本发明涉及疾病治疗及免疫学领域，具体而言，本发明涉及抗pd-1的抗体或其抗原结合片段，编码它们的核酸分子，制备它们的方法，以及包含它们的药物组合物。本发明进一步涉及所述抗体(特别是人源化抗体)或其抗原结合片段在制备药物中的用途，所述药物用于提高免疫细胞活性、增强免疫应答，或者用于预防和/或治疗肿瘤或感染。
背景技术：
：：t细胞的激活过程需要两个信号：一是由抗原递呈细胞apcs呈递的主要组织相容性复合体mhc结合的抗原肽与t细胞表面的细胞受体交联产生第一刺激信号，这种信号具有抗原特异性；二是由apcs表面分子(如b7家族)与t细胞表面相应分子(如cd28)结合所提供的第二刺激信号，主要包括激活t细胞的共刺激因子以及调节t细胞不被过度刺激的共抑制因子两种，该信号是非抗原特异性的，但是t细胞抗原特异性激活所必须的，它决定抗原刺激的t细胞是进入增殖、分化过程称为效应t细胞，还是进入抑制状态或凋亡。程序化死亡分子(programmeddeathgene1，pd-1；又称cd279)，是cd28家族成员中的免疫抑制分子，对维持机体的免疫耐受有重要作用，其功能是使机体免受自身免疫系统的攻击。pd-1基因是由ishida等人于1992年通过削减杂交技术从小鼠凋亡期的t细胞杂交瘤2b4.11中克隆出来的(ishiday,agatay,etal.inducedexpressionofpd-1,anovelmemberoftheimmunoglobulingenesuperfamily,uponprogrammedcelldeath[j].emboj,1992,11(11):3887-3895)。pd-1由288个氨基酸组成，分子量在50-55kda，属i型跨膜蛋白，cd28家族成员之一，其基因pdcd1定位于小鼠1号染色体和人2号染色体上。由于缺乏近膜端的半胱氨酸残基，pd-1以单体的形式存在于细胞膜表面。pd-1胞外含一个igv样区，胞质区含有2个酪氨酸残基，分别连接着免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif，itim)和免疫受体酪氨酸转化基序(immunoreceptortyrosine-basedswitchmotif，itsm)，点突变结果显示itsm基序对于pd-1信号传递起着重要作用(keirme,buttemj,etal.pd-1anditsligandsintoleranceandimmunity[j].annurevimmunol,2008,26:677-704)。pd-1主要表达于活化的t细胞、b细胞、自然杀伤t细胞、单核细胞和树突状细胞表面。静息的t细胞表面不表达pd-1，但被激活后可诱导表达。t细胞被激活后，细胞表面的pd-1表达可在24h之内检测到，与其配体结合后，在几个小时之内就可发挥功能效应(rileyjl.pd-1signalinginprimarytcells[j].immunolrev,2009,229(1):114-125)。pd-1有两个配体，分别是pd-l1(又称b7-h1，cd274)和pd-l2(又称b7-dc，cd273)，分别于1999年和2001年被发现，均属b7家族i型跨膜蛋白，胞外段都有igv和igc结构域。pd-l1由基因cd274编码表达，共290个氨基酸，该基因定位于小鼠19号染色体和人9号染色体。pd-l2由基因pdcd1lg2编码表达，共247个氨基酸，其基因与pd-l1编码基因定位于相同染色体。pd-l1在造血和非造血细胞中均有表达。在t细胞、b细胞、树突状细胞、巨噬细胞、间充质干细胞和髓系肥大细胞中，pd-l1呈高水平组成性表达，且在细胞活化后继续上调表达。在部分非造血细胞中，主要是实体瘤如肾脏，卵巢癌和非小细胞肺癌等，由于肿瘤信号通路的异常或肿瘤细胞受外界信号诱导，pd-l1也呈现高水平表达的特征。研究还发现，i型和ii型干扰素也能使免疫细胞上调pd-l1的表达(franciscolm,sagept.,etal.thepd-1pathwayintoleranceandautoimmunity[j].immunolrev,2010,236:219-242)。与pd-l1相比，pd-l2的表达谱相对较窄，通常不表达在静息的细胞表面，主要诱导性表达于骨髓状dc细胞，巨噬细胞髓源性肥大细胞及部分b细胞系，在外周组织及其他类型细胞中表达受限。研究还发现pd-l2抑制t细胞活性的作用低于pd-l1(latchmany,etal.pd-l2isasecondligandforpd-1andinhibitstcellactivation[j].natimmunol,2001,2(3):261-268)。pd-1抑制t细胞活性的分子机制主要是通过pi3k/akt信号通路。t细胞表面pd-1与pd-l1/pd-l2结合后，pd-1膜内区itim和itsm的酪氨酸被磷酸化，招募含有sh2同源域的去磷酸化酶shp-2，shp-2去磷酸化tcr复合体，抑制cd3ζ、zap70、pkcθ的磷酸化，进而抑制pi3k的磷酸化，从而抑制akt的磷酸化，导致细胞因子il-2、ifn-γ的下调表达，抑制t细胞的活性、增殖及细胞因子的表达(chemnitzjm,parryrv,etal.shp-1andshp-2associatewithimmunoreceptortyrosine-basedswitchmotifofprogrammeddeath1uponprimaryhumantcellstimulation,butonlyreceptorligationpreventstcellactivation[j].jimmunol,2004,173(2):945-954)。pd-1/pd-l1信号除了调节并维持自身免疫耐受,在一些慢性传染性疾病患者,如人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus,hiv)、乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus,hbv)、丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus,hcv)等感染者中，病毒入侵细胞后会诱导细胞表面高表达pd-l1，引起t细胞凋亡或衰竭。在肿瘤患者体内，pd-l1的高表达能够增强肿瘤的生长和转移能力，因此可以作为肿瘤患者预后的指标(ceerazs,nowakec,etal.b7familycheckpointregulatorsinimmuneregulationanddisease[j].trendsimmunol,2013,34(11):556-563)。研究发现，多种肿瘤细胞高表达pd-l1，如黑素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、肾细胞癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、乳腺癌、胰腺癌、食道癌、膀胱癌和肝癌等(chenl,han,x.anti-pd-1/pd-l1therapyofhumancancer:past,present,andfuture[j].jclininvest,2015,125(9):3384-3391)。此外，肿瘤部位浸润性cd8+t细胞表面也高表达pd-1，它们与肿瘤细胞表面的pd-l1相互作用，从而抑制t细胞的活化与增殖，使得t细胞丧失对肿瘤细胞的杀伤作用，引起免疫逃逸。因此，有针对性地阻断pd-1/pd-l1信号通路,能够增强t细胞对传染病病原体和肿瘤细胞的杀伤。目前,已经有多个抗pd-1和pd-l1单克隆抗体药物被fda批准用于癌症的治疗，具有不错的临床治疗效果(sunshinej,taubejm.pd-1/pd-l1inhibitors[j].curropinpharmacol,2015,23:32-38)。截止到2018年2月，默克公司pembrolizumab派姆单抗和百时施贵宝公司nivolumab纳武单抗已经被美国fda批准用于包括非小细胞肺癌、头颈癌、黑色素瘤、膀胱癌、肾癌、霍奇森淋巴瘤、尿路上皮癌和胃癌在内的近十种恶性肿瘤的临床治疗。尽管pd-1抗体肿瘤免疫疗法在近些年取得一定的成绩，但是对已进入国内肿瘤治疗临床研究的pd-1抗体进行分析后发现，由于不同pd-1抗体氨基酸序列，尤其是cdr区序列存在异质性，因而它们的特点及功能及治疗肿瘤的效果也不尽相同。