染色桑树(macluratinctoria或morustinctoria)是一种原产于中美洲、加勒比、东印度和热带南美的落叶树,这种树可以达到20-30m的平均高度和70-80cm的茎粗。染色桑树的芯材通常被称为黄木,在哥伦布时代之前就已经被用来为织物染色。黄木中的染料为桑酮(也称为桑黄酚或桑鞣酸)和具有下式i的五羟基黄酮醇桑色素:
桑色素(2,4-二羟基苯基)-3,5,7-三羟基-4h-4-色原酮(2,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-4h-chromen-4-one)属于黄酮醇类化合物群组,类黄酮的一个亚组。大多数黄色植物染料的名称源自拉丁文黄(flavus=黄色)。桑色素具有五个羟基和三个环体系。具有骨架原子序号的黄酮醇类化合物的基本骨架,连同结构相似的橙酮和开链查耳酮,由图1获知。
桑色素具有抗氧化、抗炎作用并且几乎无毒。其因此满足了药理学应用的重要前提条件。与3位上未取代的黄酮类化合物(flavonen)相比,桑色素的3-羟基化提高了其抗氧化作用。由于其3.5的低pka值(3-羟基),在生理条件下,桑色素以脱质子形式存在,与其他类黄酮不同,它几乎不结合到带负电荷的dna或rna上。桑色素(1)在2'-羟基或3-羟基脱质子的情况下作为优异的阴离子配体与过渡金属阳离子(例如与zn2+形成2:1-络合物)和镧系元素阳离子(例如与la3+形成3:1络合物)络合,并用于各种金属离子的荧光分析。其与al3+形成发绿色荧光的3:1络合物。
迄今为止,从黄木提取物中分离出了商用的桑色素。然而,市售可得的桑色素(天然和合成获得)显示出仅约85%的纯度,主要含有次要组分莰非醇(ii)作为杂质,莰非醇(ii)相对于桑色素缺少2'-羟基。此外,还有其他杂质,它们通常是多酚或类黄酮的混合物。这些只能通过非常复杂的方式分离或根本无法分离的杂质在许多应用(例如药物以及电镀或镀锌)中是干扰性的。
因此存在这样的需求,提供一种用于直接合成制备高纯度桑色素和桑色素衍生物的方法。另外,黄木是热带木材,由于环保因素,其运用并非毫无顾虑的。
在实验室规模上,在现有技术中描述了两种合成途径。尽管perkin在1896年就弄清了桑色素的结构,并且有关类黄酮合成的综述文献已经普遍存在,但是直到2013年才合成桑色素,其中利用了起始自2-甲氧基-1-(2,4,6-三羟基苯基)乙-1-酮和2,4-二甲氧基苯甲酰氯的阿兰-罗宾逊缩合(cn103342690a)。此外,还描述了一种得到桑色素的类似途径,该途径利用了查耳酮(e)-3-(2,4-二甲氧基苯基)-1-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮(8)(cn105985306)。在此使用的是苯乙酮衍生物1-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)乙-1-酮与2,4-二甲氧基苯甲醛的羟醛缩合。最后描述了一种合成途径,该途径据信在没有对酚属羟基进行甲基化的情况下得以实现(b.vyas,m.singh,m.kaur,o.silakari,m.s.bahia,b.singh,med.chem.res.2016,25,609-626)。
本发明的目的是提供一种基于容易获得且价格便宜的原料制备高纯度桑色素和桑色素衍生物的方法,以及提供高纯度合成制备的桑色素和桑色素衍生物,即没有上述提及的杂质。术语桑色素衍生物在本发明中应理解为包括可直接由桑色素制备的衍生物以及至少具有桑色素碳骨架(包括氧化形式)的高纯度化合物。
所述目的通过用于制备具有下式(1)的化合物的方法来实现,
该方法包括以下步骤:
i)将下式(4)的化合物乙酰化
以形成式(6)的苯乙酮,
ii)在室温下在碱性条件下使式(6)的苯乙酮与下式(7)的化合物反应
以形成下式(8)的查耳酮,
iii)在碱性环境中在氧化条件下,使式(8)的查耳酮转化以形成下式(9)的黄酮醇,和
iv)使式(9)的黄酮醇脱甲基化,
其中
r1,r2,r3,r4,r5和r6彼此独立地为支化或未支化的c1-c8烷基,no2,so3h,其中x为乙基或甲基或氢的nx2,cf3或氢,优选c1-c5烷基或氢,最优选c1-c3烷基或氢,和
r7和r8彼此独立地是甲基、乙基、叔丁基、苄基、甲氧基甲基、对甲氧基苄基、苄氧基甲基、三苯甲基、四氢吡喃基或烯丙基。
