用于作物害虫防护的RNAi方法与流程
背景技术：
害虫对全世界的作物生产和人类健康都是有害的，并且在某些情况下，昆虫防治消耗国家的国民生产总值(gnp)的10％至25％。(httpworldwidewebinternetsite"fao.org/3/a-av013e.pdf")。在美国，由于作物病虫害造成的年度损失估计每年超过1200亿美元。(polaszeka.(1998)wallingford,uk:cabi.530页。)。
在作物害虫中，鳞翅目是谷物作物栽培中最有害的害虫。化学控制通常很昂贵，效率低下，并且可能带来负面的环境影响。宿主植物抗性是一种有吸引力的选择，但由于缺乏强大的鳞翅目抗性种质而受到阻碍(httpworldwidewebinternetsite"cnbc.com/2015/05/08/insects-feast-on-plants-endangering-crops-and-costing-billions.html")。
自1996年以来，经过基因工程改造以生产苏云金芽孢杆菌(bt)杀虫蛋白的农作物的商业化已实现有效的害虫防治，产量增加，杀虫剂使用减少和农民利润增加。(khanzr等人(2014).philos.trans.rsoc.londbiolsci.369:1639)。
因此，2011年全世界bt作物的累计播种面积超过10亿英亩。在美国，2013年bt玉米、bt大豆和bt棉花占玉米、大豆和棉花总面积的90％(tabashnikbe等人.(2013).nat.biotech.31:510-521)。但是，鳞翅目害虫对bt的田间抗药性的演变引起人们对该方法可持续性的潜在担忧。(campagnep.等人(2013)plosone8(7):e69675.doi:10.1371)。对金字塔状bt特征的抗性丧失也进一步加剧了这种情况(httpsworldwidewebinternetsitedtnpf.com/agriculture/web/ag/news/article/2016/08/10/rootworm-resistance-pyramided-bt.html)。
技术实现要素：
本文提供一种分离的双链rna(dsrna)分子，其包含与靶基因序列的约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列，其中所述靶基因是miggs-irtg，其参与由在喂食和/或主动进食期间摄入的微生物引起的肠道微生物的清除和/或遏制。在某些方面，所述靶基因对于昆虫免疫应答是至关重要的，并且某些方面提供其在中肠中大量表达。在某些方面，所述靶基因序列包括靶基因的蛋白质编码区，5'utr区，3'utr区及其任意组合中的至少一个。此外，某些方面提供所述dsrna分子在被昆虫摄入时使靶基因沉默。在某些方面，所述靶基因是如本文其它地方所定义的1型miggsrnai靶或2型miggsrnai靶。在某些方面，所述靶基因是模式识别受体(prr)类基因或昆虫中肠结构成分基因。在某些方面，所述靶基因在主动进食期间以中肠特异性方式大量表达。
在某些方面，本文任何地方公开的dsrna分子包含两条退火的互补rna链。在某些方面，所述dsrna分子包含单rna链，所述单rna链包含其间有间隔子的反向重复序列，且其中所述单rna链可自退火以形成发夹环结构。
在某些方面，本文任何地方公开的dsrna分子包含与所述靶基因序列的蛋白质编码区的约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列。在某些方面，所述dsrna分子包含与靶基因序列的5'utr区或3'utr区的约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列。在某些方面，所述dsrna分子包含与连续区域互补的核酸序列，所述连续区至少包含所述靶基因序列蛋白质编码区，5'utr区或3'utr区长度的约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。在某些方面，所述dsrna分子包含与所述靶基因序列的约200至650个连续核苷酸互补的核酸序列。
本公开的某些方面涉及的靶基因选自由以下组成的群组：m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)，m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3)，m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)，m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)，m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)，m.sexta-dorsal(msdor)，m.sexta-
本文还提供分离的双链rna(dsrna)分子，其包含与靶基因序列的约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列，其中所述靶基因包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-70、71-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的核酸序列。在某些方面，所述靶基因序列包括靶基因的蛋白质编码区，5'utr区，3'utr区及其任意组合中的至少一个。此外，某些方面提供所述dsrna分子在被昆虫摄入时使所述靶基因沉默。
在本文公开的某些方面，所述靶基因序列选自由以下组成的群组：i)seqidno：1-9、11、14、31、39、43、44和71-75。
在本文公开的某些方面，所述靶基因序列选自由以下组成的群组：ii)seqidno：3、4和43。在某些方面，所述dsrna分子以直系同源方式导致th、dmb和faw的生长、发育进程受阻和/或死亡等。
在本文公开的某些方面，所述靶基因序列选自由以下组成的群组：iii)seqidno：76、77、80、81、85、87和88。在某些方面，所述dsrna分子导致dbm的生长、发育进程受阻和/或死亡等。此外，在某些方面dbm是抗bt菌株。
在本文公开的某些方面，所述靶基因序列选自由以下组成的群组：iv)seqidno：89、92、96、101、103和105。在某些方面，所述dsrna分子导致faw的生长、发育进程受阻和/或死亡等。
在本文公开的某些方面，所述靶基因序列选自由以下组成的群组：v)seqidno：107-110。在某些方面，所述dsrna分子导致rfb的生长、发育进程受阻和/或死亡等。
在上文公开的dsrna分子的某些方面，所述dsrna分子包含两条退火的互补rna链。在某些方面，dsrna分子包含单rna链，所述单rna链包含其间有间隔子的反向重复序列，且其中所述单rna链可自退火以形成发夹环结构。
在上文公开的dsrna分子的某些方面，所述dsrna分子包含与所述靶基因序列的所述蛋白质编码区的约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列。在某些方面，所述dsrna分子包含与连续区互补的核酸序列，所述连续区至少包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-70、71-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的序列长度的约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。在某些方面，所述dsrna分子包含与连续区互补的核酸序列，所述连续区至少包含所述靶基因序列蛋白质编码区，5'utr区或3'utr区长度的约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。
在本文公开的某些方面，所述dsrna分子包含选自由seqidno：111-119、120-126，127-135和136-139组成的群组的核酸序列。在某些方面，dsrna是其至少约200个核苷酸的片段。在某些方面，i)包含选自由seqidno：110-119组成的群组的核酸序列或其片段的所述分离的dsrna分子导致th的生长、发育进程受阻和/或死亡等；ii)包含选自由seqidno：120-126组成的群组的核酸序列或其片段的所述分离的dsrna分子导致dbm的生长、发育进程受阻和/或死亡；iii)包含选自由seqidno：127-135组成的群组的核酸序列或其片段的所述分离的dsrna分子导致faw的生长、发育进程受阻和/或死亡等；或iv)包含选自由seqidno：136-139组成的群组的核酸序列或其片段的所述分离的dsrna分子导致rfb的生长、发育进程受阻和/或死亡等。
在上述任一方面中，所述dsrna分子可以形成sirna。某些方面提供衍生自所述dsrna分子的加工的分离的sirna分子。
某些其它方面提供一种杀虫组合物，其包含在本文中任何地方公开的分离的dsrna分子或sirna分子，以及合成载体或微生物导管。在某些方面，微生物具有天然能力或被改造成以产生和/或传递dsrna以增加其生物利用度和/或生物稳定性以引起rna干扰，所述微生物包括但不限于植物生长促进生物，与靶害虫或寄生虫和/或靶害虫的天敌相关的正常共生植物和/或共生微生物，或害虫靶宿主或从含有微生物导管的自然种群中工程改造或识别出的靶害虫的昆虫或寄生虫和/或天敌的宿主培养范围等，以产生和/或传递dsrna和/或作为一种控制选项驱动此类微生物导管向害虫的自然种群传播。在本文公开的杀虫组合物的某些方面，所述dsrna分子与所述合成载体缀合。
还涉及编码本文任何地方公开的dsrna分子的重组dna构建体的某些方面。在某些方面，重组dna构建体包含基因沉默序列，所述基因沉默序列包含靶基因序列的约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，所述靶基因是如本文所定义的miggs-irtg，其参与由在喂食和/或主动进食期间摄入的微生物引起的肠道微生物清除和/或遏制。在某些方面，所述靶基因对于昆虫免疫应答至关重要。在某些方面，所述靶基因在中肠中大量表达。在某些方面，所述靶基因序列包括靶基因的蛋白质编码区，5'utr区，3'utr区及其任意组合中的至少一个。在某些方面，所述靶基因是如本文别处所述的1型miggsrnai靶或2型miggsrnai靶。在某些方面，所述靶基因是模式识别受体(prr)类基因或昆虫中肠结构成分基因。在某些方面，所述靶基因在主动进食期间以中肠特异性方式大量表达。
在重组dna构建体的任何上述方面中，所述基因沉默序列包含所述靶基因序列的所述蛋白质编码区的约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，所述基因沉默序列包含所述靶基因序列的所述5'utr区或所述3'utr区的约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，所述基因沉默序列至少连续包含所述靶基因序列蛋白质编码区，5'utr区或3'utr区长度的约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。在某些方面，所述基因沉默序列包含所述靶基因序列的约200至650个连续核苷酸。
在重组dna构建体的上述任何方面中，并且如本公开内容所指出的，在某些方面中，靶基因可以选自由以下组成的群组：m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)，m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3)，m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)，m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)，m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)，m.sexta-dorsal(msdor)，m.sexta-
进一步的方面提供一种重组dna构建体，其包含基因沉默序列，所述基因沉默序列包含靶基因序列的约200至1000个连续核苷酸，其中靶基因包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-70、71-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的核酸序列。在某些方面，所述靶基因序列包括靶基因的蛋白质编码区，5'utr区，3'utr区及其任意组合中的至少一个。
在重组dna构建体的任何上述方面中，所述靶基因序列选自由以下组成的群组：i)seqidno：1-9、11、14、31、39、43、44和71-75；ii)seqidno：3、4和43；iii)seqidno：76、77、80、81、85、87和88；iv)seqidno：89、92、96、101、103和105；和v)seqidno：107-109和110。在某些方面，所述基因沉默序列包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-70、71-75、76-88，89-105和106-110组成的群组的序列的约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，所述基因沉默序列至少连续包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-70、71-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的序列的50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。在某些方面，所述基因沉默序列包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-70、71-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的序列的约200至650个连续核苷酸。在某些方面，所述基因沉默序列可操作地连接至一个或多个启动子，以用于被昆虫摄入时使所述靶基因沉默的dsrna分子的表达。在某些方面，所述构建体是表达载体。并且，在某些方面，所述表达载体可以靶向单个或多个昆虫rnai靶基因或嵌合rnai靶基因。
本公开的某些方面还提供一种宿主细胞，其包含本文任何地方公开的dsrna分子、sirna分子、编码dsrna分子的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段。在某些方面，宿主细胞是细菌或植物细胞或细胞器。在某些方面，所述细胞器是质体。在某些方面，所述宿主细胞是转基因和/或转质体植物细胞。在某些方面，所述宿主细胞表达本文任何地方公开的dsrna和/或产生sirna。
某些方面还提供一种转基因和/或转质体植物，其包含本文任何地方公开的dsrna分子、sirna分子、编码dsrna的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段。在某些方面，所述植物的至少一个细胞表达dsrna分子和/或产生sirna分子。此外，某些方面提供上述转基因和/或转质体植物的种子、部分、组织、细胞或细胞器。在某些方面，所述种子、部分、组织、细胞或细胞器包含dsrna分子和/或sirna分子。在某些方面，所述细胞器是质体。
某些方面提供一种沉默(i)昆虫免疫应答基因和/或(ii)编码昆虫中肠的结构成分的昆虫基因的方法。在某些方面，所述方法包括摄入本文任何地方公开的分离的dsrna分子、sirna分子、杀虫组合物、宿主细胞、转基因和/或转质体植物、转质体植物和/或种子、部分、组织、细胞或细胞器至昆虫。
某些方面提供一种保护植物免受植物害虫侵害的方法。在某些方面，所述方法包括将本文任何地方公开的分离的dsrna分子、sirna分子和/或杀虫组合物局部施用到植物上，并在害虫的饮食中提供植物。在某些方面，通过在微生物中表达所述dsrna并将所述微生物局部施用于植物上来局部施用所述dsrna。
某些方面提供一种对所述植物的害虫产生植物抗性的方法。在某些方面，所述方法包括使用编码本文任何地方公开的dsrna分子的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段转化植物，其中所述植物表达本文任何地方公开的dsrna分子和/或产生sirna。
某些方面提供一种提高作物产量的方法。在某些方面，所述方法包括种植作物植物种群，所述作物植物使用本文任何地方公开的编码dsrna分子的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段转化，其中所述植物表达本文任何地方公开的dsrna分子和/或sirna分子。在某些方面，在存在害虫侵害的情况下，所述转化的植物种群比未转化的对照种群产生更高的产量。
某些方面提供一种产生抗所述植物害虫的植物的方法。在某些方面，所述方法包括：a)使用编码本文任何地方公开的dsrna分子的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段转化植物细胞和/或细胞器；b)从转化的植物细胞和/或细胞器再生植物；以及c)在适于表达所述双链rna分子的条件下种植所述转化的植物，其中(c)的所述转化的植物与未转化的植物相比，对植物害虫具有抗性。
在任何上述某方面，所述dsrna在昆虫的主动进食阶段被摄入。在某些方面，dsrna的摄入诱导昆虫幼虫产生黑色素反应。在某些方面，dsrna的摄入导致肠道微生物稳态的扰动。在某些方面，dsrna的摄入导致机会性微生物清除不良。在某些方面，dsrna的摄入导致肠道微生物的遏制不良。
在任何上述某方面，靶基因的沉默导致食欲降低和/或发育缺陷，从而导致昆虫发育不完全和/或死亡和/或昆虫繁殖成功率降低。在某些方面，在持续进食至少72小时后，观察到昆虫的食欲降低和/或发育缺陷和/或死亡和/或生殖适应性降低。
在任何上述某方面，所述昆虫的属性为鳞翅目，鞘翅目，半翅目，蜚蠊目或双翅目。在某些方面，所述昆虫是：烟草天蛾，秋粘虫，欧洲玉米螟，小菜蛾，科罗拉多马铃薯甲虫，玉米根虫复合体，赤拟谷盗，日本甲虫，白蜡窄吉丁，亚洲柑橘木虱，臭虫，蟑螂或白蚁，或诸如蚊子和苍蝇的害虫。
在任何上述某方面，植物宿主选自由以下组成的群组：玉米，高粱，狐尾小米，珍珠粟，马铃薯，水稻，番茄，茄子，甘蓝家族的栽培品种，柑桔，木犀科树木和蔷薇科作物。
附图说明
图1。图1显示细菌可摄入的dsrna测定的示意图。(kamathrs等人(2000)genomebiol.2:1-10；newmark等人(2003)proc.natl.acad.sci.usa100:11861-11865)。
图2a-c。图2a-c显示th幼虫的代表性表型。th幼虫暴露于针对miggsrnai靶mspgrp2(a)；msvmp1(b)；和针对木薯植物特异性基因mecat1(c)的阴性对照的细菌(ht115(de3))表达dsrna。
图3a、b。图3a、b显示暴露于dsrna的th幼虫对阴性对照mecat1(a)和含细菌(ht115(de3))平板miggsrnai靶mspgrp2(b)的进食活性。
图4。图4显示健康的常规饲养的(cr)和无菌的(gf)一龄th幼虫的存活率，所述幼虫暴露于针对miggsrnai靶mspgrp2的细菌(ht115(de3))表达的dsrna；msvmp1和针对木薯植物特异性基因mecat1的阴性对照dsrna。在p值介于p<0.001至p<0.05时的所有时间点，使用4次重复/处理观察到的差异具有统计学意义。
图5。图5显示健康的常规饲养的(cr)和无菌的(gf)一龄th幼虫的黑色素反应百分比，所述幼虫暴露于针对miggsrnai靶mspgrp2的细菌(ht115(de3))表达的dsrna；msvmp1和针对木薯植物特异性基因mecat1的阴性对照dsrna。在p值介于p<0.001至p<0.05时的所有时间点，使用4次重复/处理观察到的差异具有统计学意义。
图6。图6显示产生l4440载体的dsrna示意图，所述载体包含木薯cat1(mecat1)和thmiggsrnai靶mspgrp2和msvmp1的编码序列。
图7。图7显示与对照基因rps3相比，两个thmiggsrnai靶基因mshem和mssph3的中肠优选表达。对照cdna文库衍生自常规饲养的幼虫，而处理cdna文库衍生自注射有75cfu大肠杆菌的th幼虫。对照和处理幼虫被用来分离血淋巴部分(hl)，解剖中肠(mdg)以获得身体的其余部分(rb)。hl、mdg和rb用于rna分离和cdna合成。
图8。图8显示miggsrnai靶基因口服诱导程序的示意图。按照先前公布的规程(wang等人(2006).j.biol.chem.281(14):9271-9278)，将昆虫幼虫饲养在含有活的革兰氏阴性细菌大肠杆菌和来自革兰氏阳性细菌和真菌的冻干细胞壁特征的诱导培养基上。
图9a、b。图9a、b显示响应于摄食诱导培养基，miggsrnai靶基因在th幼虫中的表达。在幼虫暴露于诱导培养基后的24-48小时之间，诱导(i)具有免疫功能(a、b)的基因，并且在不存在诱导(ui)的情况下，大部分未被检测到。
图9c、d。图9c、d也显示响应于摄食诱导培养基，miggsrnai靶基因在th幼虫中的表达。在幼虫暴露于诱导培养基后的24-48小时之间，诱导(i)具有免疫功能(c)的基因，并且在不存在诱导(ui)的情况下，大部分未被检测到。同时，在两种条件下均表达了对中肠结构完整性(d)所必需的基因。
图10a-f。图10a-f显示th幼虫的代表性表型(a所示的初始大小)，所述幼虫暴露于针对杀虫性miggs-rnai靶基因mstoll2，mssuc1和msβtub的细菌表达的dsrna，与阴性(b)和阳性(c)对照处理相比。与在阴性对照处理(b)中观察到的常规生长发育相比，杀虫活性表现为生长发育迟缓，食欲不振和黑色素反应(d-f)。
图11。图11显示th幼虫的死亡率，所述幼虫摄食针对杀虫性miggs-rnai靶基因mstoll2、mssuc1和msptub的细菌表达的dsrna。miggs杀虫剂候选物与阳性对照处理(msvatpasee)相比，死亡率具有统计学意义。数据为在p≤0.001(***)时3次重复/处理±sem的平均值。
图12a-c。图12a-c显示摄食诱导培养基的dbm幼虫中的iggs-irtgs的诱导。在幼虫暴露于诱导培养基后的24-48小时之间，诱导(i)具有免疫功能的基因(a-b)的基因，并且在不存在诱导(ui)的情况下，大部分未被检测到。同时，在两种条件下均表达中肠结构完整性(c)所必需的基因。
图13a-h。图13a-h显示抗bt的dbm幼虫的代表性表型(a所示的初始大小)，所述幼虫暴露于针对杀虫性dbmmiggsrnai靶pxpgrp2(d)，pximd(e)，pxβgrp2(f)，pxcac(g)和pxchs1(h)的细菌表达的dsrna，与阳性(c)和阴性对照(b)处理相比。与在阴性对照处理(b)中观察到的常规生长发育相比，杀虫活性表现为生长发育迟缓，食欲不振和黑色素反应(d-h)。
图14。图14显示dbm幼虫的死亡率，所述幼虫摄食针对杀虫性miggsrnai靶pxpgrp2，pximd，pxβgrp2，pxcac和pxchs1的细菌表达的dsrna。miggs杀虫剂候选物与阳性对照处理(msvatpasee)相比，死亡率具有统计学意义。数据为在p≤0.001(***)及p≤0.01(**)时3次重复/处理±sem的平均值。
图15a、b。图15a、b显示使用针对thmiggs靶mspgrp2，msβgrp2，mschs2和msvmp1的dsrna建立的可喷雾rnai。将来自田间土壤生长的烟草植物(a)的1cm2叶片圆片滴入针对thmiggsrnai靶(b)的各种浓度的纯化dsrna。生物测定进行5天，每孔3只一龄幼虫，每24小时结束时更换叶片。
图16。图16显示th幼虫的死亡率，所述幼虫摄食不同浓度针对thmiggsrnai靶mspgprp2，msβgrp2，mschs2和msvmp1核心组的dsrna。叶盘涂覆的dsrna在dsrna浓度为8和16μg时导致明显的死亡率。与阳性对照处理(msvatpasee)相比，针对三个核心miggs靶的叶盘涂覆的dsrna的死亡率具有统计学意义。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(***)时3次重复/处理±sem的平均值。
图17a-h。图17a-h显示th幼虫的代表性表型(a和e所示的初始大小)，所述幼虫暴露于针对miggsrnai靶mspgprp2(d)，msβgrp2(f)，mschs2(g)和msvmp1(h)核心组的8和16μgdsrna。杀虫活性与阳性对照处理(c)相差无几，表现为生长发育迟缓，食欲不振和黑素反应(d、f-g)，而阴性对照处理(b)则可观察到正常的生长发育。
图18a-d。图18a-d显示摄食来自转质体植物叶子的th幼虫的代表性表型，所述转质体植物表达针对核心miggs靶mspgrp2(pts-28-10和pts-28-7-b)，msβgrp2(pts-26-19和pts-26-4-c)和dschs2(pts-27-3-1和pts-27-13-1-d)的dsrna。与阴性对照pts-27-13-2(a)相比，摄食表达针对miggs靶mspgrp2(b)，msβgrp2(c)和mschs2(d)的dsrna叶子的th幼虫表现出生长发育迟缓，食欲不振和黑色素反应。
图18e。图18e显示，与阴性对照相比，转质体系的杀虫活性表现为平均重量的显著降低。
图18f。图18f显示，与阴性对照相比，转质体事件具有显著的死亡率。以0-3对死亡率进行评分，分别为0、1、2和3，分别表示≤0、25、50或≥50的死亡率。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时6次重复/处理(n＝24)±sem的平均值。
图19。图19显示抗bt的dbm幼虫的死亡率，所述幼虫摄食不同浓度针对th核心miggsrnai靶pxpgprp2，pxβgrp2，pxβtub和pxchs1的dbm直系同源物的dsrna。涂覆dsrna的叶盘在dsrna浓度为0.5-1μg时导致明显的死亡率。与阳性对照处理(msvatpasee)相比，涂覆针对所有核心miggs靶的dsrna的叶盘在0.5μg至1μgdsrna剂量时，死亡率具有统计学意义。数据为在p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时3次重复/处理±sem的平均值。
图20a-h。图20a-h显示抗bt的dbm幼虫的代表性表型(a和e所示的初始大小)，所述幼虫暴露于0.5-1μg针对th核心miggsrnai靶pxpgprp2(d)，pxβgrp2(f)，pxβtub(g)和pxchs1(h)的dbm直系同源物的dsrna。杀虫活性与阳性对照处理(c)相差无几，表现为生长发育迟缓，食欲不振和黑素反应(d、f-h)，而阴性对照处理(b)则可观察到正常的生长发育。
图21a-d。图21a-d显示摄食小麦植物的faw的miggs-irtg诱导过程，所述小麦植物生长在富含微生物的田间土壤(a)和微生物贫瘠的无菌表面(b)。将十只一龄faw幼虫(c)感染到每个装有五棵小麦幼苗的罐中，并使用多孔网材料(d)包藏。在感染后的各个时间点收集幼虫样品，并将其用于汇集rna-seq方法，以识别响应田间土壤中微生物诱导的差异表达的转录物。
图22a、b。图22a、b显示与摄食富含微生物的植物(b)的幼虫相比，摄食贫微生物的植物(a)的faw幼虫的差异基因表达的双聚类比较。rna-seq数据表明，生长在田间土壤上的植物导致faw中miggs途径基因的优先上调。总共识别出100个差异表达基因，其中30个与miggs途径相关。值得注意的是，在数据集中捕获了包括pgrp2，βgrp2和imd在内的th杀虫靶的faw直系同源物，这清楚地表明，miggs途径基因响应摄食暴露于土壤微生物组的植物的昆虫被上调。
图23a-f。图23a-f显示faw幼虫的代表性表型，所述幼虫暴露于针对th核心miggsrnai靶sfchs2(b)，sfβgrp2(c)，sfpgrp2(d)和来自rna-seq研究sfrc(未标注e)和c型外源凝集素(c-typelectin-6)(sfctl-f)的两个新型miggsrnai靶的faw直系同源物的纯dsrna。与阴性对照处理(a)相比，涂覆dsrna的叶盘在每片叶盘中提供浓度为8和16μg的dsrna时，导致生长发育迟缓和食欲不振。
图23g、h。图23g、h从图23a-f示出显著的重量减少(g)和死亡率(h)。死亡率以0-3评分，其中0、1、2和3分别表示≤0、25、50或≥50的死亡率。与阴性对照相比，施加的dsrna处理导致平均体重(g)的统计学意义的显著降低，这意味着死亡率(h)显著降低。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时3次重复/处理±sem的平均值。
图24a、b。图24显示faw幼虫的平均体重(a)，所述幼虫暴露于16μg针对来自rna-seq数据的新发现的miggsrnai靶的纯dsrna。以0-3对死亡率进行评分，分别为0、1、2和3，分别表示≤0、25、50或≥50的死亡率。与阴性对照相比，施加的dsrna处理可导致平均体重(a)的统计学意义的显著降低，这也意味着死亡率(b)显著降低。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时3次重复/处理±sem的平均值。
图25。图25显示摄食米粉的rfb甲虫的代表性表型，其中所述米粉混合有1μg针对rfbtcpgrp2，msβgrp2，dschs2中的核心miggs靶和先前发现的靶mdgp的纯dsrna。与阴性对照处理(te)相比，摄食针对所有miggs靶dsrna的rfb甲虫在摄食72小时后显示出显著的死亡率。死亡率显著高于阴性对照处理，并且与阳性对照处理tcvatpasee相当。以0-3对死亡率评分，分别为0、1、2和3，分别表示≤0、25、50或≥50的死亡率。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时6次重复/处理(n＝18)±sem的平均值。
图26a、b。图26a、b显示当暴露于8-16μg针对阳性对照(a)和核心杀虫性miggsrnai靶msβgrp2(b)的纯dsrna时，观察到的th幼虫表型相关的imagej分析rt-pcr数据。转录下调与图17中观察到的幼虫表型相关。
图26c、d。图26c、d显示当暴露于8-16μg针对杀虫性miggsrnai靶mspgprp2(c)和mschs2(d)核心组的纯dsrna时，与观察到的th幼虫表型相关的imagej分析rt-pcr数据。转录下调与图17中观察到的幼虫表型相关。
具体实施方式
概述
rnai介导的基因沉默为昆虫防治提供可持续的替代方法。迄今为止，大多数成功的基于rnai的害虫防治策略都采用了必需基因功能的同源依赖沉默。尽管如此，由于鳞翅目害虫对摄入的双链rna(dsrna)的敏感性不同，因此缺乏有效的基于rnai的作物保护。(tereniuso等人(2011).j.insectphysiol.57(2):231-245)。
植物害虫在食草期间不断接触并摄入大量微生物。(gayatripriyan.等人(2012).7(1),plosone.e30768；
尽管核心的先天免疫应答途径是保守的，但是它们的特定成分仍处于强烈的多样性选择之下。(casanova-torres和goodrich-blair(2013).insects.4:320-338)。因此，在本文中预期这些途径为设计针对害虫的可持续杀虫rnai生物技术提供了新颖且特定的靶。尽管已从免疫学角度研究了肠道免疫应答，但目前尚缺乏通过遗传工程进行害虫防护的主动操作。
本文提供参与由在喂食和/或主动进食期间摄入的微生物引起的肠道微生物清除和/或遏制的“昆虫rnai靶基因”(irtg)的识别(本文称为微生物诱导的肠道特异性基因(miggs))，以及通过miggs-irtg的种间沉默来防护害虫的新型生物技术的实例。在某些方面，miggs-irtg是鳞翅目特异性的。例如，在下面详述的某些方面，该昆虫是烟草天蛾(th)(msexta；鳞翅目)。例如，在下面详述的某些方面，该昆虫是秋粘虫(faw)。例如，在下面详述的某些方面，该昆虫是小菜蛾(dbw)，例如在下面详述的某些方面，该昆虫是欧洲玉米螟。还应理解，成功的，进食引起的食欲下降，发育缺陷和/或致死性有可能以直系同源方式提供鳞翅目以外的保护。例如，防护诸如科罗拉多马铃薯甲虫(say)，玉米根虫复合体，和赤拟谷盗(rfb)的鞘翅目害虫。此外，这种miggs-rnai技术可以遏制传播疾病的昆虫载体和/或进一步操纵植物-微生物-昆虫的相互作用，其用于设计作物防护的杀虫性rnai。
在下面详述的某些方面，靶基因的沉默可导致昆虫食欲下降和/或发育缺陷和/或死亡和/或昆虫的适应性降低。在某些方面，在持续进食至少约24、36、48或72小时后或之间的任何时间可观察到这些效果。
定义
在提供描述性支持所必需的程度上，所附权利要求的主题和/或文本通过引用整体并入本文。
本书面描述的所有读者应当理解，在缺少本文具体公开或没有具体公开的任何记载的特征，元件或步骤的情况下，可以适当地实践本文描述和要求保护的示例性实施例。
