一种射干苷元磺酸钠的制备方法与流程

本发明涉及药物合成领域，具体涉及一种射干苷元磺酸钠的制备方法。
背景技术：
：射干苷元磺酸钠，又称射干苷元-5′-磺酸钠、鸢尾苷元-5′-磺酸钠或鸢尾苷元磺酸钠，化学名为4′,5,7-三羟基-6-甲氧基异黄酮-5′-磺酸钠，分子式c16h11o9sna，分子量402.31，为淡黄色结晶或结晶性粉末，其结构式如(ⅰ)所示：射干苷元磺酸钠为新型的抗病毒药物，其具有抗病毒、抗炎、解热和镇痛作用，可用于治疗急性上呼吸道感染和病毒性肺炎。目前，得到射干苷元磺酸钠的主要方法为：(1)通过分离中药的化学成分，得到射干苷元，再将射干苷元与硫酸通过磺化反应生成水溶性的钠盐；(2)从中药川射干中分离出有效成分射干苷，再将射干苷用盐酸水解为射干苷元，射干苷元与硫酸通过磺化反应生成水溶性的钠盐，化学反应式如下：但是，由于中药成分中苷元含量很低，采用方法(1)存在成本高、收率低的问题。而方法(2)中，需要将射干苷水解得到射干苷元，这一操作需要在加热条件下进行，反应时需要搪瓷反应釜、搅拌器及加热设备等特殊设备，不适合工业化大生产，因此该方法也存在成本高、收率低的问题。所以，现在急需一种路线简单、设备要求低、成本低、收率高的方法来制备射干苷元磺酸钠。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种路线简单、设备要求低、成本低、收率高的制备射干苷元磺酸钠的方法。本发明提供了一种制备射干苷元磺酸钠的方法，所述方法包括以下步骤：将射干苷加入硫酸中，反应，然后将体系加入氯化钠的水溶液中，搅拌，析出沉淀，过滤，取固体，即得。进一步地，所述硫酸的浓度为70％～99％，优选为95％～98％。进一步地，所述氯化钠的水溶液为饱和氯化钠水溶液。进一步地，所述射干苷、硫酸、氯化钠的水溶液的质量体积比为1kg：(2-6)l：(20-60)l，优选为1kg：4l：40l。进一步地，所述反应时间为1-5小时，反应温度为20～40℃；优选地，所述反应时间为2小时，反应温度为室温。进一步地，所述步骤中，还包括：将所述固体提纯，提纯工艺为：取固体，在水中加热溶解，趁热过滤，保留液体，静置，析晶。进一步地，所述提纯工艺的操作次数为1-3次。通过试验证明，本发明提供了一种制备射干苷元磺酸钠的简便方法，该方法合成路线简单、设备要求低、成本低、收率高，适合工业化生产，具有广泛的应用前景。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。附图说明图1为射干苷元磺酸钠对照品的紫外图谱。图2为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的紫外图谱。图3为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的紫外图谱。图4为射干苷元磺酸钠对照品的红外图谱。图5为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的红外图谱。图6为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的红外图谱。图7为射干苷元磺酸钠对照品的质谱。图8为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的质谱。图9为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的质谱。图10为射干苷元磺酸钠对照品的h谱。图11为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的h谱。图12为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的h谱。图13为射干苷元磺酸钠对照品的c谱。图14为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的c谱。图15为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的c谱。图16为射干苷元磺酸钠对照品的hplc图。图17为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的hplc图。图18为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的hplc图。