本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种测单碱基突变的方法及应用。
背景技术：
基因是遗传的基本单元，携带有遗传信息的dna或rna序列，通过复制，把遗传信息传递给下一代，指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，现有技术中对基因检测时对dna的提取过程复杂，dna中可能含有少量的rna或蛋白质，从而使得对dna的提纯效果不佳，且对基因检测的效果不佳。
技术实现要素：
本发明提出了一种测单碱基突变的方法及应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明提出了一种检测单碱基突变的方法，包括如下步骤：
s1、dna的提取：提取少量的动物或植物组织，放入杀菌消毒后的试管中，向试管中加入裂解溶液，将试管放置在高速离心机上离心，时间控制在5-10分钟；
s2、dna的分离；
s3、dna的纯化：在s2完成后，向试管内加入60％-70％的乙醇溶液以及浓度为10％-20％的te溶液，并将试管放置在高速离心机内，高速离心3-5分钟，取试管内的下层溶液；
s4、dna的分析；
s5、nda的扩增：在dna的试液中加入crs引物，经过pcr扩增之后，其中“gccg”为hhal的酶切识别位点，从而使用crs-pcr引物扩增等位基因时，在pcr的产物中就能够就形成了可由hhal识别的酶切位点，酶切后每个等位基因的片段长度均不相等；
s6、dna的检测：具体包括如下步骤：
m1、双链dna分子采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其由于迁移行为决定于其分子大小和电荷，不同长度的dna片段能够在聚丙烯酰胺凝胶基础上被区分开；
m2、加入了尿素和甲酰胺的混合溶液组成的变性剂梯度，从而能够把同样长度但序列不同的dna片段区分开来一个特定的dna片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为一个几百个碱基对的dna片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成；
m3、当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度，该区域这一段连续的碱基对发生解链，浓度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链，直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链dna完全解链从而双链dna完全解链；
m4、不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，从而双链dna完全解链，如果不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，dna片段中每个碱基处的序列差异都能被区分开。
优选的，dna的分析具体包括如下步骤：
1)、取dna原液15μl稀释至3.0ml，用uv-1601型紫外分光光度计测定230nm、260nm以及280nm的吸光值，高质量的dna的要求：a260/a230小于2.0；同时a260/a280介于1.7到1.9之间；
2)、将dna原适液适当稀释后，用1xtae，0.8％琼脂糖凝胶2v/cm电泳1小时进行质量监测；
3)、向一定量的原适液的dna中加入限制性内切酶ecor1至4-5u/μg的dna，在温度37摄氏度的状态下保存24小时，用0.5xtbe，0.8％琼脂糖凝胶2.5v/cm电泳3小时进行检测。
优选的，s1中dna提取时加入的裂解溶液具体为0.1mol/l氯化钠溶液、10mol/l的tris-hci溶液以及1％sds溶液。
优选的，s1中dna提取时加入的裂解溶液的ph为8.0。
优选的，s2中的dna的分离具体包括向在完成操作s1后，向试管内加入苯酚-氯仿溶液、氯仿-异戊醇溶液、冰无水乙醇以及5mol/l的氯化钠溶液，并将试管再次放置在高速离心机上进行离心，当试管内的溶液出现白色絮状沉淀时，停止离心。
本发明还提出了一种检测单碱基突变的方法的用途，具体的用途如下：
f1、了解自身是否有家族性疾病的致病基因，预测患病风险：资料证实10％～15％的癌症与遗传有关，糖尿病、心脑血管疾病等多种疾病都与遗传因素有关；
f2、用于疾病的诊断：采用基因诊断的方法，不仅敏感性大大提高，而且在短时间内就能得到结果；
f3、正确选择药物，避免滥用药物和药物不良反应：根据基因检测的结果，可制定特定的治疗方案，从而科学地指导使用药物，避免药物毒副反应。
本发明提出的一种测单碱基突变的方法及应用，有益效果在于测单碱基突变的方法及应用对dna的提取便捷，同时dna的纯度能够有效的得到保障，且检测的效果明显，能够了解自身是否有家族性疾病的致病基因，预测患病风险，采用基因诊断的方法，不仅敏感性大大提高，而且在短时间内就能得到结果，能够正确选择药物，避免滥用药物和药物不良反应：根据基因检测的结果，可制定特定的治疗方案，从而科学地指导使用药物，避免药物毒副反应。
具体实施方式
下面结合具体实施例来对本发明做进一步说明。
实施例1
一种检测单碱基突变的方法，包括如下步骤：
s1、dna的提取：提取少量的动物或植物组织，放入杀菌消毒后的试管中，向试管中加入裂解溶液，将试管放置在高速离心机上离心，时间控制在5分钟，裂解溶液具体为0.1mol/l氯化钠溶液、10mol/l的tris-hci溶液以及1％sds溶液，裂解溶液的ph为8.0；