应当注意，术语“一个(a或an)”实体是指该实体中的一个或多个；例如，“一个dsrna分子”应理解为代表一个或多个dsrna分子。这样，术语“一个”，“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。
此外，在本文中使用的“和/或”应被视为具有或不具有其它每个指定特征或部件的具体公开。因此，在本文中诸如“a和/或b”之类的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“a和b”、“a或b”、“a”(单独)和“b”(单独)。同样，在诸如“a、b和/或c”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下每个实施例：a、b和c；a、b、或c；a或c；a或b；b或c；a和c；a和b；b和c；a(单独)；b(单独)；和c(单独)。
应该理解的是，本文中无论在何处用语言“包含”来描述方面，都还提供了以“由...组成”和/或“基本上由...组成”描述的类似方面。
除非另有定义，否则本文中使用的技术和科学术语具有与本公开相关的本领域普通技术人员通常理解的相同含义。数字范围包括定义范围的数字。一组数值列举时，例如1、2、3或4，即使没有通过“及其之间的任何范围”等进行明确确定，除非另有说明，否则本公开具体包括这些数值之间的任何范围，例如1到3、1到4、2到4等。
本文提供的标题仅是为了易于参考，而不是对本公开的各个方面或方面的限制，其可以通过整体参考说明书来获得。
如本文所用，术语“非天然存在的”条件、物质、多肽、多核苷酸、组合物、实体、植物、生物、个体和/或其任何组合，或其任何语法变体等是条件术语，其明确排除但仅排除本领域普通技术人员熟知为“自然发生”的形式，或者在任何时候，由或可能由法官或行政或司法机关确定或解释为“自然发生的”。
如本文所用，术语“同一性”，例如与本文公开的氨基酸序列或核苷酸序列的“同一性百分比”是指两个或更多个氨基酸序列之间或两个或更多个核苷酸序列之间的关系。当一个序列中的一个位置在比较序列的相应位置处被相同的核酸碱基或氨基酸占据时，该序列在该位置处被称为“相同”。通过确定两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸的位置数量来计算“序列同一性”百分比，以产生“相同”位置数量。然后，将“相同”位置数量除以比较窗口中的位置总数，然后乘以100，得出“序列同一性”的百分比。通过在比较窗口上比较两个最佳对齐的序列来确定“序列同一性”的百分比。为了最佳地对齐序列以进行比较，比较窗口中核苷酸或氨基酸序列的部分可以包含称为缺口的增加或删除，而参考序列保持恒定。最佳对齐是即使有间隙也能在参考序列和比较序列之间产生最大数量的“相同”位置的对齐。可以使用，例如程序“blast”，来确定两个序列之间的“序列同一性”百分比，程序“blast”可从美国国家生物技术信息中心(nationalcenterforbiotechnologyinformation)获得，并且该程序结合了程序blastn(用于核苷酸序列比较)和blastp(用于氨基酸序列比较)，这些程序是基于karlin和altschul的算法。((1993).proc.natl.acad.sci.美国.90(12):5873-5877)。
如本文所用，术语“互补的”是指多核苷酸彼此形成碱基对的能力。碱基对通常由反平行多核苷酸链中核苷酸单元之间的氢键形成。互补的多核苷酸链可以以watson-crick方式(例如，a至t，a至u，c至g)或以允许双链形成的任何其它方式进行碱基配对。当使用rna而不是dna时，尿嘧啶(u)而不是胸腺嘧啶(t)被认为是与腺苷互补的碱基。然而，当在本发明的上下文中表示u时，暗示了取代t的能力，除非另有说明。
如本文所用，术语“多肽”旨在涵盖单个“多肽”以及多个“多肽”，并且是指由通过肽键(也称为酰胺键)线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何一条或多条链，并不指产物的特定长度。因此，“多肽”的定义中包括肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指代两个或更多个氨基酸的一个或多个链的任何其它术语。除非另外具体说明，否则可以使用术语“多肽”代替这些术语或与这些术语中的任何术语互换使用。术语“多肽”还旨在指多肽的表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、已知保护/封闭基团衍生化、蛋白水解裂解或非标准氨基酸修饰。多肽可源自天然生物来源或通过重组技术产生，但不一定从指定的核酸序列翻译而来。因此，它可以以任何方式产生，包括通过化学合成。
如本文所用，术语“蛋白质”是指单个多肽，即，如上文所定义的单个氨基酸链，但也可以指两个或更多个通过例如二硫键、氢键或疏水作用相连以产生多聚蛋白质的多肽。
如本文所用，术语“核苷酸”是指核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或其修饰形式，以及其类似物。核苷酸包括包含嘌呤的种类，例如腺嘌呤、次黄嘌呤、鸟嘌呤及其衍生物和类似物，以及嘧啶，例如胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶及其衍生物和类似物。此外，术语核苷酸还包括具有诸如放射性或荧光部分等可检测标记，或与核苷酸连接的质量标记的那些种类。
如本文所用，术语“多核苷酸”是指核苷酸的聚合物，并且包括但不限于dna、rna、dna/rna杂化物，其包括规则和/或不规则交替脱氧核糖基部分和核糖基部分(即，其中交替核苷酸单元在糖部分的2'位置具有一个-oh，然后一个-h，然后一个-oh，然后一个-h，依此类推)的多核苷酸链，以及这些多核苷酸的修饰形式，其中包括各种实体或部分在任何位置处与核苷酸单元的连接。术语“多核苷酸”也旨在涵盖单个核酸以及多种核酸，并且指分离的核酸分子或构建体，例如信使rna(mrna)或质粒dna(pdna)。多核苷酸可以包含常规的磷酸二酯键或非常规键(例如，在肽核酸(pna)中发现的一种酰胺键)。多核苷酸可以是单链或双链的。
如本文所用，术语“核酸”是指存在于多核苷酸中的任何一个或多个核酸片段，例如dna或rna片段。“分离的”核酸或多核苷酸是指已从其天然环境中去除的核酸分子、dna或rna。例如，如本文所公开的，编码包含在载体中的多肽亚基的重组多核苷酸被认为是分离的。分离的多核苷酸的其它实例包括保持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸或溶液中的(部分或基本上)纯化的多核苷酸。分离的rna分子包括多核苷酸的体内或体外rna转录物。分离的多核苷酸或核酸还包括合成产生的此类分子。另外，多核苷酸或核酸可以是或可以包括诸如启动子，核糖体结合位点或转录终止子的调节元件。
如本文所用，“编码区”是包含可翻译为氨基酸的密码子的核酸的一部分。尽管“终止密码子”(tag、tga或taa)没有被翻译成氨基酸，但是可以认为它是编码区的一部分，但任何旁侧序列，例如5'非翻译区(5'utr；也称为前导序列)、3'非翻译区(3'utr；也称为尾随序列)、启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等不是编码区的一部分。两个或更多个编码区可以存在于单个多核苷酸构建体中，例如，在单个载体上，或存在于分离的多核苷酸构建体中，例如，在分离的(不同的)载体上。此外，任何载体可包含单个编码区，或可包含两个或更多个编码区，例如，单个载体可分别编码选择标记基因和目的基因。另外，载体、多核苷酸或核酸可编码异源编码区，所述异源编码区与编码本文提供的多肽亚基或融合蛋白的核酸融合或未融合。异源编码区包括但不限于专门的元件或基序，例如分泌信号肽或异源功能域。
多种转录调节区是本领域技术人员已知的。这些包括但不限于，在诸如但不限于来自巨细胞病毒的启动子和增强子片段(立即早期启动子，与内含子-a结合)，猿猴病毒40(早期启动子)和逆转录病毒(例如劳斯肉瘤病毒)的脊椎动物细胞中起作用的转录调控区。其它转录调控区包括源自诸如肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素和兔β-珠蛋白，以及能够控制真核细胞中基因表达的其它序列的脊椎动物基因。其它合适的转录调节区包括组织特异性启动子和增强子。
类似地，多种翻译调控元件是本领域普通技术人员已知的。这些包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始和终止密码子以及衍生自微小核糖核酸病毒的元件(特别是内部核糖体进入位点或ires)。
如本文所用，术语“载体”是被引入宿主细胞或细胞器中，从而产生转化的宿主细胞或细胞器的核酸分子。载体可以包括允许其在宿主细胞中复制的核酸序列，例如复制起点。载体还可以包括一个或多个选择标记基因和本领域已知的其它遗传元件。载体的说明性类型包括质粒、噬菌体、病毒和逆转录病毒。
如本文所用，术语“转化的”细胞或细胞器或“宿主”细胞细胞器是通过分子生物学技术将核酸分子引入其中的细胞或细胞器。如本文所用，术语转化包括可以将核酸分子引入这种细胞或细胞器的那些技术，包括用病毒载体转染，用质粒载体转化以及通过电穿孔、脂转染和粒子枪加速引入裸露的dna。转化的细胞或宿主细胞可以是细菌细胞或真核细胞。
如本文所用，术语“表达”是指基因产生生物化学物质，例如多核苷酸或多肽的过程。该过程包括细胞内基因功能性存在的任何表现，包括但不限于基因抑制以及瞬时表达和稳定表达。其还包括但不限于将基因转录成信使rna(mrna)，以及将这种mrna翻译成多肽。它还包括但不限于将基因转录成rna分子，该rna分子不翻译成多肽，但是能够被细胞rnai机制加工。如果最终所需的产品是生化试剂，则表达包括该生化试剂和任何前体的创建。基因的表达产生“基因产物”。如本文所用，基因产物可以是核酸，例如通过基因转录产生的rna，或从mrna转录物翻译的多肽。本文所述的基因产物进一步包括具有转录后修饰(例如，聚腺苷酸化)的核酸，或具有翻译后修饰(例如，甲基化、糖基化、脂质添加、与其它蛋白质亚基缔合、蛋白水解裂解等)的多肽。
如本文所用，术语“工程化的”包括通过合成方式(例如通过重组技术，体外肽合成，通过肽的酶促或化学偶联或这些技术的某种组合)对核酸或多肽分子的操作。
如本文所用，术语“hprna”是指包含单链环区和反向重复序列的碱基配对茎的发夹结构rna。hprna可以从hprna构建体(或载体)和/或hprna转基因中产生，该转基因包含rnai靶基因的反向重复序列，并在重复序列之间有间隔子。从此类序列转录的rna自杂交形成发夹结构。茎可用作生成sirna的底物，但是其从环中生成的量很少或没有。由于间隔子对于转基因构建体的稳定性是必需的，但不参与sirna的产生，因此通常在此位置使用内含子序列。(watsonjm等人(2005).febsletters.579：5982-8987)。
如本文所用，术语“sirna”是指能够诱导rna干扰(rnai)途径的小(或短)干扰rna(或沉默rna)双链体。这些分子的长度可以变化(通常在18-30个碱基对之间)，并且在反义链中与其靶mrna的互补程度不同。某些，但不是全部，sirna在有义链和/或反义链的5'或3'末端具有未配对的突出碱基。术语“sirna”包括两条分开链的双链体，以及可以形成包含双链体区域的发夹结构的单链。
如本文所用，短语“双链体区域”是指两个互补或基本互补的多核苷酸中的区域，所述多核苷酸彼此间通过watson-crick碱基配对，或允许在两个互补或基本互补的多核苷酸链之间形成稳定的双链体的任何其它方式，形成碱基对。例如，具有21个核苷酸单元的多核苷酸链可以与另一个具有21个核苷酸单元的多核苷酸进行碱基配对，但是每条链上仅19个碱基是互补的或基本上互补的，使得“双链体区域”具有19个碱基对。其余碱基可以例如以5'和3'突出端存在。此外，在双链体区域内，不需要100％的互补性，在双链体区域内基本上互补是允许的。如本文所用，基本互补性是指79％或更高的互补性。例如，在由19个碱基对组成的双链体区域中的错配导致94.7％的互补性，使双链体区域基本互补。
如本文所用，短语“基因沉默”是指减少或减弱特定基因产物的表达的过程。基因沉默不需要基因产物的表达或存在完全缺失，而是在一定环境中(例如，将表达基因沉默核酸的植物中的靶基因表达与对照植物相比，或将摄食基因沉默核酸的昆虫与对照昆虫比较)，与对照相比观察到了可观察到的效果。尽管基因沉默可以通过多种途径发生，除非另有说明，否则如本文所用，基因沉默是指如本领域普通技术人员所理解的由于rna干扰(rnai)导致的基因产物表达的降低。可以通过多种手段来测量基因沉默的水平，包括但不限于通过逆转录聚合酶链式反应(pcr)、诺慎印迹分析、b-dna技术、转录敏感的报告基因构建体、表达谱(例如dna芯片)和相关技术。或者，可以通过评估由特定基因编码的蛋白质的水平来测量沉默水平。这可以通过进行包括western分析在内，或其它几种众所周知的方法的多种研究来完成，该研究测量具有例如荧光特性(例如gfp)或酶活性(例如碱性磷酸酶)的报告基因蛋白的表达水平。此外，基因沉默可以通过其对害虫的影响来评估，例如导致昆虫食欲降低和/或发育缺陷和/或死亡。
如本文所用，术语“对照”与其公认的科学用途一致，该科学用途是指本领域普通技术人员公认具有代表性的表达水平、表型、抗性、进食、死亡、发育等的比较标准。此外，本领域普通技术人员应当认识到，例如，与标准表示形式不同的、偶然、异常的环境条件，操作或其它原因所产生的统计异常值和/或非代表性结果将不是适当的对照。
如本文所用，“微生物诱导的肠道特异性基因(miggs)”是指在昆虫中肠中表达的基因或一组基因，其响应在昆虫进食的正常过程中摄入的微生物，并且主要通过维持中肠结构完整性起清除或响应摄入的微生物和/或将微生物包含在昆虫肠道中的作用。
如本文所用，“昆虫的主动进食阶段”是指具有完全和不完全变态的昆虫的所有进食阶段。
用于基因沉默的核酸
本文提供的核酸分子尤其用于保护作物免受害虫侵害。在本文公开的某些方面，核酸分子是分离的。核酸分子特异性靶向用于基因沉默的昆虫中的某些昆虫基因(在本文中可互换地称为“靶基因”，“rnai靶基因”，“昆虫rnai靶基因”和“irtg”)。例如，在某些方面，核酸分子靶向某些昆虫微生物诱导的肠道基因(miggs)rnai靶。在某些方面，当本公开的核酸分子被昆虫摄入时，靶基因的沉默发生。在某些方面，靶基因是与昆虫免疫应答有关的昆虫基因(1型miggsrnai靶)。关键的免疫应答基因是遗传上易处理的核或细胞质基因座，其对于在昆虫中提供针对内部微生物、外部微生物和/或其它昆虫寄生虫的细胞和/或体液防御非常重要。在某些方面，免疫应答基因(1型miggsrnai靶)也可以是模式识别受体(prr)基因(casanova-torres和goodrich-blair(2013).insects.4:320-338)。ppr基因是昆虫的遗传上易处理的基因座，其编码识别与微生物有关和/或由微生物释放的特征的可溶性或膜结合蛋白。prr基因可以激活或被免疫应答途径激活，以最大程度地减少微生物感染，并可以通过免疫缺陷(fmd)途径共同调节(tangx等人(2012)7(7)plosone:e36978；ryujh等人(2008).science.37(5):777-82；shresthas.等人(2009))。在某些方面，prr类型基因由已经识别出的th中的免疫缺陷(fmd)途径共同调控，这些基因最近已被总结。(casanova-torres和goodrich-blair(2013).insects(4):320-338；zhongx等人(2012).insectbiochem.mol.biol.42(7):514-524)；zhangx等人(2015).insectbiochem.mol.biol.62:38-50；caox等人(2015).insectbiochem.mol.biol.62:64-74；kanostmr等人(2016).insectbiochem.mol.biol76:118-147))。在某些方面，靶基因是昆虫基因，该昆虫基因对于包括中肠在内的昆虫器官的结构完整性是必需的，并且还有助于将摄入的微生物包含在昆虫肠道中(2型miggsrnai靶)。在某些方面，靶基因是昆虫中肠结构成分基因(2型)(odman-naresh等人(2013).plosone8:e82015.10.1371/journal.pone.0082015)。中肠结构成分基因是昆虫中的一种遗传上易处理的基因座，其编码甲壳素原纤维、蛋白质或糖蛋白，形成一种包裹着昆虫食物团/中肠的称为营养层基质的保护性囊状结构，其功能还包括将消化的微生物包含在肠道中(engel和moran(2013).femsmicrobiolrev.37699-735)。在某些方面，靶基因(1型和2型miggsrnai靶)主要在昆虫中肠中表达，例如，响应于主动进食和/或微生物感染和/或对进食期间摄入的微生物的应答，在幼虫和/或成虫中肠中大量和/或专门表达。在某些方面，在主动进食期间主要以中肠特异性方式诱导靶基因(1型和2型miggsrnai靶)。1型和2型miggsrnai靶基因的中肠丰度可能减轻与生物利用度降低相关的问题。
本文提供从公开文献中识别的昆虫miggsrnai靶基因及其核酸序列的代表性实例。在某些方面，靶基因是以下的一个或多个：m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)，m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3，m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)，m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)，m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)，m.sexta-dorsal(msdor)，m.sexta-
在某些方面，靶基因是以下的一个或多个：m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)，m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3)，m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)，m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)，m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)，m.sexta-dorsal(msdor)，m.sexta-
在某些方面，靶基因是以下一个或多个的直系同源物：m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)，m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3)，m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)，m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)，m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)，m.sexta-dorsal(msdor)，m.sexta-
本领域普通技术人员将理解核酸分子可以是，例如脱氧核糖核酸(dna)或核糖核酸(rna)。在本文任何地方描述的任何靶基因沉默核酸分子的某些方面，该核酸分子是dna分子。在本文任何地方描述的任何靶基因沉默核酸分子的某些方面，该核酸分子是rna分子。在本文任何地方描述的任何靶基因沉默核酸分子的某些方面，rna分子是，例如，用于rna干扰(rnai)过程的双链分子(dsrna)。如本文所用，dsrna分子是包含至少一个退火的双链区域的rna分子。在某些方面，双链区域包含一起退火的两条分开的rna链。在某些方面，双链区域包含一条自退火的rna链，例如，当单rna链包含其间有间隔子的反向重复序列时可以形成。本领域普通技术人员将理解，互补核酸序列能够彼此退火，但是两个序列不必100％互补以退火。退火所需的互补量可能受退火条件(例如温度，ph和离子条件)影响。在某些方面，退火的rna序列在整个退火区域是100％互补的。在某些方面，退火的rna序列在整个退火区域内小于100％互补，但是具有足够的互补性以在其环境内，例如在宿主细胞或昆虫的肠道中进行退火。在某些方面，退火的rna序列具有如本文其它地方所定义的基本互补性。
预期本文中任何地方公开的用于靶基因沉默的核酸分子的特异性均源自包含与靶基因序列的至少一部分互补或基本互补的核酸序列。然而，基本上互补的序列可能更具有降低的特异性并产生脱靶效应。如本文中任何地方所述，靶基因序列可至少包括靶基因蛋白质编码区、5'非翻译区(5'utr)和/或3'非翻译区(3'utr)以及其任何部分或组合。例如，当可获得相应的基因组序列时，可以使用先前建立的标准(siepel等人(2005).genomeres.15:1034-1050)来识别预测的utr区。
在某些方面，分离的双链rna(dsrna)分子包含与本文中任何地方公开的靶基因序列的约21至2000个连续核苷酸互补的核酸序列。例如，在某些方面，分离的双链rna(dsrna)分子包含与靶基因序列的约21、22、23、24、25、30、40、50、60、100、120、200、240、300、400、500、600、650、750、1000个至约23、24、25、30、40、50、100、200、300、400、500、600、650、750、1000或2000个连续核苷酸互补的核酸序列。例如，在某些方面，分离的dsrna分子包含与靶基因序列的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列。例如，在某些方面，分离的dsrna分子包含与靶基因序列的蛋白质编码区的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列。例如，在某些方面，分离的dsrna分子包含与靶基因序列的5'utr区或3'utr区的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列。在某些方面，分离的dsrna分子包含与连续区互补的核酸序列，该连续区包含靶基因序列蛋白质编码区、靶基因序列5'utr区、靶基因序列3'utr区和/或其任意组合的长度的至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。例如，如果确定靶基因序列蛋白质编码区的长度为200个核苷酸，则包含与包含靶基因序列蛋白质编码区的长度的95％的连续区互补的核酸序列的分离的dsrna分子将与190个核苷酸长的连续区互补。
在本文任何地方描述的任何靶基因沉默核酸分子的某些方面，包括用于rnai的dsrna分子，靶基因包含seqidno：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110中的一个或多个核酸序列。在某些方面，靶基因包含seqidno：3或14的核酸序列。因此，在某些方面，分离的dsrna分子包含与靶基因序列的约21、22、23、24、25、30、40、50、100、200、300、400、500、600、650、750、1000个至约23、24、25、30、40、50、100、200、300、400、500、600、650、750、1000或2000个连续核苷酸互补的核酸序列，其包含选自由seqid：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的核酸序列。例如，在某些方面，分离的dsrna分子包含与靶基因序列的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列，所述靶基因序列包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的核酸序列。在某些方面，分离的dsrna包含与靶基因序列的蛋白质编码区的约200至1000个连续核苷酸互补的核酸序列，所述靶基因序列包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的核酸序列。在某些方面，分离的dsrna分子包含与连续区互补的核酸序列，该连续区包含靶基因序列蛋白质编码区、靶基因5'utr区和/或靶基因3'utr区的长度的至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。在某些方面，分离的dsrna分子包含与连续区互补的核酸序列，该连续区包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的序列的长度的至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。
在本文任何地方描述的任何靶基因沉默核酸分子的某些方面，所述核酸分子可以形成sirna。因此，某些方面提供一种衍生自用于沉默本文公开的靶基因的dsrna分子的加工的sirna分子。
杀虫组合物
本公开的某些方面提供一种杀虫组合物，其包含本文中任何地方公开的用于沉默靶基因的核酸分子，所述核酸分子包括长dsrna、hprna和sirna。在某些方面，所述杀虫组合物还包含合成载体或微生物导管。例如，微生物导管可以是具有天然能力或被改造成产生和/或传送dsrna以增加其生物利用度和/或生物稳定性以引起rna干扰的微生物。代表性实例包括植物生长促进生物，与来自自然种群中改造或识别出的害虫的靶害虫或害虫靶宿主或宿主培养范围等相关的正常共生植物和/或共生微生物，以产生和/或传送dsrna。在某些方面，微生物导管可以直接局部施用到整株植物上，或涂覆在种子上或与生长培养基混合或通过肥料或灌溉等方式传播。在某些方面，杀虫组合物的核酸分子与合成载体缀合。例如，合成载体可以是具有天然或改造亲和力的惰性化合物，以结合(缀合)dsrna分子以增加其生物稳定性和/或生物利用度，从而引起rna干扰。在某些方面，合成载体包含惰性化学物质或纳米颗粒的组合，其在结合时和/或单独具有净正电荷或一般亲和力以结合带负电荷的dsrna。代表性实例包括壳聚糖、脂质体、碳量子点、植物(例如椰糠或谷物粉等)或土壤(例如钙化粘土)来源的可生物降解颗粒等。在某些方面，可以使用与合成载体缀合的dsrna可直接用作局部用药和/或在整株植物上气雾化后或涂覆在种子上或与生长介质混合或通过肥料或灌溉传播。在某些方面，dsrna或包含dsrna的组合物可用作外用喷雾剂直接施用在整株植物上，涂覆在种子上或与生长介质混合，或通过肥料或灌溉传播，或与促进植物生长的微生物等结合使用。
重组构建体
本公开的某些方面提供一种重组核酸构建体，例如dna载体，其包含和/或编码本文中任何地方公开的用于沉默靶基因的核酸分子，包括长dsrna、hprna和sirna。某些方面提供包含和/或编码本文中任何地方公开的用于沉默靶基因的核酸分子，包括长dsrna、hprna和sirna的rnai前体的重组核酸构建体。
本公开的某些方面提供重组核酸构建体，例如dna载体，其包含用于沉默本文中任何地方描述的靶基因的靶基因沉默序列。在某些方面，重组dna构建体包含基因沉默序列，该基因沉默序列包含约21、22、23、24、25、30、40、50、60、100、120、200、240、300、400、500、600、650、750、1000个至约23、24、25、30、40、50、100、200、300、400、500、600、650、750、1000或2000个本文任何地方公开的靶基因序列的连续核苷酸。在某些方面，重组dna构建体包含基因沉默序列，该基因沉默序列包含靶基因序列的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，基因沉默序列包含靶基因序列的蛋白质编码区的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，基因沉默序列包含靶基因序列的5'utr区或3'utr区的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，基因沉默序列连续包含靶基因序列蛋白质编码区、靶基因序列5'utr区、靶基因序列3'utr区和/或其任意组合的长度的至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。
在某些方面，靶基因包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的核酸序列。在某些方面，基因沉默序列包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的序列的约100至1000或约200至1000个连续核苷酸。在某些方面，基因沉默序列连续地包含选自由seqidno：1-14、16-29、31-69、70-75、76-88、89-105和106-110组成的群组的序列的长度的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或100％。
在某些方面，重组dna构建体具有基因沉默序列，所述基因沉默序列可操作地连接至一个或多个启动子，以用于被昆虫摄入时使靶基因沉默的dsrna分子的表达。因此，在某些方面，该构建体是表达载体。用于表达dsrna分子的代表性启动子包括但不限于camv35s或zmubil启动子等。在某些方面，表达载体可以靶向单个或多个昆虫rnai靶基因，例如，载体可以包含一个或多个基因沉默序列或可以使用多个载体靶向多个昆虫rnai靶基因或嵌合dsrna分子。
宿主细胞和植物
本文提供宿主细胞、植物和植物部分，其包含，表达、加工等如本文任何地方描述的用于在昆虫中诱导rnai的dsrna。在某些方面，宿主细胞包含本文中任何地方描述的dsrna分子、sirna分子、编码dsrna的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段。宿主细胞的代表性实例包括细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、植物细胞、植物细胞器(例如，包括质体)和哺乳动物细胞。在某些方面，宿主细胞是细菌或植物细胞。在某些方面，宿主细胞是转基因和/或转质体植物细胞。普通技术人员应当理解，存在多种熟知的用于将核酸(例如载体)引入宿主细胞的方法，包括用于产生转基因和/或转质体植物细胞的方法。在某些方面，宿主细胞表达dsrna分子和/或产生sirna以沉默靶基因。在某些方面，转基因和/或转质体植物可以包含dsrna分子、sirna、编码dsrna的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段。在某些方面，转基因和/或转质体植物的至少一个细胞表达dsrna分子和/或产生用于沉默靶基因的sirna。某些方面提供一种本文描述的植物的种子、部分、组织、细胞或细胞器，其中所述种子、部分、组织、细胞或细胞器包含用于沉默靶基因的dsrna分子和/或sirna。
昆虫防治方法
本文还提供使用本文中任何地方描述的dsrna分子或编码此类dsrna的载体来在昆虫中诱导rnai和/或沉默靶基因的多种方法。在某些方面，这提供对害虫的防治。
某些方面提供一种沉默昆虫免疫应答基因和/或编码昆虫中肠的结构成分的昆虫基因的方法。在某些方面，提供一种沉默昆虫miggs-irtg的方法。此类方法包括通过喷雾、浸润、颗粒、种子涂覆或植物掺入的保护剂等向昆虫提供任何地方描述的分离的dsrna(纯或粗提取物)、sirna、杀虫组合物、宿主细胞、转基因和/或/转质体植物，和/或其种子、部分、组织、细胞或细胞器的摄入。
某些方面提供一种沉默昆虫免疫应答基因和/或编码昆虫中肠的结构成分的昆虫基因的方法。在某些方面，提供一种沉默昆虫miggs-irtg的方法。此类方法包括通过喷雾、浸润、颗粒、种子涂覆或植物掺入的保护剂等向昆虫提供任何地方描述的分离的dsrna(纯或粗提取物)、sirna、杀虫组合物、宿主细胞、转基因和/或转质体植物，和/或其种子、部分、组织、细胞或细胞器的摄入。
某些方面提供用于保护诸如作物的植物免受虫害的侵害，所述害虫包括但不限于鳞翅目害虫，如烟草天蛾，秋粘虫，欧洲玉米螟，小菜蛾，或鞘翅目害虫，如科罗拉多马铃薯甲虫，玉米根虫复合体，赤拟谷盗，日本甲虫，白蜡窄吉丁，或半翅目害虫，如亚洲柑橘木虱，臭虫，或蜚蠊目害虫，如蟑螂或白蚁的所有品种，或双翅目害虫，如蚊子和苍蝇的所有品种。植物宿主的代表性实例包括但不限于：玉米，高粱，狐尾小米，珍珠粟，马铃薯，水稻，番茄，茄子，甘蓝家族的栽培品种，柑桔，木犀科树木和蔷薇科作物等。此类方法包括，例如，将本文任何地方描述的分离的dsrna(纯或粗提取物)、sirna和/或杀虫组合物局部施用到植物上，并在害虫的饮食中提供植物。在某些方面，通过在微生物中表达dsrna，然后将该微生物局部施用到植物和/或种子上来局部施用dsrna分子。
某些方面提供对所述植物的害虫产生植物抗性。此类方法包括用编码本文任何地方描述的dsrna分子的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段转化植物，其中所述植物表达本文任何地方描述的dsrna分子和/或sirna，和/或所述植物包含本文任何地方描述的用于沉默靶基因的含有杀虫组合物的dsrna和/或sirna。在某些方面，与未转化的植物相比，转化的植物对所述植物的害虫具有更强的抗性。
