一种猴头菇菌糠多糖、制备方法及应用与流程

文档序号:18642909发布日期:2019-09-11 23:46阅读:536来源:国知局
一种猴头菇菌糠多糖、制备方法及应用与流程

本公开属于抗氧化多糖技术领域,具体涉及一种提取自猴头菇菌糠的多糖及硫酸酯化多糖,其制备方法及在制备抗氧化、抗衰老产品中的应用。



背景技术:

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解,而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

猴头菇(hericiumerinaceum)又名猴头蘑、刺猬菌、猴头、猴头菌、菜花菌。因其外貌极像猴的头部,故得名猴头菇,隶属担子菌门(basidiomycota)、伞菌纲(agariomycetes)、多孔菌目(polyporales)、齿菌科(hydnaceae)、猴头菌属(hericium)。有研究团队采用微波法对猴头菇中的多糖物质进行了提取并展开研究,结果表明猴头菇多糖具有降血糖、降血脂、抗辐射,抗衰老等防治老年疾病的功效。

发明人认为,猴头菇作为多糖提取原料造价较为昂贵,对于实际生产意义不大。猴头菇菌糠是猴头菇采收后的基质剩余物,包含了猴头菌菌丝残体和经猴头菇酶解的粗纤维等成分,再加上猴头菇菌糠中含有大量的微量元素和矿物质,可见猴头菇菌糠具有较大的潜在利用价值,需要对猴头菇菌糠进行针对性地进行开发利用。

食用菌多糖是指从食用菌的子实体、菌丝体、发酵液或菌糠中提取的多糖类物质。作为一种生物非特异性免疫促进剂,食用菌多糖具有抗肿瘤、抗病毒等多种生物功效。因理化性质、空间结构等因素的限制,天然多糖表现的药理活性通常较低。经过适当修饰后,可改变多糖的分子量、空间结构及取代基的种类、数目和位置,影响其生物活性。



技术实现要素:

本公开针对猴头菇菌糠多糖活性进行了研究,通过响应面统计分析优化猴头菇菌糠多糖的提取工艺。对提取得到的猴头菇菌糠多糖进行活性验证表明,该猴头菇菌糠多糖同时具有抗氧化、抗衰老、修复肝损伤及降血脂等功效。为了提高该猴头菇菌糠多糖的活性,本公开还提供了硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖,经修饰后多糖多方面活性具有明显的提升,具有良好的应用意义。

为了实现上述技术效果,本公开提供以下技术方案:

本公开第一方面,提供一种猴头菇菌糠多糖,所述猴头菇菌糠多糖为β-型糖苷键连接的吡喃糖。

本公开第二方面,提供一种猴头菇菌糠多糖的制备方法,所述制备方法包括以下步骤:向猴头菇菌糠溶液中加入有机溶剂进行提取。

优选的,所述有机溶液包括但不限于乙醇。

优选的,所述有机溶液的质量分为90~98%。

优选的,所述提取温度为80~95℃。

本公开第三方面,提供一种硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖,所述硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖为β-型糖苷键连接的呋喃糖,其红外光谱在1262.49cm-1和808.98cm-1处附近有特征峰。

优选的,所述硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖制备方法如下:由第一方面所述猴头菇菌糠多糖通过氯磺酸-吡啶法制备。

本公开第四方面,提供第三方面所述硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖作为抗氧化剂的应用。

优选的,所述抗氧化剂为清除·oh或dpph自由基的抗氧化剂。

本公开第五方面,提供第一方面所述猴头菌糠多糖或第三方面所述硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖在制备抗衰老药物和/或保健品中的应用。

优选的,所述抗衰老药物/保健品为sod、gsh-px和cat活性以及mda含量抑制型药物/保健品。

本公开第五方面,提供第一方面所述猴头菌糠多糖或第三方面所述硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖在制备肝损伤修复药物和/或保健品中的应用。

优选的,所述肝损伤修复药物/保健品为谷丙转氨酶(alaninetransaminase,alt)和谷草转氨酶(aspertatetransferase,ast)抑制型药物/保健品。

本公开第六方面,提供第一方面所述猴头菌糠多糖或第三方面所述硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖在抗心血管疾病药物和/或保健品中的应用。

优选的,所述抗心血管疾病药物/保健品为抗冠心病药物/保健品,或抗动脉粥样硬化药物/保健品。

优选的,所述抗心血管疾病药物/保健品为总胆固醇(totalcholesterol,tc)和甘油三酯(triacylglycerols,tg)抑制型药物/保健品。

与现有技术相比,本公开的有益效果是:

