一株有效促进作物生长的桔绿木霉JS84及其研制的生物有机肥的制作方法

本发明属于农业微生物领域，具体涉及一株有效促进作物生长的桔绿木霉js84及其应用。

背景技术：

植物根际促生菌(plantgrowth-promotingrhizobacteria，pgpr)是指存在于植物根际表面及根系周围土壤微环境中，能通过直接或间接的方式显著促进植物生长的微生物(ahmadetal.,microbiologicalresearch,2008,163(2):173-181)。木霉作为pgpr的一种，能有效地促进植物生长，同时有着成本低廉、使用安全、持续效果好、增产稳定、对环境和食品安全等特点。因此，探索木霉对作物产量和生长性状的影响，可为木霉制剂在绿色无公害蔬菜生产上的合理利用提供科学依据，对节约化肥资源、发展有机农业具有重要意义。

在多篇文献(cn101637187a、cn105219650a)中公开了桔绿木霉trichodermacitrinoviride能够防治植物真菌病害，但尚未见其促生作用的相关报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，提供一株有效促进作物生长的桔绿木霉js84。

本发明的另一目的是提供该真菌的应用。

本发明的又一目的是提供该真菌制备的生物肥料及其应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一株用于促进作物生长的促生菌株js84，分离自江苏农田土壤中，分类命名为桔绿木霉trichodermacitrinoviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2019年4月12日，保藏编号为cgmccno.17466。

菌株js84在pda平板上生长较快，呈辐射状生长菌丝，大量产孢，绿色孢子，产孢簇为白色至绿色。菌株itsrdna序列构建的系统发育树分析表明，菌株js84位于trichodermacitrinoviride分支上，结合生理生化试验将js84鉴定为桔绿木霉。

本发明所述桔绿木霉js84在促进植物生长中的应用。

本发明所述桔绿木霉js84在制备促进植物生长的生物肥料中的应用。

由本发明所述桔绿木霉js84制备的生物肥料。

所述的生物肥料优选主要通以下方法制备：将保藏号为cgmccno.17466的桔绿木霉js84接种到pda液体培养基中，进行液体发酵，发酵温度为28℃，搅拌速度为170转/分钟，发酵时间为96h，光照条件下发酵更优，使发酵液中含菌量≥1×10⁶个/ml。每干重100g秸秆和200ml水混合，加入到6.6ml氨基酸拌匀。115℃灭菌1h。灭菌冷却后，接入20％木霉发酵液，拌匀，均匀铺开在周转箱中，在28℃培养4-5天后，制作成木霉菌种，放于4℃冰箱保存。按加入5％～15％的木霉菌种于有机肥中，制作成为木霉生物有机肥料。所用pda培养液配制方法为，以配制1l培养基为例：用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮20min，经过滤后滤液中加20g普通葡萄糖，定容至1000ml，ph值自然，115℃灭菌30min。

本发明所述的生物肥料在促进植物生长中的应用。

有益效果：

本发明主要利用分离筛选出根际有效定植的桔绿木霉的施用，显著提高作物苗期的生长速度，促进作物对土壤中养分的吸收利用，从而促进作物生长。本发明促生菌js84在多季盆栽试验中表现出的稳定促生能力。本发明生物肥料应用后促生效果明显，适合蔬菜作物产区大面积使用。

附图说明

图1基于菌株js84的itsrdna基因序列采用邻接法建立的系统发育树

图2第一季黄瓜盆栽效果图

图3第二季黄瓜盆栽效果图

生物材料保藏信息

菌株js84，分类命名为桔绿木霉trichodermacitrinoviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年4月12日，保藏编号为cgmccno.17466。

具体实施方式

实施例1、功能菌株的分离及鉴定

将5g土样置于盛有45ml无菌水的三角瓶中，28℃振荡30min(170r/min)制成土壤悬液。吸取0.1ml土壤悬液置于木霉选择性平板并涂布，放置于28℃培养箱中培养48h，观察平板上菌落生长情况，挑选差异菌落纯化，将纯化后的菌株接种到pda培养基上并置于4℃冰箱保存待用。