某些方面提供提高作物产量。此类方法包括种植作物植物种群，所述作物植物使用编码本文任何地方描述的dsrna分子的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段转化，其中所述植物表达本文任何地方描述的dsrna和/或sirna，和/或所述植物包含本文任何地方描述的用于沉默靶基因的含有杀虫组合物的dsrna和/或sirna。在某些方面，在存在害虫侵害的情况下，转化的植物种群比未转化的对照种群产生更高的产量。
本公开的某些方面提供一种杀虫组合物，其包含本文任何地方公开的用于沉默靶基因的核酸分子，所述靶基因包括长dsrna、hprna和sirna。在某些方面，所述杀虫组合物还包含合成载体或微生物导管。例如，微生物导管可以是具有天然能力或被改造成产生和/或传送dsrna以增加其生物利用度和/或生物稳定性以引起rna干扰的微生物。代表性实例包括植物生长促进生物，与来自包含微生物导管的自然种群中改造或识别出的靶害虫或靶害虫的寄生虫和/或天敌或害虫靶宿主或宿主培养范围等相关的正常共生植物和/或共生微生物，以产生和/或传递dsrna，和/或作为一种控制选项驱动此类微生物导管向害虫的自然种群传播。在某些方面，微生物导管可以直接局部施用到整株植物上，或涂覆在种子上或与生长培养基混合或通过肥料或灌溉等方式传播。在某些方面，杀虫组合物的核酸分子与合成载体缀合。例如，合成载体可以是具有天然或改造亲和力以结合(缀合)dsrna分子以增加其生物稳定性和/或生物利用度，从而引起rna干扰的惰性化合物。在某些方面，合成载体包含惰性化学物质或纳米颗粒的组合，其在结合时和/或单独具有净正电荷或一般亲和力以结合带负电荷的dsrna。代表性实例包括壳聚糖、脂质体、碳量子点、植物(例如椰糠或谷物粉等)或土壤(例如钙化粘土)来源的可生物降解颗粒等。在某些方面，可以使用与合成载体缀合的dsrna直接用作局部用药和/或在整株植物上气雾化后或涂覆在种子上或与生长介质混合或通过肥料或灌溉传播。在某些方面，dsrna或包含dsrna的组合物可用作直接局部喷雾用于整株植物，涂覆在种子上或与生长介质混合或通过肥料或灌溉传播，或与促进植物生长的微生物等结合使用。
某些方面提供产生对所述植物的害虫具有抗性的植物。此类方法包括首先用编码本文中任何地方描述的dsrna的多核苷酸和/或构建体或其dsrna编码片段转化植物细胞。接下来，从转化的植物细胞再生出植物。然后使植物在适合dsrna表达的条件下生长。在某些方面，转化的植物赋予遗传上易处理的(母本和/或父本遗传的)功能表型，表现为削弱目标植物害虫的正常摄食和/或生长和/或发育和/或繁殖成功的能力。因此，与对照未转化植物相比，该植物对植物害虫具有抗性。
在任何前述方法的某些方面，昆虫幼虫摄入dsrna。在任何前述方法的某些方面，dsrna的摄入在昆虫幼虫中诱导黑素反应。在任何前述方法的某些方面，dsrna的摄入导致肠道微生物稳态的扰动。在任何前述方法的某些方面，dsrna的摄入导致机会性微生物清除不良。在任何上述方法的某些方面，dsrna的摄入导致肠道微生物的遏制不良。
本领域普通技术人员将认识到，发明人已经证明了响应于它们对大肠杆菌(e.coli)细菌实验室菌株的摄食，th中的一些代表性数量的miggs-irtgs的中肠特异性表达。例如，本文公开一组20个miggs-irtgs(seqidno：1-9、11、14、31、39、43、44、71-75)，其在摄食诱导培养基(wang等人(2006).j.biol.chem.281(14):9271-9278)的th幼虫中被诱导。以前有报道说这20个基因在肠道中大量表达(表1)。同样测试和验证了2/20基因的肠道特异性表达(图7)。
从具有重要经济意义的抗bt鳞翅目害虫dbm的转录组资源中，采用相互最佳blast分析(ward等人(2014).plosone9(7):el01850)和文献管理相结合识别出代表性的thmiggs-irtg(seqidno：76-88)集的直系同源物。类似于th幼虫的观察结果，这些miggs-irtgs中的大多数是响应于dbm幼虫摄食诱导培养基而被诱导的(wang等人(2006).j.biol.chem.281(14):9271-9278)。
还使用rna-seq方法证明了大多数miggs-irtgs在另一具有重要经济意义的鳞翅目害虫faw中被诱导，该害虫摄食生长在代表性田间土壤上的植物。
rna-seq方法还识别了属于miggs类别的其它rnai候选物(seqidno：89-105)。此外，扩增的代表性thmiggs-irtg集(seqidno：106-110)的直系同源物已经从具有重要经济意义的鞘翅目害虫rfb的转录组资源中识别出。已经证明，类似于鳞翅目的观察结果，大多数miggs-irtgs是响应rfb甲虫摄食诱导培养基而被诱导的(wang等人(2006).j.biol.chem.281(14):9271-9278)。
已证明采用细菌表达的dsrna方案(timmonsl.等人(2001).gene.263:103-112)对20个miggs-irtgs中的9个进行靶向沉默对th幼虫具有杀虫性。对th幼虫的杀虫活性与目标转录物的下调相关。已证明使用细菌表达的dsrna方案(timmonsl.等人(2001).gene.263:103-112.)对14个miggs-irtgs中的7个进行靶向沉默对dbm幼虫具有杀虫性。已证明使用细菌表达的dsrna方案对9个miggs-irtgs进行靶向沉默对faw幼虫具有杀虫性(timmonsl.等人(2001).gene.263:103-112.)。已识别出三个miggs-irtgs(seqidno：3、4和43)的核心组，它们以直系同源方式对所有三种鳞翅目害虫th、dbm和faw有效，并且涂覆有针对核心miggs-irtgs的dsrna的叶盘对th、dbm和faw幼虫具有杀虫性。此外，针对核心miggs-irtgs的dsrna的质体表达影响幼虫的生长和存活。
包括以下实例以说明本公开的某些实施例。本领域技术人员应理解，以下实例中公开的技术代表发明人发现的在本公开的实践中发挥良好作用的技术。然而，根据本公开，本领域技术人员应当理解，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，可以对所公开的特定实施例进行多种改变，并且仍可获得类似或相似的结果。
实例
在某些方面，对将选定的m.sexta(th)miggs-irtgs进行识别、诱导、分离并克隆到能够使克隆的基因产生dsrna(timmonsl.等人(2001).gene.263:103-112.)的细菌表达系统中。在被m.sexta幼虫摄入后，细菌表达的dsrna旨在沉默或至少敲除、减少相应的miggs-irtg，以便减少进食行为和/或对害虫造成致命影响。基于这些结果，对其它代表性昆虫种类进行了额外的测试，以证明和建立用于支持本公开的组合物和方法的广泛适用性。
对于miggs-irtg的选择，已识别了th中由免疫缺陷(imd)途径共同调节的prr型基因，这些基因最近已被总结(casanova-torres和goodrich-blair(2013).insects(4):320-338；zhongx等人(2012).insectbiochem.mol.biol.42(7):514-524)；zhangx等人(2015).insectbiochem.mol.biol.62:38-50；caox等人(2015).insectbiochem.mol.biol.62:64-74；kanostmr等人(2016).insectbiochem.mol.biol76:118-147)。特别地，选择用于该研究的大多数prr基因被大量地诱导或预测以由中肠特异性方式表达(pauchety等人(2010).insect.mol.biol.19:61-75；kim和lee(2014).front.cell.infect.microbiol.3:116；lee和hase(2014).nat.chem.biol.,10:416-424)。
th-转铁蛋白，芳基蛋白β亚基，胰凝乳蛋白酶原样蛋白1和少数其它免疫相关基因不属于常规prr型免疫应答基因。然而，将这些基因包括在内，因为它们可能通过imd共同调节而促进中肠微生物稳态(pauchety等人(2010).insect.mol.biol.19:61-75)。另外识别出了th基因，其被证明是对中肠围食膜基质的形成至关重要的富缬氨酸中肠蛋白，还识别出了对于维持中肠的结构完整性至关重要的相关基因，其可能与肠道微生物的遏制有关。(odman-naresh等人(2013).plosone8:e82015.10.1371/journal.pone.0082015；engel和moran(2013).femsmicrobiolrev.37699-735)。编码木薯过氧化氢酶1(manihotesculanta)的非昆虫基因用作对照。
材料和方法
分离irtg基因和随后的生物测定所需的th幼虫如下饲养：卵是从卡罗来纳州生物科学公司(carolinabiologicalsciences)(美国北卡罗来纳州伯灵顿)获得的。该卵未经表面灭菌，直接用于常规饲养(cr)。通过使用含有吉普赛蛾饮食的phytatrayii(sigma，美国密苏里州)单元建立并维持幼虫菌落。(gunaratnart和jiangh(2013).dev.comp.immunol.39:388-398)。
抗bt的dbm卵是从benzonresearch(美国宾夕法尼亚州卡莱尔)购买，并按上述常规饲养。
faw卵是从benzonresearch(美国宾夕法尼亚州卡莱尔)购买，并按上述常规饲养。
对于无菌(gf)饲养程序，如前所述，所有卵均用tween-80(失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚)、漂白剂和蒸馏水的溶液进行表面灭菌。(broderickna等人(2009).environ.entomol.29:101-107)。将经表面灭菌的卵转移至含有吉普赛蛾饮食的phytatrayii(sigma，美国密苏里州)单元，该饮食中添加了抗生素(青霉素、庆大霉素、利福平、链霉素各500mg/l)。(broderickna等人(2009).environ.entomol.29:101-107；gregoryr.richards(2008).journalofbacteriology.190,4870-4879)。
cr和gf幼虫均在25℃下在环境室中以16：8小时(光照：黑暗)光周期饲养，直到使用。为了诱导一组代表性的prr类miggs-irtgs，将重悬在pbs缓冲液中的dh5α感受态细胞(invitrogen，美国加利福尼亚州)的75个集落形成单位(cfu)注入健康的2-3龄m.sexta幼虫。将幼虫在液氮中速冻并处理以用于本文所述的rna分离和cdna合成。
为了通过口服摄食诱导培养基而对miggs-irtgs的上调进行测试，将一龄幼虫饲养在luria肉汤琼脂培养基上，其接种有活大肠杆菌(3x107细胞)，藤黄球菌(m.luteus)(30μg)，和凝胶多糖(30μg)在50μl水中的混合物。(wang等人(2006).j.biol.chem.281(14):9271-9278)。
使用rneasyminikit试剂(qiagen，美国纽约州)分离总rna，并使用制造商的方案用turbodnase(ambion-lifetechnologies，美国纽约州)处理。使用iscriptcdna合成试剂盒(bio-rad，美国加利福尼亚州)，将1μgdnase处理的rna用于cdna合成。cdna用作扩增irtg的接近全长转录物的模板。类似地，还扩增了木薯的对照基因。对于组织特异性cdna合成，如pauchet等人(2010).insect.mol.biol.19:61-75)中所述，挤压对照和处理幼虫以分离血淋巴级部分(hl)，解剖中肠(mdg)，以获得身体的其余部分。使用superscriptiii一步rt-pcr系统按照制造商的方案(thermoscientific；美国)，适当的将cdna模板用于rt-pcr反应。
使用primestargxldna聚合酶(clontechlaboratories，美国加利福尼亚州)对th、dbm和fawmiggs-irtgs和非昆虫对照基因的转录物进行pcr扩增。在以下条件下进行pcr反应：98℃变性30s，55/60℃退火30s，72℃延伸45s，进行35个循环。通过琼脂糖凝胶电泳分解pcr产物，并用溴化乙锭染色。使用qiaquick凝胶提取试剂盒(qiagen，美国纽约州)对转录物进行凝胶洗脱。
使用制造商的方案，将序列确认的转录物克隆到pcr8/gw载体(invitrogen，美国加利福尼亚州)。使用lr克隆酶(inivtrogen，美国加利福尼亚州)将序列确认的重组pcr8克隆体克隆到l4440gtwy中。l4440gtwy是timmons和fire喂食载体的改良版，是guycaldwell的一份好礼(addgene质粒#11344)。(timmons&fire(1998).nature,395:854)。
对于可摄入的rnai生物测定法，将序列确认的miggs-irtg以反向定向克隆到两个t7启动子之间的l4440喂食载体中，并转化为携带iptg可诱导表达的t7聚合酶ht115(de3)的大肠杆菌菌株。(timmons&fire(1998).nature,395:854)。先前已证明以这种方式修饰irtg可诱导dsrna的表达。(timmonsl等人(2001).gene,263,103-112；kamathrs等人(2000).genomebiol.2:1-10.)。
ht115(de3)菌株是rnaseiii缺陷型大肠杆菌菌株，其t7聚合酶活性是iptg可诱导的。ht115(de3)基因型如下：f-，mcra，mcrb，in(rrnd-rrne)1，lambda-，rnc14::tn10(de3溶原：lavuv5启动子-t7聚合酶)(iptg可诱导的t7聚合酶)(rnaseiii-)，以四环素为选择标记。(kamathrs等人(2000).genomebiol.2:1-10)。使用用于转化l4440::irtg和对照构建体的标准热休克方案。
挑出含有克隆的l4440质粒的ht115细菌的单菌落，并在具有50mg/ml氨苄青霉素(amp)的5mllb培养物中生长。保存1ml液体培养物用于质粒分离，然后对l4440::irtg克隆体进行序列确认。重组细菌克隆体在液体培养物中生长8小时，并直接接种在含有1mmiptg和50mg/mlamp的lb平板上，以诱导dsrna。(kamathrs等人(2000).genomebiol.2:1-10)。使接种的板在层流气流室中干燥并在37℃的温度下孵育过夜。
为了进行幼虫生物测定，将三到五个1-2龄th、dbm和faw幼虫放在含有ht115(de3)细胞的诱导板上，所述ht115(de3)细胞含有所需的l4440::irtg。进行生物测定以测试针对表1中所列的miggs-irtgs和对照的th幼虫。
表1.从th中测得的总miggs-irtgs列表。
记录含ht115(de3)l4440::irtg的板上幼虫发育的表型差异，并与含ht115(de3)的阴性和阳性对照板的幼虫生长进行比较。在至少两个独立的饲养实验中，只有在2/3或4/5幼虫中可再现地观察到时，具有适当对照给定处理的幼虫表型才被认为是真实的，并记录下来。
对于可喷雾的rnai，使用megascriptrnai试剂盒的改良十六烷基三甲基溴化铵方法，按照制造商的方案(thermoscientific，美国)，开发了基于24孔板的生物测定系统用于针对给定miggs-irtg的dsrna的大规模纯化。通过在1％琼脂糖凝胶上电泳确定dsrna的完整性，并使用nanodropuv-vis光谱仪确定其浓度。从生长在田地土壤上的本氏烟草(nicotianabenthamiana)(用于th)或拟南芥(arabidopsis)col-wt(用于dbm)或小麦栽培品种bobwhite(用于faw)分离1cm2直径的叶盘，在te缓冲液中滴注接种0、4、8或16μg的纯化dsrna。将风干的涂覆dsrna的叶盘置于每孔含1ml1％murashige和skoog琼脂培养基的生物测定板中。每个孔包含一个叶盘，并由常规饲养的三个一龄th或dbm或faw幼虫侵染。每隔24小时更换一次涂覆dsrna的叶盘，并在连续摄食5天后测量每种dsrna的杀虫活性作为幼虫死亡率的函数。使用先前公布的面粉圆盘测定方案(cao等人(2018).int.j.mol.sci.19,1079)对成年甲虫进行rfb生物测定。
为了进行rna-seq分析以测试miggs途径基因是否由faw中的土壤微生物组诱导，对小麦(triticumaestivum)种子进行表面灭菌，并种植在4.5”盆中，该盆包含田间土壤或用4：1的无菌土：沙土混合物填充。使幼苗在育苗室中生长20天，并每盆使用十只一龄faw幼虫侵染。确认了旺盛的幼虫摄食活性，并收集幼虫样品用于rna-seq分析。使用“汇集rna-seq”方法(rajkumar等人(2015).bmcgenomics.16(1):548)获取差异化faw基因表达的快照，以响应摄食富含微生物(田间土壤)和微生物枯竭(无菌表面)基质上生长的植物。
为了证明另外的dsrna传递方法，使用质体dsrna表达系统。由于可以在质体中稳定产生高浓度的长dsrna(zhang等人(2015).science.347(6225):991-994)，按照先前公开的方案(zhang等人(2015).science.347(6225):991-994)，通过与plastomicsinc.合作在烟草植物中通过质体转化表达三种最有效的杀虫性thmiggs-irtgs(seqidno:3、4、和43)dsrna(dsmspgrp2、dsmsβgrp2和dsmschs2)。将稳定的表达针对miggs靶的dsrna的转质体细胞系的分离叶片喂入th幼虫，并评估其杀虫活性。
结果
生物测定法(图1)表明在含有ht115(de3)的l4440::mspgrp2和l4440::msvmp1板上的th幼虫的口服摄食活性导致生长障碍和/或死亡。相反，在含有ht115(de3)的l4440::mecat1板上生长的幼虫正常发育，没有任何异常表型。
暴露于细菌(ht115(de3))表达的dsrna在192小时后曝光(hpe)后针对miggsrnai靶mspgrp2(图2a)；msvmp1(图2b)；和针对木薯植物特异性基因mecat1(图2c)的阴性对照的th幼虫的代表性表型。导致幼虫死亡的表型效应通常与黑色素反应的发展、食欲下降、生长和发育有关(图2a和b)。
与上述一致，暴露于细菌表达的阴性对照mecat1dsrna的th幼虫表现出强烈的进食(图3a的箭头之间的区域)。相反，暴露于针对miggsrnai靶mspgrp2的细菌表达的dsrna的th幼虫显示出减少的进食(代表性图片，图3b箭头之间的区域)。
通常，黑化是高度保守的免疫应答，并且通常与昆虫的微生物感染有关。(kimsr等人(2005).insectmolecularbiology,14(2):185-194.doi:10.1111/j.1365-2583.2004.00547)。在持续暴露于细菌表达的针对miggsrnai靶mspgrp2和含ht115(de3)的msvmp1的dsrna的平板上的th幼虫中的黑素病反应加剧，这强烈表明已感染，这可能是由摄食期间摄入的机会性微生物清除不良所致。这种清除不良先前已与肠道微生物体内稳态的扰动有关。(packey和sartor(2009).curr.opin.infect.dis.22(3):292-301)。
仔细观察表明，摄食细菌表达的针对miggsrnai靶mspgrp2和msvmp1的dsrna的cr幼虫从第5天开始显示可辨别的死亡率，到第8天分别达到100％和80％的死亡率(图4)。
为了测试是否可以通过清除肠道菌群来延迟所观察到的表型的发生和强度，还对gf组的th幼虫进行了上述处理，同时进行了适当的对照。有趣的是，与cr幼虫(图4)相比，gf幼虫的幼虫死亡率不仅被延迟，而且更低。
在针对miggsrnai靶mspgrp2和msvmp1的细菌表达的dsrna平板上幼虫死亡率也与黑色素反应的发展相关(图5)。最值得注意的是，与cr幼虫相比，gf幼虫的黑色素反应的发展伴随着延迟(图5)。观察到的所有表型在0.001至0.05之间的p值上具有统计学意义。暴露于细菌表达的针对阴性对照mecat1的dsrna的幼虫，未观察到死亡率或黑色素反应的显著进展(图4和5)。
尽管msvmp1不直接参与免疫应答，但是下调可以消除微生物的包容，导致感染表型(图2b)。替代地或另外，msvmp1的下调可能导致围食膜基质(幼虫中肠的保护性衬里)受伤，这也可能导致败血症介导的感染表型(图2b)；与暴露于针对mspgrp2的dsrna的幼虫相比，暴露于针对msvmp1的dsrna的幼虫(cr或gf)的感染症状延迟发作进一步证实了这一点(图4和5)。清除不良和对机会性微生物的遏制不良都已与致死表型相关联。(packey和sartor(2009).curr.opin.infect.dis.22(3):292-301)。用于上述研究的dsrna传递载体的示意图如图6所示。
本文公开的大多数thmiggsrnai靶(例如，表1)是可诱导的，并且已经从开放存取中肠特异性免疫转录组和/或其它数据集中进行了识别(pauchety等人(2010)insect.mol.biol.19:61-75；odman-naresh等人(2013)plosone8:e82015；kanostmr等人(2016)insectbiochem.mol.biol76:118-147；brummett等人(2017)insectbiochemmolbiol.81:1-9；caox等人(2015)insectbiochem.mol.biol.62:64-74)；zhongx等人(2012)insectbiochem.mol.biol.42(7):514-524；xiaxu等人(2012).devcompimmunol.38(2):275-284)。针对两个miggsrnai靶mshem和msspfb的验证研究证实，当注射75cfu革兰氏阴性大肠杆菌时，它们优先采用中肠特异性方式(图7)。此外，文献整理证实了这些miggs靶在昆虫肠道中大量表达(表1)。
口服摄食含有活的大肠杆菌和来自革兰氏阳性细菌和真菌的冻干细胞壁标记的诱导培养基的th幼虫(图8)，成功诱导(图9)表1所列的miggsrnai靶基因。在幼虫暴露于诱导培养基后的24-48小时之间，诱导了具有免疫相关功能的基因，并且在不存在诱导的情况下大部分未被检测到(图9a-c)。同时，在两种条件下都表达了中肠结构完整性所必需的基因(图9d)。这清楚地表明，miggsrnai靶是响应于摄食过程中摄入的微生物而被诱导的。
使用细菌传送的dsrna筛选对微生物诱导的miggsrnai靶进行高通量筛选(图9)，识别出3种杀虫候选物(图10)。这些miggsrnai靶包括toll受体(mstoll2)，beta呋喃果糖苷酶1(mssuc1)和beta微管蛋白(msβtub)基因(图10d-f)。与阴性对照处理(图10b)相比，阳性对照msvatpasee处理(图10c)中观察到杀虫活性表现为生长发育迟缓，食欲不振和黑色素反应(图10d-f)。由于细菌表达的dsrna暴露导致的发育缺陷导致致死率在60-70％之间(图11)，其中mssuc1是杀死th幼虫的最有效靶标。死亡率具有统计学意义，并与msvatpasee阳性对照相差无几。
另外，相互最佳blast分析和文献整理的组合被用于从dbm转录组学资源中识别thmiggsrnai靶的直系同源物(表2)。
表2.从dbm转录组学资源中识别的miggs-irtgs列表。
表2.从dbm转录组学资源中识别的miggs-irtgs续表。
已证明，已识别的14个miggsrnai靶基因(图12)在摄食诱导培养基的dbm的抗bt菌株中也可以被诱导，因此表明口服诱导微生物相关的细胞壁标记可以诱导具有重要经济意义的dbm中的miggsrnai靶基因。
使用细菌传送的dsrna筛选的微生物诱导的dbmmiggsrnai靶基因(图12)的高通量筛选表明，测试的7/15miggsrnai靶对dbm的抗bt菌株表现出杀虫活性(图13)。dbm杀虫靶包括pxpgrp2(seqidno.76)、pxβgrp2(seqidno.85)、pxchs2(seqidno.87)、pxcac(seqidno.80)、pximd1(seqidno.77)、pxdor(seqidno.81)和pxβtub(seqidno.88)。与阴性对照处理(图13b)相比，阳性对照msvatpasee处理(图13c)中观察到杀虫活性表现为生长发育迟缓，食欲不振和黑色素反应(图13d-h)。由于细菌表达的dsrna暴露引起的发育缺陷导致致死率在53-70％之间(图14)，其中pxpgrp2是杀死dbm幼虫的最有效靶(图14)。死亡率具有统计学意义，与pxvatpasee阳性对照(图14)相差无几。
为了测试我们的miggsrnai技术是否可以使用多个dsrna传送平台工作，我们测试了针对四个thmiggs杀虫靶的dsrna是否可以以可喷雾形式工作。我们将针对mspgrp2、msβgrp2、mschs2和msvmp1的dsrna用于te缓冲液中浓度为0、4、8或16μg纯dsrna的可喷雾rnai分析(图15)。最有效的涂覆针对mschs2的16μgdsrna的叶盘导致58％的死亡率。当向昆虫喂食8μg涂覆针对相同的miggs靶的dsrna的叶盘时，观察到相似但略有降低的死亡率。观察到的死亡率具有统计学意义，与暴露于针对已知的阳性对照靶msvatpasee的dsrna的th幼虫观察到的死亡率(图16)相差无几。喂食4μgdsrna时，未观察到幼虫具有统计学意义的死亡(图16)，表明在此测定法中，每片叶盘需要8-16μgdsrna引起死亡。除死亡外，与阴性对照相比，摄食dsrna的th幼虫具有发育缺陷，食欲不振，黑色素反应和生长减慢的特征，表明靶向昆虫健康的migg具有明显的有害影响(图17)。此后将杀虫thmiggs靶mspgrp2，msβgrp2和mschs2称为核心集。
类似地，为了测试额外的传送平台，核心杀虫miggsrnai靶mspgrp2；msβgrp2和mschs2是通过与plastomicsinc.合作在烟草植物中进行质体转化而表达的。表达针对miggs靶的dsrna的稳定转质体系的分离叶片(图18)表明，与阴性对照(a)相比，摄食表达针对miggs靶mspgrp2(b)，msβgrp(c)和mschs2(d)的dsrna的叶片的th幼虫显示发育迟缓，食欲不振和黑色素反应。与阴性对照(e)相比，杀虫活性表现为平均重量的显著降低。以0-3对死亡率进行评分，分别为0、1、2和3，分别表示≤0、25、50或≥50的死亡率。与阴性对照(f)相比，转质体事件具有显着的死亡率。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时6次重复/处理±sem的平均值(n＝24)。清楚地表明，针对核心miggsrnai靶的稳定表达的dsrna也影响幼虫的生长和发育。
接下来，我们测试了我们的miggsrnai技术是否也可以以可喷雾的形式抵抗dbm的抗bt菌株。我们将杀虫thmiggs核心集(pxpgrp2、pxβgrp2和pxchs2)的dbm直系同源物和两个新发现的杀虫dbmmiggs靶(pxcac和pximd1)以浓度为0.1、0.5和0.25μg用于可喷雾rnai测定。我们观察到的致死率范围为53-67％，其中pxpgrp2是杀死dbm幼虫的最有效靶(图19)。死亡率具有统计学意义，与pxvatpasee阳性对照(图19)相差无几。以与针对th的可喷雾dsrna相似的方式，除死亡外，暴露于dsrna处理的dbm幼虫的还具有发育不良，食欲不振，黑素反应和生长停滞的特征(图20)。清楚地表明，当以可喷雾形式使用时，针对本文所识别的杀虫miggsrnai靶的dsrna对dbm的抗bt菌株也有效。
到目前为止，我们大多数的miggsrnai靶基因诱导方法都依赖于直接注射或口服摄入外源提供的微生物标记。为了确定我们的miggsrnai靶基因是否在田间条件下被诱导，我们将具有重要经济意义的鳞翅目有害生物faw的幼虫暴露于生长在富含微生物和微生物枯竭环境的小麦幼苗(图21)。汇集的rna-seq分析表明，田间土壤中生长的植物导致faw中miggs途径基因的优先上调。总共识别出100个差异表达基因，其中30个是miggs途径相关基因(图22)。
atty.dkt.no.47004-173514
表3使用rna-seq方法从faw中识别的miggs-irtgs列表。
最值得注意的是，包括pgrp2、βgrp2和imd的th杀虫靶的faw直系同源物被捕获在数据集中。这一发现表明，miggs途径基因响应于摄食暴露于田间土壤中微生物的昆虫而上调。
进行初步实验以筛选rna-seq(上文表3)中发现的17种杀虫性fawmiggsrnai靶，其中针对杀虫性thmiggs核心集(sfpgrp2(seqidno.89)、sfβgrp2(seqidno.101)和sfchs2(seqidno.105)和三个从rna-seq新发现的miggs靶sfctl(seqidno.96)、sfrc(seqidno.103)和sfgal(seqidno.92)的dsrna，分别在te缓冲液中添加0、4、8或16μgdsrna喂给faw幼虫。按照上述th的生物测定法，faw一龄幼虫允许摄食涂覆dsrna的叶片，数据表明，暴露于针对sfchs2(b)；sfβgrp2(c)；sfpgrp2(d)，sfrc(e)和sfctl(f)的纯dsrna的faw幼虫(图23)，与阴性对照处理(a)相比，导致生长发育迟缓和食欲不振，从而导致dsrna浓度为8和16μg时体重显著降低(g)和死亡(h)。以0-3对死亡率评分，分别为0、1、2和3，分别表示≤0、25、50或≥50的死亡率。施加的dsrna处理导致统计学意义上的平均体重(g)显著降低，与阴性对照(图23)相比，这也意味着死亡率(h)的显著降低。从rna-seq数据集中识别的其它miggsrnai靶基因的杀虫活性筛选表明，16μg涂覆有针对miggsrnai靶sftsp(seqidno.95)，sfatta(seqidno.90)，sfcec(seqidno.98)和sfhp10(seqidno.94)的dsrna的叶盘引起平均体重(a)的统计学显著降低(图24)，与阴性对照相比，平均体重(a)也转化为显著的死亡率(b)。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时3次重复/处理±sem的平均值。
还对具有重要经济意义的鞘翅目害虫rfb进行了试验，以测试通过结合相互最佳blast分析和文献整理(表4)识别的miggs-irtgs靶是否对鞘翅目害虫有杀虫作用。
使用1μg针对rfbmiggrnai靶tcpgrp2(seqidno.107)，tcβgrp2(seqidno.108)，tcmdgp(seqidno.109)和tcchs2(seqidno.110)的纯dsrna初步喂养实验表明，该dsrna对成年rfb甲虫有杀虫性。以0-3对死亡率评分，分别为0、1、2和3，分别表示≤0、25、50或≥50的死亡率，与阴性对照相比，观察到rfb死亡率显著升高(图25)。数据为在p≤0.001(***)；p≤0.01(**)及p≤0.05(*)时3次重复/处理±sem的平均值。
表4从rfb转录组资源中识别的miggs-irtgs列表。
幼虫死亡的一种可能原因可涉及miggs-irtgs转录物摄食外源提供的针对靶基因的dsrna后的下调。初步的rt-pcr数据表明，幼虫表型(图17)也与目标转录物的下调相关(图26)。
重要的是，rna-seq分析表明miggs-irtg途径靶是由土壤微生物组诱导的，表明我们的新型rnai方法即使在田间条件下也可能有效。
鉴于容易识别，高度特异性以及对多种害虫和传送平台的适用性，miggs-irtg途径基因的rnai沉默已被识别，该方法提供了作为新型杀虫策略的空前潜力。
将这些初步发现转化为针对具有重要经济意义的害虫的杀虫rnai技术可能会导致可持续的替代方案，包括但不限于本文任何地方描述的方法。
另外，所提出的方法将为理解植物-微生物-昆虫相互作用之间的三营养相互作用提供更多的启示，因为其涉及可持续的害虫防护。
序列
seqidnos：1-14和31-44是m.sexta-rnai靶基因序列的代表性实例。
seqidno：15是编码来自木薯(manihotesculanta)的过氧化氢酶1的非昆虫基因序列。
seqidno：16-29是代表性的m.sexta-rnai靶基因的编码区序列。
seqidno：30是来自木薯的过氧化氢酶1的编码区序列
seqidno：45-70是代表性的m.sexta-rnai靶基因的5'utr和3'utr区序列。
seqidno：71-75是另外的代表性的m.sexta-rnai靶基因的编码区序列。
seqidno：76-88是代表性的p.xylostella-rnai靶基因的编码区序列。
seqidno：89-105是代表性的s.frugiperda-rnai靶基因的编码区序列。
seqidno：106-110是代表性的t.castaneum-rnai靶基因的编码区序列。
seqidno：111-119是烟草天蛾杀虫性dsrna序列的代表性实例。
seqidno：120-126是小菜蛾杀虫性dsrna序列的代表性实例。
seqidno：127-135是秋粘虫杀虫性dsrna序列的代表性实例。
seqidno：136-139是赤拟谷盗杀虫性dsrna序列的代表性实例。
>m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)；m64346.1(seqidno：1)
