本发明属于药物化学领域，具体涉及到权利要求书中所述的一种取代的2-酰胺基-1,10-菲罗啉的抗菌化合物及其生理上可接受的盐。它们的制备及它们在抗菌方面的活性及在相关疾病中的用途。
背景技术：
：感染性疾病是临床上一类常见多发病，据世界卫生组织（who）的报告，患感染性疾病死亡人数高达各类原因死亡人数总和的33%。自1940年青霉素的使用开始，抗菌药物就对感染性疾病就有极大的贡献。但由于频繁使用抗生素，临床上已经发现了多种耐药菌，包括耐青霉素肺炎链球菌、超广谱β-内酰胺酶产生菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及多种耐药性结合杆菌等。特别是2010年超级细菌ndm-1的发现和2011年的“毒黄瓜”事件，让耐药细菌再次引起了全球范围的震惊和恐慌。因此，细菌耐药性和耐药菌感染已经成为公众健康最大威胁之一，是21世纪抗感染领域面临的最大挑战。万古霉素为临床上治疗耐药性革兰氏阳性病原体的主要有效抗生素。万古霉素为糖肽，它伴有肾毒性和耳毒性。此外更重要的是，对万古霉素和其它糖肽的抗菌耐药性也开始出现。这种耐药性正以稳定的速率增加，这导致所述药物在治疗革兰氏阳性病原体时效果越来越差。用于治疗某些上呼吸道感染的革兰氏阴性菌的β-内酰胺类、喹诺酮类以及大环内酯类等药物也面临耐药性增加的问题。近年来，一些新型抗生素，如噁唑烷酮类（chung-hopark.et.al,journalofmedicinalchemistry,1992,35,1156）、达托霉素（lajevitt.et.al.microbialdrugresistance,2003,9,389）、链阳性菌素（jcbarriere.journalofantimicrobialchemotherapy,1992,30,1）、lefamulin（hssoder.et.al,journalofantimicrobialchemotherapy,2012,67,1170）等药物取得一些进展，但是仍然不能满足临床的需求，因此研发新型抗耐药菌药物是迫切需要的。本发明的化合物为含有2-酰胺基-1,10-菲罗啉的新型结构抗生素，对一些革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌都具有活性。技术实现要素：本发明描述了式i化合物，和/或它们的可药用盐其中，r1选自h、羟基、氨基、二甲基氨基、巯基，r2和r7选自h、卤原子、甲基、乙基，r3、r6选自h、卤原子、甲基、乙基，苯基，取代的苯基，r4、r5选自h、甲基、苯基、取代的苯基、杂环芳基，r8选自甲基、三氟甲基、苯基、取代的苯基。优选的，r1选自h、羟基、氨基、二甲基氨基、巯基，r2和r7选自h、氟、甲基、乙基，r3、r6选自h、甲基、苯基，r4、r5选自苯基、3-甲基苯基、3-异丙基苯基、3-三氟甲基苯基、4-甲基苯基、4-异丙基苯基、4-三氟甲基苯基、2-吡啶基；r8选自甲基、三氟甲基、4-甲基苯基。进一步优选的，r1选自h、氨基、二甲基氨基，r2和r7选自h、氟、甲基，r3、r6选自h、苯基，r4、r5选自苯基、3-甲基苯基、4-异丙基苯基、4-三氟甲基苯基、2-吡啶基；r8选自三氟甲基。本发明还涉及一种产生抗菌作用的方法，该方法包括给予所述动物或植物有效量的权利要求1和2中任意一项所述的至少一种式i化合物和/或其盐。本发明还涉及用作药物（或药剂）的式i化合物和/或其可用盐用于一种在哺乳动物体内产生抗菌作用的方法。本发明还涉及药物制剂(或药物组合物)，其含有有效量的至少一种式i化合物和/或其可药用盐、生理学耐受的赋形剂和载体，以及在适当时还有其他添加剂和/或其他活性成分。药物可以口服施用，例如以丸剂、片剂、喷涂片、包衣片、颗粒剂、硬和软明胶胶囊、溶液、糖浆、乳剂、混悬剂或气雾混合物形式。但是，施用也可以如下进行：经直肠给药，例如以栓剂形式；或胃肠外给药，例如经静脉内、肌内或皮下以注射溶液或输注溶液、微囊、植入剂或植入棒的形式；或经皮或局部给药，例如以软膏剂、溶液或酊剂形式；或以其他途径给药、例如以气雾剂或鼻喷雾剂形式。本发明的药物制剂以本身已知并且为本领域技术人员所熟悉的方式制备，除了式i化合物和/或它们的可药用盐和/或它们的前药外，使用可药用的惰性无机和/或有机载体物质和/或添加剂。对于丸剂、片剂、包衣片和硬明胶胶囊的制备而言，可能使用例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等。