本发明涉及甲状旁腺癌诊断领域，具体是一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法。
背景技术：
甲状旁腺癌是一种预后较差的恶性内分泌肿瘤，其主要临床特点是大量分泌甲状旁腺激素，导致患者出现难以控制的高钙血症，最后导致患者出现心肺功能衰竭而致死。甲状旁腺癌最佳的治疗手段是在第一次手术时，采取根治性手术，完整切除甲状旁腺病变、周围的甲状腺及其他软组织，避免肿瘤破裂残留或播散。但目前在临床上缺乏有效的术前诊断方法，主要依靠术前患者的临床表现，根据手术中的肿瘤表现进行推测。如患者在术前的临床症状重，并且血清pth及血钙明显增高，则怀疑甲状旁腺癌。而手术中探查发现肿瘤与周围组织粘连严重，也是甲状旁腺癌的表现。但这些表现并不具有特异性，一些良性甲状旁腺腺瘤，特别是肿瘤体积较大或病程较长的病例，均可能出现上述表现。术中快速冰冻病理检查对于大部分肿瘤具有很好的鉴别诊断作用，但是对于甲状旁腺癌的诊断缺乏客观指标，准确性差，可重复性差，往往出现漏诊或误诊。即使是术后病理诊断，由于在组织结构上缺乏客观的特征，大部分患者仍会出现漏诊。对于漏诊的甲状旁腺癌患者，在肿瘤复发之后再行二次手术，一方面显著增加肿瘤转移复发的风险，另外一方面明显增加手术难度，带来喉返神经损伤等手术相关并发症。如将甲状旁腺良性肿瘤误诊为甲状旁腺癌，则导致手术切除范围过大，存在过度治疗的问题，给患者带来甲状腺功能低减等风险，同时给患者带来巨大的精神负担。
如果能在手术前获得诊断，及时采取根治性的肿瘤手术，则可能提高患者的长期生存时间，避免不必要的手术并发症，同时节省医疗资源。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法，具体步骤如下：
步骤一，抽取确定为原发甲状旁腺功能亢进症患者的血液并且将该血液置于含有edta溶液的抗凝管中，再向抗凝管中加入标准外参，然后在离心机中离心，获得血浆；
步骤二，采用mirna提取试剂盒提取血浆中游离的mirna，mirna指的是小rna；
步骤三，测定血浆中游离的mirna的含量，利用外参数据和内参数据对血浆结果进行标准化，得到检测结果；
步骤四，建立甲状旁腺癌预测公式，可用logistic回归和神经元算法等方法建立公式。
步骤五，将检测结果代入公式，即可评估该患者患甲状旁腺癌的概率、术后复发转移的风险以及辅助手术方式的选择。
步骤六，在使用过程中逐步积累数据，不断用病理诊断结果和随访资料作对预测公式进行修正。
作为本发明进一步的方案：步骤三中采用pcr技术测定血浆中游离的mirna的含量。
作为本发明进一步的方案：血浆中游离的mirna包括hsa-mir-6870-3p、hsa-mir-762、hsa-mir-4516、hsa-mir-3960、hsa-mir-6090、hsa-mir-6869-5p、hsa-mir-6088、hsa-mir-638、hsa-mir-8069、hsa-mir-5703、hsa-mir-6089、hsa-mir-4281、hsa-mir-1225-5p、hsa-mir-7107-5p、hsa-mir-7847-3p、hsa-mir-6510-5p、hsa-mir-7110-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-1304-3p、hsa-mir-6889-3p、hsa-mir-6795-3p和hsa-mir-3162-3p。
作为本发明进一步的方案：pcr技术包括qpcr技术和dpcr技术中的任意一种，qpcr技术为实时反转录pcr技术，dpcr技术为数字pcr技术。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明通过检测血浆中一组mirna的水平，建立甲状旁腺癌预测公式，利用公式计算患者患恶性肿瘤的可能性，从而采取相应的治疗措施；
本发明可以显著提高甲状旁腺癌术前诊断水平，为合理选择手术方式提供客观依据；