1.本公开针对猴头菇菌糠多糖的活性展开了研究,研究表明该多糖同时具有抗氧化、抗衰老,修复肝损伤及降血脂等多种生理活性,诸多活性意味着该多糖适用范围较广,优于目前已经报道的食用菌多糖。

2.本公开还提供了硫酸酯化修饰的多糖形式,修饰后的多糖在多方面活性都具有提升。有公开研究显示猴头菇多糖溶液达到15mg/ml时,对dpph的清除率达到69.2%。本公开研究表明,硫酸酯化猴头菇菌糠多糖为400μg/ml时,同样可以达到60%的以上清除率,用量显著低于猴头菇多糖。上述数据表明该硫酸酯化的猴头菇多糖活性显著高于猴头菇多糖,并且经济成本显著低于猴头菇多糖,具有良好的技术效果。

附图说明

构成本公开的一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解,本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开,并不构成对本公开的不当限定。

图1为实施例1中硫酸酯化猴头菇菌糠多糖和猴头菇菌糠多糖的体外抗氧化能力折线图;

其中,图1a为羟基自由基清除率折线图;

图1b为dpph自由基清除率折线图;

图1c为还原力折线图。

图2为实施例1中猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖对小鼠脑组织酶活及脂质含量的影响柱形图。

图3为实施例1中猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖对小鼠肝组织酶活及脂质含量的影响柱形图;

图4为实施例1中猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖对衰老小鼠血清生化指标的影响柱形图;

图5为实施例1中猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖红外光谱图。

具体实施方式

应该指出,以下详细说明都是例示性的,旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是,这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式,而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的,除非上下文另外明确指出,否则单数形式也意图包括复数形式,此外,还应当理解的是,当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时,其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

正如背景技术所介绍的,猴头菇菌糠作为一种猴头菇采收后的基质剩余物,包含了较多猴头菌菌丝残体和经猴头菇酶解的粗纤维等成分。本领域公知食用菌多糖具有诸多生理活性,从猴头菌菌糠中有望提取到具有良好活性的多糖物质。本公开针对猴头菇菌糠中的多糖成分展开了研究,经活性试验验证,从猴头菇菌糠中提取到的多糖同时具有抗氧化、抗衰老、修复肝组织损伤及降血脂等多重功效,并且活性显著。本公开提供了一种硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖,经修饰,该多糖的上述活性均具有一定程度的提升,具有良好的推广意义。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案,以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本公开的技术方案。

实施例1

1.1猴头菇菌糠的处理

将猴头菇菌糠日光下暴晒1~2天,待干燥后,放置60℃烘箱内烘至恒重,粉碎,过10~20目筛。

1.2响应面试验设计

选取提取次数(1、2、3)、乙醇浓度(75%、85%、95%)和提取温度(75℃、85℃、95℃)这三个条件进行rsm设计,采用design-expert8.0软件对试验数据进行回归分析,以确定猴头菇菌糠多糖的提取条件。

表1猴头菇菌糠多糖提取的响应面试验设计

1.3猴头菇菌糠多糖的制备

每组称取猴头菇菌糠1.0g,加入40倍体积去离子水,按照表2中对应的提取次数、乙醇浓度和提取温度进行多糖的提取及醇沉,每组进行3组平行试验。加入对应浓度的乙醇24h后收集沉淀,沉淀干燥后获得猴头菇菌糠粗多糖,用去离子水重新溶解粗多糖,粗多糖溶液去蛋白、去色素、去小分子杂质后,获得猴头菇菌糠多糖。

1.4多糖含量的测定

采取苯酚-硫酸法测定多糖含量。原理是多糖在硫酸的作用下,先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,与苯酚反应生成橙黄色溶液,在490nm处有特征吸收,与标准系列比较定量。

(1)6%苯酚溶液的配制:精确称取6ml苯酚,用去离子水定容至100ml,充分摇匀,配成6%的苯酚溶液,该溶液需要现配现用且需放置到棕色瓶中避光保存。

(2)标准葡萄糖溶液的制备:精确称取0.0100g葡萄糖(使用前于105℃恒温烘箱中烘干至恒重)于100ml容量瓶中,定容,即得100μg/ml的葡萄糖标准溶液。

