本发明涉及药用植物成分提取技术领域，尤其涉及一种元宝枫油提取神经酸的方法。
背景技术：
神经酸(nervoicacid)是一种长链不饱和脂肪酸，由于其主要来源于深海鲨鱼及鲨鱼油，亦称鲨鱼酸。化学名为顺15-二十四碳烯酸，分子式为c24h46o2，分子量为366.6，白色粉状固体。神经酸最早发现于哺乳动物的神经组织，在神经组织和脑组织中含量较高，亦存在于视网膜及精液之中，是生物膜的重要组成部分，通常以鞘糖脂和鞘磷脂的形成存在于大脑白脂中，是脑甙中髓质的标志物。化学合成神经酸路线、工艺复杂、得率低、无法实现工业化。从鲨鱼油及脑中提取，受到资源制约，亦无法批量生产。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种神经酸原料来源广泛、提取成本低的提取神经酸的工艺方法。为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
元宝枫油提取神经酸的方法，包括以下步骤：
(1)将元宝枫毛油过滤，除去杂质；然后将元宝枫油通过水洗；再进行脱酸处理，然后80℃水浴加热回流持续4小时，用饱和氯化钠水溶液清洗并回流2小时，直到元宝枫油澄清为止，常温静置4小时后分液保留上层清液，上层清液再次用饱和氯化钠水溶液清洗至少洗2次；
所述的脱酸处理，根据元宝枫油的酸价加入元宝枫油重量0.5～1％的氢氧化钠溶液进行脱酸处理，氢氧化钠溶液的质量浓度为4～8％，反应条件为30～50℃，搅拌速度30～60r/min，时间为30～60min，反应完成后按照10℃/h速度升温到80℃。
(2)将元宝枫油和无水乙醇混合，并加入催化剂，按照质量份数比，元宝枫油：无水乙醇：催化剂为100份：40～60份：1.0～1.5份；混合均匀后进行酯交换反应，反应的条件为75～80℃，反应时间2～3h；反应完成后水洗直到中性得到纯净元宝枫油；
(3)纯净元宝枫油用石油醚萃取；萃取两次，合并萃取得到的石油醚层，用质量浓度为l5％的hcl水溶液调ph至2～3；然后加热回流持续2小时，并保持ph值；回流后静置分液，得到的石油醚层进行水洗2次，最后蒸发除去石油醚；所述的蒸发除去石油醚，条件为40℃，真空度为0.05mpa。得到的油层水洗至中性，用无水硫酸钠干操，得混和脂肪酸；
(4)步骤(3)得到的混和脂肪酸与尿素、体积浓度95％乙醇混合，得到脲包混合液，所述的脲包混合液为尿素：混合脂肪酸：95％乙醇按照w/w/v的比例3：2：14混合，脲包混合液在20℃冷却30min，并采用300mpa压力保压20min。脲包混合液加热70℃回流至澄清，然后5℃条件冷藏8h，再将-l0℃冷冻l2h，24h后取出，抽滤至干，低温干燥包埋晶体呈无色至淡黄色，再反复结晶l次，得到神经酸粗品；
(5)在30℃下用去离子水洗抽滤神经酸粗品，洗除至无尿素残留，用石油酸-乙酸萃取，分液并旋缩，然后用300～400目硅胶柱层析分离，分离后依次用石油醚、l：l的石油醚：正乙烷、l：l的正乙烷：乙酸进行梯度洗脱；用ag-tlc薄层检验，含神经酸部分反复冷冻结晶纯化即得神经酸纯品。所述的反复冷冻结晶纯化，采用低温分步冷冻结晶方法，在不同低温梯度，不同碳链长度的不饱和脂肪酸分步析出，低温梯度依次为5℃～10℃、10℃～20℃、10℃～40℃。
进一步的，所述的元宝枫毛油，由以下方法制得：
(1)元宝枫翅果进入初清筛进行初步清理，并用去石机进行除去杂质，再经磁选器，最后送入脱荚主机脱荚，再经过复选机后获得脱荚的元宝枫籽；
元宝枫籽进行多级的筛分，并进行分级除杂，分级后的各级元宝枫籽进入脱壳工序，脱壳得到元宝枫仁，元宝枫仁经过风选机风选，再通过ccd色选机，选出残壳、未脱壳的元宝枫仁，以及霉变的料粒；
(2)对元宝枫种仁进行湿热处理，将水分含量调至8～10％，用轴冷式螺旋冷榨机压榨，压榨温度不高于65℃，饼残油不高于12％，压榨得到的毛油在不超过18℃条件下过滤、精滤。
与现有技术相比，本发明提供的元宝枫油提取神经酸的方法，采用元宝枫油作为原料，元宝枫油中神经酸含量达5.5％，提取原料来源广泛并且成本低廉，与深海鲨鱼油相比元宝枫油是可持续利用的神经酸新资源。本发明的提取方法操作简单、提取率高、适用于工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例来进一步说明本发明，可以使本领域技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
制备元宝枫毛油，由以下方法制得：
(1)元宝枫翅果进入初清筛进行初步清理，并用去石机进行除去杂质，再经磁选器，最后送入脱荚主机脱荚，再经过复选机后获得脱荚的元宝枫籽；
元宝枫籽进行多级的筛分，并进行分级除杂，分级后的各级元宝枫籽进入脱壳工序，脱壳得到元宝枫仁，元宝枫仁经过风选机风选，再通过ccd色选机，选出残壳、未脱壳的元宝枫仁，以及霉变的料粒；
