一种香菇多糖的提取方式的制作方法

本发明涉及香菇多糖提取技术领域，具体为一种香菇多糖的提取方式。

背景技术：

香菇，学名lentinulaedodes(berk.)sing。香菇在颜色、味道、口感、营养等方面较与他菌类相比较为独特，是深受大家喜爱的食用菌，在全球市场上有着极大的需求量。

市场上常见销售的鲜香菇和干香菇有不同的口感，随着脱水技术的发展，香菇更是被加工成香菇干脆片，成为一种健康营养的零食制品。香菇不仅味道鲜美，还富含蛋白质、多糖、纤维素及多种维生素、氨基酸等营养物质。香菇能够延缓衰老，抑制血压上升，抗癌抗肿瘤，并且能够增强机体的免疫机能。

香菇多糖是极性大分子化合物，然而用热水或稀碱法提取得到的香菇多糖中常常夹杂蛋白质。常用的除蛋白的方法有sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。sevag法复杂、费时且样品损失较大，三氟三氯乙烷法和三氯乙酸法均需在较低的温度下进行，不便于操作者的进行。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种香菇多糖的提取方式，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种香菇多糖的提取方式，包括以下步骤：

s1，材料准备：在市场上购买足量的干鲜香菇，以及氯化胆碱、丙三醇和k2hpo4，购买的干鲜香菇洗净切块。

s2，香菇多糖水提液的制备：取s1中切块的干鲜香菇，而后进行适当粉碎，加入适量的自来水，再采取水浴回流提取，提取完成后，抽滤得香菇多糖水提液，放置于冰箱冷藏室备用。

s3，氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂的合成：取氯化胆碱适量和丙三醇适量，两者物质的量比为1:2，置于干燥器皿中进行混合，水浴锅恒温加热并配合机械搅拌，得无色透明液体即可，存放在室温环境下进行存储备用。

s4，k2hpo4溶液的配制：取一定量k2hpo4溶于蒸馏水中，配制成k2hpo4溶液。

s5，氯化胆碱/丙三醇-盐双水相体系的构建：向试管中倒入一定量的s3中合成的氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂，再加入适量s4中配置的k2hpo4溶液，而后进行均匀摇晃，保持外界温度不变，观察是否成为清晰的两相，两相清洗的则构建成功，若两相不清晰，则冲洗配置氯化胆碱/丙三醇与k2hpo4溶液，直至两相清晰，保留两相清晰的氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂和k2hpo4溶液，备用。

s6，蛋白质的脱除：向带有刻度的离心管中加入s3中的氯化胆碱/丙三醇和s4中的k2hpo4溶液，以及s2中的香菇多糖水提液，再经过离心机进行离心处理，操作结束后将离心管取出待两相完全分离。

优选的，其中s1中处理后的的香菇存放在保鲜盒中至于低温环境下存放备用，所述的低温环境其温度控制在1℃至4℃的范围内。

优选的，其中s2中水浴回流提取时间控制在2h，其冰箱的冷藏室温度控制在-2℃至-4℃。

优选的，其中s3中水浴锅的温度设定为80℃，其中的机械搅拌的时间控制在30min。

优选的，其中s4中制得到的k2hpo4溶液存放在室温环境中进行存储备用。

优选的，其中s6中离心机设定离心机的转速设为2000r/min离心萃取时间为30min。

优选的，其中s6中制得的双相液个提取一定量，分别存放在不同的两个器皿中，而后采用苯酚-硫酸显色法来测定多糖，以及采用考马斯亮蓝法测定蛋白质，而后在两个上相液中分别滴入浓硫酸以及考马斯亮蓝g-250，而后再将滴入浓硫酸的器皿内滴入苯酚，观察若是上相液中的溶液中滴入苯酚的器皿中显色则上相液为需要提取的多糖，反之若是滴入考马斯亮蓝g-250的器皿中显青色，则上相液为蛋白质，下相液为需要提取的多糖。