软明胶胶囊和栓剂的载体物质有例如脂肪、蜡、半固体和液体多元醇、天然或硬化油等。适合于制备溶液、例如注射溶液或乳剂或糖浆剂的载体物质有例如水、盐水、醇、甘油、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖、植物油等。适合用于微囊、植入剂或植入棒的载体物质，例如羟乙酸和乳酸的共聚物。药物制剂通常含有约0.5至约90％重量的式i化合物和/或它们的可药用盐和/或它们的前药。药物制剂中的活性成分式i化合物和/或它们的可药用盐和/或它们的前药的量通常约0.5至约1000mg、优选约1至约500mg。除了式i的活性成分和/或它们的可药用盐以及载体物质外，药物制剂可含有一种或多种添加剂，如填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、润湿剂、稳定剂、乳化剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、芳香剂、增稠剂、稀释剂、缓冲物质、溶剂、增溶剂、获得储库效果的试剂、改变渗透压的盐、包衣剂或抗氧化剂。它们也可以含有两种或多种式i化合物和/或它们的可药用盐。在药物组合物含有两种或更多种式i化合物时，对个别化合物的选择可依据药物制剂的特定总体药理学性质。例如，作用持续时间较短的高度强效化合物可以与功效较低的长效化合物组合。就式i化合物中取代基选择而言所允许的灵活性使得能够对化合物的生物学和物理化学性质进行众多控制，由此能够选择这类所需化合物。此外，除了至少一种式i化合物和/或其可药用盐外，药物制剂还可含有一种或多种其他治疗性或预防性的活性成分。当使用式i化合物时，剂量可在宽限度内并且按照常规的和医生已知的而变化，剂量应适合于每种个例的个体情况。其取决于例如所应用的具体化合物、所治疗疾病的性质和严重程度、施用方式和方案或所治疗的是急性还是慢性病症或是否进行预防。适合的剂量可利用医学领域已知的临床方法建立。一般而言，在重约75kg的成人中获得所需结果的日剂量是约0.01至约100mg/kg、优选约0.1至约50mg/kg、特别约0.1至约10mg/kg(在每种情况下以mg/kg体重计)。特别在施用相对大量的情况下，日剂量可以分为若干部分，例如2、3或4部分施用。通常，根据个体行为，可能有必要向上或向下偏离所述的日剂量。此外，式i化合物可用作制备其他化合物、特别是其他药物活性成分的合成中间体，其可由式i化合物例如通过引入取代基或修饰官能团获得。在大多数情况下，对含有式i的最终化合物或中间体的反应混合物进行后处理，如果有必要，将产物通过本领域技术人员已知的常规方法纯化。例如，所合成的化合物可利用熟知的方法如结晶、色谱或反相高效液相色谱法(rp-hplc)或基于例如化合物大小、电荷或疏水性的其他分离方法进行纯化。类似地，熟知的方法如nmr、质谱法(ms)可以用于表征本发明化合物。因此，以下实施例是本发明的一部分，用于阐明而非限制本发明。应当指明的是，未实质性影响本发明各种实施方案活性的修饰包括在本文所公开的本发明范围内。实施例1：2-（三氟甲磺酰胺）-1,10-菲罗啉的合成第一步：1,10-菲罗啉-n-氧化物将1,10-菲罗啉一水合物（4.95g，25mmol），30%h2o2（3.5ml）加于30ml醋酸中，在70℃下搅拌3h，然后向反应液中再加30%h2o2（3.5ml），继续搅拌3h，将反应液降至室温，再向其中加入30%h2o2（2ml）并搅拌10h，浓缩反应液至10ml左右，用naoh溶液（2mol/l）调节浓缩液至中性，氯仿萃取，浓缩有机相得到1,10-菲罗啉-n-氧化物3.56g（18.1mmol，72.6%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ9.30(1h,m),8.72(1h,dd,m),8.24(1h,m),7.82(1h,d,j=8.8hz),7.72(1h,d,j=8.0hz),7.70(1h,d,j=8.0hz),7.64(1h,m),7.42(1h,m);lc/ms(m+1)+=197.1。