总的来说，现有的pd-1抗体均存在一定毒副作用及对在部分人群中其治疗剂量明显受限等缺陷，这大大削弱了pd-1抗体的临床治疗效果及普适性，并且导致了一定的安全性隐患(michotjm,bigenwaldc,etal.immune-relatedadverseeventswithimmunecheckpointblockade:acomprehensivereview[j].eurjcancer,2016,54:139-48)。因此，发展具有更高的特异性、更低的毒副作用、更优的临床药效的抗pd-1抗体是迫切而必要的，这将给癌症、感染等疾病患者提供更多的用药选择。技术实现要素：在本申请中，发明人首先开发了具有优良性质的鼠源抗体，其能够特异性识别/结合人pd-1，阻断pd-1与其配体pd-l1的结合，并且能够在体外/体内增强免疫细胞活性，刺激免疫应答。因此，该鼠源抗体具有用于预防和/或治疗肿瘤或感染的潜力。在此基础上，发明人又付出了大量的创造性劳动，对该鼠源抗体进行了深入的研究和改造，从而开发了该鼠源抗体的人源化抗体：本发明的人源化抗体不仅具有极高的人源化程度，而且具有与鼠源抗体基本上相同的生物学功能。因此，本发明的抗体(特别是人源化抗体)是极为有利的，其不仅保留了亲本鼠源抗体的功能和性质，从而具有用于预防和治疗肿瘤或感染的潜力；而且具有较高的人源化程度，从而可安全地施用给人受试者，而不引发免疫原性反应。本发明的抗体具有重大的临床价值。本发明的抗体因此，在一个方面，本发明提供了一种能够特异性结合pd-1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)互补决定区(cdr)：(i)vhcdr1，其具有如seqidnos:1、9、17、25任一项所示的vh中含有的cdr1的序列，或者与所述vh中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(ii)vhcdr2，其具有如seqidnos:1、9、17、25任一项所示的vh中含有的cdr2的序列，或者与所述vh中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(iii)vhcdr3，其具有如seqidnos:1、9、17、25任一项所示的vh中含有的cdr3的序列，或者与所述vh中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其具有如seqidnos:2、10、18、26任一项所示的vl中含有的cdr1的序列，或者与所述vl中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(v)vlcdr2，其具有如seqidnos:2、10、18、26任一项所示的vl中含有的cdr2的序列，或者与所述vl中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(vi)vlcdr3，其具有如seqidnos:2、10、18、26任一项所示的vl中含有的cdr3的序列，或者与所述vl中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat编号系统定义。在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)互补决定区(cdr)：(i)vhcdr1，其具有如seqidno:1所示的vh中含有的cdr1的序列，或者与所述vh中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个或4个氨基酸的置换)的序列；(ii)vhcdr2，其具有如seqidno:1所示的vh中含有的cdr2的序列，或者与所述vh中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个或6个氨基酸的置换)的序列；和(iii)vhcdr3，其具有如seqidno:1所示的vh中含有的cdr3的序列，或者与所述vh中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个，6个或7个氨基酸的置换)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其具有如seqidno:2所示的vl中含有的cdr1的序列，或者与所述vl中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个，6个或7个氨基酸的置换)的序列；(v)vlcdr2，其具有如seqidno:2所示的vl中含有的cdr2的序列，或者与所述vl中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个或2个氨基酸的置换)的序列；和(vi)vlcdr3，其具有如seqidno:2所示的vl中含有的cdr3的序列，或者与所述vl中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个或6个氨基酸的置换)的序列。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)如seqidno:1所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，(b)如seqidno:2所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：如seqidno:1所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seqidno:2所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr；其中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr通过kabat编号系统确定。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)cdr：(i)vhcdr1，其由下述序列组成：seqidno:3，或与seqidno:3相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个或4个氨基酸的置换)的序列，(ii)vhcdr2，其由下述序列组成：seqidno:4，或与seqidno:4相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个或6个氨基酸的置换)的序列，和(iii)vhcdr3，其由下述序列组成：seqidno:5，或与seqidno:5相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个，6个或7个氨基酸的置换)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其由下述序列组成：seqidno:6，或与seqidno:6相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个，6个或7个氨基酸的置换)的序列，(v)vlcdr2，其由下述序列组成：seqidno:7，或与seqidno:7相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个或2个氨基酸的置换)的序列，和(vi)vlcdr3，其由下述序列组成：seqidno:8，或与seqidno:8相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个，5个或6个氨基酸的置换)的序列；其中，所述重链可变区(vh)cdr和所述轻链可变区(vl)cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段具备以下特征中的一项或多项：(i)vhcdr1具有如x1x2afx3rfx4(seqidno:49)所示的序列；(ii)vhcdr2具有如x5x6ggx7x8x9x10(seqidno:50)所示的序列；(iii)vhcdr3具有如arhx11x12x13tx14ax15x16x17(seqidno:51)所示的序列；(iv)vlcdr1具有如x18x19x20x21x22yx23yx24f(seqidno:52)所示的序列；(v)vlcdr2具有如rx25a(seqidno:53)所示的序列；和(vi)vlcdr3具有如qx26x27x28x29x30px31(seqidno:54)所示的序列；其中，x1至x31彼此独立地是任意氨基酸。