(3)标准曲线的制备:准确称取0.1g标准葡萄糖(105℃干燥),用去离子水定容至100ml,充分溶解后准确吸取10ml于洁净的容量瓶中,再加去离子水定容至100ml,即获得浓度为100μg/ml的标准葡萄糖溶液。将100μg/ml的标准葡萄糖溶液依次稀释成浓度为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml的葡萄糖溶液,各取1ml分别加入到已盛有1ml去离子水的试管中,另取一试管精确加入2ml去离子水作为空白对照,在7支试管中,分别依次加入1ml苯酚溶液(6%)和5ml浓硫酸,充分震荡混匀,室温下反应20min,在490nm条件下测od值,以葡萄糖含量、吸光度分别为横、纵坐标绘制回归曲线。得回归方程为y=0.015x-0.0134,r2=0.9972,该葡萄糖标准曲线可用。

(4)多糖含量的测定:取待测多糖溶液2ml于试管中,以下方法同标准曲线的测定,测定三次取平均值,按照回归方程计算多糖浓度,多糖结果及相关方程分析见表2、表3和表4。

表2猴头菇菌糠多糖响应面试验设计及结果

1.5响应面数据分析

通过多重回归分析,猴头菇菌糠多糖的提取得率和变量的编码值之间可以用多项式模型表示,二次多项回归方程式为:

y=2.56+0.4x1+0.62x2+0.093x3+0.28x1x2+0.14x1x3-0.092x2x3-0.55x12-0.36x22-0.29x32

其中y为猴头菇菌糠多糖提取得率的预测值,x1、x2和x3分别表示提取次数、乙醇浓度和提取温度的编码值。

响应面分析中bbd设计模型方差分析及拟合方差分析见表3。

表3猴头菇菌糠多糖二次模型回归系数的显著性检验

注:*:表示显著(p<0.05),**:表示极显著(p<0.01)。

由表2和表3可知,响应面试验二次模型回归系数的显著性检验中,模型显著(p<0.0001),f值为28.20,并且失拟值(lack-of-fit)不显著(p=0.079),意味着该模型拟合程度较好,试验误差较小,猴头菇菌糠多糖提取得率的试验值与预测值相一致,并且决定系数r2=0.9732,也说明了试验值与预测值吻合度极高,回归模型各项的方差分析表明线性回归系数(x1,x2),二次项系数(x12,x22)均极显著(p<0.01),二次项系数x32显著(p<0.05),说明提取次数、乙醇浓度和提取温度对于猴头菇菌糠多糖的得率均有重要影响,并且与提取温度相比,提取次数和乙醇浓度对于猴头菇菌糠多糖提取得率的影响更为显著。综上所述,该模型试验误差小,拟合程度很好,可用于对猴头菇菌糠多糖提取最佳工艺进行探究。

通过回归方程算得猴头菇菌糠多糖的最佳提取工艺条件为:提取次数2.68次,乙醇浓度95%,提取温度89.92℃,猴头菇菌糠多糖的理论得率为3.10%。按以上条件进行验证试验,考虑到实际因素,提取次数3次,乙醇浓度95%,提取温度90℃,在该条件下,猴头菇菌糠多糖的实际得率为2.94±0.11%,与预测值无显著差异。

1.6猴头菇菌糠多糖的硫酸酯化

采用氯磺酸-吡啶法制备硫酸酯化猴头菇菌糠多糖。首先配置酯化试剂,在三角瓶中加入90ml吡啶,在冰水浴中充分搅拌后,在1h内,逐滴加入15ml氯磺酸,制得酯化试剂待用。

在60ml的n,n-二甲基甲酰胺中溶解3g纯化好的猴头菇菌糠多糖,充分搅拌后倒入装有酯化试剂的三角瓶中,50℃下搅拌2h,转速为200r/min。反应结束后,冷却至室温,用质量浓度为10%的naoh溶液调至中性,再加入三倍体积的质量浓度为95%的乙醇沉淀24h,5000r/min离心5min得沉淀,将沉淀溶于去离子水中,透析3d,最后将多糖溶液真空冷冻干燥得硫酸酯化猴头菇菌糠多糖。

1.7取代度的测定

(1)试剂配置方法:测定多糖的取代度使用的方法为氯化钡-明胶法,方法步骤如表4。

表4取代度测定所需试剂配置方法

(2)硫酸根标准曲线的绘制:准确吸取0.02ml、0.04ml、0.08ml、0.12ml、0.16ml、2.00ml浓度为0.6mg/ml硫酸根标准溶液于试管中,溶液不足2ml的试管,用1mol/l盐酸溶液补足至2ml,之后向每支试管中滴加浓度为3%的三氯乙酸3.8ml和1ml的氯化钡-明胶溶液,充分混匀后,室温反应15min,在波长360nm处,测每管反应液的吸收值a1,将1ml的氯化钡-明胶溶液换为1ml的明胶溶液,其余步骤相同,测各试管反应液吸收值a0,用a1减去a0,所得的值作为纵坐标,以硫酸基的量作为横坐标绘制标准曲线,得回归方程为y=0.0016x+0.0079,r2=0.9948,该硫酸根标准曲线可用。