第二步：2-氯-1,10-菲罗啉将1,10-菲罗啉-n-氧化物（1.96g,10mmol），nacl（11.7g，0.2mol）加入dmf（40ml）中，向溶液中缓慢滴加pocl3（30mmol），反应液在100℃加热6h，降至室温，向反应液中加入氨水（50ml），用氯仿萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2-氯-1,10-菲罗啉1.03g（4.8mmol,48.0%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ9.25(1h,m),8.24(1h,m),8.16(1h,d,j=8.8hz),7.82(1h,d,j=8.8hz),7.70(1h,d,j=8.8hz),7.64(1h,m),7.59(1h,d,j=8.8hz);lc/ms(m+1)+=214.1。第三步：2-氨基-1,10-菲罗啉将2-氯-1,10-菲罗啉（859mg，4mmol），乙酰胺（4.73g，80mmol），碳酸钾（3.87g，28mmol）混合，并加热到200℃，搅拌1小时，降至室温，向反应中加水（30ml），用二氯甲烷萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2-氨基-1,10-菲罗啉409mg（2.1mmol,52.5%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ9.05(1h,m),8.14(1h,m),8.00(1h,d,j=8.4hz),7.62(1h,d,j=8.4hz),7.51(1h,m),7.50(1h,d,j=8.4hz),6.88(1h,d,j=8.4hz),5.23(2h,br);lc/ms(m+1)+=196.1。第四步：2-（三氟甲磺酰胺）-1,10-菲罗啉将2-氨基-1,10-菲罗啉（400mg，2mmol），三乙胺（0.4ml，3mmol）加入二氯甲烷（20ml）中，搅拌降温至-30℃，向此溶液中缓慢滴加三氟甲磺酸酐（0.34ml，2mmol）。将反应液升至室温搅拌8h，水洗有机相，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2-(三氟甲磺酰胺）-1,10-菲罗啉536mg（1.6mmol,82%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ9.05(1h,m),8.19(1h,m),8.00(1h,d,j=8.4hz),7.62(1h,d,j=8.4hz),7.51(1h,m),7.50(1h,d,j=8.4hz),6.72(1h,d,j=8.4hz),6.42(1h,br);lc/ms(m+1)+=328.0。实施例2：2-（三氟甲磺酰胺）-9-氨基-1,10-菲罗啉的合成第一步：9-氯-1-甲基-1,10-菲罗啉硫酸氢盐将2-氯-1,10-菲罗啉（5.4g，25mmol）加入硫酸二甲酯（22.1g，175mmol）中，升温至120℃，搅拌1小时，冷却至室温，向反应液中加入乙醚，有淡棕色固体析出，过滤，乙醚/乙醇（1/2）洗涤，干燥得9-氯-1-甲基-1,10-菲罗啉硫酸氢盐6.0g（18mmol，72%）。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.60(1h,d,j=7.2hz),9.42(1h,d,j=8.8hz),8.88(1h,d,j=8.8hz),8.46(3h,m),8.16(1h,d,j=8.4hz),5.12(3h,s).第二步：9-氯-1-甲基-1,10-菲罗啉-2（1h）-酮将9-氯-1-甲基-1,10-菲罗啉硫酸氢盐（6.0g，18mmol）、铁氰化钾（23.0g，680mmol）、naoh（16g，400mmol）加入到400ml冰水中，搅拌1h，然后恢复至室温搅拌4h，过滤，干燥得9-氯-1-甲基-1,10-菲罗啉-2（1h）-酮3.2g（13.1mmol，73%）。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.54(1h,d,j=9hz),8.09(1h,d,j=9hz),7.89(1h,d,j=8.4hz),7.83(1h,d,j=8.4hz),7.76(1h,d,j=8.4hz),6.87(1h,d,j=9hz),4.35(3h,s);lc/ms(m)+=244.0。