在某些优选的实施方案中，x1至x31彼此独立地选自丙氨酸(a)、精氨酸(r)、天冬氨酸(d)、半胱氨酸(c)、谷氨酰胺(q)、谷氨酸(e)、组氨酸(h)、异亮氨酸(i)、甘氨酸(g)、天冬氨酸(n)、亮氨酸(l)、赖氨酸(k)、甲硫氨酸(m)、苯丙氨酸(f)、辅氨酸(p)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、色氨酸(w)、酪氨酸(y)和缬氨酸(v)。在某些优选的实施方案中，x1选自g或a，x2选自f或a，x3选自s或a，x4选自d或a，x5选自i或a，x6至x8彼此独立地选自g或a，x9选自r或a，x10选自t或a，x11选自g或a，x12选自t或a，x13至x14彼此独立地选自g或a，x15选自m或a，x16选自d或a，x17选自y或a，x18选自k或a，x19选自s或a，x20选自v或a，x21选自d或a，x22选自n或a，x23选自g或a，x24选自s或a，x25选自s或a，x26选自q或a，x27选自s或a，x28选自n或a，x29选自e或a，x30选自d或a，x31选自t或a。在某些优选的实施方案中，x6是g，x7是g，x10是t，x11是g，x13是g，x14是g，x15是m，x23是g，x24是s，x26是q，x31是t。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段具备以下特征中的一项或多项：(1)x1至x4中的至多一个为a；(2)x5至x10中的至多一个为a；(3)x11至x17中的至多一个为a；(4)x18至x24中的至多一个为a；(5)x26至x31中的至多一个为a。在某些优选的实施方案中，x1至x17中的至多一个为a。在某些优选的实施方案中，x18至x31中的至多一个为a。在某些优选的实施方案中，x1至x31中的至多一个为a。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(1)如seqidnos:3、55-58任一项所示的vhcdr1；如seqidno:4所示的vhcdr2；以及，如seqidno:5所示的vhcdr3；如seqidno:6所示的vlcdr1；如seqidno:7所示的vlcdr2；以及，如seqidno:8所示的vlcdr3；(2)如seqidno:3所示的vhcdr1；如seqidnos:4、59-61任一项所示的vhcdr2；以及，如seqidno:5所示的vhcdr3；如seqidno:6所示的vlcdr1；如seqidno:7所示的vlcdr2；以及，如seqidno:8所示的vlcdr3；(3)如seqidno:3所示的vhcdr1；如seqidno:4所示的vhcdr2；以及，如seqidnos:5、62-64任一项所示的vhcdr3；如seqidno:6所示的vlcdr1；如seqidno:7所示的vlcdr2；以及，如seqidno:8所示的vlcdr3；(4)如seqidno:3所示的vhcdr1；如seqidno:4所示的vhcdr2；以及，如seqidno:5所示的vhcdr3；如seqidnos:6、65-69任一项所示的vlcdr1；如seqidno:7所示的vlcdr2；以及，如seqidno:8所示的vlcdr3；(5)如seqidno:3所示的vhcdr1；如seqidno:4所示的vhcdr2；以及，如seqidno:5所示的vhcdr3；如seqidno:6所示的vlcdr1；如seqidno:7或70所示的vlcdr2；以及，如seqidno:8所示的vlcdr3；或(6)如seqidno:3所示的vhcdr1；如seqidno:4所示的vhcdr2；以及，如seqidno:5所示的vhcdr3；如seqidno:6所示的vlcdr1；如seqidno:7所示的vlcdr2；以及，如seqidnos:71-74任一项所示的vlcdr3。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的vh包含：如seqidno:3所示的vhcdr1；如seqidno:4所示的vhcdr2；以及，如seqidno:5所示的vhcdr3；并且，所述抗体或其抗原结合片段的vl包含：如seqidno:6所示的vlcdr1；如seqidno:7所示的vlcdr2；以及，如seqidno:8所示的vlcdr3。在另一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)互补决定区(cdr)：(i)vhcdr1，其具有如seqidno:9所示的vh中含有的cdr1的序列，或者与所述vh中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(ii)vhcdr2，其具有如seqidno:9所示的vh中含有的cdr2的序列，或者与所述vh中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(iii)vhcdr3，其具有如seqidno:9所示的vh中含有的cdr3的序列，或者与所述vh中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其具有如seqidno:10所示的vl中含有的cdr1的序列，或者与所述vl中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(v)vlcdr2，其具有如seqidno:10所示的vl中含有的cdr2的序列，或者与所述vl中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(vi)vlcdr3，其具有如seqidno:10所示的vl中含有的cdr3的序列，或者与所述vl中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)如seqidno:9所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，(b)如seqidno:10所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：如seqidno:9所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seqidno:10所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr；其中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr通过kabat编号系统确定。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)cdr：(i)vhcdr1，其由下述序列组成：seqidno:11，或与seqidno:11相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(ii)vhcdr2，其由下述序列组成：seqidno:12，或与seqidno:12相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(iii)vhcdr3，其由下述序列组成：seqidno:13，或与seqidno:13相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其由下述序列组成：seqidno:14，或与seqidno:14相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(v)vlcdr2，其由下述序列组成：seqidno:15，或与seqidno:15相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(vi)vlcdr3，其由下述序列组成：seqidno:16，或与seqidno:16相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；其中，所述重链可变区(vh)cdr和所述轻链可变区(vl)cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的vh包含：如seqidno:11所示的vhcdr1；如seqidno:12所示的vhcdr2；以及，如seqidno:13所示的vhcdr3；并且，所述抗体或其抗原结合片段的vl包含：如seqidno:14所示的vlcdr1；如seqidno:15所示的vlcdr2；以及，如seqidno:16所示的vlcdr3。