在此,该方法基于容易获得的原料,并提供所需产物的高产率。另外,以高纯度获得产物,所述产物由此显示出比天然获得的桑色素更高的活性。
附加地或替代地,该方法可以包括步骤
(i-a)在酸性条件下将下式(3)的化合物甲基化
以形成式(4)的化合物,其中r1,r2,r3,r4,r5和r6如上定义。
由此可以由另外的容易获得的原料,例如市售三甲氧基苯(其可直接使用),合成桑色素或桑色素衍生物。
在一个优选的实施方案中,r3是氢。在一个特别优选的实施方案中,r1,r2,r3,r4,r5和r6为氢。因此,通过根据本发明的方法获得的是特别优选的高纯度的式i的桑色素:
在步骤iii)中,氧化条件可优选借助于叔丁基过氧化氢(tert.-butylhydroperoxide)产生,且碱性环境可优选借助于碱金属氢氧化物产生。在此,碱金属氢氧化物是lioh、koh和naoh。使用叔丁基过氧化氢减少了具有橙酮骨架的不合意副产物的形成,并另外提高了产率。
在步骤ii)中,碱性条件可以借助于碱金属氢氧化物产生。另外,反应可以在室温下进行。
在步骤i)中,乙酰化可以在路易斯酸和二氯甲烷存在下借助于乙酰氯进行。在此,路易斯酸可以优选为三氯化硼,bbr3或alcl3或上述物质的混合物,非常特别优选alcl3或三氯化硼。
在步骤(i-a)中,酸性条件可以借助于无机酸产生。在此,无机酸优选为硝酸,盐酸或硫酸。
此外,所述目的通过提供可通过根据本发明的方法获得的不含莰非醇的具有式(1)的化合物来实现。在一个特别优选的实施方案中,在式(1)的化合物中r1,r2,r3,r4,r5和r6是氢,即该化合物是不含莰非醇的式(i)的桑色素。根据本发明的桑色素的特点在于非常高的纯度;纯度优选大于85%、90%或非常特别优选大于95%,在特别优选的实施方案中,实现了99%的纯度。在本发明中,纯度是指仅能以上述量检测到多酚或类黄酮。特别地,如前所述,根据本发明的桑色素不含莰非醇杂质,即不含式(ii)的莰非醇和/或其衍生物。在本发明中,表述“不含”是指在常规测量精度范围内,莰非醇或其衍生物以小于0.5%的含量存在,在特定的扩展方案中以小于0.3%的含量存在。在特别优选的实施方案中,在测量精度的范围内,不能检测到莰非醇或其衍生物。根据本发明可获得的高纯度桑色素可以例如无需进一步提纯直接用于电解沉积锡或锡/铅(例如根据ep810303a1或de19623274a1)。现已发现,sn和sn/pb沉积中的桑色素活性与迄今使用的天然产物中的桑色素含量并非线性相关,这归因于不可分离的杂质,特别是莰非醇和多酚和类黄酮。人们认为从技术上迄今不可分离的天然杂质降低了桑色素的活性。根据本发明的纯合成产物不含这些天然杂质,因此与天然产物相比显示出22.35%的活性改进。在本发明中,活性改进在此是指在电镀技术上所谓的霍尔槽(hull-zell)中用sn或sn/pb镀覆的金属板的百分比增加,如在ep810303a1中详细描述的。此外,通过根据本发明的桑色素获得的锡或锡/铅层的孔隙率(通过水分输送fsp测量,diss.h.künzel,univ.stuttgart1994)比借助于天然桑色素制备的比较例中低约35%。在此已经证实,不论本发明中所测试的天然桑色素的货源(sigma-aldrich,adooqbioscience,aurantika,fisher-scientific),性能改善总是在相同的量级内(在常规测量公差的范围内)。
下面通过实施例解释本发明,但是不应将实施例理解为限制性的。
实施例1
制备3,5-二甲氧基苯酚(4)
在氩气氛下,将间苯三酚(3)(80.0g,634mmol,1.0当量)溶解在甲醇(400ml)中。缓慢滴加硫酸(95%,46.3ml,825mmol,1.3当量),并将反应混合物于80℃在回流下搅拌26小时。随后,加入10%碳酸钾水溶液(800ml)和甲苯(300ml)。分离各相后,用甲苯(每次300ml)萃取水相两次。用2mhcl溶液将水相调节至ph<2,并用乙酸乙酯(每次300ml)萃取3次。合并的有机相用硫酸钠干燥,并在高真空下除去溶剂。通过分馏纯化后,获得作为无色油的化合物(4)(81.2g,527mmol,83%)。另外,可以获得作为无色油的副产物(5)(4.71g,28.0mmol,4.4%)。3,5-二甲氧基苯酚(4):沸点:139-141℃(2.8mbar)。