s2、dna的分离；具体包括向在完成操作s1后，向试管内加入苯酚-氯仿溶液、氯仿-异戊醇溶液、冰无水乙醇以及5mol/l的氯化钠溶液，并将试管再次放置在高速离心机上进行离心，当试管内的溶液出现白色絮状沉淀时，停止离心。
s3、dna的纯化：在s2完成后，向试管内加入60％的乙醇溶液以及浓度为10％的te溶液，并将试管放置在高速离心机内，高速离心3分钟，取试管内的下层溶液；
s4、dna的分析；具体包括如下步骤：
1)、取dna原液15μl稀释至3.0ml，用uv-1601型紫外分光光度计测定230nm、260nm以及280nm的吸光值，高质量的dna的要求：a260/a230为1.4；同时a260/a280为1.75；
2)、将dna原适液适当稀释后，用1xtae，0.8％琼脂糖凝胶2v/cm电泳1小时进行质量监测；
3)、向一定量的原适液的dna中加入限制性内切酶ecor1至4u/μg的dna，在温度37摄氏度的状态下保存24小时，用0.5xtbe，0.8％琼脂糖凝胶2.5v/cm电泳3小时进行检测。
s5、nda的扩增：在dna的试液中加入crs引物，经过pcr扩增之后，其中“gccg”为hhal的酶切识别位点，从而使用crs-pcr引物扩增等位基因时，在pcr的产物中就能够就形成了可由hhal识别的酶切位点，酶切后每个等位基因的片段长度均不相等；
s6、dna的检测：具体包括如下步骤：
m1、双链dna分子采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其由于迁移行为决定于其分子大小和电荷，不同长度的dna片段能够在聚丙烯酰胺凝胶基础上被区分开；
m2、加入了尿素和甲酰胺的混合溶液组成的变性剂梯度，从而能够把同样长度但序列不同的dna片段区分开来一个特定的dna片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为一个几百个碱基对的dna片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成；
m3、当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度，该区域这一段连续的碱基对发生解链，浓度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链，直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链dna完全解链从而双链dna完全解链；
m4、不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，从而双链dna完全解链，如果不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，dna片段中每个碱基处的序列差异都能被区分开。
本发明提出了一种检测单碱基突变的方法的用途，具体的用途如下：
f1、了解自身是否有家族性疾病的致病基因，预测患病风险：资料证实10％的癌症与遗传有关，糖尿病、心脑血管疾病等多种疾病都与遗传因素有关；
f2、用于疾病的诊断：采用基因诊断的方法，不仅敏感性大大提高，而且在短时间内就能得到结果；
f3、正确选择药物，避免滥用药物和药物不良反应：根据基因检测的结果，可制定特定的治疗方案，从而科学地指导使用药物，避免药物毒副反应。
实施例2
一种检测单碱基突变的方法，包括如下步骤：
s1、dna的提取：提取少量的动物或植物组织，放入杀菌消毒后的试管中，向试管中加入裂解溶液，将试管放置在高速离心机上离心，时间控制在8分钟，裂解溶液具体为0.1mol/l氯化钠溶液、10mol/l的tris-hci溶液以及1％sds溶液，裂解溶液的ph为8.0；
s2、dna的分离；具体包括向在完成操作s1后，向试管内加入苯酚-氯仿溶液、氯仿-异戊醇溶液、冰无水乙醇以及5mol/l的氯化钠溶液，并将试管再次放置在高速离心机上进行离心，当试管内的溶液出现白色絮状沉淀时，停止离心。
s3、dna的纯化：在s2完成后，向试管内加入65％的乙醇溶液以及浓度为15％的te溶液，并将试管放置在高速离心机内，高速离心4分钟，取试管内的下层溶液；
s4、dna的分析；具体包括如下步骤：
1)、取dna原液15μl稀释至3.0ml，用uv-1601型紫外分光光度计测定230nm、260nm以及280nm的吸光值，高质量的dna的要求：a260/a230为1.6；同时a260/a280介于1.8；
2)、将dna原适液适当稀释后，用1xtae，0.8％琼脂糖凝胶2v/cm电泳1小时进行质量监测；
3)、向一定量的原适液的dna中加入限制性内切酶ecor1至4.5u/μg的dna，在温度37摄氏度的状态下保存24小时，用0.5xtbe，0.8％琼脂糖凝胶2.5v/cm电泳3小时进行检测。
s5、nda的扩增：在dna的试液中加入crs引物，经过pcr扩增之后，其中“gccg”为hhal的酶切识别位点，从而使用crs-pcr引物扩增等位基因时，在pcr的产物中就能够就形成了可由hhal识别的酶切位点，酶切后每个等位基因的片段长度均不相等；
s6、dna的检测：具体包括如下步骤：
m1、双链dna分子采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其由于迁移行为决定于其分子大小和电荷，不同长度的dna片段能够在聚丙烯酰胺凝胶基础上被区分开；