atggtttcaaaaagtatcgtcgctttggctgcgtgcgtcgcaatgtgcgtagcccagccagtggagaagatgcctgtgctgaaggaccaacccgctgaagtcctcttccgggagtctcaggccaccgttctcgaatgtgttaccgagaatggcgataaagatgtcaaatattcttggcaaaaagacggcaaagaattcaaatggcaggaacacaatatcgcccagcgcaaagacgaaggcagcctggtcttcctcaagcccgaggctaaagatgaaggccaatacagatgtttcgctgagtcggccgccggagtcgccacctcccacatcatctcctttagaaggacctacatggtcgtacctactacttttaagactgtagaaaagaaaccggtagaagggtcatggctcaaacttgagtgcagcatccccgaaggttatcctaaacctactattgtatggagaaagcagcttggtgaagacgaaagtatagcagattctatactggcacgtcgtattacacaatctccagagggagacctgtacttcacgagcgtcgagaaagaagacgtaagcgaaagctataaatacgtttgcgctgctaagtcaccggctattgatggggatgtccctcttgttggatacactattaaaagcttagaaaagaatacaaatcagaaaaacggtgagctggtcccgatgtacgtcagtaatgatatgatagctaaggccggagacgttactatgatctactgcatgtatggtggagtcccaatggcttaccccaactggttcaaagacggtaaggacgtgaacggcaaaccgagcgaccgcatcacccgccacaacagaacctccggcaaaagactgttcatcaaggagacgctgctcgaagatcagggcacttttacttgcgacgtgaacaacgaagtcggcaagccacagaaacattccgtcaaacttaccgtagtcagtggacccagatttacgaagaaaccagaaaagcaagtcatcgctaagcagggccaggactttgtaatcccctgtgaagtatccgccttaccggccgcccctgtctcctggacgttcaacgccaagcccatcagcggcagccgcgtggtagccagcccgagcggactgaccatcaagggcatccagaagtctgacaagggttattatggctgccaggcccacaacgagcacggagatgcctacgctgagacgctcgtgattgttgcttaa
>m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3)；af413067.1(seqidno:2)
atgttgttgcttctgtattgtcttgtggcggcctccgcgccgttctttattgcagcggaccaaggcagccctgacctgcctttagctaccgaaccaccaacagaatgcggaacaatagcacctgatgatagcttagtattagatgggtccgttggtaaaagtgacaaattaccttggtatgctattatctacacaaccaccacccggccatacaagcagatcggtggaggaaccctcatcactccttcagtagtaatctcagccgctcactgtttctggcgcaatggtgaggttccatctaaggataattacgccgtggcgctcggcaagacccatagtgcttggaatagccatgccgatgtaaacgctcacaagtctgatgtaaaagaaatacacataccaccgcagtttaagggaaggaacactaattatcggaatgatatagcaatcgtggtcatgtcagaccctgtgacctacaaagtggacatccgccctatctgtttgaacttcgatgtacaatttgaaagactgcaattaaaagacggcattatggggaagatcggcacatggaatgtaagtcgtgagacactgaaactatcgaaaacattaaaagtggtggagaatccatacattgacgcagcgacttgtattagtgagtctccggcaagcttcagaaattccatcactgcggacaaaatatgcatcggatacgttaacggcaccgggctatgtagaggtgatggcggcgctggggtggctttccctagccaggaacaaggagtgcaacgttactacctcagaggtgttatatctacagcccataccagcgatgatggcaacttatgtgcagatggatttgtaactgccactgctataggccatcacgaacattttatcaaacagtttataagcgtttag
>m.sexia-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)；gq293365.1(seqidno:3)
atggcgagcttcgctttaatagttatccttagcgtaattggctttatatcggcctatcctagtcctgaaggttacagttctgccttcaactttccattcgtaaccaaggagcagtggggcggcagggaggcacgcacgtcgacgccactcaaccacccagtgcagttcgtggtgatccaccacagttacattcccggcgtgtgcctcagccgggacgagtgcgcgcgcagcatgcgctccatgcagaacttccacatgaacagtaacgggtggagtgatattggatacaacttcgctgtcggcggtgaagggtcggtgtacgagggccgcggctgggacgcggtcggcgcacacgcagctggctataacagtaacagtatcggcatcgtgctcatcggcgattttgtttcaaacctcccgccggcggtgcaaatgcaaaccacacaagaattgatcgcagcgggcgtgcgactcggttacatcaggcccaactacatgctcatcgggcatcgtcaggtctccgccactgagtgcccaggaaccagactcttcaacgaaatcaccaactggaacaacttcgtgaggatatga
>m.sexia-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)；ay135522.1(seqidno:4)
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>m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)；hm363513.1(seqid:5)
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>m.sexta-dorsal(msdor)；hm363515.1(seqidno:6)
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>m.sexta-
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>m.sexta-toll受体(mstoll)；ef442782.1(seqidno:8)
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>m.sexta-scolexina(mssca1)；af087004.1(seqidno:9)
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>m.sexta-血淋巴蛋白酶18(mshp18)；ay672794.1(seqidno:10)
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>m.sexta-转铁蛋白(mstrn)；m62802.1(seqidno:11)
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>m.sexta-芳基蛋白β亚基(msarp)；m28397.1(seqidno:12)
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>m.sexta-胰凝乳蛋白酶原样蛋白1(msctl1)；am419170.1(seqidno:13)
atgtacgtgaaagtagcacttctgttggtagccctcattgctgggagctgggccttcccaaagctcgaagatgagcaggacatgtccatcttcttcacgcagctcgattcgagcgcgcgtatcgtgggtggtacccaggcccccagcggaagtcaccctcacatggtggcgatgaccaccggtaccttcatcaggagcttcagctgtggaggctcagttgtcggtagacgttccgttctgactgcggctcattgcatcgctgctgttttcagtttcggttccctcgccagtaccctccgcttgacggtcggcaccaacttctggaaccagggaggcaccatgtacaccgtcgctcgcaacataacccacccccactacgtctctgcgaccatcaagaacgacatcggtctgttcatcactcacaacaacatcatcgacacgactgtcgtccgcagcatccctcttaactttgactatgtgcccggtggtgttctcactagagtcgccggatggggcaggatcaggaccggcggtgccatctctccctctctgctggagatcattgtgcctactatcagtggaagcgcatgcgtagccagtgcaatccaagctggcatcgatctgaacatgagaccacctcccgtcgagcctcacatcgagctgtgcaccttccacggtcctaacgtaggcacttgtaatggtgactccggcagcgctcttgcccgcctagacaacggccagcagatcggtgtggtatcgtggggcttcccgtgcgcacgcggcggtcccgacatgttcgtcagggtcagcgcctaccaatcctggctgcagcagagcatcgtataa
>m.sexta-富缬氨酸中肠蛋白(msvmp1)；ncbi登录号还未设置(seqidno:14)
atcattgacggaccttccgttggaccngccatcatcggcgctggagacatcgctgtcggccctgctatcgtcgacttccctttccccgacggcggtgccgtgtctgcccccgttgagccttcccccatcgccatcggacccgctatcgtcggtgaatcccctatctccgtcggacctgccatcgttgaggccggagacatcgctgttggacccgctatcatcgacttcccccttcccgacggtggcgccgtgtccgcccccgttgaggtttctcccgtcgactccgtcgtcgtcggccctgccgccggctctcagagctctcccctcgtccagatcatcatcaacgttaaggcccccgctggtgccggccccgttgtcgatgccgtcgctgacaagcccatggacatcattgatgttatgcccgtcgtcgaccctgctgatttcgtggacctcacccccgttgtagagcctgtagaagtcgtcgacattgtcgatgtcatgcccgtggttgaccccatcaacatcatcgatgttatgcctgttgttaagcccgtaaacccccttgcccgttcttaaggg
>m.esculanta-过氧化氢酶1(mecat1)；af170272(seqidno:15)
atggatccttgcaagttccgtccatcaagctcaaacaatacccccttctggaccaccgatgctggtgctccagtatggaacaacaattcctccatgactgttggaaccagaggtccaatccttttggaggactatcatatgatagagaaacttgccaactttaccagagagaggattccagagcgtgtcgtccatgctaggggaatgagtgcaaagggcttctttgaagtcacccacgatgtctctcaccttacttgtgctgatttccttcgagcccctggagttcaaacccctgtcatcgtccgtttctccactgttatccacgagcgtggcagccctgaaacactcagggatcctcgaggttttgcgactaagttctacaccagagagggcaactttgatattgtgggaaacaacttccctgtcttcttcatccgtgatggaataaaattcccagatgtgatacacgcttttaagcccaatcccaagtctcacatccaagaatactggaggatctttgacttcttatcacaccatcctgagagcttgagcaccttcgcctggttcttcgatgatgttggaattccccaagattacagacacatggaaggtttcggtgttcacacctttactttcatcaacaaggctggaaaagtaacctacgtgaaatttcactggaaacccacttgcggggtcaagtgtttgatggatgatgaggcacttaagatcggaggtgccaaccacagccatgctacgcaggatttatacgactccattgccgctggcaactatcctgagtggagactcttcatccagacaatggatccagctgatgaagacaaattcgactttgatccacttgatatgaccaagatctggcctgaggatatttttcctctacagcaaattggccgtttggtcttgaacaggaacatcgataactggtttgctgagaatgaaatgctcgcattcgaccctggtcatattgttcctggcattcactattcaaacgacaagttgtttcagctcagaacctttgcatatgctgacactcagaggcaccgtctcggacccaactataagatgctccctgttaatgctcccaagtgtgcttatcacaacaatcattacgatggtttcatgaatttcatgcacagggatgaggaggtggattacttcccatccaggtatgatccagttcgccatgctgagagaagccccattcctaacgctatctgtagtggaaggcgtgaaaagtgcgtcattgaaaaggagaacaatttcaagcaacctggagagagatatcgatcctgggcacctgatagacaagaaagattcctgtgcagattggttaacgccttatcagagccacgtatcacctttgagattcgcagtatctgggtctcttactggtctaagtgcgacgcgtctctgggtcaaaagctggcttctcgtctcaacgtgaggccaaatatatga
>m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)；m64346.1(seqidno:16)
ggcaaagaattcaaatggcaggaacacaatatcgcccagcgcaaagacgaaggcagcctggtcttcctcaagcccgaggctaaagatgaaggccaatacagatgtttcgctgagtcggccgccggagtcgccacctcccacatcatctcctttagaaggacctacatggtcgtacctactacttttaagactgtagaaaagaaaccggtagaagggtcatggctcaaacttgagtgcagcatccccgaaggttatcctaaacctactattgtatggagaaagcagcttggtgaagacgaaagtatagcagattctatactggcacgtcgtattacacaatctccagagggagacctgtacttcacgagcgtcgagaaagaagacgtaagcgaaagctataaatacgtttgcgctgctaagtcaccggctattgatggggatgtccctcttgttggatacactattaaaagcttagaaaagaatacaaatcagaaaaacggtgagctggtcccgatgtacgtcagtaatgatatgatagctaaggccggagacgttactatgatctactgcatgtatggtggagtcccaatggcttaccccaactggttcaa
>m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3)；af413067.1(seqidno:17)
atgttgttgcttctgtattgtcttgtggcggcctccgcgccgttctttattgcagcggaccaaggcagccctgacctgcctttagctaccgaaccaccaacagaatgcggaacaatagcacctgatgatagcttagtattagatgggtccgttggtaaaagtgacaaattaccttggtatgctattatctacacaaccaccacccggccatacaagcagatcggtggaggaaccctcatcactccttcagtagtaatctcagccgctcactgtttctggcgcaatggtgaggttccatctaaggataattacgccgtggcgctcggcaagacccatagtgcttggaatagccatgccgatgtaaacgctcacaagtctgatgtaaaagaaatacacataccaccgcagtttaagggaaggaacactaattatcggaatgatatagcaatcgtggtcatgtcagaccctgtgacctacaaagtggacatccgccctatctgtttgaacttcgatgtacaatttgaaagactgcaattaaaagacggcattatggggaagatcggcacatggaatgtaagtcgtgagacactgaaactatcgaaaacattaaaagtggtggagaatccatacattgacgcagcgact
>m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)；gq293365.1(seqidno:18)
atggcgagcttcgctttaatagttatccttagcgtaattggctttatatcggcctatcctagtcctgaaggttacagttctgccttcaactttccattcgtaaccaaggagcagtggggcggcagggaggcacgcacgtcgacgccactcaaccacccagtgcagttcgtggtgatccaccacagttacattcccggcgtgtgcctcagccgggacgagtgcgcgcgcagcatgcgctccatgcagaacttccacatgaacagtaacgggtggagtgatattggatacaacttcgctgtcggcggtgaagggtcggtgtacgagggccgcggctgggacgcggtcggcgcacacgcagctggctataacagtaacagtatcggcatcgtgctcatcggcgattttgtttcaaacctcccgccggcggtgcaaatgcaaaccacacaagaattgatcgcagcgggcgtgcgactcggttacatcaggcccaactacatgctcatcgggcatcgtcaggtctccgccactgagtgcccaggaaccagactcttcaacgaaatcaccaactggaacaacttcgtgag
>m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)；ay135522.1(seqidno:19)
gcgtctgtttgttcgcaaccattgcgggctgcttgggccagcgagggggtccatacaaggtgcctgatgcgaaactcgaagctatctaccccaaaggcttgagagtctctgtgccagatgatggctactccctatttgccttccacggcaagctcaatgaggagatggaaggtttagaggctggccattggtccagagacatcaccaaagcgaagcagggcagatggatattcagagataggaatgctgagctgaagcttggagacaaaatttacttctggacttacgttattaaggatggattgggatacaggcaggacaatggagaatggactgttacagaattcgtcaatgagaacggtacagtggtggacactagtacagcgccgccaccagtagcacccgccgtttcagaggaagatcaatcgccaggtcctcagtggagaccttgcgaaagatccctgactgagtccttggcccgcgaacgcgtttgcaaaggcagccttgtctttagcgaggactttgatggttccagtttggccgacttgggcaattggaccgctgaagtcagattccctggcgaaccggactacccgtacaacttgtacactacggacggcactgtgggattcgaaagtgggtctctggtggtgagacccgtcatgaccgagtccaaataccacgagggcatcatatacgaccgcctcgaccttgagagatgtacaggacagctgggtacgctggaatgcaggcgagagagcagcggcggtcagattgtaccacctgtgatgacagctaaactggccactcgacgcagcttcgcgttcaagttcggcaggatcgatataaaggcgaagatgccgcgcggggactggttgataccagaactcaacctcgaacctttagataacatatacggcaaccagcgatacgcttcgggtctcatgcgggtcgcgttcgtgagaggaaacgatgtatacgccaagaagctctacggaggtccgataatgtccgacgcggacccgttcaggtccatgctgttgaaggacaagcaagggttggccaactggaataatgattaccacgtctactcgctgctgtggaagcctaacggtttagagctgatggtggacggtgaagtgtacggcaccatcgacgctggcgatggcttctaccagattgcgaagaacaacctcgtgagccacgcctcgcagtggctcaagggcaccgtcatggcgccgtttgatgaaaagttcttcatcactctgggtcttcgcgtggcgggtatccacgacttcacggacggtccgggcaaaccttgggagaacaagggc
>m.sexia-relish族蛋白2a(msrel2a)；hm363513.1(seqidno:20)
agtgtgcgtctacgaatgatttgaaaatatgccgcataagccgttgttacggtagaccgagaggcggcgaagatatcttcatatttgtcgaaaaggtcaacaagaaaaacatccaagttcggttctttagactggaaaacggggagcgcacctggtcagcgatggcgaactttctgctaagcgatgttcaccaccaatacgctatcgcttttagaacgccaccgtacgtcaatcaccaaatttctgaagacgtgcaagtttttatagaactcgtacgcccttcagacggtaggacgagcgctcccatggagttcacatacaaggctgagcaaatctataaacagaacaagaaacgtaaaactacttcgtcgtactcgtcgctcgacagctcctcaggttcggccggttcaattaaaagcatcagcgaactgcccgcgcccgttgtttttgctgaaaacgtaagttttttctatgacacattactcattcttcaacccatgacgaatctataa
>m.sexta-dorsal(msdor)；hm363515.1(seqidno:21)
atgcttgtgacgttatgcggcgggaactatagtggattgtcgttaacaaaaactaatcattatatgtcaccaaaatcatatgtgccaggaaatggttatgacgccgccgtaatcctaggtaccacggagcagaatgacagcgaaccctcaaacttgaatattagtgatgtttttgaagccatcacgctcgctgatccgtcgttcggcgcgggcgtgccgtcggtagaggagacgatggcgcacacgcagccccagccgctgcaaatgccgtacgtggtcgtcgtgcagcagcccgccagcaaagcgctcagatttcgatatgagtgcgagggcagatcagccggttcgattcccggcgcgtcgagcacgcccgagaaccgaaccttccccgccatcaagataatcggctacaccggcaccgtctccatcgtagtgtcgtgtgtcaccaaagatgagccttgcaggccgcacccacacaacctggtcgggcgcgaccactgcgaccgcggcgtgttctccgtccgcatcgagatcaccgacgagaataacgaataccagtttcggaacctgggcatacagtgcgtcaagcggcgcgacatcggcgaggcgctgcggatccgagaggacctgcgcgtcgatccgttcaaaaccggcttcacccaccggaaccacccgcaaggcatcgatctgaatgcagtgcggctcgcgttccaagtgttcctgccgcactccagcggcaagatgcggcgcacgctcgcgcccgtcgtgtccgacgtcatctacgacaag
>m.sexta-spatzle(msspzia)；gq249944.1(seqidno:22)
cgaacaacctgacagacggatagcgggacggtcagcacaatacgaacatttaagaacaaacgagaggtctctcccggtctacagcgagacccagaggatacaagcagaagagagaagaagacacagttcgagactagaagaaccgagacaacgtgctgagaatggttcatataagatattgaataaccctccgaaaccctgtattactaataggagaagtcaaattgattcgtcgaatgatagggtagtgttccccggtccgacttcagaaaggtcgtacgtacccgaagtgccagaggaatgcaagaaaatcggcatatgcgacagtataccgaattacccagaagaacacgtagctaatattatatctcgacttggagacaaaggaaaagtattacaaatagacgaactggacgtatcagacactccagatatcgcccagaggttgggtccgcaggaggacaacatggaactatgtagctttagagaaaagattttttaccccaaggcagcgccagacaaagatggaaattggttcttcgttgtgaattcaaaagaaaacccagtacagggttataaagttgaaatttgcgaccgtcagcaattaccatgcgcggagttcgcgagcttccaacagggatatgaagcgaggtgcatccagaaatacgttcgccggaccatgttggcgttggatcccaagggtcagatgaccgacatgccccttaaagtgcccagctgttgct
>m.sexta-toll受体(mstoll)；ef442782.1(seqidno:23)
caagtggtcgttgtgcactgcaccggactcgccgagttcccgcgcctgccactaaccacggacaagtggatcctgcacctgccccacaacaacatatcatacctcgccgcggccgacgtatcgccgaacatcgtggaactcgatctaagaaacaattcaatcaagaatatcgacgtacaggcatcagcaaaactagccttcgtccggctgcaattgggtggtaacccgatcgagtgtgactgcgaggcgttgaagctgctggcgccgctgctcaaacctgactcaaagctgcttgacagaaaggacgtgaaatgtgagaacgacgcgcagattaccttggcgatgctgaaattatgtactaagtcatccaatgggctgatgtacttgctgttcctgttgctgttactcgcatttgtcgtaaccggactgctcgcacgaaccgcaattcgcctgcgcatcaaaatgatcctcatgagactgggttggatgtcgagactactggagcccgcggacgacgatcgcccgtacgacgcgtttgtgtctttcgcacacgaggatgaggagctggtgatggagcagctggcggcacggctcgagagcggctcgcggccgtaccgactgtgtctgcactaccgcgattgggcgccaggcgagtggatcccggcgcaaatagcggcttcggtgcgggcctctcggcgcacggtggcggttgtgtcggcgcactacttacagtcgggctgggcgcttgccgagatccgggaggcgaccgcagcctcgctgcaggaaggcatgccacgtctcatcatcgtgctgctcgacgagaccgaccggttgatgctcgatatagaccctgagttgcacgcctatgtgcgcaacaatacctacgtgcg
>m.sexta-scolexina(mssca1)；af087004.1(seqidno:24)
tcgaagctaagggggcaaagcagccaattgatacgagggcagtgaaggaacggtatccatacgcagttcggagtttcggaggcttctgcggaggaaccattatcagtcccacctggatcctgaccgccggccactgctcgatactctatgcggggagcggcctaccggccggcaccaacattaccgaggtatctagcttgtaccgcttccccaagcggctcgtcatacacccgctcttctccataggacccgtctggctcaacgctacggagttcaacctcaaacaggcggctgcacgatgggacttcttgttgatagaactggaggaaccgctgccgttggacggcaagatcctggcggctgcgaagctcgacgaccagcccgacctccccgcaggcctcgacgtgggctatccgagctacagcaccgacacctacgaggctaagatacaaagcgagatgcacggaaagaagctttcggttcaatctaacgaggtgtgctcgaagctagagcagttcaaggcggaggacatgttgtgcgccaagggacgtccaccgcgatacgacttcgtctgcttcagcgacagtggcagtgggctagtagacaacaatggtcgcctagtcggcgtggtgtcgtgggccgagaacaacgctttcgagtgccgcaacggcaacctggcggtcttctcgcgagtgtccagcgtacgcgagtggatccgacaagtc
>m.sexta-血淋巴蛋白酶18(mshp18)；ay672794.1(seqidno:25)