在另一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)互补决定区(cdr)：(i)vhcdr1，其具有如seqidno:17所示的vh中含有的cdr1的序列，或者与所述vh中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(ii)vhcdr2，其具有如seqidno:17所示的vh中含有的cdr2的序列，或者与所述vh中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(iii)vhcdr3，其具有如seqidno:17所示的vh中含有的cdr3的序列，或者与所述vh中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其具有如seqidno:18所示的vl中含有的cdr1的序列，或者与所述vl中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(v)vlcdr2，其具有如seqidno:18所示的vl中含有的cdr2的序列，或者与所述vl中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(vi)vlcdr3，其具有如seqidno:18所示的vl中含有的cdr3的序列，或者与所述vl中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)如seqidno:17所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，(b)如seqidno:18所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：如seqidno:17所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seqidno:18所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr；其中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr通过kabat编号系统确定。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)cdr：(i)vhcdr1，其由下述序列组成：seqidno:19，或与seqidno:19相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(ii)vhcdr2，其由下述序列组成：seqidno:20，或与seqidno:20相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(iii)vhcdr3，其由下述序列组成：seqidno:21，或与seqidno:21相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其由下述序列组成：seqidno:22，或与seqidno:22相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(v)vlcdr2，其由下述序列组成：seqidno:23，或与seqidno:23相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(vi)vlcdr3，其由下述序列组成：seqidno:24，或与seqidno:24相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；其中，所述重链可变区(vh)cdr和所述轻链可变区(vl)cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的vh包含：如seqidno:19所示的vhcdr1；如seqidno:20所示的vhcdr2；以及，如seqidno:21所示的vhcdr3；并且，所述抗体或其抗原结合片段的vl包含：如seqidno:22所示的vlcdr1；如seqidno:23所示的vlcdr2；以及，如seqidno:24所示的vlcdr3。在另一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)互补决定区(cdr)：(i)vhcdr1，其具有如seqidno:25所示的vh中含有的cdr1的序列，或者与所述vh中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(ii)vhcdr2，其具有如seqidno:25所示的vh中含有的cdr2的序列，或者与所述vh中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(iii)vhcdr3，其具有如seqidno:25所示的vh中含有的cdr3的序列，或者与所述vh中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其具有如seqidno:26所示的vl中含有的cdr1的序列，或者与所述vl中含有的cdr1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；(v)vlcdr2，其具有如seqidno:26所示的vl中含有的cdr2的序列，或者与所述vl中含有的cdr2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和(vi)vlcdr3，其具有如seqidno:26所示的vl中含有的cdr3的序列，或者与所述vl中含有的cdr3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的cdr1、cdr2及cdr3，和/或所述轻链可变区(vl)中含有的cdr1、cdr2及cdr3由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)如seqidno:25所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，(b)如seqidno:26所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr。在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat、chothia或imgt编号系统定义。在某些示例性实施方案中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和/或所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：如seqidno:25所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seqidno:26所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr；其中，所述重链可变区(vh)中含有的3个cdr和所述轻链可变区(vl)中含有的3个cdr通过kabat编号系统确定。