修饰在真核细胞中用于沉默基因表达的非编码RNA分子的特异性的方法与流程

文档序号:21603972发布日期:2020-07-24 16:59阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种在一真核细胞中对用于编码或被加工成不具有rna沉默活性的一非编码rna分子的一基因进行修饰的方法,前提是所述真核细胞不是一植物细胞,其特征在于:所述方法包括:将一dna编辑剂引入至所述真核细胞中,所述dna编辑剂赋予所述非编码rna分子针对一感兴趣的靶rna的一沉默特异性,从而对用于编码或被加工成所述非编码rna分子的所述基因进行修饰。

2.一种在一真核细胞中将用于编码或被加工成针对一靶rna的一rna沉默分子的一基因进行修饰的方法,前提是所述真核细胞不是一植物细胞,其特征在于:所述方法包括:将一dna编辑剂引入至所述真核细胞中,所述dna编辑剂将所述rna沉默分子的一沉默特异性重定向至针对一第二靶rna,所述靶rna以及所述第二靶rna是不同的,从而对用于编码所述rna沉默分子的所述基因进行修饰。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:用于编码或被加工成所述非编码rna分子的所述基因对所述真核细胞是内源性的。

4.如权利要求2所述的方法,其特征在于:用于编码所述rna沉默分子的所述基因对所述真核细胞是内源性的。

5.如权利要求1或3中任一项所述的方法,其特征在于:对用于编码或被加工成所述非编码rna分子的所述基因的所述修饰包括:赋予所述非编码rna分子针对所述感兴趣的靶rna具有至少45%的互补性。

6.如权利要求2或4中任一项所述的方法,其特征在于:对用于编码所述rna沉默分子的所述基因的所述修饰包括:赋予所述rna沉默分子针对所述第二靶rna具有至少45%的互补性。

7.如权利要求1、3或5中任一项所述的方法,其特征在于:所述非编码rna分子的所述沉默特异性是通过测量所述感兴趣的靶rna的一rna或蛋白质水平来确定的。

8.如权利要求2、4或6中任一项所述的方法,其特征在于:所述rna沉默分子的所述沉默特异性是通过测量所述第二靶rna的一rna或蛋白质水平来确定的。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法,其特征在于:所述非编码rna分子或所述rna沉默分子的所述沉默特异性是由表型上确定的。

10.如权利要求9所述的方法,其特征在于:所述由表型上确定的是通过确定选自于由一细胞尺寸、一生长速率/抑制、一细胞形状、一细胞膜完整性、一肿瘤尺寸、一肿瘤形状、一生物的一色素沉著、一感染参数以及一炎症参数所组成的群组中的至少一种表型来实现。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法,其特征在于:所述非编码rna分子或所述rna沉默分子的所述沉默特异性是由基因型上确定的。

12.如权利要求11所述的方法,其特征在于:一表型是在一基因型之前确定的。

13.如权利要求11所述的方法,其特征在于:一基因型是在一表型之前确定的。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法,其特征在于:所述非编码rna分子或所述rna沉默分子是由一前体加工而成。

15.如权利要求1至14中任一项所述的方法,其特征在于:所述非编码rna分子或所述rna沉默分子是一rna干扰(rnai)分子。

16.如权利要求15中所述的方法,其特征在于:所述rnai分子是选自于由一小干扰rna(sirna)、一短发夹rna(shrna)、一微型rna(mirna)、一piwi相互作用rna(pirna)以及一反式作用sirna(tasirna)所组成的群组。

17.如权利要求1、3、5、7或9至14中任一项所述的方法,其特征在于:所述非编码rna分子是选自于由一小核rna(snrna)、一小核仁rna(snorna)、一长非编码rna(lncrna)、一核糖体rna(rrna)、一转移rna(trna)、一重复衍生rna以及一转座元件rna所组成的群组。

18.如权利要求15或16所述的方法,其特征在于:所述rnai分子被修饰,以保留结构的独创性及以便通过多个细胞rnai因子来识别。

19.如权利要求1至18中任一项所述的方法,其特征在于:对所述基因进行所述修饰受到通过选自于由一缺失、一插入、一点突变及其组合所组成的群组中的一种修饰影响。

20.如权利要求19所述的方法,其特征在于:所述修饰是在所述非编码rna分子或所述rna沉默分子的一茎区域中。

21.如权利要求19所述的方法,其特征在于:所述修饰是在所述非编码rna分子或所述rna沉默分子的一环区域中。

22.如权利要求19所述的方法,其特征在于:所述修饰是在所述非编码rna分子或所述rna沉默分子的一非结构化区域中。

23.如权利要求19所述的方法,其特征在于:所述修饰是在所述非编码rna分子或所述rna沉默分子的一茎区域以及一环区域中。

24.如权利要求19所述的方法,其特征在于:所述修饰是在所述非编码rna分子或所述rna沉默分子的一茎区域、一环区域以及一非结构化区域中。

25.如权利要求19至24中任一项所述的方法,其特征在于:所述修饰包括一种至多200个核苷酸的修饰。

26.如权利要求19至25中任一项所述的方法,其特征在于:所述方法还包括:将多个供体寡核苷酸引入至所述真核细胞中。

27.如权利要求1至26中任一项所述的方法,其特征在于:所述dna编辑剂包括与一植物可表达启动子在运作上相连接的至少一个grna。

28.如权利要求1至27中任一项所述的方法,其特征在于:所述dna编辑剂不包括一核酸内切酶。

29.如权利要求1至27中任一项所述的方法,其特征在于:所述dna编辑剂包括一核酸内切酶。

30.如权利要求1至29中任一项所述的方法,其特征在于:所述dna编辑剂包括一dna编辑系统,所述dna编辑系统是选自于由一大范围核酸酶、一锌指核酸酶(zfn)、一转录激活因子样效应核酸酶(talen)以及crispr所组成的群组。

