

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种尼达尼布杂质3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯。

本发明的另一个目的是提供所述杂质的制备方法。

本发明的最后一个目的是提供所述杂质的应用。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

本发明所述具有式3所示结构的化合物：

其化学名称为3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯，为尼达尼布杂质。

本发明所述具有式3所示结构化合物的制备方法，包括将式2化合物与n,n-二甲基酰胺进行反应，得到式3化合物，

其中，所述n,n-二甲基酰胺是n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二甲基丙酰胺或n,n-二甲基丁酰胺，优选n,n-二甲基甲酰胺或n,n-二甲基乙酰胺，式2化合物与n,n-二甲基酰胺的摩尔比为为1：(1.5～2.5)，优选为1：(1.6～2.1)。

其中，反应温度为40～80℃，优选50～65℃，进一步优选54～56℃，反应时间为6～10h，优选8～10h。

其中，反应溶剂为甲醇、二氯甲烷、乙醇、异丙醇、丁醇、乙酸乙酯、苯甲醚或甲苯，式2化合物与反应溶剂的比例为1g：(0.5～2.5)ml，优选为1g：(1～2)ml，进一步优选为1g：(1.2～1.4)ml。

其中，反应完成后，使用水和有机溶剂萃取反应液，所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯中的一种或多种。

萃取过程中，所述水的用量是反应液体积的5～15倍，优选8～12倍，所述有机溶剂的用量是反应液体积的10～20倍，优选13～18倍。此处的“用量”是指萃取过程中水或有机溶剂的总用量。

优选地，所述的水为纯化水。将反应液和水混合，搅拌10～50min，优选30min，再加入有机溶剂萃取。

其中，反应后通过柱层析方法分离，然后浓缩、干燥得到式3化合物。

优选地，所述柱层析方法使用分离硅胶进行分离，流动相为第一溶剂和第二溶剂的混合液，第一溶剂是乙酸乙酯、二氯甲烷、乙酸异丙酯中的一种或多种，第二溶剂是甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或多种。

第一溶剂和第二溶剂的体积比为为(5～100)：1，优选(10～100)：1。

所述分离硅胶为常规柱层析所用硅胶，优选为100-200目分离硅胶。

本发明所述的具有式3所示结构的化合物在制备尼达尼布原料或制剂杂质对照品中的应用。

申请人研究发现，尼达尼布生产过程中，其关键中间体式2化合物结构中的甲氧基易降解成n,n-二甲基，生成尼达尼布工艺杂质式3化合物，使得最终产品质量难以保证。

本发明是在参考专利zl0880119068.4制备得到尼达尼布的基础上，开发出的尼达尼布工艺杂质—3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯，通过一步反应和纯化得到3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯，解决了该杂质获得的便捷性和稳定性；尤其重要的是，本发明对尼达尼布工艺杂质纯化方法进行了详细研究，筛选出了更加稳定的柱层析分离条件，尼达尼布工艺杂质hplc纯度可达95％以上。本发明的制备条件温和可控，可方便地制备得到3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯。

有益效果：1、本发明提供的化合物3-(二甲氨基(苯基)亚甲基)-2-氧化吲哚-6-羧酸甲酯可作为尼达尼布的有关物质检测用对照品，用于尼达尼布原料或及其相关制剂的质量控制。2、本发明提供的所述杂质的制备方法操作便捷，反应条件温和可控，大大提高反应的稳定性，反应产物收率高、纯度高。

附图说明

图1是式3化合物二级质谱图；

图2是式3化合物核磁共振氢谱图；

图3是式3化合物碳谱图；

图4是实施例1液相检测图谱；

图5是实施例5反应中控hplc图谱。

具体实施方式

本发明将于下文通过实施例更加详细的描述，这些实施例示例性地用于进一步说明，且不应当视为对本发明的限制。

尼达尼布工艺杂质的制备

实施例1：

向反应瓶中加入式2化合物(10g，0.032mol)，12ml甲醇混合搅拌，再加入n,n-二甲基甲酰胺(5ml，0.065mol)，加热至55℃，反应8小时，加入相对于反应液10倍体积的纯化水，搅拌30min，再加入相对于反应液10倍体积乙酸乙酯进行萃取，分离出水相，水相再用5倍体积乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，将浓缩完毕的样品，采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅胶为100～200目普通分离硅胶，流动相为乙酸乙酯：甲醇＝100:1(体积比)，流速为2ml/分钟，收集相应的组分，在40℃以下减压浓缩后，40℃真空干燥，得6.30g式3化合物，收率为60.6％，hplc纯度98.9％(hplc图谱见图4)。