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)下述3个重链可变区(vh)cdr：(i)vhcdr1，其由下述序列组成：seqidno:27，或与seqidno:27相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(ii)vhcdr2，其由下述序列组成：seqidno:28，或与seqidno:28相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(iii)vhcdr3，其由下述序列组成：seqidno:29，或与seqidno:29相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或(b)下述3个轻链可变区(vl)cdr：(iv)vlcdr1，其由下述序列组成：seqidno:30，或与seqidno:30相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(v)vlcdr2，其由下述序列组成：seqidno:31，或与seqidno:31相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(vi)vlcdr3，其由下述序列组成：seqidno:32，或与seqidno:32相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；其中，所述重链可变区(vh)cdr和所述轻链可变区(vl)cdr由kabat编号系统定义。在某些优选的实施方案中，(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的vh包含：如seqidno:27所示的vhcdr1；如seqidno:28所示的vhcdr2；以及，如seqidno:29所示的vhcdr3；并且，所述抗体或其抗原结合片段的vl包含：如seqidno:30所示的vlcdr1；如seqidno:31所示的vlcdr2；以及，如seqidno:32所示的vlcdr3。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段进一步包含来源于哺乳动物(例如，鼠或人)免疫球蛋白的构架区(fr)。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的vh包含来源于鼠免疫球蛋白的重链可变区(vh)构架区(fr)，和/或所述抗体或其抗原结合片段的vl包含来源于鼠免疫球蛋白的轻链可变区(vl)构架区(fr)。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段是人源化的。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的人源化程度为至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的vh包含来源于人免疫球蛋白的重链可变区(vh)构架区(fr)，和/或所述抗体或其抗原结合片段的vl包含来源于人免疫球蛋白的轻链可变区(vl)构架区(fr)。在此类实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区fr和/或轻链可变区fr可以包含一个或多个非人源(例如，鼠源)氨基酸残基，例如所述重链构架区fr和/或轻链构架区fr可以包含一或多个氨基酸回复突变，在这些回复突变中有相应的鼠源氨基酸残基。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)人免疫球蛋白的重链构架区或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)；和/或(b)人免疫球蛋白的轻链构架区或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含人免疫球蛋白的框架区，例如人胚系抗体基因所编码的氨基酸序列中所包含的框架区。在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：人重链胚系基因所编码的氨基酸序列中所包含的重链框架区，和/或人轻链胚系基因所编码的氨基酸序列中所包含的轻链框架区。在此类实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的框架区(重链框架区和/或轻链框架区)可以包含一个或多个非人源(例如，鼠源)氨基酸残基。在某些优选的实施方案中，所述框架区(重链框架区和/或轻链框架区)包含一或多个氨基酸残基，其被回复突变至相应的鼠源残基或相应鼠源残基的保守氨基酸置换(此类突变称为回复突变(backmutation))。因此，在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含人免疫球蛋白的框架区(例如，人胚系抗体基因所编码的氨基酸序列中所包含的框架区)，所述框架区任选地包含一个或多个从人源残基至鼠源残基的回复突变。在某些示例性实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：igvh3-23*04所编码的氨基酸序列中所包含的重链框架区，和igkv3-11*01所编码的氨基酸序列中所包含的轻链框架区，所述重链框架区和/或轻链框架区任选地包含一个或多个从人源残基至鼠源残基的回复突变。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的人源化程度为至少95％。在某些示例性实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：igvh1-2*02所编码的氨基酸序列中所包含的重链框架区，和igkv1-16*01所编码的氨基酸序列中所包含的轻链框架区，所述重链框架区和/或轻链框架区任选地包含一个或多个从人源残基至鼠源残基的回复突变。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的人源化程度为至少84％。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidnos：1、9、17、25、33、35、37、39任一项所示的序列；(ii)与seqidnos：1、9、17、25、33、35、37、39任一项所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidnos：1、9、17、25、33、35、37、39任一项所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和/或(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidnos：2、10、18、26、34、36、38、40任一项所示的序列；(v)与seqidnos：2、10、18、26、34、36、38、40任一项所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidnos：2、10、18、26、34、36、38、40任一项所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：1所示的序列；(ii)与seqidno：1所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：1所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：2所示的序列；(v)与seqidno：2所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：2所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：9所示的序列；(ii)与seqidno：9所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：9所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：10所示的序列；(v)与seqidno：10所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：10所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：17所示的序列；(ii)与seqidno：17所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：17所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：18所示的序列；(v)与seqidno：18所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