(3)硫酸酯化猴头菇菌糠多糖取代度的测定:称取4.5mg硫酸酯化猴头菇菌糠多糖于具塞试管中,加4.5ml浓度为1mol/l的盐酸溶液,密封好后在100℃水浴锅中水解4h。然后在75℃干燥箱中干燥,配置成2mg/ml的多糖溶液,4℃低温保存。取0.2ml多糖溶液,按照标准曲线制定方法,测出硫酸酯化猴头菇菌糠多糖的a1和a0值,根据标准曲线可获得硫酸基的含量,再根据下式获得硫酸酯化猴头菇菌糠多糖的取代度。

ds=1.62×s/(32-1.02×s)

其中,ds为取代度;s为硫酸根质量占多糖质量的百分比

1.8体外抗氧化能力的测定

(1)还原力测定:反应体系为:0.2mol/l的磷酸缓冲液(ph6.6)2.5ml,质量浓度为1%的铁氰化钾溶液2.5ml,稀释好的不同浓度的多糖溶液1.0ml。50℃下水浴20min,结束后加2.5ml质量浓度为10%的三氯乙酸终止反应,离心10min(3000r/min)后取2.5ml上清,加入2.5ml去离子水和0.5ml质量浓度为0.1%的三氯化铁,25℃下水浴15min后,测各试管中反应液在700nm下的吸光度值。

(2)清除·oh能力的测定:反应体系为:依次加入9mmol/l硫酸亚铁1ml,9mmol/l水杨酸1ml,稀释好的不同浓度的多糖溶液1ml,用去离子水代替多糖溶液做空白对照,体积分数为0.03%的过氧化氢1ml,将混合物在37℃水浴锅中恒温水浴30min,离心后测各反应液在510nm下的吸光度值,按下面公式计算多糖对于·oh的清除率:

c=(1-a1/a0)×100

其中,c为·oh清除率(%);a1为多糖组吸光度值;a0为空白组吸光度值

(3)清除dpph自由基能力的测定:反应体系为:依次加入质量浓度为0.1μmol/l的dpph乙醇溶液2ml,稀释好的不同浓度的多糖溶液2ml,以蒸馏水代替多糖溶液作为空白对照,混合物在25℃水浴锅中恒温水浴15min,测各试管中反应液在517nm下的吸光度值。猴头菇菌糠多糖对dpph自由基的清除率按下列公式计算:

c=[1-(a1-a2)/a0]×100

其中,c为dpph自由基清除率(100%);a0为dpph乙醇溶液+蒸馏水混合液的吸光度值;a1为dpph乙醇溶液+多糖溶液混合液的吸光度值;a2为无水乙醇+多糖溶液混合液的吸光度值。

1.9体外抗氧化结果

还原力越强的物质,其抗氧化性也就越强。由图1c可知,在相同的多糖浓度条件下,经过修饰后的硫酸酯化猴头菇菌糠多糖,其还原力要强于未修饰的多糖。

·oh目前是对健康危害最大的一种活性氧,过高的·oh能够损伤或者杀死红细胞,降解dna,损伤细胞膜和细胞器,进而使得细胞发生病变。如图1a所示,经硫酸酯化修饰后的猴头菇菌糠多糖,其清除·oh的能力要强于未修饰的多糖。

dpph是一种以氮为中心的很稳定的自由基,dpph已被广泛用于检测食品药物的体外抗氧化能力,大量研究表明,dpph自由基能损伤心肌细胞、血管内皮细胞,对机体器官有严重的损害作用。由图1b可直观看出,两种多糖对于dpph自由基的清除能力会随着浓度的升高而增强,并且经过修饰后的猴头菇菌糠多糖清除dpph自由基的能力要极显著强于未修饰的多糖。

综上所述,猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化修饰后的菌糠多糖均具有较强的体外抗氧化能力,并且硫酸酯化修饰的猴头菇菌糠多糖在还原力以及对于·oh和dpph自由基清除能力要显著高于未修饰的猴头菇菌糠多糖,硫酸酯化修饰能够提高猴头菇菌糠多糖的体外抗氧化活性。