dc[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]:rf=0.40。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ=6.08(t,j=2.2hz,1h,4-ch),6.03(d,j=2.2hz,2h,2-ch,6-ch),5.19(s,1h,oh),3.75(s,6h,och3)。13c-nmr(100mhz,cdcl3):δ=162.0(2c,cph-och3),157.7(cph-oh),94.6(2c,c-2,c-6),93.5(c-4),55.7(2c,och3).ir(金刚石-atr):
可以以78%的产率获得产物。这主要是由于在降低ph值后第二次萃取水相而变得可能,这导致了额外的23%的产物收率。尤其在大批次的情况下,增加反应时间是必要的;反应时间从500毫克批次的21小时增加到20克批次的30小时。产品的表征分析符合预期。
反应期间,发现并分离出两种副产物。其中之一是单甲基化的5-甲氧基苯-1,3-二醇,这可以通过1h-nmr和13c-nmr分析来确认。此处的产率为15%。另一副产物是三甲基化的3,5-三甲氧基苯,其产率为7%。1h-nmr和13c-nmr分析也能够确认该结构。副产物1,3,5-三甲氧基苯(5)[12]:产率:7%。dc[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]:rf=0.78。沸点:135-137℃(2.8毫巴)。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ=6.09(s,3h,ph-h),3.77(s,9h,och3)。13c-nmr(100mhz,cdcl3):δ=161.6(3c,cph-och3),92.9(3c,cph),55.3(3c,och3)。ir(金刚石-atr):
实施例2
制备1-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)乙-1-酮(6)
在氩气氛下,将三氯化硼(在二氯甲烷中的1m溶液,48.9ml,48.9mmol,1.0当量)溶解于二氯甲烷(50ml)中,并冷却至-10℃。滴加预先溶解在二氯甲烷(25ml)中的3,5-二甲氧基苯酚(4)(7.54g,48.9mmol,1.0当量)。使反应混合物达到室温并搅拌30分钟。随后,在15分钟内滴加预先溶解在二氯甲烷(80ml)中的乙酰氯(4.54ml,63.6mmol,1.3当量)。将反应混合物在回流下搅拌3小时。冷却后,加入1mhcl水溶液(300ml)。分离各相,用乙酸乙酯(每次200ml)萃取水相3次。合并的有机相用硫酸钠干燥,并在高真空下除去溶剂。在硅胶上进行柱色谱法纯化[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]后,得到作为无色固体的苯乙酮衍生物(6)(7.38g,37.6mmol,77%)。dc[石油醚/乙酸乙酯(2:1)]:rf=0.73。熔点:79-82℃。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ=14.03(s,1h,oh),6.06(d,j=2.4hz,1h,5-ch),5.92(d,j=2.4hz,1h,3-ch),3.85(s,3h,o-ph-och3),3.82(s,3h,p-ph-och3),2.61(s,3h,o=cch3)。13c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ=203.2(c=o),167.6(p-cph-och3),166.1(o-cph-och3),162.9(o-cph-oh),106.0(cph-c=0),93.5(c-5),90.75(c-3),55.5(2c,och3),32.9(ch3)。ir(金刚石-atr):
实施例3
制备3-(2,4-二甲氧基苯基)-1-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)丙-2-烯-1-酮(8)