第三步：2,9-二氯-1,10-菲罗啉0℃，氮气保护下，将9-氯-1-甲基-1,10-菲罗啉-2（1h）-酮（3.1g，13mmol）、五氯化磷（3.4g，16.3mmol）加入到三氯氧磷（40ml）中，加热回流7h，减压浓缩除去三氯氧磷，向剩余物中加入冰水和氨水溶液调至碱性，过滤，用水洗涤固体，得到2,9-二氯-1,10-菲罗啉2.91g（11.7mmol，90%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ8.20(2h,d,j=8.4hz),7.81(2h,s),7.63(2h,d,j=8.4hz);lc/ms(m)+=248.0。第四步：2,9-二氨基-1,10-菲罗啉将2,9-二氯-1,10-菲罗啉（747mg，3mmol），乙酰胺（4.73g，80mmol），碳酸钾（3.87g，28mmol）混合，并加热到200℃，搅拌1小时，降至室温，向反应中加水（30ml），用二氯甲烷萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2,9-二氨基-1,10-菲罗啉306mg（1.46mmol,48.6%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ8.10(2h,d,j=8.4hz),7.62(2h,s),7.41(2h,d,j=8.4hz),5.25(4h,br);lc/ms(m+1)+=211.1。第五步：2-（三氟甲磺酰胺）-9-氨基-1,10-菲罗啉将2,9-氨基-1,10-菲罗啉（300mg，1.45mmol），三乙胺（0.4ml，2.9mmol）加入二氯甲烷（20ml）中，搅拌降温至-30℃，向此溶液中缓慢滴加三氟甲磺酸酐（0.26ml，1.5mmol）。将反应液升至室温搅拌8h，水洗有机相，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2-(三氟甲磺酰胺）-9-氨基-1,10-菲罗啉410mg（1.2mmol,80%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ8.08(1h,m),7.94(1h,d,j=8.4hz),7.42(1h,d,j=8.4hz),7.41(1h,m),7.45(1h,d,j=8.4hz),6.62(1h,d,j=8.4hz),6.41(1h,br);5.27(2h,br);lc/ms(m+1)+=343.0。实施例3：2-（三氟甲磺酰胺）-5,6-二甲基-9-氨基-1,10-菲罗啉的合成2-（三氟甲磺酰胺）-5,6-二甲基-9-氨基-1,10-菲罗啉将2,9-氨基-5,6-二甲基-1,10-菲罗啉（476mg，2mmol），三乙胺（0.55ml，4.0mmol）加入二氯甲烷（20ml）中，搅拌降温至-30℃，向此溶液中缓慢滴加三氟甲磺酸酐（0.37ml，1.5mmol）。将反应液升至室温搅拌8h，水洗有机相，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2-（三氟甲磺酰胺）-5,6-二甲基-9-氨基-1,10-菲罗啉659mg（1.78mmol,89%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ8.01(1h,m),7.32(1h,m),7.37(1h,d,j=8.4hz),6.49(1h,d,j=8.4hz),6.39(1h,br),5.21(2h,br),2.38(3h,s),2.35(3h,s);lc/ms(m+1)+=371.1。实施例4：2-（三氟甲磺酰胺）-5-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉和2-（三氟甲磺酰胺）-6-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉的合成第一步：5-苯基-1,10-菲罗啉将5-溴-1,10-菲罗啉（5.18g，20mmol），苯基硼酸（2.56g，21mmol），双三苯基膦二氯化钯（140mg，0.2mmol），碳酸钾（8.28g，60mmol）加入四氢呋喃30ml中，升温至60℃反应8h，50℃减压蒸馏除去四氢呋喃，剩余物用硅胶柱层析得到5-苯基-1,10-菲罗啉4.53g（17.7mmol,88.3%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ9.01(1h,m),8.20(1h,dd,m),8.16(1h,d,j=8.0hz),7.82(1h,d,j=8.0hz),7.64-7.58(3h,m),7.47-7.39(5h,m);lc/ms(m)+=256.1。