：18所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：25所示的序列；(ii)与seqidno：25所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：25所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：26所示的序列；(v)与seqidno：26所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：26所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：33所示的序列；(ii)与seqidno：33所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：33所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：34所示的序列；(v)与seqidno：34所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：34所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：35所示的序列；(ii)与seqidno：35所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：35所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：36所示的序列；(v)与seqidno：36所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：36所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：37所示的序列；(ii)与seqidno：37所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：37所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：38所示的序列；(v)与seqidno：38所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：38所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seqidno：39所示的序列；(ii)与seqidno：39所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seqidno：39所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seqidno：40所示的序列；(v)与seqidno：40所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seqidno：40所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：(1)具有如seqidno:1所示的序列的vh和具有如seqidno:2所示的序列的vl；(2)具有如seqidno:9所示的序列的vh和具有如seqidno:10所示的序列的vl；(3)具有如seqidno:17所示的序列的vh和具有如seqidno:18所示的序列的vl；(4)具有如seqidno:25所示的序列的vh和具有如seqidno:26所示的序列的vl；(5)具有如seqidno:33所示的序列的vh和具有如seqidno:34所示的序列的vl；(6)具有如seqidno:35所示的序列的vh和具有如seqidno:36所示的序列的vl；(7)具有如seqidno:37所示的序列的vh和具有如seqidno:38所示的序列的vl；或(8)具有如seqidno:39所示的序列的vh和具有如seqidno:40所示的序列的vl。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段进一步包含来源于哺乳动物(例如，鼠或人)免疫球蛋白的恒定区序列或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加。在某些优选的实施方案中，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的保守置换。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人免疫球蛋白的重链恒定区(ch)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；和/或，本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人免疫球蛋白的轻链恒定区(cl)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)。在某些优选的实施方案中，所述重链恒定区是igg重链恒定区，例如igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区。在某些优选的实施方案中，所述重链恒定区是鼠igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区。在某些优选的实施方案中，所述重链恒定区是人igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区。在某些实施方案中，优选地所述重链恒定区是人igg1或igg4重链恒定区。在某些优选的实施方案中，所述轻链恒定区是κ轻链恒定区。在某些优选的实施方案中，所述轻链恒定区是鼠κ轻链恒定区。在某些优选的实施方案中，所述轻链恒定区是人κ轻链恒定区。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体是嵌合抗体或人源化抗体。在某些优选的实施方案中，本发明的抗原结合片段选自scfv、fab、fab’、(fab’)2、fv片段、双抗体(diabody)。本发明的抗体或其抗原结合片段对pd-1(特别是人pd-1)具有高特异性和高亲和力。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段能够以约1×10-10m或更低的kd结合pd-1(特别是人pd-1)；优选地，以约5×10-11m或更低的kd结合pd-1(特别是人pd-1)，或者，以约1×10-11m或更低的kd结合pd-1(特别是人pd-1)。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段具备以下生物学功能中的至少一项：(1)特异性识别/结合pd-1(特别是人pd-1)；(2)阻断pd-1与pd-l1的结合，或者抑制和/或阻断由pd-1结合pd-l1介导的细胞内信号传导；(3)在体外及受试者体内提高免疫细胞(特别是t细胞，例如抗原特异性t细胞)活性；(4)在体外及受试者体内提高免疫细胞(特别是t细胞，例如抗原特异性t细胞)的效应细胞因子(例如，il-2、ifn-γ等)的分泌水平、增殖活性、活化标记(例如，cd25、cd69等)的表达水平、和/或细胞杀伤活性；(5)在体外及受试者体内增强免疫应答(特别是t细胞介导的免疫应答)；(6)在受试者中预防和/治疗肿瘤(例如，具有微卫星高度不稳定性(msi-h)或者错配修复缺陷(dmmr)的肿瘤)或感染。在本发明中，本发明的抗体或其抗原结合片段可以包括这样的变体，所述变体与其所源自的抗体或其抗原结合片段相比差异仅在于一个或多个(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换)氨基酸残基的保守置换，或者与其所源自的抗体或其抗原结合片段具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，且基本保留了其所源自的抗体或其抗原结合片段的上述生物学功能。衍生的抗体本发明的抗体或其抗原结合片段可进行衍生化，例如被连接至另一个分子(例如另一个多肽或蛋白)。