图19为磺化反应过程的hplc监控图；左列为实验例2中对射干苷元磺化反应的hplc监控结果，其中编号为1、2、3、4、5的hplc图谱分别为反应5.0min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的结果，a峰为射干苷元，b峰为射干苷元磺酸钠；右列为实验例2中对射干苷磺化反应的hplc监控结果，其中编号为1′、2′、3′、4′、5′的hplc图谱分别为反应5min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的结果，a峰为射干苷元，b峰为射干苷元磺酸钠、e峰为射干苷。具体实施方式本发明所用原料与试剂均为已知产品，通过购买市售产品所得。其中:射干苷为自制(制备方法参见发明专利，专利号：zl201610939889.9实例1)，含量98.52％。；射干苷元磺酸钠对照品为自制(制备方法参见申请专利，申请号：2018105810925实例3)，含量99.65％实施例1、利用本发明的方法制备射干苷元磺酸钠取射干苷1kg，加4l硫酸，搅拌溶解，反应2小时，倾入40lnacl饱和水溶液中，边加边搅拌，析出大量沉淀，放置过夜，过滤，沉淀用水煮沸溶解，趁热过滤，放置，析晶，过滤，取沉淀，再用水重结晶一次，过滤，60℃减压干燥，得射干苷元磺酸钠790g，纯度98.74％，收率(以射干苷计)91.37％，为淡黄色结晶性粉末。化学反应式如下：对照例1利用对照方法制备射干苷元磺酸钠步骤(1)：取射干苷1kg，置于10l圆底烧瓶中，加50％乙醇5l，搅拌均匀，再加浓盐酸500ml，摇匀。加热回流3～5小时，待薄层检查无射干苷斑点存在时停止水解反应。取出，趁热过滤，静置过夜，析出淡黄色细长针晶。过滤，用水洗涤结晶至流出液ph近中性，结晶用2l95％乙醇加热溶解，过滤，滤液趁热倾入4.5l沸水中，静置过夜，析晶，过滤，60℃减压干燥，得射干苷元600g，为淡黄色粉末。步骤(2)：取步骤(1)制得的射干苷元600g，加2.4l硫酸，搅拌溶解，反应2小时，倾入24lnacl饱和水溶液中，边加边搅拌，析出大量沉淀，放置过夜，过滤，沉淀用水煮沸溶解，趁热过滤，放置，析晶，过滤，沉淀再用水重结晶一次，过滤，60℃减压干燥，得射干苷元磺酸钠700g，纯度98.42％，收率(以射干苷计)81.38％，为淡黄色结晶性粉末。以下通过实验例证明本发明的有益效果。实验例1、质量检测1、实验方法分别取射干苷元磺酸钠对照品、实施例1制备的射干苷元磺酸钠、对照例1制备的射干苷元磺酸钠，进行hplc、紫外、红外、质谱、h谱、c谱测定，图谱见图1～18。2、实验结果检测结果显示三者为同一化合物。实验例2、利用hplc检测磺化反应过程1、实验方法照高效液相色谱法(中国药典2015版四部通则0512)测定。(1)仪器：agilent1100高效液相色谱仪(2)参数设置：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/l磷酸二氢钠水溶液(3.12gnah2po4.2h2o溶于1000ml水中，h3po4调ph值到3.0)为流动相(a)，以乙腈为流动相(b)，按照a:b＝55:45比例混合洗脱；流速：1ml/min；检测波长为263nm，柱温35℃；理论板数按射干苷元磺酸钠峰计算，应不低于2000。将各样品适量注入液相色谱仪中，测定，即得。(3)制样与测试：分别取射干苷元、射干苷，加硫酸进行磺化反应，并在不同时间利用hplc监控其反应体系的组成。具体如下：取射干苷元1.0g，加硫酸4ml，搅拌溶解，放置反应，分别于5.0min、30.0min、1.0h、2.0h、12.0h分别取样，进行hplc分析，结果见图19(图中编号为1、2、3、4、5的hplc图谱分别为反应5.0min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的样品，a峰为射干苷元，b峰为射干苷元磺酸钠)。取射干苷1.0g，加硫酸4ml，搅拌溶解，放置反应，分别于5min、30min、1.0h、2.0h、12.0h分别取样，进行hplc分析，结果见图19(图中编号为1′、2′、3′、4′、5′的hplc图谱分别为反应5min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的样品，a峰为射干苷元，b峰为射干苷元磺酸钠、e峰为射干苷)。