在氩气氛下,将苯乙酮衍生物(6)(4.80g,24.5mmol,1.0当量)和2,4-二甲氧基苯甲醛(7)(6.01g,36.7mmol,1.5当量)溶解在乙醇(150ml)中。滴加naoh(8.80g,220mmol,9.0当量)在蒸馏水(38ml)中的溶液。在室温搅拌该反应混合物117小时。随后,加入1mhcl水溶液(350ml)并再搅拌15分钟。用乙酸乙酯(每次250ml)萃取该溶液三次。合并的有机相用硫酸钠干燥,并在高真空下除去溶剂。在硅胶上进行柱色谱法纯化[石油醚/乙酸乙酯(3:1→1:1)]后,得到作为黄色固体的查耳酮(8)(5.87g,17.0mmol,70%)。dc[石油醚/乙酸乙酯(4:1)]:rf=0.32。熔点:126-129℃。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ=14.54(s,1h,2'-oh),8.10(d,j=15.7hz,1h,β-h),7.90(d,j=15.7hz,1h,α-h),7.54(d,j=8.6hz,1h,6-h),6.53(dd,j=8.6,2.4hz,1h,5-h),6.47(d,j=2.4hz,1h,3-h),6.10(d,j=2.4hz,1h,3'-h),5.95(d,j=2.4hz,1h,5'-h),3.90(s,3h,6'-och3),3.89(s,3h,2-och3),3.85(s,3h,4-och3),3.83(s,3h,4'-och3).13c-nmr(100mhz,cdcl3):δ=193.0(c=o),168.3(c-6'),165.8(c-4'),162.8(c-4),162.4(c-2'),160.2(c-2),138.3(c-β),130.4(c-6),125.3(c-α),117.8(c-1),106.5(c-1'),105.5(c-5),98.4(c-3),93.8(c-5'),91.1(c-3'),55.7(2'-och3),55.5(2-och3),55.5(4'-och3),55.4(4-och3)。ir(金刚石-atr):
实施例4
制备2-(2,4-二甲氧基苯基)-3-羟基-5,7-二甲氧基-4h-4-色原酮(9)
在氩气氛下,将查耳酮(8)(1.00g,2.90mmol,1.0当量)溶解在乙醇(40ml)中。加入叔丁基过氧化氢(在h2o中70%,4.0ml,29.0mmol,10当量)和在蒸馏h2o(4ml)中的naoh(1.74g,43.6mmol,15当量),在室温下搅拌23小时。随后,加入hcl水溶液(1.0m,100ml),并用乙酸乙酯(每次80ml)萃取3次。合并的有机相用硫酸钠干燥,并在高真空下除去溶剂。在硅胶上柱色谱法纯化[石油醚/乙酸乙酯(1:4)]后,除橙酮(10)(44mg,0.13μmoi,4.5%)外,还获得作为黄色固体的黄酮醇(9)(395mg,1.10mmol,38%)。还获得了羟基化的橙酮衍生物(11)(118mg,329μmol,11%)。dc[石油醚/乙酸乙酯(1:4)]:rf=0.45。熔点:110-112℃。1h-nmr(600mhz,cdcl3):δ=7.50(d,j=8.4hz,1h,6'-ch),6.78(s,1h,oh),6.61(dd,j=8.4,2.4hz,1h,5'-ch),6.58(d,j=2.3hz,1h,3'-ch),6.48(d,j=2.3hz,1h,8-ch),6.34(d,j=2.3hz,1h,6-ch),3.97(s,3h,4'-och3),3.87(s,6h,2'-och3,7-och3),3.84(s,3h,5-och3)。13c-nmr(150mhz,cdcl3):δ=172.0(c-4),164.1(c-7),162.7(c-4'),160.6(c-5),159.6(8c-c-1o),158.8(c-2'),142.7(c-2),138.6(c-3),131.9(c-6'),112.4(c-1'),106.8(4c-c-5c),104.8(c-5'),99.2(c-3'),95.6(c-6),92.6(c-8),56.4(4'-och3),55.9(5-och3),55.8(2'-och3),55.5(7-och3)。ir(金刚石-atr):
