本发明属于生物医药
技术领域：
，具体一种大麻二酚提取物及其制备方法。
背景技术：
：大麻(cannabissativa)是一种非常有前途的药用植物，其中大麻酚类化合物中药用价值最高的化合物为四氢大麻酚和大麻二酚(cbd)，研究表明大麻二酚具有重要的临床应用前景，如对于多种癌症、癫痫、阿尔兹海默病、亨廷顿症等具体一定疗效([j].黑龙江科学,2018,1:024)。球磨粉碎技术为微粉化技术重要组成之一，目前一般用于材料的亚微米级研磨、机械合金的制备，也可用于热敏感及黏性较大的药材以及生物细胞的破粹和dna、rna的提取([j].现代药物与临床,2014(2):154-157.)。当前，因为毒品的泛滥导致大麻等易制毒药材的监管变的日益严格，因此为防止大麻流入不法渠道，目前的天然药物提取工业中更加倾向于用工业大麻提取大麻二酚。工业大麻，又叫汉麻，是指四氢大麻酚含量低于0.3％的大麻，不具有毒品利用价值，同样因为四氢大麻酚和大麻二酚含量较低，富集难度大，一般天然药材提取工业一般采用较为复杂的工艺和大量溶剂萃取法的方法进行工业化提取，如cn104277917a公开了一种通过工业大麻精油的提取方法，cn106278828a公开了一种通过乙醇浸取和柱层析法制备得到大麻二酚，但仍然存在着使用大量有机溶剂导致溶剂残留和污染环境，提取工艺复杂，提取率效率低下等缺陷。综上，研究一种新型的，从工业大麻中有效提取大麻二酚、减少有机溶剂使用以及简化工艺步骤的提取方法在大麻提取工业中具有较高的商业价值。技术实现要素：基于上述原因，申请人经过多次创造性试验，本发明要解决的技术问题是提供一种新的利用球磨法制备大麻二酚的方法，该制备方法能够显著提高从工业大麻中提取大麻二酚的提取率，简化提取步骤。本发明的技术方案如下：一种大麻二酚提取物，提取物中大麻二酚的重量百分含量为大于等于95％小于100％，四氢大麻酚的重量百分含量为未检出。优选的提取物中大麻二酚的重量百分含量为大于等于97％小于100％，四氢大麻酚的重量百分含量为未检出。该大麻二酚提取物的制备方法为：(1)筛选和脱水：将晾干的工业大麻放入粉碎机中进行粉碎，再将粉碎过筛后的工业大麻进行脱水干燥，制备得到水分含量低于10％的工业大麻粗品(w/w)；(2)球磨：将步骤(1)得到的工业大麻原料放入球磨机中，通过液氮冷却，研磨0.1～5小时得到球磨后工业大麻原料；(3)浸提：向步骤(2)得到的原料加入浸提溶剂，常温下浸泡提取1～8小时，得到初提液；(4)离心：将步骤(3)得到的初提液进行离心分离，取上清液；(5)浓缩和干燥：将步骤(4)得到的上清液进行减压浓缩，烘干后得大麻二酚提取物粗品。步骤(1)中所述粉碎机的筛网为30～50目；脱水干燥的温度选自60～80℃。步骤(2)中所述的球磨机选自珠式磨机、行星式磨机、振动式磨机、偏心振动式磨机、重力依赖型球磨机、棒磨机和滚磨机；所述球磨机的研磨体直径选自2～15mm。步骤(2)中所述的原料的d90的范围选自500～2000nm；所述原料的d50的范围选自1000～2000nm。步骤(3)中所述的浸提溶剂选自c1-c4的醇类，优选甲醇、乙醇、异丙醇或其混合溶剂。步骤(3)中所述原料与浸提溶剂的质体比选自3:1～1:3，优选2:1、1:1或1:2。步骤(4)中所述离心分离的转速选自500～2000转/分钟，优选1000～1500转/分钟。大麻二酚提取物的制备方法包括：(1)将大麻二酚粗品溶于混合有机溶剂中，其中混合有机溶剂与大麻二酚粗品体积与重量比为15-25:1(ml/g)，制备得到大麻二酚粗品溶液；；(2)在5-10℃条件下，向步骤(1)中得到的大麻二酚粗品溶液加入大麻二酚的反溶剂，，过滤，干燥，得到大麻二酚提取物。所述混合溶剂为c5～c10的饱和烷烃类和c1～c3的醇类的混合溶剂；所述c5～c10的饱和烷烃类和c1～c3的醇类的体积比选自1:1～1:3；所述反溶剂为水，所述水和大麻二酚粗品溶液的体积比选自1:1～1:5。本发明所述的大麻二酚提取物的制备方法还包括：柱层析方法以及徐凝沉淀方法等本发明进一步提供一种通过上述方法从工业大麻中提取得到的大麻二酚精制品在制备治疗神经精神疾病的药物组合物中的用途，所述神经精神疾病选自精神分裂症、抑郁症、麻醉和躁狂症。具体实施方式以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。本说明书实施例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本发明所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下优点：本发明提供的通过球磨法从工业大麻中提取大麻二酚的方法与现有技术中的提取方法相比，工艺简单，不需要使用大量有机溶剂反复提取；此外，能够大大的缩短提取时间和提高提取率，具有较好的制药工业应用价值。