31.如权利要求29或30中任一项所述的方法,其特征在于:所述核酸内切酶包括cas9。

32.如权利要求1至31中任一项所述的方法,其特征在于:所述dna编辑剂是以dna、rna或rnp的形式施加至所述细胞。

33.如权利要求1至32中任一项所述的方法,其特征在于:所述dna编辑剂与用于监测在一真核细胞中的表达的一报道子连接。

34.如权利要求33所述的方法,其特征在于:所述报道子是一萤光蛋白。

35.如权利要求1至34中任一项所述的方法,其特征在于:所述感兴趣的靶rna或所述第二靶rna对所述真核细胞是内源性的。

36.如权利要求35所述的方法,其特征在于:所述感兴趣的靶rna或所述第二靶rna与一癌症相关。

37.如权利要求1至34中任一项所述的方法,其特征在于:所述感兴趣的靶rna或所述第二靶rna对所述真核细胞是外源性的。

38.如权利要求37所述的方法,其特征在于:所述感兴趣的靶rna或所述第二靶rna与一传染病相关。

39.如权利要求1至38中任一项所述的方法,其特征在于:所述真核细胞是从一真核生物获得,所述真核生物是选自于由一哺乳动物、一昆虫、一线虫、一鸟、一爬行动物、一鱼、一甲壳类动物、一真菌以及一藻类所组成的群组。

40.如权利要求1至39中任一项所述的方法,其特征在于:所述真核细胞是一哺乳动物细胞。

41.如权利要求40所述的方法,其特征在于:所述哺乳动物细胞包括一人类细胞。

42.如权利要求1至41中任一项所述的方法,其特征在于:所述真核细胞是一全能干细胞。

43.一种在有需要的一受试者中治疗一传染病的方法,其特征在于:所述方法包括:根据权利要求1至42中任一项所述的方法,对用于编码或被加工成一非编码rna分子或用于编码或被加工成一rna沉默分子的一基因进行修饰,其中所述感兴趣的靶rna与所述传染病的发病或发展相关,从而治疗所述受试者中的所述传染病。

44.一种在有需要的一受试者中治疗一单基因隐性遗传疾病的方法,其特征在于:所述方法包括:根据权利要求1至42中任一项所述的方法,对用于编码或被加工成一非编码rna分子或用于编码或被加工成一rna沉默分子的一基因进行修饰,其中所述感兴趣的靶rna与所述单基因隐性遗传疾病相关,从而治疗所述受试者中的所述单基因隐性遗传疾病。

45.一种在有需要的一受试者中治疗一自体免疫疾病的方法,其特征在于:所述方法包括:根据权利要求1至42中任一项所述的方法,对用于编码或被加工成一非编码rna分子或用于编码或被加工成一rna沉默分子的一基因进行修饰,其中所述感兴趣的靶rna与所述自体免疫疾病相关,从而治疗所述受试者中的所述自体免疫疾病。

46.一种在有需要的一受试者中治疗一癌性疾病的方法,其特征在于:所述方法包括:根据权利要求1至42中任一项所述的方法,对用于编码或被加工成一非编码rna分子或用于编码或被加工成一rna沉默分子的一基因进行修饰,其中所述感兴趣的靶rna与所述癌性疾病相关,从而治疗所述受试者中的所述癌性疾病。

47.一种在有需要的一受试者中增强一化疗剂的疗效及/或特异性的方法,其特征在于:所述方法包括:根据权利要求1至42中任一项所述的方法,对用于编码或被加工成一非编码rna分子或用于编码或被加工成一rna沉默分子的一基因进行修饰,其中所述感兴趣的靶rna与所述化疗剂的疗效及/或特异性的增强相关,从而增强所述受试者中一化疗剂的疗效及/或特异性。

48.一种在有需要的一受试者中诱导细胞凋亡的方法,其特征在于:所述方法包括:根据权利要求1至42中任一项所述的方法,对用于编码或被加工成一非编码rna分子或用于编码或被加工成一rna沉默分子的一基因进行修饰,其中所述感兴趣的靶rna与所述凋亡相关,从而诱导所述受试者中的细胞凋亡。

49.一种产生一真核非人类生物的方法,前提是所述生物不是一植物,其特征在于:所述生物的至少一些所述细胞包括用于编码或被加工成一非编码rna分子的一经修饰的基因,所述非编码rna分子包括针对一感兴趣的靶rna的一沉默特异性,所述方法包括根据权利要求1至42中任一项所述的方法对一基因进行修饰,从而产生所述真核非人类生物。


技术总结
本发明公开一种在一真核细胞中对用于编码或被加工成不具有RNA沉默活性的一非编码RNA分子的一基因进行修饰的方法,前提是所述真核细胞不是一植物细胞。所述方法包括将一DNA编辑剂引入至所述真核细胞中,所述DNA编辑剂赋予所述非编码RNA分子针对一感兴趣的靶RNA的一沉默特异性。本发明还公开一种在一真核细胞中对用于编码或被加工成针对一靶RNA的一RNA沉默分子的一基因进行修饰的方法。本发明更公开多种疾病预防和治疗的方法、诱导细胞凋亡的方法以及产生一真核非人类生物的方法。

技术研发人员:艾尔·毛利;亚伦·盖伦提;克里斯蒂娜·皮诺奇;安吉拉·查帕罗·加西亚;奥菲尔·梅尔
受保护的技术使用者:热带生物科学英国有限公司
技术研发日:2018.09.18
技术公布日:2020.07.24
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