1.10体内抗衰老活性试验

1.10.1d-半乳糖致小鼠衰老模型的建立

试验小鼠,选用35只昆明种雄性小鼠(鲁抗生物医药有限公司),体重20±2g。饲养条件为:实验室中经过3d适应期后,将小鼠随机分成7组(每组5只)。环境温度为22±2℃,环境湿度为60-65%,每天光照12h。试验分组:

(1)正常组(nc):每天灌胃0.2ml去离子水+腹腔注射0.2ml生理盐水;

(2)模型组(mc):每天灌胃0.2ml去离子水+腹腔注射0.2mld-半乳糖溶液(300mg/kg);

(3)阳性对照组(pc):每天灌胃0.2mlvc溶液(300mg/kg)+腹腔注射0.2mld-半乳糖溶液(300mg/kg);

(4)hrps高剂量组:每天灌胃0.2mlhrps溶液(400mg/kg)+腹腔注射0.2mld-半乳糖溶液(300mg/kg);

(5)hrps低剂量组:每天灌胃0.2mlhrps溶液(200mg/kg)+腹腔注射0.2mld-半乳糖溶液(300mg/kg);

(6)shrps高剂量组:每天灌胃0.2mlshrps溶液(400mg/kg)+腹腔注射0.2mld-半乳糖溶液(300mg/kg);

(7)shrps低剂量组:每天灌胃0.2mlshrps溶液(200mg/kg)+腹腔注射0.2mld-半乳糖溶液(300mg/kg)

不同分组小鼠在同等大小的饲养箱中喂养,垫料换新频率保持一致,饲料和饮水自由采食。持续喂养45d后,小鼠禁食12h,摘眼球取血,颈椎脱臼处死小鼠,迅速取肝和脑样本,用生理盐水清洗内脏,用滤纸吸取多余水分,分别取1g组织样本,按1:9的比例加入磷酸盐缓冲液(0.2mol/l,ph7.4,4℃)研磨,将研磨液离心(8000r/min,10min,4℃)取上清,置于-20℃备用。同时将取的眼球血离心(12000r/min,10min,4℃)取血清置于-20℃备用。整个取样过程要迅速,且需要在低温下进行,以保证样本内各指标成分不会发生降解。1.10.2指标的检测

(1)谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、超氧化物歧化酶(sod)、过氧化氢酶(cat)、丙二醛(mda);

(2)血清指标检测:利用nyas6905全自动生化分析仪对小鼠血清中谷丙转氨酶(alaninetransaminase,alt)、谷草转氨酶(aspertatetransferase,ast)、总胆固醇(totalcholesterol,tc)和甘油三酯(triacylglycerols,tg)进行检测。

1.11动物试验结果

sod是一种重要的活性物质,能够清除机体新陈代谢过程中产生的有害物质,对清除机体内的ros起着重要作用,从而减少ros对于机体细胞的损害。通过检测机体内各组织器官中sod含量的方法,来鉴定机体对于ros的清除能力。gsh-px可以有效清除机体内的h2o2,使其转变为h2o,将有机氢过氧化物(rooh)转变为roh,由于机体内活性氧诱发的脂类过氧化反应生成的脂类过氧化物,对于生物膜会造成严重损伤,从而导致细胞老化,加速机体衰老,而gsh-px能够清除机体内产生的脂类过氧化物,从而减轻脂类过氧化物对于细胞造成的损害,因此检测机体内gsh-px活力的大小可以直接反映出机体的衰老程度。cat是一类能够清除细胞代谢过程中产生的过氧化氢的末端氧化酶,其广泛存在于生物界,包括动物、植物和微生物体内,是保护细胞免受过氧化物损害的关键性酶。当机体内存在大量自由基时,这些自由基会与脂质产生过氧化反应,mda则是氧化反应的终产物,mda能够损伤蛋白质、核酸等生物大分子,过量的mda能损伤人体神经、破坏细胞结构、加速机体衰老,因此通过检测机体内mda的含量水平,就能够反映出机体内脂质过氧化和氧化应激的程度。

由图2可知,硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖能够改善d-半乳糖诱导的衰老小鼠脑组织中sod、gsh-px和cat活性以及mda含量的影响,缓解氧化应激损伤。