gatggtcagaaagcgtgggacaaatgtctggaatacgttgacaagctgtcgtacccatgcgcttcaacctactcccactacctcagctccgtttgggagaaagataaggagtgcagtatggttcagtttgttggcgtgaggcgattcgcctcgtataacggacaaccggcgaaacggaacgagtaccctcacatggctctgctcggctacggcgacgaccaggagacggcgcagtggctctgcggcggctcagtgatcagtgatcaattcatcctcacggctgcacactgcatctttacaaatctattgggtccagtacgtttcgcagcgctaggaatactgcagcgatcggatccagtagagttatggcaagtttacaagatcggcggcatagttccccatccgcagtataagtcacctatcaagtaccacgacattgctctcctgaagactgaaaacaaaataaagtttaatgagaacgtgctgccagcgtgtttgttcatagagggcagagtgggtgggagtgagcaggctaaagcgaccggttggggcgcgcttggacataaacagacggcagctgacgtactgcaagtggttgaccttcaaaagttcagtgacgaagagtgcggaagtacctaccgtccttaccggcatttgcctcaaggctacgacagcgccacgcagatgtgctacggcgacaagggaaaactgaatatggacacctgtgagggcgacagcggcggtcctctacagttccaaaactcctcgctcctctgc
>m.sexta-转铁蛋白(mstrn)；m62802.1(seqidno:26)
atggctttgaaacttttaactttgatagccctgacttgtgcggctgcgaatgcagctaaatcttcatacaaactatgcgtgccagcagcatacatgaaggactgcgagcagatgcttgaagtacccacgaagtctaaagtggccttggaatgtgtaccggctagagacagggtggaatgcctcagctttgttcagcagcgacaggcggacttcgtccccgtcgaccctgaggacatgtacgtggcctccaagatccccaaccaggacttcgtcgtcttccaggagtacaggactgatgaagagcctgatgcgccattccgttatgaagccgttattgtggttcacaaagacctacccatcaacaacttggatcagctgaagggactgaggtcttgccacaccggagtcaatcgtaacgtcgggtacaagatcccactaacgatgttgatgaaacgtgccgtgttcccgaaaatgaacgaccacagcatttcgccgaaagagaacgaactgaaagcgctatcgacgttcttcgcaaagtcgtgcatcgtcggcaaatggtcgcctgaccccaaaaccaactcggcttggaaatcacaatacagccatttgtgttcaatgtgcgaacacccggagcgttgtgactatcccgacaattacagcgggtacgagggcgcgttgagatgcctcgcccacaacaacggggaggtcgcgttcaccaaagtcatattcacacgtaaattctttgggcttccagtaggtaccactccagcgagtccatcaaacgaaaatcccgaagagttcagatatctctgcgtggacggatctaaagcccccatcactggcaaggcttgttcatgggctgccagaccttggcaaggactgatcggtcacaatgacgtacttgccaaactcgctccgctcagagagaaggttaagcaacttgctgattctggtgcagctgacaaaccggagtggttcaccaaagtccttggtctatcagagaagatccaccatgtcgctgacaatatcccaatcaagcccatcgactacctgaacaaggctaactacacggaggtcattgaaagaggacatggagctcccgagctggtcgtcaggctatgtgtgacgtcaaacgtggcattatctaagtgccgggctatgtccgtgttcgcattcagtagagacatcaggccgatcctagactgtgttcaagaaaacagcgaagatgcctgtcttaagagcgtccaagacaacggttcagatcttgcctcagtagacgatatgagagtagctgcagc
>m.sexta-芳基蛋白β亚基(msarp)；m28397.1(seqidno:27)
ctgtcataatcctagcggggttggtggccctggccctcggcagcgaagtgcctgtcaagcactccttcaaagttaaggatgttgatgcggctttcgtcgaacgtcaaaagaaggtcttagatcttttccaagatgtcgaccaagtaaatcctaacgatgagtactacaagattggcaaggaatacaacatcgaggctaacatcgacaattactcgaacaagaaggccgtcgaagaattcttgcagttatacaggacaggtttcttgcctaagtactatgaattttcacccttctatgacagactaagggacgaggccattggtgttttccacctcttttactacgctaaagattttgatacgttctacaaatctgccgcatgggcgcgtgtgtacctcaacgaaggacagttcttatacgcctactacattgctgtgattcagcgtaaagatactcagggcttcgttgtaccagcaccgtatgaagtctaccctcaattcttcgcaaacttgaacactatgctcaaagtctaccgtaccaaaatgcaggatggagttgttagtgccgatttagctgcacaacacggcatcgtaaaggagaaaaactactacgtatactatgccaattactccaactcattagtgtacaacaacgaggaacagagactgtcgtacttcactgaggacatcggcttgaattcgtactactactacttccactctcacttgcctttctggtggaattctgagagatacggagcactaaaatcgcgccgtggtgaaatctactattacttctatcagcaattaattgcacgttattactttgaacgtctctcgaacggcctgggtgacattcccgaattctcatggtactcaccagtcaagtctggctactatccactgatgtcttcttattactaccccttcgctcaaaggcccaactactggaacgtgcacagcgaagaaaactacgagaaagtacgattcttggacacgtatgaaatgtcattccttcagttcctccaaaacggacacttcaaagcgtttgaccagaagattgacttccacgatttcaaagctatcaactttgttggaaactactggcaagataatgctgacctgtacggtgaggaagttactaaggactaccaacgttcatatgaaattatagcccgccaagtgcttggtgctgcacctaaaccattcgacaagtacacattcatgcccagcgctttagacttctaccagacgtctctgcgtgacccaatgttctaccaactttacaacagaattctgaagtacatatatgagtacaagcagtacctgcaaccgtactcttcagaaaaactggcattcaagggtgtcaagg
>m.sexta-胰凝乳蛋白酶原样蛋白1(msctl1)；am419170.1(seqidno:28)
atgtacgtgaaagtagcacttctgttggtagccctcattgctgggagctgggccttcccaaagctcgaagatgagcaggacatgtccatcttcttcacgcagctcgattcgagcgcgcgtatcgtgggtggtacccaggcccccagcggaagtcaccctcacatggtggcgatgaccaccggtaccttcatcaggagcttcagctgtggaggctcagttgtcggtagacgttccgttctgactgcggctcattgcatcgctgctgttttcagtttcggttccctcgccagtaccctccgcttgacggtcggcaccaacttctggaaccagggaggcaccatgtacaccgtcgctcgcaacataacccacccccactacgtctctgcgaccatcaagaacgacatcggtctgttcatcactcacaacaacatcatcgacacgactgtcgtccgcagcatccctcttaactttgactatgtgcccggtggtgttctcactagagtcgccggatggggcaggatcaggaccggcggtgccatctctccctctctgctggagatcattgtgcctactatcagtggaagcgcatgcgtagccagtgcaatccaagctggcatcgatctgaacatgagaccacctcccgtcgagcctcacatcgagctgtgcaccttccacggtcctaacgtaggcacttgtaatggtgactccggcagcgctcttgcccgcctagacaacggccagcagatcggtgtggtatcgtggggcttcccgtgcgcacgcggcggtcccgacatgttcgtcagggtcagcgcctaccaatcctggctgcag
>m.sexta-富缬氨酸中肠蛋白(msvmpi)；ncbi登录号还未设置(seqidno:29)
atcattgacggaccttccgttggaccngccatcatcggcgctggagacatcgctgtcggccctgctatcgtcgacttccctttccccgacggcggtgccgtgtctgcccccgttgagccttcccccatcgccatcggacccgctatcgtcggtgaatcccctatctccgtcggacctgccatcgttgaggccggagacatcgctgttggacccgctatcatcgacttcccccttcccgacggtggcgccgtgtccgcccccgttgaggtttctcccgtcgactccgtcgtcgtcggccctgccgccggctctcagagctctcccctcgtccagatcatcatcaacgttaaggcccccgctggtgccggccccgttgtcgatgccgtcgctgacaagcccatggacatcattgatgttatgcccgtcgtcgaccctgctgatttcgtggacctcacccccgttgtagagcctgtagaagtcgtcgacattgtcgatgtcatgcccgtggttgaccccatcaacatcatcgatgttatgcctgttgttaagcccgtaaacccccttgcccgtt
>m.esculanta-catalase1(mscat1)af170272(seqidno:30)
atggatccttgcaagttccgtccatcaagctcaaacaatacccccttctggaccaccgatgctggtgctccagtatggaacaacaattcctccatgactgttggaaccagaggtccaatccttttggaggactatcatatgatagagaaacttgccaactttaccagagagaggattccagagcgtgtcgtccatgctaggggaatgagtgcaaagggcttctttgaagtcacccacgatgtctctcaccttacttgtgctgatttccttcgagcccctggagttcaaacccctgtcatcgtccgtttctccactgttatccacgagcgtggcagccctgaaacactcagggatcctcgaggttttgcgactaagttctacaccagagagggcaactttgatattgtgggaaacaacttccctgtcttcttcatccgtgatggaataaaattcccagatgtgatacacgcttttaagcccaatcccaagtctcacatccaagaatactggaggatctttgacttcttatcacaccatcctgagagcttgagcaccttcgcctggttcttcgatgatgttggaattccccaagattacagacacatggaaggtttcggtgttcacacctttactttcatcaacaaggctggaaaagtaacctacgtgaaatttcactggaaacccacttgcggggtcaagtgtttgatgga
>m.sexta-imd(msimd)；msex2.05477-ra(seqidno:31)
atgacttctttgaaaagcaaattagcagaattcttgaaggggttaaaatcagatgcaaccccaagccccgaggccatcgacagaacccagggtaaatccacaaactgagcaatgaaaatgacgcaccctcggatagtgaacctgaagaaatcattatagaagatatgacgatacgaagaaaaagaaaaaggcaagttacaagaaaccgttctttagctccaaacctggtgcattccccgaaaagaaaaaagacaagaataccaaagacgattacagcaactttgtgaatactcaagccactggtgatgtcatcaatattgtaggctgtaacaatttccgctggggtaataattattatttgggaaataccaagaaacaggctcctcctaagaaatatttccaagaagaggaagacagtgaaccagaagatgatattcagaaatgcaacttaatcaaactgctatttgaagctgaaaataagccagaacatgagtacctggactacatttcccagaacatgaatgaaaagtggcacagattctttgtgaaactaggttttacaccaggaaggatcaaaacatccatcatagataatgccagttatggtatttcagaggctcgatacgcattgctacttgagtgggtgaataaaaaacgggactctaatcttggacagctatcgaatttattgtggaaacacggcgagaggcgaattgtcaaagaattagccattatgtactctgcaagcaaggccaaatctgatgatgaatag
>m.sexta-fadd(msfadd)；msex2.03129-rb(seqidno:32)
atgactctatcggaatcaaaatttaaacaattaaaagaacaaattattttacatgcaagtgcaactgaaagacatgctcaaattttgaactcattaaaggatttgtttaaagaagatattaattctgttcgaagatttgaacaaatcagcaatatagcacaattattaaaagttttagaaataagagatgtgttgtcagaggatgatgttgctcctttgaaagatgtggcacgccaactaccaaatagctcagaaatgctgcggaaaattgctgaatatgaagaaaatcacaagtgtggagagtttatttctgttcctaagtcacctccaaaacaaaaagaacatagtcattctggatgggatattaacagcatacagaattctgaatattctgtaaaaaaggaaaggatatttgaagttatttctgaagaaattggcacccattggagaaatctagcgagatatttgaaaacaagggaatgtacaataattgaaattgacagtaaaaacataccactttcaagtaaagctatggagattttgaaattgcattgtaaaaaagcaaatccacaaaagtggttttttgacttgtgtaatgcattggacaaagtgcataggactgacatagtgttatcactgcaagaaattatgtctatgaatatttag
>m.sexta-dredd(msdrd)；msex2.04297-rc(seqidno:33)
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>m.sexta-relishf(msrelf)；msex2.08004-re(seqidno:34)
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>m.sexta-iap1(mslap1)；msex2.05607-ra(seqidno:42)
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>m.sexta-beta-呋喃果糖苷酶1(mssuc1)；gq293363.1(seqidno:44)
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>m.sexta-抑血细胞聚集素(mshem)；m64346.1-utrs5'utr(seqidno:45)
tgttacattaattataaaaaaaaatacaaaaaagaaatatataagtaagtactaataatatggtctagtttattataagtcttagagactaacgataaataataaatttctcatgaaccacctatttatttatttgaaaagcattttaaatatattatagatttaaacgtaacgaagtctttaaactcgcgggtaaaaacgcatacttacttgactctacatcggcgacacacgaaaaacttattcgtactgttttttcattgaatatgttatgaaaaagaaaactatatgtaatcgcagtcacatatataaaactttataaaaaagttaacagagataaataacttgtttggtgttcgtcatagcaatagagtagccgcggcgcctaaggctacgaaataagctcattgaactgtaatggagtgtgcctagttgtttctcttcttaccaagactcaagagggatttggagcttcatctacgattattatacctacctacgtatagactataatggatagtaaaaatagaaagtaatttcttttatatcaacttttgtattcatatgtaagtacttacttataattatttatttttttaggtgaaa
3'utr(seqidno:46)
gttaacaataaacaatactgttaaccgtacgtagtgttaaataatacaaatatatgtattttacaataagatttcctgtttttaaattatcctcacgtaacgtattgggtatctaagcggttgagcagtgagataagtctaccccaaagtagtccgttcatcaaacgacataaccatctcgtcatttagttaaaacaaaaaaagaataatgataaaagatataaaattctgtataagaaccaatacctagcacctttctcacattgccaaacatacattaaaaaacagtattatgcttttttcgctcttttattctatattttatattaaaaaatacctatagtaaatactgttttcatcgtcgccggtattcatacacgtagtatacgtacctaactctgaaactactggtttgaattgaaaaa
>m.sexta-丝氨酸蛋白酶同系物3(mssph-3)；af413067.1
5'utr(seqidno:47)
agcgctttgggaacgttccgtggcacgata
3'utr(seqidno:48)
gatggtggaatgtttaaaaatacaagagtgtgaggcagtgattaatggtctgtaatatccgattcttgctggcttctgtttcgtaattaacgtaaaatctaattatcattagaatattttggaaaaccttagagttaccttcggaaaacttcaccgtttgccgctggtgtgaagatctgttccccccataaactgatgggaaattgtatgtaggtactcgagttataatttctttttatacctgcgtttaagttccattacaactttctaattttatgaataaatatctaataaacgattaacaaaattaaaaaaaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)；gq293365.1
5'utr(seqidno:49)
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3'utr(seqidno:50)
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>m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)；ay135522.1
3'utr(seqidno:51)
attaaaactaacgaaaagactcgtttccatagtggtatattttcaactcgtcaatttcaggtacaagcatgtttggtggaaggatattatcggcccgaataggcactgtacaccaagtacaaccatgactcatcaaaggtgtcgcgttctggaatcacctgtatttccaacaggccggcataattgtgtcgtctagcgagggataactcaatagtctatttgaacgccattctacttaccattaggtgtagtgaagatatttggggctagacaaaatggaaggaaatttatgagttgcatcgaatgattatcactaagtattcgaatgattcatttcgttgttggtgcaataggatgtcaagggtcaaatggacattaaaagagagtttaaggtgtttttttacaattaacgttgatctatcactttacttgcctattaagtaaagtattattttgaaaaatacaaaatacttgagtttatagtatctcttgcgtttatggtactgtcaaaaatatcagtattattcatttacaaaattaaaatttaataatctaaattattcttcatgtaaatgatcatttatacctctgccttgattatg
>m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)；hm363513.1
5'utr(seqidno:52)
agagtacgttcgatggcagtctgtcgaacattggtagtttcccgtttgagtgttgtttactccctttgagggattagtttattctccacgaatataaacatcggaaaatcaaaaactaagttgataaaaagttgtgtgctccggtataattttttggtatcagtgacggacaaaggtgatataaaa
3'utr(seqidno:53)
tatattcatgagaaggggacaactaaggattgaatatcagcagaacttgagttatgttaatgaggtatttatattagcttaatacttaaaggggaaaattcgattagcttttcaaatatacttaaattttagtttttgtcaaatatcggtgtttcccattttgatatttttttatccatattttaataataaatatcttgtcttagcaattttaatgggtaattataaagaaactcacgcaccatagttgcactaaactacaaaattacacaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-dorsal(msdor)；hm363515.1
5'utr(seqidno:54)
atacaacgatatcacaggcgtccggggacggaccagtttaaacaaacattacagtgaatagcgatgtgattattttcttgcttgtatagagttaaatttttaaattagatttaaatattaaaatatttgcgaataaaa
3'utr(seqidno:55)
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>m.sexta-toll受体(mstoll)；ef442782.1
5'utr(seqidno:56)
gaaaagttattcacaatatgacccgaagtgtcagcgccgcacatgcgcgggagcactcgtacttataccagacattgtgactaaatacctaattttatgttttgctcatcgcccattgcgcgacattaagcagtatccagtagtcagtgatcagtgttactacactattttgcttctcagcgattagtcaacacgcgcatatcgtttacttcaacaaacaattattacgcaaatcgtgatatttgaatgtagagacacgaatcaaagattattcgtttaacgttattttcgcgggatgtttctctgttggggggtactgttgcgtggtgtgcagtcaaaggtttattttatcgggtattgtgctctttaagtgttgacgcggcggattatcgtcggttagactaataaatcgtgtcgatttatgtgtgacccactacggtgtcgtgcgacgtg
3'utr(seqidno:57)
atccagaacttgcgtgtacccttcgatatacagggctattttgacatcgtgttactaaatgaaaccacattctcgtcttcacctttgctgacattgtgccaaaaatcatccattaataacgaatatttccaccaaaaaaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-scolexina(msscai)；af087004.1
3'utr(seqidno:58)
tagaccataccgttgtcattttgggctgtagtgtatagataataaatatagacgcgtgtactggtgtgacgtacggaagtggagagttgggagcgacagctcaccgctcactccactcccggccgccgcgcgagtagcagtgtcagtgattgcaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-血淋巴蛋白酶18(mshp18)；ay672794.1
5'utr(seqidno:59)
gccagacgtttcagtttgtttcgaact
3'utr(seqidno:60)
ttatgaataaatacaatttaataagcattatttattaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-胰凝乳蛋白酶原样蛋白1(msctli)；am419170.1
5'utr(seqidno:61)
tacttcgggctacacaatgtacgtgaaagta
3'utr(seqidno:62)
tctccgaaccgaacctgatcttaactgtaaataaaataagcgatacccaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-dredd(msdrd)；msex2.04297-rc；当前注释为烟草天蛾胱天蛋白酶6；在ncbi中为hm234679.1
5'utr(seqidno:63)
ttggtaaccctgtgggaagtcccaaagtcgaagctcgagaacagttttaagcagaggttttaagtctaatttattggtctctggttttaagttagtgtcatgtgtcaacaataataaagctttatttttggctctatttataagtaaggtatcatcctttcagcgttaaaacaaagggcgtagctcatgttcatgtagttcttttaaataagtgtgaactaagtgtatatgtacatttattactggtgaca
3'utr(seqidno:64)
cataatatttttatttagatatattgtaagtactaagaatgaagtggtgatagcttagttgggagtggaatggacagccaagacaaatgtcagcaagttcaaatccaaaggcatacacctctgacttttaaaaaaaaatatgtgtgtattctttgtaaattatcacttgctttacggtgaaggaaaacatcatgaggaaactctcaatagtaaaggtatcccattgcccagcagtgggacagtatattatacagggttgatattattattattatatactatgctttgctcatgcgctcattcactccagcattaatgacctttcctggtattgaagttctgctaagtattttatgggataaaaataccctgaatgttaatccacacacattcagtatgtcaaatttcatctaaatccatttaggtgtgttctatttgatactaagttccaacaaaaatcttcataaacgtcaggacccctcaggagcaacattattaataagattaataataaattttcaatgcataataattttaatataatttatattacttaatgttgaagttgatatacttaa
>m.sexta-relishf(msrelf)；hm363513.1
5'utr(seqidno:65)
agagtacgttcgatggcagtctgtcgaacattggtagtttcccgtttgagtgttgtttactccctttgagggattagtttattctccacgaatataaacatcggaaaatcaaaaactaagttgataaaaagttgtgtgctccggtataattttttggtatcagtgacggacaaaggtgatataaaa
3'utr(seqidno:66)
tatattcatgagaaggggacaactaaggattgaatatcagcagaacttgagttatgttaatgaggtatttatattagcttaatacttaaaggggaaaattcgattagcttttcaaatatacttaaattttagtttttgtcaaatatcggtgtttcccattttgatatttttttatccatattttaataataaatatcttgtcttagcaattttaatgggtaattataaagaaactcacgcaccatagttgcactaaactacaaaattacacaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-甲壳素合酶2(mschs2)；ay821560.1
5'utr(seqidno:67)
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3'utr(seqidno:68)
tatttggccaaaattgtgaactgtaaacatgcaataaaatgatgaacg
>m.sexta-beta-呋喃果糖苷酶1(mssud)；gq293363.1
5'utr(seqidno:69)
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3'utr(seqidno:70)
ttatcgtgctaaagtaatagttattgtttcacattatgttcaaataaaaaagtaattatttatgttcaaataaaaaagtaattatttaagtgtcttgtaaatctgcgaataaatatacttaatgtataaaaaaaaaaaaa
>m.sexta-sickie(mssck)；msex2.03324ra(seqidno:71)
