基于非免疫作用磁性材料的微生物捕获方法及分离方法和用途与流程

本发明涉及微生物领域，尤其是涉及基于非免疫作用磁性材料的微生物捕获方法及分离方法和用途

背景技术：

在微生物的检测鉴定过程中，为了去除复杂的基底物质，降低检测限，微生物的捕获是必不可少的。一般的微生物捕获材料都是建立在抗原-抗体免疫的基础上。这样就会出现许多问题，例如，需要找到相匹配的抗原抗体，但是天然存在的相匹配的抗原抗体是很少的，根本无法满足人们对不同微生物的捕获；抗原-抗体是十分昂贵的，虽然能特异性的捕获微生物，但是捕获材料的成本却大幅度提高了；一旦在磁性材料表面包裹或者连接了抗原或抗体等生物材料，就会影响到材料的储存，首先材料需要储存在2～8℃的低温环境中，还要加入防腐物质，储存的时间也会大大缩短。当材料用于微生物捕获时，还要进行一系列的纯化过程，否则将严重影响微生物的捕获效果。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种基于非免疫作用的磁珠的微生物捕获效果，而且材料的前处理简单，可室温长期存放，免去了抗原抗体，使得磁珠的成本减低，用于微生物的捕获，经济实惠。

本发明采用以下技术方案：、

一种基于非免疫作用磁性材料的微生物捕获方法，将无任何修饰的裸磁珠、经氨基修饰的磁珠和经羧基修饰的磁珠中的一种或多种直接置于微生物中，实现对微生物的捕获。

进一步，所述磁珠捕获微生物之前，先进行前处理，所述前处理为取适量磁珠溶液在外加磁场作用下去除磁珠自身所带的溶剂。

进一步，将磁珠置于含微生物的溶液中，对微生物进行捕获。

进一步，含微生物的溶液普通微生物去除培养基后，清洗并重悬在无菌水中。

进一步，将磁珠用后续实验所用的缓冲液清洗后直接加入含微生物的溶液中进行捕获。

进一步，将磁珠用含0.05％吐温20的磷酸盐缓冲液清洗三次后，直接加入含微生物的溶液中，25℃，捕获1小时。

进一步所述微生物为大肠埃希氏菌。

本发明还提供一种微生物的分离方法，将无任何修饰的裸磁珠、经氨基修饰的磁珠和经羧基修饰的磁珠中的一种或多种直接置于微生物中，实现对微生物的捕获，然后通过外加磁场分离，实现微生物的分离。

进一步，所述微生物为大肠埃希氏菌。

本发明还提供磁珠在微生物捕获中的新用途，将无任何修饰的裸磁珠、经氨基修饰的磁珠和经羧基修饰的磁珠中的一种或多种直接置于微生物中，实现对微生物的捕获。

本发明的有益效果：

本发明提供了一种基于非免疫作用磁性材料的微生物捕获方法，将普通的商品化的裸磁珠、氨基修饰的磁珠和羧基修饰的磁珠用于微生物的捕获，没有抗原-抗体的存在，极大的降低了磁性微生物捕获材料的生产成本，同时使捕获材料可以室温长期保存。虽然没有抗原-抗体的特异性识别，却可以通过静电吸附以及材料表面氨基或羧基的作用，实现微生物的捕获。

而且材料的前处理简单，磁性材料中不包含生物材料，储存方便，可长时间保存且不需要进行防腐处理。

附图说明

图1是实施例1的结果图。

图2是实施例2的结果图。

图3是实施例3的结果图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的具体实施例做详细说明。

实施例1裸磁珠对大肠埃希氏菌的捕获

具体实验步骤1.取适量的商品化裸磁珠，通过外加磁场去除自身的溶剂，然后用pbst缓冲液(含0.05％吐温20的pbs缓冲液)清洗三次；

2.为了凸显裸磁珠的捕获效果，我们用公认的没有微生物捕获能力的牛血清白蛋白(bsa)对裸磁珠进行包裹，25℃，反应一个小时，然后进行磁性分离、清洗，得到封闭好的磁珠；

3.将培养好的大肠埃希氏菌去除培养基后，清洗并重悬在无菌水中。制备梯度细菌悬浮液，其梯度为2×10³、1×10³、500、250cfu·ml^-1；

4.将清洗好的磁珠加入到细菌悬液中，在37℃下捕获一个小时期间保持磁珠处于悬浮状态；

5.分别收集上清液和磁珠涂布与胰蛋白胨大豆琼脂(tsa)培养基上计数。37℃条件下连续培养16h；

6.实验结果结果见图1，细菌富集效率采用平板计数法测定。以bsa包被的裸磁珠作为对照(第三列)，结果显示在不同的梯度下裸磁珠对大肠埃希氏菌都有明显的捕获(第一列)，可见裸磁珠对大肠埃希氏菌有明显的富集作用。

实施例2羧基修饰磁珠对大肠埃希氏菌的捕获

1.取适量的商品化羧基修饰的磁珠，通过外加磁场去除自身的溶剂，然后用pbst缓冲液(含0.05％吐温20的pbs缓冲液)清洗三次；

2.为了凸显羧基修饰磁珠的捕获效果，我们用公认的没有微生物捕获能力的bsa对裸磁珠进行包裹，25℃，反应一个小时，然后进行磁性分离、清洗，得到封闭好的磁珠；

3.将培养好的大肠埃希氏菌去除培养基后，清洗并重悬在无菌水中。制备梯度细菌悬浮液，其梯度为2×10³、1×10³、500、250cfu·ml^-1；

4.将清洗好的磁珠加入到细菌悬液中，在37℃下捕获一个小时期间保持磁珠处于悬浮状态；

5.分别收集上清液和磁珠涂布与胰蛋白胨大豆琼脂(tsa)培养基上计数。37℃条件下连续培养16h；

6.实验结果结果见图2细菌富集效率采用平板计数法测定。以bsa包被的羧基修饰的磁珠作为对照(第三列)，结果显示在不同的梯度下羧基修饰的磁珠对大肠埃希氏菌都有明显的捕获(第一列)。可见羧基修饰磁珠对大肠埃希氏菌有明显的富集作用。

实施例3氨基修饰磁珠对大肠埃希氏菌的捕获

1.取适量的商品化氨基修饰的磁珠，通过外加磁场去除自身的溶剂，然后用pbst缓冲液(含0.05％吐温20的pbs缓冲液)清洗三次；

2.为了凸显氨基修饰磁珠的捕获效果，我们用公认的没有微生物捕获能力的bsa对裸磁珠进行包裹，25℃，反应一个小时，然后进行磁性分离、清洗，得到封闭好的磁珠；

3.将培养好的大肠埃希氏菌去除培养基后，清洗并重悬在无菌水中。制备梯度细菌悬浮液，其梯度为2×10³、1×10³、500、250cfu·ml^-1；

4.将清洗好的磁珠加入到细菌悬液中，在37℃下捕获一个小时期间保持磁珠处于悬浮状态；

5.分别收集上清液和磁珠涂布与胰蛋白胨大豆琼脂(tsa)培养基上计数。37℃条件下连续培养16h；

6.实验结果结果见图3，细菌富集效率采用平板计数法测定。以bsa包被的氨基修饰的磁珠作为对照(第三列)，结果显示在不同的梯度下氨基修饰的磁珠对大肠埃希氏菌都有明显的捕获(第一列)。可见氨基修饰磁珠对大肠埃希氏菌有明显的富集作用。

以上仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。