由图3可知,硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖能够改善d-半乳糖诱导的衰老小鼠肝脏组织中sod、gsh-px和cat活性以及mda含量的影响,缓解氧化应激损伤。

alt和ast分布于人体多个器官组织中,其中肝脏内含量最多,当肝组织细胞受到损伤时,位于肝细胞胞质中的alt和线粒体中的ast就会从细胞质中渗出到血液中,因此,临床上常通过检测血清中alt和ast的活性来判断肝脏组织的受损程度。tc和tg主要是在肝脏中代谢,当肝脏出现损伤,导致代谢障碍,那么就会引发高胆固醇血症,使得血清中tc和tg含量升高。血清中tc和tg的升高会增高冠心病和动脉粥样硬化的发病率,对于老年人的威胁极大。

由图4所知,在腹腔注射d-半乳糖后,衰老模型组小鼠血清中alt和ast的活性极显著高于正常组小鼠血清中alt和ast的活性(p<0.01),可见腹腔注射d-半乳糖对小鼠器官组织的损伤十分严重,使得胞质中的alt和线粒体中的ast渗出到血液中。不同剂量的猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖均能极显著降低衰老小鼠血清中alt和ast的活性(p<0.01),并且具有一定的剂量效应,说明多糖具有一定的保护小鼠肝脏的能力。

连续的d-半乳糖的注射,使得模型组小鼠血清中tc和tg的含量极显著性升高(p<0.01),表明小鼠体内出现了脂质的代谢紊乱。当灌胃不同剂量的猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖后,能够不同程度的降低血清中tc和tg的含量,对肝脏损伤具有一定的缓解作用。试验表明,猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖具有降低血清中tc和tg含量的活性,从而降低冠心病和动脉粥硬化的发病率。

1.12猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖键型分析

利用红外光谱分析方法,对猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖进行键型分析。称取4.0mg冷冻干燥好的猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖样品,与200mg的溴化钾(kbr)粉末在玛瑙研钵中充分混合研磨后压片,利用nicoletnexus470红外光谱仪扫描压片,获得猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖的红外色谱,光谱扫描范围为500-4000cm-1

1.13猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖键型分析结果

谱峰的位置和形状是红外光谱的两个重要特征,用波数来表示谱峰的位置,代表某一基团具有的最显著的特征,而形状则反映了对应基团的一些细节。因此可以通过红外光谱中谱峰的位置和形状来推测目的多糖的结构特征。

图5表示了猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖的红外光谱图。在3416.93cm-1和3409.47cm-1附近的吸收峰表示多糖中o-h键的伸缩振动;在2975cm-1附近的吸收峰表示多糖中亚甲基(-ch2-)的c-h键伸缩振动;在2920cm-1附近的吸收峰表示多糖中c-h键的伸缩振动,在1630cm-1和1417cm-1附近是多糖中羧基和羧基中c=o键的特征吸收峰;在1141.96cm-1附近的吸收峰表示糖醛酸的伸缩振动;以上几组特征峰的存在可以判断该物质为糖类化合物,证实了猴头菇菌糠多糖和硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖具有多糖的典型吸收峰,属于糖类化合物。

猴头菇菌糠多糖在1094.15cm-1、1141.96cm-1、1195.97cm-1处各有一个吸收峰,共三个吸收峰,这是由于c-o键和o-h键的伸缩振动引起的,而硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖在1046.97cm-1处有一个吸收峰,且附近仅有这一个吸收峰,说明猴头菇菌糠多糖为吡喃糖,而硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖为呋喃糖;糖α-和β-的端基差向异构体是由端基的c-h变角振动造成的,c-h键为平伏键则是α-型异构体,在850cm-1附近有吸收峰,c-h键为直立键则是β-型异构体,在880cm-1附近有吸收峰,综上所述,猴头菇菌糠多糖为β-型糖苷键连接的吡喃糖,硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖为β-型糖苷键连接的呋喃糖。

硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖的红外光谱在1262.49cm-1和808.98cm-1处分别显示有特征峰,这两处峰值分别是由不对称的s=o键和对称的c-o-s键伸缩振动引起的,均是硫酯键的特征吸收峰,而这两处吸收峰猴头菇菌糠多糖不具有,说明经过硫酸酯化修饰后的猴头菇菌糠多糖连接上了硫酸基团;并且与猴头菇菌糠多糖相比,硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖在2920cm-1附近的吸收峰减弱,这是由于部分硫酸酯化试剂在c-6位发生取代,使得亚甲基(-ch2-)中的c-h伸缩振动峰减弱。

上述红外光谱分析证实了,猴头菇菌糠多糖经过硫酸酯化修饰后,成功生成了硫酸酯化合物硫酸酯化的猴头菇菌糠多糖。

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