atgacgacgttgactgcaaataggcaagtgtcggtgttgcagacgtcgatcccgctgccggcgtcggcggcggcggtgcggcgcgctccgcccgacaaacgaccgctgcccgccacaccagtacatgcaggtggcaagagtggtctttctgcgagttccagccgctccaccagtccattaggacagggtgcagtcagttttataccacgtgcgcctaattcatcatctggatcccggccgaactcgtccctccttgcgcccagtagcaaaataccctccaccgcaacacaagggcaacagcattcacaaacacccacagcccaaaatggaacacccacaaagcagtctatgcttgacaagttaaagctattcaataaagacaaaattagcaatgaaaaacaaaacagcaaaagcactgcagtatcaaaacgcaccagttcttccagtggtttctcatcggcaaagagtgagagatcagactcgagtttaagccttaatgagtcttctaacatacccaacacacatatcaaatcgtctaatttaataggacctaaaacaatacggcaacaaagcgatactttatcaaaagacaaatctggtaaaaatttaaaacctaagttagttaattctaaatctcctagagattctacaactaacttgaatagggctagtagcaaaacaactaataatgataaatcgaggaatagtccaaaacttcctgctagggataaggaatcgaaactagccacacctaaaaccatgagtaacacaaaactaaaccaagttgaagatcaaccgaggggttccaaaactaaagtggaatcgaaaatggtaaagctttccggtagccaagttaagctgagtgaacaaagatccgatactccacaagactgtaaagaaaatgtaactcctaatgcgaaaaatcatcagagtcactctcaaacaccatgtggaggacagggatttggaactccaaaccatacaggaatacctaaaccgactgccgctgtcaagggaacttttaaaatatcaaaagacgatagacatgttatacagaaaagtacaaatagtcaattaagtcctatacaaagcaattctagtttaaattctacaaataacataagtgcacttccattctgtagagaacaatctaatttaagtaaggatataactcaaaagcagacactagccgtatccccgatgccggttatgagcacagggaatcaaaatcatagttcgcaaatgtctgaaagttcacactccaattctacgcacagtactacaggccaacattcgaactctagcgatagcagcgttatataccgtccttctagcgaatcaggttctgaaatgtcgaagactgctagtcacagtgtggcatcaaataaacggctagacatgaatactacttatataaatgacgttataaacgaagcggagatatcagaaaaggaggcagcacaaagacgtcacgtcgataattcaatccccaagcaatcgtttgatcccaataaaacgttaaccgaaataagtaggaggctcgaaagtgatagtagatctagcacaccgtcgcattgtcgtgataattctttaggcgaagacgagaatccaatgatgaatgttttaccaatgagaccgttacttcgcggatacaacagtcatttaaccttgcccatgagaacttcaggtttggcacagaaaaatataagcgtttatccacaccacgcaaatactgtaaaagcaaactttggacgggaaaacataggtcttcgcgatcgtataaactatgggcctggtttttcgaatcctgattattgtgatctggaaattgcttcgggatacatgtctgatggtgattgtttgagaagaattaatatcggtgagatggaatgcgggaggaacaacgacatgatggacggctatatgtccgagggtggtgcttcactctacggtcgtcggatgaactaccagcaaccacaatttcaacaaatggacgaaagacgaagtggtggtcgcaatagaggcatggagggtggtagtggtgtagtctacagagtagtgggtcgcacacgcagcaaagccgactccggacagcagaccgagcgccagcctcagccttcccggcaggacaccacgtggaagaagtacactgactcgcccgggaatcagccagcacccgcgcctcctagtccatctcactcgcgcaagggtgagagacgaactggccatcattcaccgcagcaccacaaacgagaaaaactcactgcagctcagcagcttgggatcgcacctcatcctcagtatgccgctccagctcaagcagctaaccctgctggtcagcattcctctagaaacccaggcccacagctccagtctccgagtggagggtcgcgtccctccagcgtctctagcggtggtaatggcagtgcctgctcgtcgaaggctaaagttcctcaaaattttggatatgtgaaaagacaaaacggtgtacagcagccggcacctcaggccaacggtccaccgccgcaacatggaggccacactggaagaaccgcccaggtgtctgcagtgccaagaactaaagtcaaagtttcgggaggaacccagacatgcacacaggatttacagattcacaaaaatggtatcggacctaaatcgtattctctgggcggcaccgcggctgcccaactgtcagcgtcagtgcgagagagactgctcgggtcacaatcactaccaaaacctggaacacacgaattcgcagcgttattccatcaccacagaattgcacccagaggcggcatgaagatcagcgatggcagcctttctgacacacagacatactctgaagtgaaatcagactatgggataccctacgcgccctggctcaggcatagcaacacatactcggcgagcgggcggttgtcagagggagagtcgatggagtcgctcacgtcgctgcactcggcgcaggcgcaggcgcacaaccacacctcctcccctaactcccaccgcagctcactcacacacaataagctcatcatgcaccgagatgcacagggctccaggcttaacaggagcaacagcattagatcgactaagtcagaaaaattatatccgtcgatgcttcaaaggtcttcagagagcgattatgaaccgtattattgtttacctgtgcagtatggaccaacaggtcaaggtctaaactatggtgtgtcggagccgccgtcgccgtcgccgcgctcggcgctgagcccgacgcacgcgcccggcaacgtcatgcacacgccgcgccactcacaccactacccgaaaaagaacgacgatgtgcacggttcgacggcgtcgctagtgtcgaccgcctcctcgctggctgccggcgcaggcgcagaagagaggcacgcccatgaggtgcgaaagctgagaagagaactggccgatgcgaaagaaaaagttcacactttaacaacgcagttaacaaccaacgcgcacgtggtgtccgcattcgagcagagtctgtcgaatatgacgcagcgcctgcagcagctcaccgcaaccgccgagagaaaggattcggaactgacggagcttcgtcaaacgattgagttgctgcggaaacagtcgattcaagctggtctgactactgctcacatgcagtccatgggaatccgtgccgatggcgtcaacgtcactggacagcaggacccaacaacccaaacgcagcagtcatcaccacaacgtaacgcacaaacgggcaacggtgcgatcacgcggcatctatcgaccgacagcgtgtcgagcatcaacagcctgagcagcggctcctcagcgcctcacgacaaaaaacacaagaaaaaaggatggctacgctcatcgttcacgaaggcattctcacggaacgcgaagatatctaaaacagcgaagcactcgtccctcgggcagctgtcgtcacaggacagctcgtcgggctcgcatcactacgacgacccgcacacgatacgagagggcagtaatgagaacagtctagaacattcccacgaggctcttcctgatactaaggagaagccggcgcctgtcaagcctgaagaacaaaccaaagataacaaagaggaatctgtcttggtggatgagctgaagcggcaactgcgcgagaaggatctcgtgttgaccgacatcagactggaggcgctcagctccgcgcatcagttggagagtctcaaagacaccgttataaaaatgagaaacgagatgttgaacctgaagcaaaacaacgagcgtttgcagcggctggtgacgtcacgctcgctcgccggcagccagagctcgctcggcaccggcggctccgccgtcgaggacccgaggcggttcagcctcgcggaccaggccaccatgcaccaggcggcgatcgacattcacgcccagcctctcgacctcgacttcaactgcatgtcagccacaccaaccatcgacttctcgaagaaaggttcacccaagtccggcatggtggagcccatatatgggaataaggctgcctgcgaactgaacgagaacaatgagacgctgctaggagcgttgaatggggccagcgatttgttctccaacggactcaatgctggagagcggctgagtggagattacgatataaacagcgtgttaccgccgcctaaaacacgcgagcttgctattggtgaaagctactctgatattggtgtagcagacagccagggagacacgactgatggaaagaaaatagcgatagctgtatatttaggtcaacccgaaacattccaaagatatttcgaagaggtccaagacacattgacggagtccgagtgcagattctacgcgaagcaatcggcaagcgcgtacaatcatttcgagaaacaagccagtttcgaatcgccgagaatgtccacgaatcacagtccagaagtggagacacaagactacccgcaaataaataagtcgaacacgaatagccttaaaagcaacaaatctacgca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>m.sexta-akirin(msaki)；msex2.12479-ra(seqidno:72)
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>m.sexta-cactus(mscac)；msex2.02793-ra(seqidno:73)
atgagtgccaaaaaaggatatgaaacgaagattgtcgaggaagaaaacatggattccggaattgtgtctggtgaattggaatcttatgagatttcgggtgaagtggattcgggcgtgattgattgtgataagaaatacgaaggggttccaagtgaggtgttggaattgacggacaagttcaaaagtgtaaatgtgagagagaagagctgtcctgatgttccaccactggcggacctgttccaccctgacaacgacggagatacacaactacacattgcatcggtacacggctgcgagaaatcagtgagcacgatcatcagggtgtgccctgacaaggagtggctggacctgcccaacgactacggccacacgcccctccacctcgcggtgatgagcggcaatgccgtggtgacaaggatgctggtgatagccggcgcttcgctcgctattcgcgacttcatgggagagacgcccttacacaaggcgaccgcagcgcgaaaccaggagtgtctcaaagccctgcttgcccctgtaccggaacagcccaataggaaattgtcttcaatactcgaccagaggaactataacggtcaatgttgtgtccacctggcggcgtcaattggaagcgtagagacgctacagaccctggtctactacggagccgatatcaatgccagggagaacctggcgggctggacggcgctgcacatcgcggcgcggcgcggcgacgtgcgcgtggtgcagttcctgcggtcgcgctgcgccggcgcggcgacgcggccgcgggactacgccggccgcacgccgcgccgcctcgcgcgccgcaccaaggccgccgccgccttcgacgacaaggacgacagcgactccgactccgactcggacgatgatgatatgtacgacagtgatagcgagacgttgttcgaaaaactccgcgagagcctgagcacgtcgatcaacgtcgcctga
>m.sexta-gloverin(msglv)；gi110649240(seqidno:74)
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>m.sexta-beta-1微管蛋白(msβtub)；af030547(seqidno:75)
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>p.xylostella-肽聚糖识别蛋白2(pxpgrp2)；acb32179.1(seqidno:76)
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>p.xylostella-免疫缺陷蛋白(pximd)；px003008(seqidno:77)
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>p.xylostella-relish(pxrel)；px002858(seqidno:78)
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>p.xylostella-toll受体(pxtoll2)；px006338(seqidno:79)
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>p.xylostella-cactus(pxcac)；px016665(seqidno:80)
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>p.xylostella-dorsal(pxdor)；pxoooho(seqidno:81)
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>p.xylostella-抑血细胞聚集素(pxhem)；acn69054.1(seqidno:82)
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>p.xylostella-sph-3(pxsph3)；xp_004922188.1(seqidno:83)
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>p.xylostella-转铁蛋白(pxtrs)；baf36848.1(seqidno:84)
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>p.xylostella-转铁蛋白(pxtrs)；baf36848.1(seqidno:85)
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>p.xylostella-gloverin(pxglv)；acm69342.1(seqidno:86)
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>p.xylostella-甲壳素合酶1(pxchsi)；kx420688.1(seqidno:87)
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>p.xylostella-beta微管蛋白(pxβtub)；kx420688.1(seqidno:88)
gcggcagccagcagtaccgcgcgctgaccgtgcccgagctcacacagcagatgttcgacgccaagaacatgatggcggcttgcgacccgcgccacggccgctacctcaccgtggccgccatcttccgcggacgcatgtccatgaaggaggtcgacgagcaaatgttgaacatccagaacaagaacagcagctacttcgtcgaatggatcccgaacaacgtcaaaacggccgtgtgcgacataccgcctcgtggactgaagatgtctgccacctttatcgggaacacgacagcaatccaagagctcttcaagaggatttctgagcagttcactgctatgttcaggagggaagcgttcctccactggtatactggtgaaggcatggacgagatggagttcacagaggcggagagcaacatgaacgacctggtctccgagtaccagcagtaccaggacgccacggctgaagacgagggagaattcgacgaggatattgaagacgagtga
>s.frugiperda-肽聚糖识别蛋白1(sfpgrpi)；rep_c7951(seqidno:89)
gcattaacatctcaggatttgattcgaaagtaaggtctgaatttagtccttacatttacttaaaattaggtcctttttggtttgtactgaaatgaaagtttttctgttcttggtcttaattgtgaagataatggctgaggcaaaaggagattgtgatgtgatcccgattacgcagtggggagattcacctcttaaaagggaggatyctcttccaaatccagtgaatattgttgtcgtccaayacrctgtggtaccggagtgtaacaatgatgaagagtgtgagaaagcagccamtggaatcaggagctaccacattaacaaacgtggattcactgatataggacaatcgttcctgattggtggaaacgggagagtttatgaaggagccggctggcatcacgttggggcccatactttgggatacaatgcaagatctgtggggatctccttcattggcgattttagaacaaaattaccaacacccgaagcactgaaagccttcaacagtctcctggaatgtggagtcacgaacaattatctgtcaaaggactatcacctggtggcccatagtcagctctctatgactgacagtccyggagacatgytgaggaagcaggtggaatcgtggcctcmttggctggataatgccaaagacatacttaagtagaaraagactaaacgccgtactttgagccatttaatggttacttaacccagtccttagcaatttgatacaaggccaatgtctctaagggcggcagtaaaggtcaaaacacatttaatgagtgtgtttaagattttgctagtgaaaattgttttgaagtacgtatttgatgtaagtgatgatatcagtacccttagtatgagtttgctttacgttccacgagatggaaacgagagcgcgttcggcgctctgattggttcgttcattcatgccggccaatcatagcgccgaatgggctctcatttcgttttcgttcaacgtaaagtaaattcgtactaagggtactgactttaaaataagttaccaaaaagagtattacctatttacattattttatttattttaggtgtattgtaattcaagtattaaattaattagtgtagattaatkscatgcattttatatttgatttcattgaataa
s.frugiperda-抗菌肽(sfatta)；rep_c9395(seqidno:90)
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s.frugiperda-c型外源凝集素15(sfctl15)；joint2_rep_c488(seqidno:91)
agttttcgtgcttagcacacagagcgccgaacgcgctctcgtttcaattactttaaacgtaaagcaaactcgcactaaggttactgtgacctttgtaaacatgtacaatgcaatactatgttgttattttcgatacaatcatataaaagacaacgtttaaaaaaaaagcatagcacagaccacagtacaagtatcgagaccaaacttttgttaaaacttatttcgttctgtgcagcaactctaatgcgaataatgtgcaaattataataaatatgttttgtatataaacatgtgttatctcaagttcaagacattccggctcctacagtcaacagatacagtgcacaaaaatgttaaaaatatatttaatttgtttgtcttacttgttcatgttaaacttagacagggcacaatgcaccccccagtattggttcaacatggatgcgaatggttggctgaaagtgcacacgatacccgccacgtgggaggaagcattccttcggtgtcactatgaaggtgcggtacttgcgtcccccttgacgcaacaactgagtaaggctcttmaaaacaagtttgcagkcwtcggtaacccatcaatccacttggggacacatgatttgtactccastggttactacttttctgtagaaggagtaccaatggacagcttggtgctgaaatggagtaatatcagaggtacgggcgaytgcctggcgatgtcacgcgacggggaagcatttttcacgaaatgcgagcaacctcgaccctacatctgctacaagaagctggacaatctgacgatgaacatctgtggaacattygatgacgcktatcaattctacgataagactggcagctgctataagagacacaacgyctatcagacatggcctgacgcgttcaagatatgcgctgccgagggaggstacctggtgatcctgaacgatgacacagaggccgccatcatcaaggatatgttccccgtacggccaggaaagcccaacgaatgggagaacttccacgtgggkctgcgggcatggggaccggaacgtacttggatcactattcatggagaaaaaattgatgatgtattccataattggaacccgggacagccggacaactacaagggagtccaggacactggcgctttccttagarmaggcactttagacgatcatgccgctggtgacaaatgtatgtttgtctgtgagaaggatcctaaagtaaaacgcttcgaagagytacccgaaggattggcmgaagttttaggacaataggccgctagtcaaatattgttcatatacctwagttttaattatgtaaaaataatartcgattgcagaatttaataaaatttaaactaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaggtmaaaacatgtc
s.frugiperda-galectin4(sfglc4)；rep_c2653(seqidno:92)
gccttgtagttcgacagtcaaatccaacgggtgtcagaaacaatttccgtttttccggctattgatcgtcatataaataactccgaaggaaaaatgactacaatcgacaatccgacagtaccgttcacgagacccattcctgggcatcygctccccggccgcaaaatggtcgttaagggtgcaatctctcccagatcagataggttctcaataaacttgaaatgtggtagcgaggacatcgctttccacttcaaccctcgcttcagtgagcagaaaatagttcgcaactcttatatttctggcaagtggggtcatgaggagatcagtggaggcatgccgttggtaaggggagagcattttgaagcgcaatttgaatgcaatgaagataatttttcggtggagttgaacgggaaacatttctgcaattactcttatcgcatcccaatccataagatcacccacgtcaacgtggacggtgacgtcacgataagtcagatcaccttcgtggacgcctgagccatcgcccgatcttacaatggtactttttttttacttatgaactaatgctggaaaccaaacttctttattcaaatatttttcttttgtctttatgactatcagtgtttttattgcaataaaaag
s.frugiperda-溶酶菌(sflys)；rep_c18992(seqidno:93)
atcagtgtggtgtcttcaacccaagtgcattgtattgcttggtaaataataactgasaacaaaaatcttggttattgcttgaacaggtttcgcctatcaattagccgaatattgttacccttgacacgcaataattggttactcgattaaagcttgaagaggtaaagtgccgaaatgacgcgcgccattctgtttgttgttgttttatgctttattgcaaaatgctatggaaaaacattcackgaatgtgaattagttcaggagctaagaaggcaaggatttcctgaacatgagcttaaagattgggtrtgyctgatcgaagcggagagttccaaacgaaccaacgccattggtaacggcaattcagatggctctctcgactatggcttattccaaatcaaataaccgctactggtgcagcgayggtgaccatccaggcaagggatgcaacgataccgctagtaaagatctgttgctggatgacatcacaatagcgtctcagtgcgctaagaccattttcggtgtccacggatttaacgcctgggtcgcatgggtgaacaaatgcaaaggaaggaccttaccyaaccttcactgttagttatttattgagaaaatgtaactaaggtatatggttactttgtacctaaatataggtattaggcatatattgtccactctcatcaaatttttacttttatatcagt
s.frugiperda-血淋巴蛋白酶10(sfhpio)；c12881(seqidno:94)
attcgctgtacgcacctcggattgtgcggtcaactwtacaaggctcgtaccttgcagttgaaccgacaatctattcctaaagcctttttaaggtcaggaaaaatagttcctacatctaaatgcagtagaatttgcgaaacgaatttaaataaaaatggcgtcgattgtgtttgtgattttgtgtgttaccgtcgctgcggtgaaaagcgcgattttaaacccgtggagtaaagttgaggccaacaaatgtggtgtagaagccagtactaacttggtccatcacaatccatggttggtctacatcgagtattggcgtggaaactcagatactgagatccgatgcgccggtactttaatcgacagcaaacatgtcgtcacagctgcccactgcgttaggactctgaagtttagtcatttgatcgcccgtcttggcgaatacgacgtaaattctaaggaggactgcgttcagggcgtgtgtgccgatcccatcgtcagaatcaaggtggctgagatcatcgtgcatcctaactacagcaaccgggaacatgacattgcaatcttaaggctggaggaggaagctccttataccgatttcactccggcccatctgtctgccttctggtgatctcgcggaagacacccagttcttagcagccggctggggtgaratccccacgaaaggcttcttcagccacgtgaagaaaatcgtcccctacgtactggaatcgagagagatgccaaaaggtgtaccagtacaattatatcccggagaacgtgatctgtgccggt
s.frugiperda-胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(sftsp)；rep_c48453(seqidno:95)
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s.frugiperda-c型外源凝集素6(sfctl6)；joint2_rep_c448(seqidno:96)
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s.frugiperda-丝氨酸蛋白酶同系物13(sfsph13)；rep_c1904(seqidno:97)
gaakagtgtcaatttatttaattgtcaaaatcgcgttgaatgtaagattgctatagaaattatttgtaaaaactttctcaaaaatttaattctaaaatgtaaaggaacctaaaatcagataccgataacacattttgtaaatggtttaatattgaaacgaaacttctaaacatttttggtgaaatacacataataatataacttcttcgaaaactaggtagatagacttcaactcagtttttattagcgagctagaagatacagagattatctaagatggtgtgtgatggtccggatcctccagagaacaatcctcacgaaattgttccacctcctaggaatgaattgataatgaatggtaatcaaggggatgacagtgatgaagaacatgaatattttggctatgaacctttggcgcaaggtccagaactagcagtctcagatcacgatagtgatgatgacccagagagtgctgaaacacctccagctgatgttccaaatatagagccaatggaaaatgtactaagccgggaagtttggagtgccccgagrcatacagatgctatacaaatggataatgaacgggctcaacaggtgatgagagctatggcaaattttgctctaccccaggcctcawttccagaatgggctcagagcatctctgaagaacaatggaagcaaactctgaatgaacaaatagaaagattgaaaaataaaagataaactaattatatgtagtataataataattaagatttaagtgataaaaataacaattataacttatatgtttaaaaaatgtatataaactgtaaactttaagcttattcacattactttaaatatagaaaaaatatgtgtacctatttattgtttggctacataatccaatatagattaaattgcaaatgtttaatgtaattatttagttggatcaaaaataacagcactaaaggtcactagtttagttctttcatttcgaatgaaaaagtaaaatggagaatctgcatagaaattttcagctgaccgtgttaatgttccacttgttgcggctactgcttctgttccaaactcattaattgttaactttacatcatgaattatggaatccacatgtattccagggttgggtagactgtccaaaatgtttgtcccatttccttcgttttctgagtatctgtctgattctccttcagatttattcacaaactgattggtgttatttaccataagtgcgaagtttgcttggcctggtataaacatactttgtatcccaatagattgcaaggtgctctctagctttgtggtgcttttaattttcatcttagggaaacgaataacacaatttttcacatgcatttcattgatggtatcatcaataactttgttgttaatattttccatgagttccaataatgttaatcgyttatgagataatggttttaaagcgtacataaaagtttcactgtcgttatatggcaatgctatcatgtggaaatcatgttcctcagaaaccttgtaacgaaactccccaaaattcaacatcatgtcagccataacttcatctgtggcccttttgaattccatctttcttgtgaattgcggtgcaaaaggctgtttccatgtgccactaaagtacaatgcagttaaaagtactactttagtatggggaggcagagaatctttcaaaaaatcgtctatatttccttctgtgtgcttgctcacccactcattgatgctgtttttagatccttcggtttcttgaaaatcagtacgtaacacatcgcctccgtaaacaccatgcagataacttctgtacaactctcgcaattctacttggttgtctacaaatatcgcgtcagcgtacaaagtttttgaaaactcgttcatatttaaactctgtagtagttcgccgaactgttcgtggttcttgcggtttcgtagaatatcttgggaaaatccgagtgtctctgcgatttcatcatgtgtcatcccaacacttccgagtaatgtcatggcaagcagaccagcgacacctattggtgatatcacgatgttttcgtttttcttttcgttcatcattttgactagtaaattatatccaaaattatttatagcttttggtatcgagttatctttcgtatttgttgtttctaagttatcattttcagcagttgtggttggtattatcgtgcttgaaatctgactgtcctcttcattttgtccagaatattgaaaatataatgttgttataattaaaaataacaatgacttgctatccatgttgtggtgcttaaataaggtattaaacgtaaacttcacactaacaggaacaggttcctattatttcccacttaaatcgtgaacttacggcatagacactatacacgtctactcgtttgaccaactctgagagcaactcaaaaacaaccttgtgtgtgtatgaataacgaactaaaat