通常，抗体或其抗原结合片段的衍生化(例如，标记)不会不利影响其对pd-1(特别是人pd-1)的结合。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段还意欲包括此类衍生化的形式。例如，可以将本发明的抗体或其抗原结合片段功能性连接(通过化学偶合、基因融合、非共价连接或其它方式)于一个或多个其它分子基团，例如另一个抗体(例如，形成双特异性抗体)，检测试剂，药用试剂，和/或能够介导抗体或抗原结合片段与另一个分子结合的蛋白或多肽(例如，抗生物素蛋白或多组氨酸标签)。此外，本发明的抗体或其抗原结合片段还可以用化学基团进行衍生，例如聚乙二醇(peg)，甲基或乙基，或者糖基。这些基团可用于改善抗体的生物学特性，例如增加血清半衰期。因此，在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段带有标记。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段带有可检测的标记，例如酶、放射性核素、荧光染料、发光物质(如化学发光物质)或生物素。本发明所述的可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。这类标记是本领域熟知的，其实例包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3h、125i、35s、14c或32p)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(fitc)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(tritc)、藻红蛋白(pe)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如cy7、alexa750))、发光物质(例如化学发光物质，如吖啶酯类化合物)、磁珠(例如，)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。教导该标记物的使用的专利包括，但不限于，美国专利3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；及4,366,241(全部通过引用并入本文)。如上所述的可检测的标记可通过本领域已知的方法检测。例如，放射性标记可使用摄影胶片或闪烁计算器检测，荧光标记物可使用光检测器检测，以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测，及测热标记物通过简单可视化着色标记物来检测。在某些实施方案中，此类标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。在某些实施方案中，可通过不同长度的接头(linker)将如上所述的可检测的标记连接至本发明的抗体或其抗原结合片段，以降低潜在的位阻。在另一个方面，本发明还提供了一种缀合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段以及连接于所述抗体或其抗原结合片段的治疗剂。在某些优选的实施方案中，所述缀合物是抗体-药物缀合物(adc)。在某些优选的实施方案中，所述治疗剂选自细胞毒素或放射性同位素。在本发明中，合适的治疗剂的非限制性实例包括，抗代谢物、烷化剂、dna小沟结合剂、dna嵌入剂、dna交联剂、组蛋白去乙酰基酶抑制剂、核输出抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶i或ii抑制剂、热激蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生素及抗有丝分裂剂。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段任选地通过接头与所述治疗剂缀合。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段通过可裂解的接头(例如肽接头、二硫化物或腙接头)与所述治疗剂缀合。抗体的制备本发明的抗体可以本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或pcr扩增获得编码本发明抗体的重链和轻链基因的dna分子。将所得dna分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞。然后，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本发明的抗体。本发明的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得(参见morimotoetal.,j.biochem.biophys.methods24:107-117(1992)andbrennanetal.,science229:81(1985))。另外，这些抗原结合片段也可以直接由重组宿主细胞产生(reviewedinhudson,curr.opin.immunol.11:548-557(1999)；littleetal.,immunol.today,21:364-370(2000))。比如，fab’片段可以直接从宿主细胞中获得；可以将fab’片段化学偶联形成f(ab’)2片段(carteretal.,bio/technology,10:163-167(1992))。另外，fv、fab或f(ab’)2片段也可以直接从重组宿主细胞培养液中直接分离得到。本领域的普通技术人员完全知晓制备这些抗原结合片段的其它技术。因此，在另一个方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区。在另一个方面，本发明提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体)，其包含本发明的分离的核酸分子。在某些优选的实施方案中，本发明的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体等。在某些优选的实施方案中，所述载体能够在受试者(例如哺乳动物，例如人)体内表达本发明的抗体或其抗原结合片段。在另一个方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含本发明的分离的核酸分子或本发明的载体。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。在某些优选的实施方案中，本发明的宿主细胞是哺乳动物细胞，例如cho(例如cho-k1、cho-s、chodg44)。在另一个方面，提供了制备本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养本发明的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。治疗方法和药物组合物本发明的抗体或其抗原结合片段可用于体外或在受试者体内抑制和/或阻断由pd-1结合pd-l1介导的细胞内信号传导，提高免疫细胞活性，增强免疫应答，以及用于预防和/或治疗肿瘤或感染，或者用作免疫佐剂。因此，在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其含有本发明的抗体或其抗原结合片段或者本发明的缀合物，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在某些优选的实施方案中，所述药物组合物还可以包含另外的药学活性剂。在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂是具有抗肿瘤活性的药物，例如另外的免疫检查点抑制剂、溶瘤病毒、化学治疗剂、抗血管生成药物、抗代谢药物、靶向肿瘤药物、免疫刺激剂等。在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂是用于治疗感染的药物，例如抗病毒剂、抗真菌剂、抗细菌剂、免疫刺激剂等。在某些优选的实施方案中，在所述药物组合物中，本发明的抗体或其抗原结合片段或者缀合物与所述另外的药学活性剂作为分离的组分或作为同一组合物的组分提供。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段或者缀合物与所述另外的药学活性剂可以同时、分开或相继施用。