第二步：5-苯基-1,10-菲罗啉-n-氧化物将5-苯基-1,10-菲罗啉（3.84g，15mmol），30%h2o2（3.0ml）加于30ml醋酸中，在70℃下搅拌3h，然后向反应液中再加30%h2o2（3.0ml），继续搅拌3h，将反应液降至室温，再向其中加入30%h2o2（2ml）并搅拌10h，浓缩反应液至10ml左右，用naoh溶液（2mol/l）调节浓缩液至中性，氯仿萃取，浓缩有机相得到5-苯基-1,10-菲罗啉-n-氧化物3.3g（12.1mmol，80.1%）。lc/ms(m)+=272.1。第三步：2-氯-5苯基-1,10-菲罗啉将5-苯基-1,10-菲罗啉-n-氧化物（2.72g,10mmol），nacl（11.7g，0.2mol）加入dmf（40ml）中，向溶液中缓慢滴加pocl3（30mmol），反应液在100℃加热6h，降至室温，向反应液中加入氨水（50ml），用氯仿萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2-氯-5-苯基-1,10-菲罗啉1.34g（4.62mmol,46.2%）。1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ8.95(1h,m),8.12(1h,dd,m),7.88(1h,d,j=8.0hz),7.81(1h,d,j=8.0hz),7.64-7.58(2h,m),7.47-7.39(5h,m);lc/ms(m)+=290.1。第四步：2-氯-5-苯基-10-甲基-1,10-菲罗啉硫酸氢盐将2-氯-5-苯基-1,10-菲罗啉（1.3g，4.5mmol）加入硫酸二甲酯（4.54g，36mmol）中，升温至120℃，搅拌1小时，冷却至室温，向反应液中加入乙醚，有淡棕色固体析出，过滤，乙醚/乙醇（1/2）洗涤，干燥得2-氯-5-苯基-10-甲基-1,10-菲罗啉硫酸氢盐1.3g（3.1mmol，69%）。第五步：9-氯-1-甲基-6-苯基-1,10-菲罗啉-2（1h）-酮将2-氯-5-苯基-10-甲基-1,10-菲罗啉硫酸氢盐（1.2g，3mmol）、铁氰化钾（3.0g，90mmol）、naoh（2.4g，60mmol）加入到40ml冰水中，搅拌1h，然后恢复至室温搅拌4h，过滤，干燥得9-氯-1-甲基-6-苯基-1,10-菲罗啉-2（1h）-酮674mg（2.1mmol，70%）。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.25(1h,d,j=8.4hz),7.79(1h,d,j=8.4hz),7.59(1h,d,j=8.4hz),7.50-7.46(2h,m),7.41-7.35(5h,m);lc/ms(m)+=320.1。第六步：2,9-二氯-5-苯基-1,10-菲罗啉0℃，氮气保护下，将9-氯-1-甲基-6-苯基-1,10-菲罗啉-2（1h）-酮（660mg，2.1mmol）、五氯化磷（0.6g，2.6mmol）加入到三氯氧磷（20ml）中，加热回流6h，减压浓缩除去三氯氧磷，向剩余物中加入冰水和氨水溶液调至碱性，过滤，用水洗涤固体，得到2,9-二氯-5-苯基-1,10-菲罗啉600mg（1.9mmol，88%）。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.23-8.17(2h,m),7.80-7.72(1h,m),7.63-7.58(2h,m),7.40-7.33(5h,m);lc/ms(m)+=324.0。第七步：2,9-二氨基-5-苯基-1,10-菲罗啉将2,9-二氯-5-苯基-1,10-菲罗啉（488mg，1.5mmol），乙酰胺（2.37g，40mmol），碳酸钾（1.94g，14mmol）混合，并加热到200℃，搅拌1小时，降至室温，向反应中加水（15ml），用二氯甲烷萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩除去有机相，剩余物用硅胶柱层析得到2,9-二氨基-5-苯基-1,10-菲罗啉180mg（0.6mmol,41.8%）。1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.03-7.97(2h,m),7.60(1h,s),7.43-7.33(7h,m),5.20(2h,br);lc/ms(m+1)+=287.1。