2、实验结果从图19中可以看出，射干苷元的磺化反应，直接生成射干苷元磺酸钠(b峰)及另一未知峰(c峰)成分，随着反应进行(2h)，射干苷元(a峰)及c峰成分均消失，生成单一的b峰成分，即射干苷元磺酸钠，但此时另一杂质峰即d峰成分开始生成，若反应12h时，d峰成分明显，推测d峰可能为射干苷元二磺酸钠或射干苷元多磺酸钠。射干苷的磺化反应，反应生成极性很大的f峰成分(此时几无射干苷成分)，推测f峰可能为射干苷磺酸钠，然后再逐渐转化为b峰成分即射干苷元磺酸钠(图中a、c、f峰均消失)，与射干苷元磺化反应一样，反应2h后，生成单一的射干苷元磺酸钠，同时杂质峰d峰开始生成。由上可知，射干苷元磺化反应为直接生成射干苷元磺酸钠，而射干苷磺化反应先生成射干苷磺酸钠，再脱葡萄糖生成射干苷元磺酸钠。实验例3、射干苷元磺酸钠雌激素样作用评价1、实验方法为了减少内源性雌激素的分泌对试验结果产生的影响，本试验小鼠选用的是初断乳、性未成熟的雌性小鼠(昆明种小鼠30只，雌性，出生后21d(断乳鼠)，体重9～12g，购自四川省中医药科学院实验动物中心)。阳性药物为雌二醇注射液(e2)，2mg/ml，上海通用药业股份有限公司生产，用植物油配制成35μg/ml的悬浊液。实验动物按体重随机分为3组：阴性对照组、阳性对照组、射干苷元磺酸钠组，每组10只。实验动物适应性饲养6d后，称重，阴性对照组给予等体积植物油；阳性对照组按0.35mg/(kg·d)给予e2；射干苷元磺酸钠按35mg/(kg·d)给予，早、晚各灌胃1次，连续4d。各组动物于最后1次给药后第2天，称重，脱臼处死，分离子宫并称重，计算小鼠子宫系数(即：子宫湿重/体重×100％)及小鼠体重增幅。结果见表1、表2。2、实验结果表1射干苷元磺酸钠对小鼠子宫系数的影响组别体重(g)子宫湿重(g)子宫系数(％)阴性对照组18.563±1.2640.018±0.0030.098±0.006e2组21.438±1.1610.124±0.015*0.575±0.054*射干苷元磺酸钠组21.246±1.2070.121±0.014*0.570±0.046*备注：*与阴性对照组比较，p<0.05表2射干苷元磺酸钠对小鼠体重的影响组别增重(g)用药前后体重增幅(％)阴性对照组4.982±1.17526.81±3.682e2组7.503±0.887*34.953±2.869*射干苷元磺酸钠组7.228±0.842*34.046±2.445*备注：*与阴性对照组比较，p<0.05从上述结果可见，用药后，射干苷元磺酸钠组动物体重增幅显著高于阴性对照组，说明射干苷元磺酸钠有生长促进作用，这与射干苷元磺酸钠具有雌激素样作用有关。由此说明，射干苷元磺酸钠具有雌激素样药理活性。实例4射干苷元磺酸钠对h2o2诱导pc12细胞损伤的保护作用1、实验方法取对数生长期的pc12细胞以1×105个/l接种于96孔板，每孔加入100μl，于37℃、5％co2培养箱中培养24h，分别加入最终浓度为0μg/ml、0.01μg/ml、0.1μg/ml、1.0μg/ml的本发明药物预处理24h，除了空白对照组，其余各组(包括阳性药水溶性ve对照组)分别再加入最终浓度为60μmol/l的h2o2继续培养20h后，每孔加入mtt(5mg/ml)20μl，继续培养4h，吸除上层液体，每孔加入dmso100μl，37℃培养15min，待蓝紫色结晶物完全溶解后，酶标仪检测各组细胞在490nm下的吸光值。照前法计算细胞存活率，结果见表3。2、实验结果表3射干苷元磺酸钠对h2o2诱导pc12细胞损伤的保护作用(n＝6)备注：①与空白组比较，δp<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01②通过试验，h2o2诱导pc12细胞损伤有效作用浓度为60μmol/l，而射干苷元磺酸钠有效作用浓度范围为0.01～1.0μg/ml。上述mtt实验显示，h2o2组od值明显降低，细胞存活率显著低于正常对照组(p<0.0l)；而不同浓度射干苷元磺酸钠细胞存活率比h2o2损伤组显著提高，有显著性差异，且呈剂量相关性；射干苷元磺酸钠细胞存活率与阳性药(水溶性ve)对照组比较，相当或更好。所以，上述实验结果表明射干苷元磺酸钠对h2o2诱导pc12细胞损伤有显著的保护作用。综上，本发明提供了一种新的制备射干苷元磺酸钠的方法，该方法路线简单、设备要求低、成本低、收率高，适合工业化生产，具有广泛的应用前景。此外，本发明进一步证明了射干苷元磺酸钠具有新的药理活性，即雌激素样作用、并对h2o2诱导pc12细胞损伤有显著的保护作用，因此，射干苷元磺酸钠在制备治疗雌激素依赖性肿瘤(如乳腺癌、子宫内膜癌等)、阿尔茨海默病的药物上具有良好的应用前景。当前第1页12