s.frugiperda-抗菌肽(sfcec)；rep_c42380(seqidno:98)
ttcgtgtcgtatcactagagttcgaaatacaaaataataatacatttattattttgccataattaataataaagttattttatttcataataataatgaatttcacaaagatattttgtttgtttttgtcttgctttgttttgatggcgaccgtgtcaggagctcctgaaccgaggtggaaattcttcaagaaagtggagaagttgggccaaaacatccgckatggtatcataaaggcaggacccgcagtggccgtggtgggatcagcrgcagccatwggaaagtgakccctacgacctgagacatgaagactaatatccaytaaaataasaatattgaggcktataatattaatttattrtrtttgtaaattaaattatttgtaagataa
s.frugiperda-relish(sfrel)；c13122(seqidno:99)
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s.frugiperda-toll(sftoll)；joint2_c3284(seqidno:100)
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s.frugiperda-beta1,3聚糖识别蛋白(sfβgrp2)；ef641300(seqidno:101)
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s.frugiperda-c20042(sfc20042)；未注释(seqidno:102)
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s.frugiperda-rc16438(sfrc16438)；未注释(seqidno:103)
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s.frugiperda-j2rc2367(sfrc2367)；未注释(seqidno:104)
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s.frugiperda-甲壳素合酶b(sfchsb)；ay52599)(seqidno:105)
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t.castaneum-肽聚糖识别蛋白2(tcpgrp2)；xm_965754.3(seqidno:107)
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t.castaneum-beta1-3聚糖结合蛋白(tcβgrp2)；xm_966587.4(seqidno:108)
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t.castaneum-中肠蛋白(tcmdgp)；xm_971351(seqidno:109)
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t.castaneum-甲壳素合酶2(tcchs2)；efa10719.1(seqidno:110)
atggcggcgcgtcatcgctttgccacagggagccctgaggaaacagagcccctgtattcgtcgacgcaaatgcccgaaaaagtccgggaaaaatggaacgtcttcgacgaccccccaagagagcccacttcggttccgaagtcaaaagaacctacatcgagtggggggtgaagtttttgaaagttgtgacaatcataactgtgttttttgtggtccttggtgctgcagtggtttcgaaagggacaaccttgttcatgacgtcacaaataaaaaagaatgtgacaagggcttattgcaacaaaaagatagaccgcaacctccaattcgtcgtctccctccccgaagtggagcgcgtgcaatggatctggctcctcattttcgcttacttgatccccgaagtgggtacctggatccgcgccgtccgcaaatgcctctacaagctctggaaaatgccctccctctccgaattcctctccctcttcggcacggaaacgtgccccgccatcggaagcgcaattttgatattcgtcgtcctccccgagctggacgtcgtcaaaggggcgatgctcacaaacgcggtttgtttcgtgcccggagttgtggcaatgttctcgcgcaaaccgtgctccataaacgagaacctgaaaatggggctggacatcgccagcataactgcacaggcgtcaagcttcgtggtgtggcccttggttgaaaataacccgaccttgtacctaatccccgtttccgtgattttgatttcggtgggttggtgggagaatttcgtgtcggaaacgtcctacttaccgtttatccgggctctgggcaagagcaaaaaggagtttaagacaaggacgtacttcatttacgcgttcgtggccccggttaaatgcctggcgtttttttgcaccgctttggtcattttttactgccaggagggcagtgttgactttttatttgataatttttcagccgcgtttcaggatcataacattgaaattaccgaagtcgcgcccgtcttgccggggaattacgcaaatgcagttcggtcgggagccgaaaccccatccacacaagcagttacatgacggggatttgggtttggttgattaacatttcggcgacttatatttgctacgcgtttgggaaattctcctgcaaagtcatgatccagagcgttagcttcgcttttccgatcaatttgtcggtccctgtcctcttatccggactgatcgcaatgtgtggcatgtactacagggatgagtgttctttcgctgagtcaattcctccatatttgtttttcgttcctccacctctcatgttcctacaagattttctctcgcaccaacacgcctggatttggctggtttggttgctgtcacaagcctggatttcggtgcacatttggtccccaaactgtgacaaactttcaagcaccgaacagttgtttattcggcccatgtatgacgcgtttttgatcgatcaaagcctggcgttaaaccggagacgtgacgaaaatcccagaaattacagaagcgacgaagggcctcaaattacagagctcgagccggaaacgatcgagagtcaggacgccataacccggatttacgcctgcgggacaatgtggcacgaaactcccgaagaaatgatggaatttttgaaatcggtgttccgcttggaccaagaccagtgttcccacaggattgtgagggagcatttgggactcaagcatgacaattactacgaattggagactcatatatttttcgatgatgcgtttattcggaccagtgaagacgataatgatccccacgtcaacgaatacgttgagtcacttgcgtccattatcgacgaggctgcgactaaggttcacggtaccacggtgagggtgcgtccgcccaaagtgtaccccacgccttacggcggacgcctggtctggacgctcccagggaaaacaaaaatgatcgcccacttgaaggacaagaagaagattagggcgaaaaagcgctggtctcagtgcatgtacatgtactttttgctcggattcagattgcaagccaacgacgaactctccgcccacagcaaggaaatccgcggcgaaaacacctacatcctcgccctggacggcgacatcgatttccaacccgaagccctgcacctcttggtggactacatgaagaagaacaaaacgttgggggcggcctgcggccgcatccaccccatcggcagcggcggcatggtctggtaccaaatgttcgaatacgccgtcggtcactggatgcaaaaagccaccgagcacgtcataggctgcgtcctctgcagccccggctgtttctccctgttccggggaaaagccctcatggacaaaagcgtcatgaagaagtacaccactcgatcgacccaagccaagcactacgtgcagtacgatcaaggggaggaccggtggttgtgcactttgttactccagaggggctaccgtgtggaatactccgcagcctcggacgctttcacgcactgtccggaaggcttcaacgagttttacaaccagcggaggcgctggatgccgtccactatggccaacattttggaccttttgatggattacgagcacacggtcaaaatcaacgaaaatatttccatgctgtacatcgggtaccaaattattttaatgatcggtacggtcattggccccggtactattttcctcatgttggtcggcgccttcgtggctgcctttgggctcgaccaatggagcagtttctactggaatttactaccaatcgcagtttttatcctagtatgtgccacttgtagctccgatatccaattatttttcgccggccttatcagcgccatttacggcctgataatgatggctgttttcgtcggtgtgatgctccaaatcagccaagacggcccacttgcgccttcctcccttttcttcttctgcatggctgctgaatttataatcgcagcactgctgcatccgcaagaattcaactgtttgaaatacggggtcatttactacgtcacggtccccagcatgtacctcctcctagtcatctactcggtcttcaatatgaacaacgtgtcctgggggacgcgcgaagtgacagtcgtgcccaagcctgaccccaacgccgtccagaaaatcgaagagaaaaaaccggagaagaaagacaaagttttgacgtttctgggcgcgaatgcccaggacgacgaaggcgggcttgaattttcggtcaacaaacttttcaaatgcatgatttgtacgtacaaggccgataacaaggaaaacgagcagttgaggaaaatacaagagtcgttgagagacttgaataggaaaatcgagtcgctggaaaaaatgcaatatccggatttgaggtctcctgccgttagcaacgttacaacgttcatggagggctcaaaggcgacggttaagaacaacgtggaggataactacatggaggctccgcaagacaatgtttcgcaaccgtcggatgaggtcatggagaatagttggttctacgatgggcctttgattaggggggaagtgcattacttgaataggaatgaggaaacgttttggaatgaactgatagagcagtatttacacccgattgaggatgacaagaagaaggtttcggctgaattgaaagatttgagggacaaaatggtgtttactttcctgatgttgaattcgctctacgttattgtgatttttttgctcactttgaagaaggatttgctccatctggactggccgtttgaccccaaagtgaacttcacgtatttcgaggacaaaaatgagattggcgtttacataacatacctccagctggagcccatcggtttcgtgttcctcatatttttcgccctgcttatggtgatccagttcttcgcaatgatgatccaccgcttcggcaccttctcccaaatcatcacaaaaacacaattagacttcgatctgtgcagcaaaccaatcgacgaaatgactgtggacgaactcaggtcccgcgaccctataaaaatagtcgcagatttacaaaaactaaaaggtataaacaacgaatacgaggaccaaacggaagttccggtcgaaatgcgaaaaacagtaagtaatttggcgcaaacgagcggtggtggtgagaacaagcccatattttatttggatgaagcgttccaaaggcgagtcactcaaatagggagcacttcaagcaacaacccgagcattagcgcctttaggaagaaaagccttgcttacgtccaacaaagaatgagcatagccccaaatcgggtgtcacaagcccggcctagtgtgcagttacggtaccccaatggaaaagccaacgaaaatttcgtttttgacgaaaacgggtcagacgtggaggcataa
>m.sexta-肽聚糖识别蛋白2(mspgrp2)；gq293365.1(seqidno:111)
taatcattagaaaaatggcgagcttcgctttaatagttatccttagcgtaattggctttatatcggcctatcctagtcctgaaggttacagttctgccttcaactttccattcgtaaccaaggagcagtggggcggcagggaggcacgcacgtcgacgccactcaaccacccagtgcagttcgtggtgatccaccacagttacattcccggcgtgtgcctcagccgggacgagtgcgcgcgcagcatgcgctccatgcagaacttccacatgaacagtaacgggtggagtgatattggatacaacttcgctgtcggcggtgaagggtcggtgtacgagggccgcggctgggacgcggtcggcgcacacgcagctggctataacagtaacagtatcggcatcgtgctcatcggcgattttgtttcaaacctcccgccggcggtgcaaatgcaaaccacacaagaattgatcgcagcgggcgtgcgactcggttacatcaggcccaactacatgctcatcgggcatcgtcaggtctccgccactgagtgcccaggaaccagactcttcaacgaaatcaccaactggaacaacttcgtgagg
>m.sexta-beta-1,3-聚糖识别蛋白2(msβgrp2)；ay135522.1(seqidno:112)
gagcgtctgtttgttcgcaaccattgcgggctgcttgggccagcgagggggtccatacaaggtgcctgatgcgaaactcgaagctatctaccccaaaggcttgagagtctctgtgccagatgatggctactccctatttgccttccacggcaagctcaatgaggagatggaaggtttagaggctggccattggtccagagacatcaccaaagcgaagcagggcagatggatattcagagataggaatgctgagctgaagcttggagacaaaatttacttctggacttacgttattaaggatggattgggatacaggcaggacaatggagaatggactgttacagaattcgtcaatgagaacggtacagtggtggacactagtacagcgccgccaccagtagcacccgccgtttcagaggaagatcaatcgccaggtcctcagtggagaccttgcgaaagatccctgactgagtccttggcccgcgaacgcgtttgcaaaggcagccttgtctttagcgaggactttgatggttccagtttggccgacttgggcaattggaccgctgaagtcagattccctggcgaaccggactacccgtacaacttgtacactacggacggcactgtgggattcgaaagtgggtctctggtggtgagacccgtcatgaccgagtccaaataccacgagggcatcatatacgaccgcctcgaccttgagagatgtacaggacagctgggtacgctggaatgcaggcgagagagcagcggcggtcagattgtaccacctgtgatgacagctaaactggccactcgacgcagcttcgcgttcaagttcggcaggatcgatataaaggcgaagatgccgcgcggggactggttgataccagaactcaacctcgaacctttagataacatatacggcaaccagcgatacgcttcgggtctcatgcgggtcgcgttcgtgagaggaaacgatgtatacgccaagaagctctacggaggtccgataatgtccgacgcggacccgttcaggtccatgctgttgaaggacaagcaagggttggccaactggaataatgattaccacgtctactcgctgctgtggaagcctaacggtttagagctgatggtggacggtgaagtgtacggcaccatcgacgctggcgatggcttctaccagattgcgaagaacaacctcgtgagccacgcctcgcagtggctcaagggcaccgtcatggcgccgtttgatgaaaagttcttcatcactctgggtcttcgcgtggcgggtatccacgacttcacggacggtccgggcaaaccttgggagaacaaggg
>m.sexta-relish族蛋白2a(msrel2a)；hm363513.1(seqidno:113)
atgtcctcttgtccaagcgactatgatcccagtgaatcgtccaaatctccacaaagtatttgggagtcaggaggatacagttctccgtcgcaacaagttcctcaattgacttctaacttaacagaattgtctgttgatcacagctatagatacaatggaaatggaccatatctacagatcacagagcaaccacagaaatactttcggttccgttatgttagcgagatggtgggaacacatggatgtttgcttggcaaatcttatacaacaaacaaagttaaaactcatccgacagttgaactcgtgaattacaccggtcgagccctgataaagtgccaactatcgcaaaacaagagcgaagacgaacacccgcacaaactgctcgatgaacaagacagagacatgagccaccacgttcccgagcacggcagttatagagtggtatttgctggtatgggtataattcatgctgccaaaaaggaagttgcggggtggctctatagaaaatatatacagcagaacaagaatgaaaagtttaataagaaagagctcgaagcgcattgtgagaggatgtccaaagagatcgatttaaatatagttagactgaagtttagcgctcacgatattgacactggcattgaaatttgccggccagtgttctctgaacccatttataatttgaagtgtgcgtctacgaatgatttgaaaatatgccgcataagccgttgttacggtagaccgagaggcggcgaagatatcttcatatttgtcgaaaaggtcaacaagaaaaacatccaagttcggttctttagactggaaaacggggagcgcacctggtcagcgatggcgaactttctgctaagcgatgttcaccaccaatacgctatcgcttttagaacgccaccgtacgtcaatcaccaaatttctgaagacgtgcaagtttttatagaactcgtacgcccttcagacggtaggacgagcgctcccatggagttcacatacaaggctgagcaaatctataaacagaacaagaaacgtaaaactacttcgtcgtactcgtcgctcgacagctcctcaggttcggccggttcaattaaaagcatcagcgaactgcccgcgcccgttgtttttgctgaaaacgtaagttttttctatgacacattactcattcttcaacccatgacgaatctataa
>m.sexta-
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>m.sexta-toll受体(mstoll)；ef442782.1(seqidno:115)
atgcaggctcggcggtggtgcgcggcactgctattaatgcagatgctgagctggctcggagtcagtggacacttaccgcgtcccgagtgcgcgccagccgcagattgccaacttatacgagacaacataatcgatggatatgcacaattctacttcaacgtatcaggacatgaagtgaaatttgaacattacatcggaaacgacttcgatgtcgaattgtcatgcaattacatcgccatggacaacgcaatgctgccgcggttctcaacgaccttttcagtcaacgtaatagtggttaaagaatgtgctttgccaagaagtgggtcaatcgatgccgctgtcgctgcacttaatatcaacgttttgacggagctgactctggacaaattcctagagccggcggtgatcacgcgcgcacatcttaccagtttacaacgactagagaggctggagctacacggtaactcaaacacaagcctcgcccccggcgcactggccgcgctctccgccgcgtccgcactgaaatgtcttgtattgcatgcagtacgcgtgcccgccgctgacctggcgcgcttgccgtcgtcactgcaagaactagcgttgttggatgtgggcgctgcgagtatgcatttagattcatcggttaatttgacgtcactcttcgtaatcgatacacattatcctgtcgtcgtgaatgtgagcaacgccgttgcgctcagagacttgcacataaataccccaagtactgtgttgaccgaagacgtgctcccgtcgtcactcaactcacttgaactagaggggtggaacgaaacgcatccggtgcctaagacacgttgtgtactacttaaggaacttaatgtaatcggcaccgacaatgatgcctatccggtgactct
>m.sexta-富缬氨酸中肠蛋白(msvmp1)；ncbi登录号还未设置(seqidno:116)
acggaccttccgttggaccngccatcatcggcgctggagacatcgctgtcggccctgctatcgtcgacttccctttccccgacggcggtgccgtgtctgcccccgttgagccttcccccatcgccatcggacccgctatcgtcggtgaatcccctatctccgtcggacctgccatcgttgaggccggagacatcgctgttggacccgctatcatcgacttcccccttcccgacggtggcgccgtgtccgcccccgttgaggtttctcccgtcgactccgtcgtcgtcggccctgccgccggctctcagagctctcccctcgtccagatcatcatcaacgttaaggcccccgctggtgccggccccgttgtcgatgccgtcgctgacaagcccatggacatcattgatgttatgcccgtcgtcgaccctgctgatttcgtggacctcacccccgttgtagagcctgtagaagtcgtcgacattgtcgatgtcatgcccgtggttgaccccatcaacatcatcgatgttatgcctgttgttaagcccgtaaacccccttgcccgttctt
>m.sexta-甲壳素合酶2(mschs2)；ay821560.1(seqidno:117)
atggccgcaactacaccaggttttaagaagttagcagacgattctgaggattcagatacagaatacaccccgctgtatgatgacggtgatgaaatagatcaaagaactgcacaagaaacaaaaggatggaatctatttcgagagattccggtgaaaaaggagagtggatctatggccacaaaaaattggatagaaacaagcgtaaaaatcataaaagtgcttgcctacatattggttttttgtgctgtactgggttccgcagtcatagctaaaggaactcttctatttattacgtcacaactgaagaaagacagacaaattactcactgcaatagacgacttgctttagaccaacagttcataacggtacacagtttagaagaaagaataacatggctatgggcagcacttattgtattcggtgtgccggagttaggggtgtttttgagatccgtcaggatatgcttcttcaaaactgccaagaaaccaaccaaaacacagtttattattgctttcataacagagacactacaagcaataggaatagcagcacttgtattaataattctaccagaattagacgctgtgaaaggagccatgttgatgaacgccacgtgcgctatccctgcattgctaaacattttcacgagagaccgaatggattctaagttttctataaaattgatattggatgtattggcgatatcggcacaagccacggcgtttgttgtttggcctcttatggaaagaacgccagttctatggaccataccagttgcatgtgtgttagtgtctctaggcttctgggagaattttgttgacacctacaataaaagttatgtttttacggtgctgcaggaactacgcgacaacctcaagaggactcggtactacactcagcgggtgctatctgtttggaagattatagtgtttatggcatgcattttaatatcgctgcatatgcaaaatgacaatccgtttacctttttcactcacgccagcaaagcctttggagagagacagtatgtcgttaacgaggttctaatagtagtccgagatgacgaaaccataggctatgacgtcaccggaggtatattcgaattggacgcgatatggacctcagcattgtgggtcgcattaattcaagtgggagcagcctacttctgtttcggaagtggcaagtttgcttgcaaaattcttatacaaaattttagtttcactttagcattgactctcgtcgggcccgtggcaatcaacctccttattgctttctgcggaatgagaaatgcagacccttgcgctttccatagaactatacctgacaatttgttttacgagataccacctgtg
>m.sexta-beta-呋喃果糖苷酶1(mssud)；gq293363.1(seqidno:118)
ttgctgtgcgttttccttggtagtgtatcgtcatgttgcgttaatgggcggtactacccgaggtaccatttgtcgccaccgcatggctggatgaacgaccccaacggattctgctacttcaaaggtgaataccatatgttttaccagtacaatcccatgtcaagtttggaggctggcatagctcattggggtcatgcgaaaagtaaagatttgtgccattggaaacacttagacccgccatctatcctgatcagtggtacgatcaaacgggagtattttctggaagtgcgctagtagagaatgacgtcatgtacctttattatactggaaatgtaaatcttactgatgaaatgccatttgagggacaattccaagctcttggtatcagtactgacggtgtccacgtagaaaagtataaagacaatccaataatgtacacgccaaaccatcaacctcacatccgagacccaaaagtttgggaacacgacggctcttattatatggtcttaggaaacgcatatgatgattatacaaagggccaaatagttatgtacgaatcatcagacaagatcaactggcaagaagtaactatactatataaatcaaatggatctttcggttacatgtgggagtgtccagatttattcgaaatagacggcaagtttgtacttctgttctctcctcaaggcgtgaagtctgtgggcgatatgtaccagaatctgtatcaagcaggatacatcgtcggagaattcgattacgatactcattcattcacaatactaaccgaattcagagaattggatcacggtcatgatttttacgctacacaaacaatgaaagatcctagtggaagaagaatagtcgttgcttgggcaagt
>m.sexta-beta-1微管蛋白(msβtub)；af030547(seqidno:119)