式3化合物结构经质谱(图1)，核磁共振氢谱(图2)和碳谱(图3)确证，具体数据见表1和表2：

测试数据

图谱解析：

表1尼达尼布工艺杂质的氢谱测定结果

表2尼达尼布工艺杂质的碳谱测定结果

实施例2：

向反应瓶中加入式2化合物(6.5g，0.021mol)，12ml乙醇混合搅拌，再加入n,n-二甲基甲酰胺(3.2ml，0.0413mol)，加热至55℃，反应8小时，加入相对于反应液10倍体积的纯化水，搅拌30min，再加入相对于反应液10倍体积乙酸异丙酯进行萃取，分离出水相，水相再用5倍体积乙酸异丙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，将浓缩完毕的样品，采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅胶为100～200目普通分离硅胶，流动相为乙酸异丙酯：乙醇＝100:5(体积比)，流速为2ml/分钟，收集相应的组分，在40℃以下减压浓缩后，40℃真空干燥，得4.30g式3化合物，收率为63.6％，hplc纯度97.8％。

实施例3：

向反应瓶中加入式2化合物(8g，0.026mol)，12ml甲苯混合搅拌，再加入n,n-二甲基乙酰胺(5ml，0.054mol)，加热至55℃，反应9小时，加入相对于反应液10倍体积的纯化水，搅拌30min，再加入相对于反应液10倍体积乙酸甲酯进行萃取，分离出水相，水相再用5倍体积乙酸甲酯萃取，合并有机相，减压浓缩，将浓缩完毕的样品，采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅胶为100～200目普通分离硅胶，流动相为乙酸乙酯：乙醇＝100:1(体积比)，流速为2ml/分钟，收集相应的组分，在40℃以下减压浓缩后，40℃真空干燥，得4.82g式3化合物，收率为57.9％，hplc纯度96.8％。

实施例4：

向反应瓶中加入式2化合物(5g，0.016mol)，12ml异丙醇混合搅拌，再加入n,n-二甲基乙酰胺(2.4ml，0.026mol)，加热至55℃，反应10小时，加入相对于反应液10倍体积的纯化水，搅拌30min，再加入相对于反应液10倍体积乙酸乙酯进行萃取，分离出水相，水相再用5倍体积乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩干，将浓缩完毕的样品，采用柱层析方法纯化。具体柱层析条件：硅胶为100～200目普通分离硅胶，流动相为二氯甲烷：甲醇＝100:10(体积比)，流速为2ml/分钟，收集相应的组分，在40℃以下减压浓缩后，40℃真空干燥，得2.42g式3化合物，收率为48.2％，hplc纯度95.5％。

实施例5：

参照专利zl0880119068.4报道的合成方法(详见合成路线2)制备尼达尼布。

申请人研究发现，在关键中间体式2化合物和scr-4308反应制备尼达尼布的过程中，其关键中间体式2化合物结构中的甲氧基易降解成n,n-二甲基，生成尼达尼布工艺杂质式3化合物，使得最终产品质量难以保证。

关键中间体式2化合物和scr-4308反应制备尼达尼布的具体工艺：

将式2化合物、scr-4308、甲醇和n,n-二甲基甲酰胺加入反应釜，搅拌，氮气保护，加热至55～65℃，反应8小时(取反应液检测)，反应结束后，降温至0～10℃，过滤，甲醇洗涤，固体在40±5℃真空干燥，得到尼达尼布。反应中控图谱见图5，其中，16.199min为尼达尼布，17.653min为尼达尼布工艺杂质式3化合物。

图5的检测条件为：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；以10mmol/l的乙酸铵(用冰醋酸调节ph至5.0)为流动相a，以乙腈为流动相b；流速为每分钟1.0ml；检测波长为242nm；柱温为35℃；进样体积为5μl，按下表3进行线性梯度洗脱。

表3

测定方法取本品适量，加溶剂(乙腈:水＝80:20的混合溶液)稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，扣除溶剂峰、梯度洗脱峰，按面积归一化法计算。