副产物2-(2,4-二甲氧基苄叉基(benzyliden))-4,6-二甲氧基苯并呋喃-3(2h)-酮(10):dc[石油醚/乙酸乙酯(1:4)]:rf=0.44。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ=8.19(d,j=8.7hz,1h,6'-h),7.27(s,1h,2c=ch),6.58(dd,j=8.7,2.4hz,1h,5'-h),6.45(d,j=2.4hz,1h,3'-h),6.36(d,=1.9hz,1h,7h),6.11(d,j=1.9hz,1h,5h),3.94(s,3h,4-och3),3.90(s,3h,6-och3),3.87(s,3h,2'-och3),3.86(s,3h,4'-och3)。13c-nmr(100mhz,cdcl3):δ=180.6(c-3),168.6(7-c-c-1o),168.4(c-6),162.2(c-4'),160.1(c-2'),159.3(c-4),146.8(c-2),132.8(c-6'),114.7(c-1'),105.7(3c-c-4c),105.5(c-5'),105.3(2c=c),98.0(c-3'),93.8(c-5),89.1(c-7),56.2(4-och3),56.0(6-och3),55.6(2'-och3),55.4(4'-och3)。ir(金刚石-atr):
副产物(e)-2-((2,4-二甲氧基苯基)(羟基)亚甲基)-4,6-二甲氧基苯并呋喃-3(2h)-酮(11):dc[石油醚/乙酸乙酯(1:4)]:rf=0.63。熔点:177-180℃。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ=9.47(s,oh),7.19(d,j=7.3hz,6'-h),6.57(dd,j=7.3,2.1hz,5'-h),6.56(d,j=2.1hz,3'-h),6.53(d,j=2.3hz,7-h),6.36(d,j=2.3hz,4-h),3.99(s,3h,3-coch3),3.86(s,3h,5-coch3),3.83(s,3h,4'-coch3),3.79(s,3h,2'-coch3).13c-nmr(100mhz,cdcl3):δ=170.72(3-c),162.87(6-c),161.80(2-c),160.85(4'-c),158.67(2'-c),157.01(4-c),155.80(7-c-c-1-o),132.46(6'-c),112.98(c-oh),104.70(5'-c),100.41(1'-c),99.15(3'-c),99.09(3-c-c-4-c),95.37(5-c),94.26(7-c),56.86(4-c-ch3),55.86(6-c-ch3),55.77(2'-c-ch3),55.68(4'-c-ch3)。ir(金刚石-atr):
实施例5
制备2-(2,4-二羟基苯基)-3,5,7-三羟基-4h-4-色原酮(1,桑色素)
在氩气气氛下,将黄酮醇(9)(400mg,1.12mmol,1.0当量)溶于乙酸(99%,10ml)中,并加入hbr(在h2o中48%,50ml)。随后,在回流下加热24小时。基本上从粗产物中除去溶剂,并将其容纳在乙醇(2毫升)中。加入石油醚(100ml)后,将残留物在高真空下过滤并干燥,得到作为深红色固体的桑色素((1),220毫克,728μmol,65%)。rp-dc[水/甲醇(1:1)]:rf=0.35。熔点:>250℃。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ=12.64(s,5-c-oh,1h),10.72(s,coh,1h),9.79(s,4'-coh,1h),9.35(s,coh,1h),8.89(s,coh,1h),7.24(d,j=8.4hz,6'-ch,1h),6.41(d,j=2.1hz,3'-ch,1h),6.36(dd,j=8.5,2.3hz,5'-ch,1h),6.30(d,j=2.1hz,8-ch,1h),6.18(d,j=2.0hz,6-ch,1h)。13c-nmr(100mhz,dmso-d6):δ=176.2(c-4),163.7(c-7),160.9(c-5),160.4(c-4'),156.8(2c,c-2',c-8a),149.0(c-2),136.2(c-3),131.7(c-6'),109.3(c-1'),106.8(c-5'),103.6(c-4a),103.0(c-2'),98.0(c-6),93.4(c-8)。ir(金刚石-atr):