atgagggaaatcgtgcacatccaggctggccaatgcggcaaccagatcggagctaagttctgggagatcatctctgacgagcatggcatcgaccccaccggcgcttaccatggcgactcggacctgcagctggagcgcatcaacgtgtactacaatgaggcctccggcggcaagtacgtgccgcgcgccatcctcgtggacctcgagcccggcaccatggactctgtccgctccggacctttcggacagatcttccgcccggacaacttcgtcttcggacagtccggcgccggtaacaactgggccaagggacactacacagagggcgccgagcttgtcgactcggtcttagacgtcgtacgtaaggaagcagaatcatgcgactgcctccagggattccaactcacacactcgctcggcggcggtaccggttccggaatgggcaccctccttatctccaaaatcagggaagaataccccgacagaattatgaacacatattcagttgtaccatcacccaaagtgtctgatacagtagtagaaccttacaatgcaacactgtcagtccaccaactcgtagaaaacaccgacgaaacctactgtatcgacaatgaggctctctatgacatctgcttccgcacgctcaaactttccacacccacatatggcgaccttaaccacctggtgtcgctcacaatgtccggcgtgaccacctgcctcaggttccccggtcagctgaatgcggatctccgcaagctggcggtgaacatggtgcccttcccgcgtctgcacttcttcatgccgggcttcgctccgctcacgtcgcgcggcagccagcagtaccgcgccctcaccgtgcccgaactcacccagcagatgttcgacgctaagaacatgatggcggcgtgcgacccgcgtcacggccgctacctcaccgtcgccgccatcttccgtggtcgcatgtccatgaaggaggtcgacgagcagatgctcaacatccagaacaagaactcgtcgtacttcgttgaatggatccccaacaacgtgaagaccgccgtgtgcgacatcccgccccgtggtctcaagatgtcggccactttcatcggcaactccaccgctatccaggagctgttcaagcgcatctctgaacagttcaccgctatgttcaggcgcaaggctttcttgcattggtacaccggcgagggcatggacgagatggagttcaccgaggccgagagcaacatgaacgacctggtgtccgagtaccaacagtaccaggaggccaccgccgacgaggacgccgagttcgacgaggagcaagagcaggagatcg
>p.xylostella-肽聚糖识别蛋白2(pxpgrp2)；acb32179.1(seqidno:120)
cccgatacagttggagtacctgccccggcccctggggctggtggtggtccagcacaccgccacccccgcgtgtgacactgacgccgcgtgtgtggagctggtgcagaacatacagaccaatcatatggatgtgctgaagttttgggatattggaccgaacttcctgattggtgggaacggcaaggtgtacgagggccctggttggctgcacgtcggcgcccacacttacggctacaacaggaagtctatcgggatctctttcattaggaattttaatgctaagaccccaacaaaagcagcgttgaatgcggctgaagcattgctgaagtgtggagtgagagaaggacacctgtctcactcatacgcagtggtcggccatagacaactgatcgcaacagagagcccaggcaggaaactgtaccaaatcatcaggcgctgg
>p.xylostella-免疫缺陷蛋白(pximd)；px003008(seqidno:121)
tcccgaagccacctagagaaccggtagagactacagagacatcacaaaataataccgaaaatcaaccttacaatgtcgaagaagaggaaatacccgaaccagaaaagcctaagaaagaaaaaaagaatcccaagcctaccaaaaaaactttctttaatcgtgacaaaactaacaaacacgacgatacccgcaaacatacaaaatccggaaaggaccagacatcaattaatactcaaggtaacttgaaaattatacttcctgtaacttaaacggcccgttgaccccagtttacctttcgcctttcttgatatatttttgtaatccagccttactttggtaatacatacttgccccacttgtatttagttaatggtggcactagctagatagtaatgttaaatgatgataagcagtagtgattcatcattcaaatgtatcattgtcctttaatgttaagcgcaaatagattttcattgttctcccatgtgcttcatgttttatgtatttataggtaggtacttaatgttttataaatatttttttgttaattgggaatccccagtccccattgtctggaccagtttatatataattgaactaacaagagtgtgctttaaatactattctctgcaattatgataattaaacaacatgaatttctcttcacttcccttctcttatttaaataatattgtaggaaactgtaataactaatacaagattataaatttcattctagcaactggtgatgtaatccatgtggtaaattccaaagatgtgcaggtcggccatcagtatgtgtacaacatgggaactcccggagctaactcacagaagaataacccatttgatgatgaagaaacagtagaaaagacaaatctaataactctggtcatggaagcaaaaattatggtaataacacatttttaactaggcataaggtcataatttagccagaatcatcagcttgt
>p.xylostella-cactus(pxcac)；px016665(seqidno:122)
caatgctgcggagggtctatgcgggtggacacctctacacgtagcggcggcgcgaggcgacgtcgacacggctcgctacttgctcgagaagtgcgctggcgtcgatccctctgccctggactacgccggtcgtacggccaggaaactggcgttgaagaataaagcggccgccctgtttgacggcagtgagggcagcgaggaggaggatagtgacagtgaggatgagatgcttctggaaagcgaccagagtctgttcgaccggatccgtgacggtatgaacgccatcaacgtcgcctga
>p.xylostella-dorsal(pxdor)；px000110(seqidno:123)
taacctgtgccagcaaccaatggctcctatggcgcagcagctgatggacccgtcccccagcgacccaccctccatcacggggctgctgatggatcgcccggaccagccctactccggggagctgtctggactctccgccctgctggctgaggcagcccccgcagagatgctcagcgatagcctcaacagactgtctacgggggacttgttgagacaagttgatatgtga
>p.xylostella-beta1-3聚糖识别蛋白2(pxβgrp2)；q8mu95.1(seqidno:124)
gaaggattgaagtgagcgccagaatgccgcgcggtgattggttgattccagatattctgctggagccgaaagaaaacctttacggagtacgcaattacgcgtcaggtctactcagcatagcctcagtcagaggaaacactgcttactcgaagaccctcaaaggaggccccatactgtgtgacaaggaaccgcagagaagtgccaagttgagcgaaaaagttggatatgaccattggaataaagccttccataactacaccatgatttgggcaccaagtggcatcaccatgctggtggacggcgagcagtacggggacatccgtcccggcgacggcttcagccaggacccggcggtgagcagcgtggtggccgcgccgcagtggctgaagggcaccagcatggcgccctttgatgttatgttctacatatcccttggtctccgcgtgggcggagtgaacgacttccccgacactcctgagaagccgtggaagaacaaggccactaaagccatgctgaatttctggaacgcccgggaacagtggcagagcagctggtttgaggacaccactgcactcctcatagactatgtcagggtttatgcgctgtga
>p.xylostella-甲壳素合酶1(pxchsi)；kx420688.1(seqidno:125)
cgtatctcgcacgacctgaaagagctgcgaaactcatccgtcttttccttctttatgatcaatgccctctttgttctcatcgtattcttgctgcaactgaacaaggacaacctccacataaagtggcccttcggagtcaaaactaacattacgtatgatgaggtgacgcaagaggtgctgatctccaaggatacctgcaactagagcctattggtctggtgttcgtgttctttttcgcattgattttagtcatccagttcactgccatgttgttccatcgattcggaactttgtcgcatatattatcgtctacggaactgaactggttctgcaataagaaggcggaagacttatctcaagacgcactgctagataagaatgcgatagcaatagtgaaggatctccagaaactaaacgggctcgatgacgggtatgacaatgactcggggtcgggcccgcacaatgtgggaaggagaaagacgatacacaacctggagaaagcgagacagaagaagaggaacataggaacgctcgacgtcgctttcaagaagcgattcttcaacatgaacgctaatgaaggaccaggaacaccagttctgaaccgcaagatgacgttgcgaagagagacgttgaaggcgttggaaacgaggaggaattctgtgatggccgaacgaaggaagtcgcaaatgcaaacacttggagctaacaacgaatatggagtcactggaatcttaaacaacaacccagcggtgatgccgcgccaccggccgtcgacagccaacatttcggtcaaggacgtcttcgcggaacccaacgggggacaagtgaaccgagggtacgagaccacgcacggcgacgagggagacggcaactccatcagactgcagccgagaaccaaccaggtctccttccaggggagataccaataa
>p.xylostella-beta微管蛋白(ρxβτuβ)；kx420688.1(seqidno:126)
gaaggaggtcgacgagcaaatgttgaacatccagaacaagaacagcagctacttcgtcgaatggatcccgaacaacgtcaaaacggccgtgtgcgacataccgcctcgtggactgaagatgtctgccacctttatcgggaacacgacagcaatccaagagctcttcaagaggatttctgagcagttcactgctatgttcaggagggaagcgttcctccactggtatactggtgaaggcatggacgagatggagttcacagaggcggagagcaacatgaacgacctggtctccgagtaccagcagtaccaggacgccacggctgaagacgagggagaattcgacgaggatattgaagacgagtga
>s.frugiperda-肽聚糖识别蛋白1(sfpgrp1)；rep_c7951(seqidno:127)
cctgattggtggaaacgggagagtttatgaaggagccggctggcatcacgttggggcccatactttgggatacaatgcaagatctgtggggatctccttcattggcgattttagaacaaaattaccaacacccgaagcactgaaagccttcaacagtctcctggaatgtggagtcacgaacaattatctgtcaaaggactatcacctggtggcccatagtcagctctctatgactgacagtccyggagacatgytgaggaagcaggtggaatcgtggcctcmttggctggataatgccaaagacatacttaagtagaaraagactaaacgccgtactttgagccatttaatggttacttaacccagtccttagcaatttgatacaaggccaatgtctctaagggcggcagtaaaggtcaaaacacatttaatgagtgtgtttaagattttgctagtgaaaattgttttgaagtacgtatttgatgtaagtgatgatatcagtacccttagtatgagtttgctttacgttccacgagatggaaacgagagcgcgttcggcgctctgattggttcgttcattcatgccggcc
>s.frugiperda-抗菌肽(sfatta)；rep_c9395(seqidno:128)
gccagacatctaccacaggaccactcaacgtacgaccaagtacaactcctcgggttcgacgaagatggacgaccagtgtttgagcacgaagacttactcccagaactagaggagtcctaccagccagagcacctggcgaggactcgcagacaggcgcagggcagcgtcaccctcaactccgacggcggcataggcctgggcgctaagatcccgctcgcacacaacgacaagaatgtggtgagcgccatcggctccatggacttcaacaacaagttgcagcctgcttccaagggcttcggtctggctctggacaacgtcaacgggcacggactgacggtgatgaaggaaagtatccccgggttcggggacaggctgtcgggcgctggcaagctgaacgtgttccacaacgacaaccacaacgtggccgtgaccggctctctcgccaggaacatgcccagcatcccgaacgtgcccaacttcaacacgtacggcgggggcgtcgactacatgtacaagaacaaggtgggagcgtctctgggcatggccagtactccgttcttggaccgcaaggactactccgcgatgggcaacctgaacctgttccgcagcccgaccactaccgtggacttcagcggcggctttaagaagttcgaatctcccttcatgagcagcggctggaagcctaacttcggccttactttcggcagatctttctagatatattttgtaatctaaatttaactttaactttgttgtataatattttgtcgaattaagatcagtattgttcatactaatattatattatcagtgtttcttataaattaa
>s.frugiperda-血淋巴蛋白酶10(sfhpio)；c12881(seqid9)
caaggctcgtaccttgcagttgaaccgacaatctattcctaaagcctttttaaggtcaggaaaaatagttcctacatctaaatgcagtagaatttgcgaaacgaatttaaataaaaatggcgtcgattgtgtttgtgattttgtgtgttaccgtcgctgcggtgaaaagcgcgattttaaacccgtggagtaaagttgaggccaacaaatgtggtgtagaagccagtactaacttggtccatcacaatccatggttggtctacatcgagtattggcgtggaaactcagatactgagatccgatgcgccggtactttaatcgacagcaaacatgtcgtcacagctgcccactgcgttaggactctgaagtttagtcatttgatcgcccgtcttggcgaatacgacgtaaattctaaggaggactgcgttcagggcgtgtgtgccgatcccatcgtcagaatcaaggtggctgagatcatcgtgcatcctaactacagcaaccgggaaca
>s.frugiperda-胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(sftsp)；rep_c48453(seqidno:130)
agcaacaaaatgcgtgtcctcgcttgcttggcccttctcttagctgtggtagcagccgtcccctccaatccccagaggattgtgggtggttcggtcaccaccattgaccggtaccccaccattgcatccctgctgtactcgtggaacttgagttcctactggcaggcgtgcggtggttccatcttgaacaaccgtgccatccttactgctgcccactgcacagttggtgacgccgccaacagatggagaatccgtcttggctccacctgggccaacagcggtggtgtcgttcacaacgtcaacactaacatcgtccacccctcatacaactctgcaactttgaacaacgacatcgctatcctccgctccgccaccaccttctccttcaacaacaatgttcaggctgcctccattgctggtgccaactacttgcccggtgacaacaccgccgcctgggccgctggatggggaactacctccgctggtggctctagctctgagcagctccatcacgttgagctgcgcatcatcaaccaggctacttgcaaaaacaattacgctacccgcggtatcaccatcacctacaacatgttgtgctctggctggcccaccggtggtcgcgaccagtgccagggtgactctggtggtcctctctaccacaacggcatcgttgttggtgtctgctctttcggtattggctgtgctcag
>s.frugiperda-c型外源凝集素6(sfctl6)；joint2_rep_c448(seqidno:131)
aacagttttctattggcagtcaaagacttcagtcgaaaaataatcctcatcagagtcgtgaagcaaggtgcccaaaatataatgtaacctagatacctattaataaattatttgtcaaccaaaacgttacgttcaaagtccttaaaatcaaaatatcttatgattagttttgatttaaaaatagaggttcgaaatcgccaacccaaataggtttagtttacgattcaggaaaaatcctaacgtagggaaacattattttacaagacttttggcttaaaaactttgagaaccaatgtcaaatttgataataactaatgaggtataaaagcttgatcctattaggacttattttcataacaccatcgagtttgtatttaatrragacgtgkgttaactaacaacatgaagaccggtgtaaaatattctgttmtttggatattctctctattytgctatatagaggcaacatttcgttgtgactacacgtacagcaaggaagcgaagggctggttcaaacatgtggtgataccagctacttgggctgacgcacgwctgcactgcacgttggaaggtgcaacgctggcttctccactcaaccaggctatmagtaatgagatgcagtccmtcctggcraacctctcggcgctgcaatcagaagtcttcactggaattcacrcgactktttcacgrmrcaacttatatcatacyatygaaggtatacctcttagtaaaattccattagattgggcaacaaatgagccaaatggtgggagagatgaaaactgtatcacgtttaactccgatggccaagcggcagacagatcctgtaargagactcgaccttacatctgctaccgacacacwactaaagtgactgtgkccaatgaatgtgggactgtagatcctgaatacaatttggataaaagaacgggckcytgctataagttccacacrgtacctcgcacgttcgagcgtgccaacttcgcgtgttctgctgaaggtg
>s.frugiperda-抗菌肽(sfcec)；rep_c42380(seqidno:132)
ttcgtgtcgtatcactagagttcgaaatacaaaataataatacatttattattttgccataattaataataaagttattttatttcataataataatgaatttcacaaagatattttgtttgtttttgtcttgctttgttttgatggcgaccgtgtcaggagctcctgaaccgaggtggaaattcttcaagaaagtggagaagttgggccaaaacatccgckatggtatcataaaggcaggacccgcagtggccgtggtgggatcagcrgcagccatwggaaagtgakccctacgacctgagacatgaagactaatatccaytaaaataasaatattgaggcktataatattaatttattrtrtttgtaaattaaattatttgtaagataa
>s.frugiperda-beta1,3聚糖识别蛋白(sfpgrp2)；ef641300(seqidno:133)
gcaacaatcgcaccaactctttcgtgcgcagtggaagtttgttcatccgtccctctctaacatcagacgagttcggagaagctttcctctcatctggacactggaacgtcgagggtggtgctcctgctgatagatgcacaaatccacaatggtggggttgcgagagaacaggcacgccgaccaacattttgaacccaatcaagagtgctcgtgtccgtaccgtcaattccttcagcttccgttacggacgcctcgaagtccgcgctaaaatgcccgccggagattggatttggccagctatctggttgatgcctgcgtacaacacttacggtacttggcccgcatcaggagagattgacttagttgagtcccgaggcaaccgtaacatgttccacaatggtgtccatatcggtacacaggaagcaggctcgaccttgcactacggaccttacccagcgatgaacggttgggagcgcgcccattgggtcagaaggaaccct
>s.frugiperda-joint2_rep_c16438(sfrc16438)；un-annotated(seqidno:134)
tcgttctcctcgtcgctttcttggggacctcatggtttacgggagatgtttctgcgagtccgcggccgcaagagccgcgtgtggatcaaaatccgaatcaggtgtcaccttatggagggtccgggtaccacgcacctccgcagtaccaaccgcagtaccaaccacagccgtactacccacagccgcagtactacccacagccgtactacccacctcctcagtattacccaccgcagccacaaacacctgagaatgctccactcataaacacatggaatggtttccacgactgggctcagaatatcgttcaaagtgctttggggcagaaattcccgaaaggtagacagtaactttttaattgtcaattgaagataaggcccatttcaccaactgctgtttaattttaaggagctcctaaactaacataggtgacacttagcgatattctggattttttgtgaacgtataaataatatccaaatgtaaaagataagaggccaagaa
>s.frugiperda-甲壳素合酶b(sfchsb)；ay52599)(seqidno:135)
gaatttaggagcagcgtgcgggcgcatccatcctgtgggctcaggcttcatggcatggtatcaaatgttcgagtacgctattggtcattggctgcaaaaggcgactgaacacatgattggctgtgtactctgtagccctggatgcttctccctcttcagaggaaaggctttgatggacgacaacgttatgaagaaatataccttaacttcccacgaggcacgacactatgtgcaatacgatcaaggcgaggaccgttggtgcacgctactgctgcagcgcgggtaccgcgtggagtacagcgcggtgtcggacgcgtacacgcactgccccgagcacttcgacgagttcttcaaccagcgccgccgctgggtgccctccacgctcgccaacatcttcgacctgctcggcagcgccaagctcaccgtcaagtccaacgacaacatctccaccctctatatagtctatcagttcatgttgatagtgggtacggtgttgggtcccggcacgatcttcctgatgatggggggagccatgaacgccatcattcagatcagcaacgcgtacgcgatgatgttgaacctcgtaccactcgtcatcttccttatagtctgtatgacttgtcagtcaaagacgcagctcttcctcgctaacctcataacatgcgcatacgcaatggtgatgatgatcgtgatagtggggatagttctgcagatagtggaggatggatggctggctccgtccagtatgttcacagctttaatattcggtacattcttcgtcaccgcggcactacacccgcaagagatcaaatgtttgttgttcatagcagtgtactatgtaaccatccctagtatgtacatgttgttgatcatatactccatctgtaatctcaacaacgtatcctggggtaccagggagacaccgcagaagaaaactgctaaggaaatg
>t.castaneum-肽聚糖识别蛋白2(tcpgrp2)；xm_965754.3(seqidno:136)
atgagtggcagtgaccctttaacaaatacccaacaatccgatcaagattattaccatccactctgttattcaattcaagtggacgacgaaaatgaacaatcagctctcctgcccgcatttcatcaaaggaaaagtttgcgagttcaggatαα′aατctttattgtatttttattttcaattctaattaccggactagccattggcctctcccttgcaacgagggaccgaatggaaagctgcaggagtctataatattacagttcgggaacagtggcaagctcacgtcccttcatcaacaatgccaaagttggaacttcccgtaagaagagttttatttcttcctgcaaataccactagctgcggcagcaaacccactgtgccaaagtcctccaggaactacaattacagcatatgctgcgtggaaagaaccgacatctccacaattcatagactgcgatggcagaattttcgaggggagaggatgggactttgaaacttctgttcaaaattgtacggttatgatactgtgagagttgcttttttggaggaattagatgcgaaagcaccgaggtttagacaagctgaagcggcaaaaatgttcctggaagt
>t.castaneum-beta1-3聚糖结合蛋白(tcβgrp2)；xm_966587.4(seqidno:137)
acattacaacgttccgcgagcctgaatccaagcattcaggccccgtggcttcaaagtgagcatccccatactgaaggcatccaattattcgcctttcatggaaatattaataaacccctgcacggtctcgaggccggacaattttcccaagacgtcctccaaagggagggagacgagtgggtgttccaagactccagtgccaaataaacgtgggagataaaactattattggctctttatcattaaagaagacctgggctacagatacgatcacggcgagtacgagtgaaagttttagccacccgtgacttcgattctcctcaaacaacctctgtgacgccgaacttgcccccaatctcggcatttgcgaaaaggtgatggtaaatctcacgcggaagctgctcgatttgcagcaagaaattgagtcccttagggagacgaacgatattttggaggatatggttcagaagcacactgatacggcgactagtctcactttggacggcttgatgataaaggatgacgacgaacttgtttcggtgattcaagcaattattaaagataactggactaaaaagcaggattcaaaatgtgacgaggcaggagaatggaatggtcaagtttcaagtggcgagtttgagagaaaagttggaggttgtcaaagcggccaaaagaaaactcaagtcgtcgagctttaggatcacgtattaa
>t.castaneum-中肠蛋白(tcmdgp)；xm_971351(seqidno:138)
ccgttgaagaggatgcccagtgaagaaatcagtatcagtgatctgcctagcgaaatgaaagaagttttagtagaaattagcccgaactttgatgaaaatctgaaacgggctttcaggaacgaaggagtgaggctgcagagagtgcagaacaatggacgatttattcatcagctggacgacgttctcttatccatagacgataccaaaatcgagttacgcaacctgaaattcccctggatccccgacttccgcatcgtggacttgtccagcgacctgcccatgtcatgcctcgacctaacctaaacctgggcaatttgcgaattgagggcgagtaggaagccaacaacaccacactcaggcgatggctcccggtatctcacattggtcgaatcgtgatcggttttaacaacgtccgagcgaacggaaaagtcggactcgtgctcgagcaggattctttcgttccgcagaattatgatattagatatgagccgacggatgttgttattagggttagctatcacgtggatggcgagaatgggtgcaaaatgagattagcaattcagatattgaggccacgctaggcaagaccgtgtgggtgcagttgactgagatattgtccaacctgttgcataggcaattgggcgaggttgtagtggagt
>t.castaneum-甲壳素合酶2(tcchs2)；efa10719.1(seqidno:139)
atggcggcgcgtcatcgctttgccacagggagccctgaggaaacagagcccctgtattcgtcgacgcaaatgcccgaaaaagtccgggaaaaatggaacgtcttcgacgaccccccaagagagcccacttcggttccgaagtcaaaagaacctacatcgagtggggggtgaagtttttgaaagttgtgacaatcataactgtgttttttgtggtccttggtgctgcagtggtttcgaaagggacaaccttgttcatgacgtcacaaataaaaaagaatgtgacaagggcttattgcaacaaaaagatagaccgcaacctccaattcgtcgtctccctccccgaagtggagcgcgtgcaatggatctggctcctcattttcgcttacttgatccccgaagtgggtacctggatccgcgccgtccgcaaatgcctctacaagctctggaaaatgccctccctctccgaattcctctccctcttcggcacggaaacgtgccccgccatcggaagcgcaattttgatattcgtcgtcctccccgagctggacgtcgtcaaaggggcgatgctcacaaacgcggtttgtttcgtgcccggagttgtggcaatgttctcgcgcaaaccgtgctccataaacgagaacctgaaaatggggctggacatcgccagcataactgcacaggcgtcaagcttcgtggtgtggcccttggttgaaaataacccgaccttgtacctaatccccgtttccgtgattttgatttcggtgggt
本公开的广度和范围不应由任何上述示例性实施例限制，而应仅根据所附权利要求及其等同物来限定。
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