本发明还可以结合分子条码技术制成试剂盒，开发出产品，造福广大患者，具有积极的社会效益。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法，具体步骤如下：
步骤一，抽取确定为原发甲状旁腺功能亢进症患者的血液6ml并且将该血液置于含有edta溶液的抗凝管中，再向抗凝管中加入标准外参，然后在离心机中离心，获得血浆3ml；
步骤二，采用mirna提取试剂盒提取血浆中游离的mirna，血浆中游离的mirna包括hsa-mir-6870-3p、hsa-mir-762、hsa-mir-4516、hsa-mir-3960、hsa-mir-6090、hsa-mir-6869-5p、hsa-mir-6088、hsa-mir-638、hsa-mir-8069、hsa-mir-5703、hsa-mir-6089、hsa-mir-4281、hsa-mir-1225-5p、hsa-mir-7107-5p、hsa-mir-7847-3p、hsa-mir-6510-5p、hsa-mir-7110-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-1304-3p、hsa-mir-6889-3p、hsa-mir-6795-3p和hsa-mir-3162-3p；
步骤三，采用pcr技术测定血浆中游离的mirna的含量，利用外参数据和内参数据对血浆结果进行标准化，得到检测结果；
步骤四，建立甲状旁腺癌预测公式，可用logistic回归和神经元算法等方法建立公式。
步骤五，将检测结果代入公式，即可评估该患者患甲状旁腺癌的概率、术后复发转移的风险以及辅助手术方式的选择。
步骤六，在使用过程中逐步积累数据，不断用病理诊断结果和随访资料作对预测公式进行修正。
实施例2
一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法，具体步骤如下：
步骤一，抽取确定为原发甲状旁腺功能亢进症患者的血液4ml并且将该血液置于含有edta溶液的抗凝管中，再向抗凝管中加入标准外参，30分钟内在离心机中离心，获得血浆2ml；
步骤二，采用mirna提取试剂盒提取血浆中游离的mirna；
步骤三，采用qpcr技术测定血浆中游离的mirna的含量，利用外参数据和内参数据对血浆结果进行标准化，得到检测结果；
步骤四，建立甲状旁腺癌预测公式，可用logistic回归和神经元算法等方法建立公式。
步骤五，将检测结果代入公式，即可评估该患者患甲状旁腺癌的概率、术后复发转移的风险以及辅助手术方式的选择。
步骤六，在使用过程中逐步积累数据，不断用病理诊断结果和随访资料作对预测公式进行修正。
实施例3
一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法，具体步骤如下：
步骤一，抽取确定为原发甲状旁腺功能亢进症患者的血液5ml并且将该血液置于含有edta溶液的抗凝管中，再向抗凝管中加入标准外参，2小时内在转速为2250rpm的离心机中离心，获得血浆2.5ml；
步骤二，采用mirna提取试剂盒提取血浆中游离的mirna，血浆中游离的mirna包括hsa-mir-6870-3p、hsa-mir-762、hsa-mir-4516、hsa-mir-3960、hsa-mir-6090、hsa-mir-6869-5p、hsa-mir-6088、hsa-mir-638、hsa-mir-8069、hsa-mir-5703、hsa-mir-6089、hsa-mir-4281、hsa-mir-1225-5p、hsa-mir-7107-5p、hsa-mir-7847-3p、hsa-mir-6510-5p、hsa-mir-7110-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-1304-3p、hsa-mir-6889-3p、hsa-mir-6795-3p和hsa-mir-3162-3p；
步骤三，采用dpcr技术测定血浆中游离的mirna的含量，利用外参数据和内参数据对血浆结果进行标准化，得到检测结果；
步骤四，建立甲状旁腺癌预测公式，可用logistic回归和神经元算法等方法建立公式。