将选出的木霉菌株接种于pda培养基上，分别放置于28℃，37℃和40℃培养箱中，培养5d后观察，筛选出能在40℃正常生长的高温木霉。

通过筛选最终获得一株木霉命名为js84，菌株js84在pda平板上菌株js84在pda平板上生长较快，呈辐射状生长菌丝，大量产孢，绿色孢子，产孢簇为白色至绿色。菌株itsrdna序列构建的系统发育树分析表明，菌株js84位于trichodermacitrinoviride分支上，将js84归类为trichodermacitrinoviride，将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.17466。

实施例2、功能菌生物肥料的产生

将菌株js84(cgmccno.17466)接种至pda培养液中液体发酵，发酵生产的条件为：发酵温度为28℃，搅拌速度为170转/分钟，发酵时间为96h，使发酵液中含菌量≥1×10⁶个/ml。每干重100g秸秆和200ml水混合，加入到6.6ml酸解氨基酸液(zl201410042218.3中公开的液体氨基酸复合物)拌匀。115℃灭菌1h。灭菌冷却后，接入20％木霉发酵液，拌匀，均匀铺开在周转箱中，在28℃培养4-5天后，制作成木霉菌种，放于4℃冰箱保存。按加入5％～15％的木霉菌种于有机肥中，制作成为木霉生物有机肥料。

其中所用pda培养液配制方法为，以配制1l培养基为例：用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮20min，经过滤后滤液中加20g普通葡萄糖，定容至1000ml，ph值自然，115℃灭菌30min。

实施例3、盆栽促生效果试验

3.1促生生物肥在黄瓜(第一季、第二季)上的应用效果

促生盆栽试验在国家有机类肥料工程技术研究中心(宜兴)温网室内进行，供试土壤为不含病原菌的健康沙土，供试黄瓜品种为不含病原菌的露丰黄瓜。将黄瓜种子浸泡在常温水中1h，放置在湿润的纱布上于30℃培养箱中催芽12～24h，待75％以上种子萌发后，选取露白的种子移至育苗盘育苗，待长出2片真叶后挑选长势一致幼苗移栽盆中。试验设置两个处理：1)ck，不施用任何肥料；2)处理of，施用普通有机肥；3)处理js84，施用木霉生物有机肥。每个处理6盆，每盆装1.5kg土，of加入2％的普通有机肥，js84加入2％的木霉生物有机肥，常规管理，30d左右后测量植株的生理指标。

第一季黄瓜促生效果如图2、生物量情况如表1所示，盆栽培养30d后，施用js84木霉生物有机肥处理(js84)、施用有机肥(of)处理和不施肥(ck)处理在黄瓜植株的株高、茎粗、地上部鲜重和地上部干重方面均有显著性差异。与不施肥(ck)处理相比，施用js84木霉生物有机肥处理(js84)，黄瓜植株的株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重分别增加了17％、8％、5％、18％和36％。与of相比，施用js84木霉生物有机肥的处理在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重分别增加了5％、6％、2％、9％和16％。

第二季黄瓜促生效果如图3、生物量情况如表2所示，盆栽培养30d后，施用js84木霉生物有机肥处理(js84)、施用有机肥(of)处理和不施肥(ck)处理在黄瓜植株的株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重方面均有显著性差异。与ck相比，施用js84木霉生物有机肥的处理在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重方面，分别增加了60％、30％、11％、58％和41％。与of相比，施用js84木霉生物有机肥的处理在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重方面，分别增加了30％、11％、3％、23％和18％。

综上两季盆栽结果表明，与不施肥(ck)处理和有机肥(of)处理的黄瓜在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重之间差异明显，说明js84菌株的促生效果明显。综上两季盆栽结果表明，施用js84木霉生物有机肥(js84)处理黄瓜植株长势优于不施肥(ck)处理和普通有机肥(of)处理，且在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重、地上部干重方面达到显著性差异，表明js84菌株具有明显的促生效果。

表1、第一季黄瓜促生盆栽试验生物量情况

表2、第二季黄瓜盆栽促生试验生物量情况