m2、加入了尿素和甲酰胺的混合溶液组成的变性剂梯度，从而能够把同样长度但序列不同的dna片段区分开来一个特定的dna片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为一个几百个碱基对的dna片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成；
m3、当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度，该区域这一段连续的碱基对发生解链，浓度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链，直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链dna完全解链从而双链dna完全解链；
m4、不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，从而双链dna完全解链，如果不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，dna片段中每个碱基处的序列差异都能被区分开。
本发明提出了一种检测单碱基突变的方法的用途，具体的用途如下：
f1、了解自身是否有家族性疾病的致病基因，预测患病风险：资料证实13％的癌症与遗传有关，糖尿病、心脑血管疾病等多种疾病都与遗传因素有关；
f2、用于疾病的诊断：采用基因诊断的方法，不仅敏感性大大提高，而且在短时间内就能得到结果；
f3、正确选择药物，避免滥用药物和药物不良反应：根据基因检测的结果，可制定特定的治疗方案，从而科学地指导使用药物，避免药物毒副反应。
实施例3
一种检测单碱基突变的方法，包括如下步骤：
s1、dna的提取：提取少量的动物或植物组织，放入杀菌消毒后的试管中，向试管中加入裂解溶液，将试管放置在高速离心机上离心，时间控制在10分钟，裂解溶液具体为0.1mol/l氯化钠溶液、10mol/l的tris-hci溶液以及1％sds溶液，裂解溶液的ph为8.0；
s2、dna的分离；具体包括向在完成操作s1后，向试管内加入苯酚-氯仿溶液、氯仿-异戊醇溶液、冰无水乙醇以及5mol/l的氯化钠溶液，并将试管再次放置在高速离心机上进行离心，当试管内的溶液出现白色絮状沉淀时，停止离心。
s3、dna的纯化：在s2完成后，向试管内加入70％的乙醇溶液以及浓度为20％的te溶液，并将试管放置在高速离心机内，高速离心5分钟，取试管内的下层溶液；
s4、dna的分析；具体包括如下步骤：
1)、取dna原液15μl稀释至3.0ml，用uv-1601型紫外分光光度计测定230nm、260nm以及280nm的吸光值，高质量的dna的要求：a260/a230为1.9；同时a260/a280为1.85；
2)、将dna原适液适当稀释后，用1xtae，0.8％琼脂糖凝胶2v/cm电泳1小时进行质量监测；
3)、向一定量的原适液的dna中加入限制性内切酶ecor1至5u/μg的dna，在温度37摄氏度的状态下保存24小时，用0.5xtbe，0.8％琼脂糖凝胶2.5v/cm电泳3小时进行检测。
s5、nda的扩增：在dna的试液中加入crs引物，经过pcr扩增之后，其中“gccg”为hhal的酶切识别位点，从而使用crs-pcr引物扩增等位基因时，在pcr的产物中就能够就形成了可由hhal识别的酶切位点，酶切后每个等位基因的片段长度均不相等；
s6、dna的检测：具体包括如下步骤：
m1、双链dna分子采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其由于迁移行为决定于其分子大小和电荷，不同长度的dna片段能够在聚丙烯酰胺凝胶基础上被区分开；
m2、加入了尿素和甲酰胺的混合溶液组成的变性剂梯度，从而能够把同样长度但序列不同的dna片段区分开来一个特定的dna片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为一个几百个碱基对的dna片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成；
m3、当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度，该区域这一段连续的碱基对发生解链，浓度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链，直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链dna完全解链从而双链dna完全解链；
m4、不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，从而双链dna完全解链，如果不同dna片段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来，dna片段中每个碱基处的序列差异都能被区分开。
本发明提出了一种检测单碱基突变的方法的用途，具体的用途如下：
f1、了解自身是否有家族性疾病的致病基因，预测患病风险：资料证实15％的癌症与遗传有关，糖尿病、心脑血管疾病等多种疾病都与遗传因素有关；
f2、用于疾病的诊断：采用基因诊断的方法，不仅敏感性大大提高，而且在短时间内就能得到结果；
f3、正确选择药物，避免滥用药物和药物不良反应：根据基因检测的结果，可制定特定的治疗方案，从而科学地指导使用药物，避免药物毒副反应。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。