(2)对元宝枫种仁进行湿热处理，将水分含量调至8～10％，用轴冷式螺旋冷榨机压榨，压榨温度不高于65℃，饼残油不高于12％，压榨得到的毛油在不超过18℃条件下过滤、精滤。
实施例2
元宝枫油提取神经酸的方法，包括以下步骤：
(1)将元宝枫毛油过滤，除去杂质；然后将元宝枫油通过水洗；再进行脱酸处理，然后80℃水浴加热回流持续4小时，用饱和氯化钠水溶液清洗并回流2小时，直到元宝枫油澄清为止，常温静置4小时后分液保留上层清液，上层清液再次用饱和氯化钠水溶液清洗至少洗2次；
所述的脱酸处理，根据元宝枫油的酸价加入元宝枫油重量0.65％的氢氧化钠溶液进行脱酸处理，氢氧化钠溶液的浓度为4％，反应条件为45℃，搅拌速度60r/min，时间为30min，反应完成后按照10℃/h速度升温到80℃。
(2)将元宝枫油和无水乙醇混合，并加入催化剂，按照质量份数比，元宝枫油：无水乙醇：催化剂为100份：55份：1.2份；混合均匀后进行酯交换反应，反应的条件为75～80℃，反应时间2h；反应完成后水洗直到中性得到纯净元宝枫油；
(3)纯净元宝枫油用石油醚萃取；萃取两次，合并萃取得到的石油醚层，用质量浓度为l5％的hcl水溶液调ph至3；然后加热回流持续2小时，并保持ph值；回流后静置分液，得到的石油醚层进行水洗2次，最后蒸发除去石油醚；所述的蒸发除去石油醚，条件为40℃，真空度为0.05mpa。得到的油层水洗至中性，用无水硫酸钠干操，得混和脂肪酸；
(4)步骤(3)得到的混和脂肪酸与尿素、体积浓度95％乙醇混合，得到脲包混合液，所述的脲包混合液为尿素：混合脂肪酸：95％乙醇按照w/w/v的比例3：2：14混合，脲包混合液在20℃冷却30min，并采用300mpa压力保压20min。脲包混合液加热70℃回流至澄清，然后5℃条件冷藏8h，再将-l0℃冷冻l2h，24h后取出，抽滤至干，低温干燥包埋晶体呈无色至淡黄色，再反复结晶l次，得到神经酸粗品；
(5)在30℃下用去离子水洗抽滤神经酸粗品，洗除至无尿素残留，用石油酸-乙酸萃取，分液并旋缩，然后用300目硅胶柱层析分离，分离后依次用石油醚、l：l的石油醚：正乙烷、l：l的正乙烷：乙酸进行梯度洗脱；用ag-tlc薄层检验，含神经酸部分反复冷冻结晶纯化即得神经酸纯品。所述的反复冷冻结晶纯化，采用低温分步冷冻结晶方法，在不同低温梯度，不同碳链长度的不饱和脂肪酸分步析出，低温梯度依次为5℃～10℃、10℃～20℃、10℃～40℃。
实施例3
元宝枫油提取神经酸的方法，包括以下步骤：
(1)将元宝枫毛油过滤，除去杂质；然后将元宝枫油通过水洗；再进行脱酸处理，然后80℃水浴加热回流持续4小时，用饱和氯化钠水溶液清洗并回流2小时，直到元宝枫油澄清为止，常温静置4小时后分液保留上层清液，上层清液再次用饱和氯化钠水溶液清洗至少洗2次；
所述的脱酸处理，根据元宝枫油的酸价加入元宝枫油重量1％的氢氧化钠溶液进行脱酸处理，氢氧化钠溶液的浓度为4％，反应条件为50℃，搅拌速度40r/min，时间为50min，反应完成后按照10℃/h速度升温到80℃。
(2)将元宝枫油和无水乙醇混合，并加入催化剂，按照质量份数比，元宝枫油：无水乙醇：催化剂为100份：40份：1.5份；混合均匀后进行酯交换反应，反应的条件为75～80℃，反应时间2h；反应完成后水洗直到中性得到纯净元宝枫油；
(3)纯净元宝枫油用石油醚萃取；萃取两次，合并萃取得到的石油醚层，用质量浓度为l5％的hcl水溶液调ph至2.5；然后加热回流持续2小时，并保持ph值；回流后静置分液，得到的石油醚层进行水洗2次，最后蒸发除去石油醚；所述的蒸发除去石油醚，条件为40℃，真空度为0.05mpa。得到的油层水洗至中性，用无水硫酸钠干操，得混和脂肪酸；
(4)步骤(3)得到的混和脂肪酸与尿素、体积浓度95％乙醇混合，得到脲包混合液，所述的脲包混合液为尿素：混合脂肪酸：95％乙醇按照w/w/v的比例3：2：14混合，脲包混合液在20℃冷却30min，并采用300mpa压力保压20min。脲包混合液加热70℃回流至澄清，然后5℃条件冷藏8h，再将-l0℃冷冻l2h，24h后取出，抽滤至干，低温干燥包埋晶体呈无色至淡黄色，再反复结晶l次，得到神经酸粗品；
(5)在30℃下用去离子水洗抽滤神经酸粗品，洗除至无尿素残留，用石油酸-乙酸萃取，分液并旋缩，然后用300～400目硅胶柱层析分离，分离后依次用石油醚、l：l的石油醚：正乙烷、l：l的正乙烷：乙酸进行梯度洗脱；用ag-tlc薄层检验，含神经酸部分反复冷冻结晶纯化即得神经酸纯品。所述的反复冷冻结晶纯化，采用低温分步冷冻结晶方法，在不同低温梯度，不同碳链长度的不饱和脂肪酸分步析出，低温梯度依次为5℃～10℃、10℃～20℃、10℃～40℃。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。