实施例1、大麻二酚粗品提取(1)将10kg工业大麻清洗、晾干，采用xl-60c型中药粉碎机(购买自南京威利朗食品机械有限公司)，然后过50目筛，粉碎过筛后的工业大麻花叶在放置于烘箱中，于75℃脱水干燥，得到工业大麻粗品；(2)将工业大麻粗品放置于带有液氮冷却循环系统的立式球磨机(购买自莱州市龙骏化工机械有限公司)，采用直径为10mm和8mm的球形钢珠(约30～50个)进行研磨，研磨时间为1小时，温度设置为-10℃，制备得到的的工业大麻原料的粒径经测定(winner2308智能型干湿一体激光粒度仪)，d90约为1500～1800nm，d50约为1000～1200nm；(3)向球磨后得到的工业大麻原料加入无水乙醇，无水乙醇与工业大麻原料的质体积比为1:1，常温下浸泡3小时；(4)离心步骤(3)所得初提液，转速1000转/分钟，离心15分钟，取上清液；(5)将步骤(4)所得上清液进行减压浓缩，于90℃下烘干，制备得到大麻二酚粗品20.1g。实施例2、大麻二酚粗品的精制-1(1)将实施例1所得大麻二酚粗品10g溶于20ml乙醇和正己烷混合溶剂中(乙醇与正己烷混合溶剂的体积比为1:1)，制备得到大麻二酚粗品溶液；(2)将步骤(1)所得大麻二酚粗品溶液温度降低至5℃，向溶液中加入纯水(水与大麻二酚粗品溶液的体积比为1:2)，5～10℃静置过夜，，过滤，干燥，得到大麻二酚提取物8.16g(大麻二酚含量99.6％，未检出四氢大麻酚)。实施例3、大麻二酚粗品的精制-2(1)将实施例1所得大麻二酚粗品5g溶于10ml乙醇和正庚烷混合溶剂中(乙醇与正庚烷混合溶剂的体积比为4:1)，制备得到大麻二酚粗品溶液；(2)将步骤(1)所得大麻二酚粗品溶液温度降低至8℃，向溶液中加入纯水(水与大麻二酚粗品溶液的体积比为1:4)，5～10℃静置过夜，过滤，干燥，得到大麻二酚提取物4.1g(大麻二酚含量99.5％，未检出四氢大麻酚)。测试对比例4、实验材料对照品1：参照专利cn106278828a实施例1所述方法提取；实验例样品1：参照实施例1所述方法制备；实验例样品2：参照实施例3所述方法制备；检测分析方法：实验仪器：日本日立公司hitachil-2300高效液相色谱仪；日本日立公司hitachil-2400紫外检测器；日本日立公司d-2000elite色谱工作站；sartorius公司bp210s电子天平；试剂：乙醇、四氢呋喃为色谱纯，购自山东禹王实业有限公司；醋酸为色谱纯；购自广州市自力色谱科仪有限公司；供试品：大麻二酚粗产品，通过实施例1所述方法制备；供试品溶液配制：取供试品溶液1mg，以乙醇定容配制成100μg/ml的供试品溶液。对照品：大麻二酚和四氢大麻酚购自中国药品生物制品检定所色谱柱：色谱柱为agilentzorbaxsb-c18液相色谱柱880975-902流动相配制：有机相为乙醇与四氢呋喃混合溶剂(v/v＝15:1)；水相为0.8％的醋酸钠水溶液(w/v)流动相：a：0.8％的醋酸钠水溶液(用醋酸调ph至2.5)-乙醇四氢呋喃(90:10)b：0.8％的醋酸钠水溶液(用醋酸调ph至2.5)-乙醇四氢呋喃(60:40)检测条件：流速为1.0ml/min；检测波长为220nm；柱温为35℃；进样量为20μl表1梯度条件(体积比)时间(min)a(％)b(％)0802057525155545204555252080302080对照品溶液制备及线性回归方程的确定:取大麻二酚对照品(1mg/ml)溶液，以乙醇定容制备成200μg/ml大麻二酚的对照品母液，再配制成浓度梯度为0.05μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的大麻二酚对照品溶液；按照大麻二酚相同的方法，取四氢大麻酚对照品(1mg/ml)溶液，以乙醇定容制备成成200μg/ml大麻二酚的对照品母液，再配制成浓度梯度为0.02μg/ml、0.2μg/ml、0.8μg/ml、4μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μ/ml的四氢大麻酚对照品溶液。根据其相应的峰面积得如下线性回归方程:大麻二酚:y＝75621x+39051，n＝8(r2＝0.9995)四氢大麻酚:y＝73973x+36298，n＝8(r2＝0.9994)上述对照品及及实验例样品的cbd含量的检测结果参见表2。表2各样品cbd含量的结果名称cbd含量四氢大麻酚含量标准品100％未检出对照品93.7％3.1％实验例样品190.9％4.5％实验例样品299.5％未检出通过上述检测结果可知，本发明所提供的制备方法与cn106278828a所提供的方法相比，工艺简单，不需要反复提取以及通过柱层析的方法，提取率高达90％以上；此外，精制过后的大麻二酚提取物，纯度达到99％以上，未检出四氢大麻酚，符合药用标准，因此本发明所提供制备和精制方法适用于制药工业化生产，降低生产成本的同时减少环境的污染。当前第1页12