第八步：2-（三氟甲磺酰胺）-5-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉和2-（三氟甲磺酰胺）-6-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉将2,9-二氨基-5-苯基-1,10-菲罗啉（178mg，0.6mmol），三乙胺（0.17ml，1.2mmol）加入二氯甲烷（20ml）中，搅拌降温至-30℃，向此溶液中缓慢滴加三氟甲磺酸酐（0.1ml，0.6mmol）。将反应液升至室温搅拌8h，水洗有机相，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相，剩余物用制备液相（meoh/h2o）分离纯化得到2-（三氟甲磺酰胺）-5-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉89mg（0.21mmol,35%），2-（三氟甲磺酰胺）-6-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉108mg（0.26mmol,43%）。2-（三氟甲磺酰胺）-5-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉：1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ8.17-8.02(2h,m),7.97-7.92(1h,m),7.64-7.31(7h,m),5.57(1h,br);4.12(2h,br);lc/ms(m+1)+=419.1。2-（三氟甲磺酰胺）-6-苯基9-氨基-1,10-菲罗啉：1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ8.19-8.02(2h,m),7.91-7.80(1h,m),7.61-7.36(7h,m),5.79(1h,br);4.13(2h,br);lc/ms(m+1)+=419.1。符合专利权要求的式i化合物可以采用与上述实施例近似的合成方法得到，有代表性的化合物（包含实施例化合物）如下：编号化合物结构lc/ms(m+1)+i-1328.0i-2343.0i-3289.1i-4365.1i-5371.1i-6343.0i-7371.1i-8371.1i-9371.1i-10495.1i-11419.1i-12419.1i-13433.1i-14461.1i-15487.1i-16420.1i-17409.1活性测定阳性对照：青霉素钠供试菌种：金黄色葡萄球菌（s.aureus）、蜡状芽孢杆菌（b.cereus）、枯草芽孢杆菌（b.subtilis）、绿脓杆菌（p.aeruginosa）、大肠杆菌（e.coli）。实验方法：本实验采用微量稀释法测定所有参试化合物对五种供试细菌的最小抑制浓度（mic值）。在无菌条件下向5ml离心管中加入3ml灭菌后的lb培养液，再用灭菌的接种针挑取少量供试细菌加入到培养液中，封好口后于37.5℃恒温培养箱中培养12h。取700µl灭菌的培养液于600nm下测定吸光度，以不加供试细菌的lb培养液为空白对照，根据0.1od600相当于浓度为1×108cfu/ml，后将菌液稀释100倍至1×106cfu/ml。使用96孔（u型底，12×8）微孔稀释板进行mic测定。将待测化合物用无菌水稀释，配制成2048µg/ml的初始浓度，再稀释8倍得到256µg/ml的母液。在第2-7孔中各加入50µl的无菌水，在第1、2孔加入50µl母液，将第2孔中溶液混合均匀后用移液枪移取50µl至第3孔，以此类推对2-8孔进行二倍稀释，最后从第8孔中吸出混合好的50µl溶液弃掉，如此便可获得128，64，32，16，8，4，2µg/ml浓度梯度。向9、10孔中加入50µl的无菌水，1-9和11孔中各加入浓度为0.8-1×106cfu/ml的菌液50µl，10孔加入50µl的lb培养液，11孔加入1‰dmso的无菌水溶液50µl，12孔加入100µl无菌水作为空白对照。将微孔中溶液震荡均匀，置于37℃恒温培养箱中培养。同时以青霉素钠作为阳性对照，每个处理重复三次（阳性对照初始浓度与药液浓度同为128µg/ml）。观察培养12-16h后的结果，有菌丝生长的孔中会有沉淀，呈现出混浊状，无菌丝生长的孔的药液浓度即为该样品的mic值。表1化合物对供试细菌mic值的测定结果当前第1页12