优选的，其中多糖等物质在浓硫酸的作用下，糖苷键断裂，多糖水解成单糖，单糖脱水生成糠醛及其衍生物，这些物质再与苯酚作用生成有色物质，考马斯亮蓝g-250自身为红色，在465nm波长下有最大吸光值，当与蛋白质结合的时候，它的颜色由红色转变为青色。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明采用一种全新的方法脱去香菇多糖中的蛋白质。采用近来年研究热门、发展前景广阔的低共熔溶剂与合适的无机盐结合构建氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂-盐双水相体系将蛋白质从香菇多糖中萃取出来，并且本发明的香菇多糖回收率为98.0%，对香菇多糖蛋白质的脱除率高达90.8%，并且氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂作为一种环境友好型的离子液体类似物，具有性质稳定、选择性强、价格低廉等优点。

说明书附图

图1是氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂-盐双水相体系萃取蛋白质示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种香菇多糖的提取方式，包括以下步骤：

s1，材料准备：在市场上购买足量的干鲜香菇，以及氯化胆碱、丙三醇和k2hpo4，购买的干鲜香菇洗净切块，处理后的的香菇存放在保鲜盒中至于低温环境下存放备用，所述的低温环境其温度控制在1℃至4℃的范围内。

s2，香菇多糖水提液的制备：取s1中切块的干鲜香菇，而后进行适当粉碎，加入适量的自来水，再采取水浴回流提取，提取完成后，抽滤得香菇多糖水提液，放置于冰箱冷藏室备用，水浴回流提取时间控制在2h，其冰箱的冷藏室温度控制在-2℃至-4℃。

s3，氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂的合成：取氯化胆碱适量和丙三醇适量，两者物质的量比为1:2，置于干燥器皿中进行混合，水浴锅恒温加热并配合机械搅拌，得无色透明液体即可，存放在室温环境下进行存储备用，水浴锅的温度设定为80℃，其中的机械搅拌的时间控制在30min。

s4，k2hpo4溶液的配制：取一定量k2hpo4溶于蒸馏水中，配制成k2hpo4溶液，中制得到的k2hpo4溶液存放在室温环境中进行存储备用。

s5，氯化胆碱/丙三醇-盐双水相体系的构建：向试管中倒入一定量的s3中合成的氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂，再加入适量s4中配置的k2hpo4溶液，而后进行均匀摇晃，保持外界温度不变，观察是否成为清晰的两相，两相清洗的则构建成功，若两相不清晰，则冲洗配置氯化胆碱/丙三醇与k2hpo4溶液，直至两相清晰，保留两相清晰的氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂和k2hpo4溶液，备用。

s6，蛋白质的脱除：向带有刻度的离心管中加入s3中的氯化胆碱/丙三醇和s4中的k2hpo4溶液，以及s2中的香菇多糖水提液，再经过离心机进行离心处理，操作结束后将离心管取出待两相完全分离，离心机设定离心机的转速设为2000r/min离心萃取时间为30min。

氯化胆碱/丙三醇低共熔溶剂-盐双水相体系萃取蛋白质示意图如图1所示。

其中s6中制得的双相液个提取一定量，分别存放在不同的两个器皿中，而后采用苯酚-硫酸显色法来测定多糖，以及采用考马斯亮蓝法测定蛋白质，而后在两个上相液中分别滴入浓硫酸以及考马斯亮蓝g-250，而后再将滴入浓硫酸的器皿内滴入苯酚，观察若是上相液中的溶液中滴入苯酚的器皿中显色则上相液为需要提取的多糖，反之若是滴入考马斯亮蓝g-250的器皿中显青色，则上相液为蛋白质，下相液为需要提取的多糖，多糖等物质在浓硫酸的作用下，糖苷键断裂，多糖水解成单糖，单糖脱水生成糠醛及其衍生物，这些物质再与苯酚作用生成有色物质，考马斯亮蓝g-250自身为红色，在465nm波长下有最大吸光值，当与蛋白质结合的时候，它的颜色由红色转变为青色。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。