步骤五，将检测结果代入公式，即可评估该患者患甲状旁腺癌的概率、术后复发转移的风险以及辅助手术方式的选择。
步骤六，在使用过程中逐步积累数据，不断用病理诊断结果和随访资料作对预测公式进行修正。
实施例4
一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法，具体步骤如下：
步骤一，抽取确定为原发甲状旁腺功能亢进症患者的血液并且将该血液置于含有edta溶液的抗凝管中，再向抗凝管中加入标准外参，然后在离心机中离心，获得血浆，-80℃低温保存7天；
步骤二，采用mirna提取试剂盒提取血浆中游离的mirna，血浆中游离的mirna包括hsa-mir-6870-3p、hsa-mir-762、hsa-mir-4516、hsa-mir-3960、hsa-mir-6090、hsa-mir-6869-5p、hsa-mir-6088、hsa-mir-638、hsa-mir-8069、hsa-mir-5703、hsa-mir-6089、hsa-mir-4281、hsa-mir-1225-5p、hsa-mir-7107-5p、hsa-mir-7847-3p、hsa-mir-6510-5p、hsa-mir-7110-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-1304-3p、hsa-mir-6889-3p、hsa-mir-6795-3p和hsa-mir-3162-3p；
步骤三，采用pcr技术测定血浆中游离的mirna的含量，利用外参数据和内参数据对血浆结果进行标准化，得到检测结果；
步骤四，建立甲状旁腺癌预测公式，可用logistic回归和神经元算法等方法建立公式。
步骤五，将检测结果代入公式，即可评估该患者患甲状旁腺癌的概率、术后复发转移的风险以及辅助手术方式的选择。
步骤六，在使用过程中逐步积累数据，不断用病理诊断结果和随访资料作对预测公式进行修正。
实施例5
一种利用血浆mirna标记物诊断甲状旁腺癌的方法，具体步骤如下：
步骤一，抽取确定为原发甲状旁腺功能亢进症患者的血液5ml并且将该血液置于含有edta溶液的抗凝管中，再向抗凝管中加入标准外参，然后在离心机中离心，获得血浆2.5ml；
步骤二，采用mirna提取试剂盒提取血浆中游离的mirna，血浆中游离的mirna包括hsa-mir-6870-3p、hsa-mir-762、hsa-mir-4516、hsa-mir-3960、hsa-mir-6090、hsa-mir-6869-5p、hsa-mir-6088、hsa-mir-638、hsa-mir-8069、hsa-mir-5703、hsa-mir-6089、hsa-mir-4281、hsa-mir-1225-5p、hsa-mir-7107-5p、hsa-mir-7847-3p、hsa-mir-6510-5p、hsa-mir-7110-5p、hsa-mir-21-5p、hsa-mir-1304-3p、hsa-mir-6889-3p、hsa-mir-6795-3p和hsa-mir-3162-3p；
步骤三，测定血浆中游离的mirna的含量，利用外参数据和内参数据对血浆结果进行标准化，得到检测结果；
步骤四，建立甲状旁腺癌预测公式，可用logistic回归和神经元算法等方法建立公式。
步骤五，将检测结果代入公式，即可评估该患者患甲状旁腺癌的概率、术后复发转移的风险以及辅助手术方式的选择。
步骤六，在使用过程中逐步积累数据，不断用病理诊断结果和随访资料作对预测公式进行修正。
本发明的工作原理是：本发明在术前收集患者的血浆标本，通过检测血浆中一组mirna的水平，建立甲状旁腺癌预测公式，利用公式计算患者患恶性肿瘤的可能性，从而采取相应的治疗措施，本发明建立客观的可重复的分子诊断方法，提供一种术前诊断甲状旁腺癌的诊断策略，以便显著提高术前甲状旁腺癌的诊断准确性，从而为患者选择最佳的手术方式，提高患者的生活质量和生存时间。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。