在某些示例性实施方案中，所述药物包含无菌可注射液体(如水性或非水性悬浮液或溶液)。在某些示例性实施方案中，此类无菌可注射液体选自注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。在另一个方面，本发明涉及本发明的抗体或其抗原结合片段或者缀合物在制备药物中的用途，所述药物用于：(1)在体外或受试者(例如人)体内提高免疫细胞(例如t细胞)活性；(2)在受试者(例如人)中增强免疫应答(例如t细胞介导的免疫应答)；(3)在受试者(例如人)中治疗肿瘤；或(4)在受试者(例如人)中治疗感染。在某些优选的实施方案中，所述肿瘤是具有微卫星高度不稳定性(msi-h)和/或错配修复缺陷(dmmr)的肿瘤。在另一个方面，本发明提供了一种免疫原性组合物，其含有本发明的抗体或其抗原结合片段，以及免疫原。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段作为佐剂。在某些优选的实施方案中，所述免疫原选自与肿瘤相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、肿瘤细胞、由所述抗原致敏的树突状细胞，及其任意组合。在某些优选的实施方案中，所述免疫原选自与病原体(例如，病毒)相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、灭活或减毒的病原体、由所述抗原致敏的树突状细胞，及其任意组合。在某些优选的实施方案中，所述免疫原性组合物还包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。在某些优选的实施方案中，所述免疫原性组合物包含稳定剂。某些优选的实施方案中，在所述免疫原性组合物中，本发明的抗体或其抗原结合片段与所述免疫原作为分离的组分或作为同一组合物的组分提供。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段与所述免疫原可以同时、分开或相继施用。在另一个方面，本发明涉及本发明的抗体或其抗原结合片段用作佐剂的用途，或者，在制备免疫原性组合物中的用途，所述免疫原性组合物用于在受试者中增强免疫应答(例如，t细胞介导的免疫应答)；其中，所述免疫原性组合物包含本发明的抗体或其抗原结合片段以及免疫原。在某些优选的实施方案中，所述免疫原选自与肿瘤相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、肿瘤细胞、由所述抗原致敏的树突状细胞，及其任意组合。在此类实施方案中，所述免疫原性组合物用于在受试者中预防和/或治疗肿瘤。在某些优选的实施方案中，所述免疫原选自与病原体(例如，病毒)相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、灭活或减毒的病原体、由所述抗原致敏的树突状细胞，及其任意组合。在此类实施方案中，所述免疫原性组合物用于在受试者中预防和/或治疗感染。在某些优选的实施方案中，所述免疫原性组合物还包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。在某些优选的实施方案中，所述免疫原性组合物包含稳定剂。在另一个方面，本发明提供了一种在体外提高免疫细胞(例如t细胞)活性的方法，所述方法包括将所述免疫细胞与本发明的抗体或其抗原结合片段接触的步骤。此类方法可以用于治疗目的，或非治疗目的。在某些优选的实施方案中，可使用任何适宜的指示物来测量免疫细胞的活性。此类适宜的指示物的非限制性实例包括：在本发明的抗体或其抗原结合片段存在的条件下，免疫细胞(例如t细胞)的细胞因子(例如，il-2、ifn-γ等)分泌水平、增殖活性、和/或活化标记(例如，cd25、cd69等)表达水平增加。在某些优选的实施方案中，所述方法用于治疗肿瘤。在此类实施方案中，通过上述方法获得的免疫细胞可以过继转移到受试者中以治疗肿瘤。在本发明的抗体或其抗原结合片段存在下进行体外活化可预期提高过继转移的免疫细胞的活性，从而有利于这些过继转移的免疫细胞在受试者体内的肿瘤杀伤作用。在某些优选的实施方案中，所述免疫细胞是肿瘤浸润性淋巴细胞(例如，肿瘤浸润性t细胞)。在某些优选的实施方案中，所述方法还包括将所述免疫细胞与另外的药学活性剂接触的步骤，所述另外的药学活性剂可以选自免疫刺激性细胞因子。在某些示例性实施方案中，所述另外的药学活性剂选自例如il-2、il-3、il-12、il-15、il-18、ifn-γ、il-10、tgf-β、gm-csf，及其任意组合。在某些优选的实施方案中，所述免疫细胞为t细胞，例如细胞毒性t细胞(ctl)、抗原特异性t细胞或肿瘤浸润性t细胞(til-t)。在某些示例性实施方案中，所述免疫细胞为肿瘤浸润性淋巴细胞(例如，肿瘤浸润性t细胞)。在另一个方面，本发明提供了一种在受试者中提高免疫细胞活性和/或增强免疫应答的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体(或其抗原结合片段)、本发明的缀合物、本发明的药物组合物或本发明的免疫原性组合物。在某些优选的实施方案中，所述免疫应答是t细胞介导的免疫应答。在某些优选的实施方案中，所述方法用于预防和/或治疗肿瘤。在此类实施方案中，所述受试者患有肿瘤。在某些优选的实施方案中，所述肿瘤是具有微卫星高度不稳定性(msi-h)和/或错配修复缺陷(dmmr)的肿瘤。在某些优选的实施方案中，所述方法用于预防和/或治疗感染。在此类实施方案中，所述受试者患有感染。在某些优选的实施方案中，所述感染是病毒感染，例如慢性病毒感染。在某些优选的实施方案中，所述免疫细胞为t细胞，例如细胞毒性t细胞(ctl)、抗原特异性t细胞或肿瘤浸润性t细胞(til-t)。在某些示例性实施方案中，所述免疫细胞为肿瘤浸润性淋巴细胞，例如肿瘤浸润性t细胞。在另一个方面，本发明提供了一种用于在受试者(例如人)中预防和/或治疗肿瘤的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体(或其抗原结合片段)、本发明的缀合物、本发明的药物组合物或本发明的免疫原性组合物。在某些优选的实施方案中，将本发明的抗体(或其抗原结合片段)或缀合物与另外的具有抗肿瘤活性的药物联合使用。这种另外的具有抗肿瘤活性的药物可以在施用抗体(或其抗原结合片段)或缀合物之前、同时或之后施用。在某些优选的实施方案中，将本发明的抗体(或其抗原结合片段)、缀合物、药物组合物或免疫原性组合物与额外的疗法组合施用。这种额外的疗法可以是已知用于肿瘤的任何疗法，例如手术、化学治疗、放射治疗、靶向治疗、免疫治疗、激素治疗、基因治疗或姑息治疗。这种额外的疗法可以在施用本发明的抗体(或其抗原结合片段)、缀合物、药物组合物或免疫原性组合物之前、同时或之后施用。在另一个方面，本发明提供了一种用于在受试者(例如人)中预防和/或治疗感染的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体(或其抗原结合片段)、本发明的缀合物、本发明的药物组合物或本发明的免疫原性组合物。在某些优选的实施方案中，将本发明的抗体(或其抗原结合片段)或缀合物与另外的用于治疗感染的药物联合使用。这种另外的用于治疗感染的药物可以在施用抗体(或其抗原结合片段)或缀合物之前、同时或之后施用。在某些优选的实施方案中，将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与疫苗联合使用。在某些优选的实施方案中，所述疫苗可以是与病原体相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、灭活或减毒的病原体、由所述抗原致敏的树突状细胞，或其任意组合。在某些优选的实施方案中，所述病原体可以是病毒(例如，甲、乙、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、人乳头状瘤病毒或疱疹病毒)、真菌、细菌或寄生虫。在本发明中，所述肿瘤的非限制性实例包括黑色素瘤(例如，转移性恶性黑素瘤)、乳腺癌、肾癌(例如，透明细胞癌)、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、结肠癌、食道癌、头颈鳞状细胞癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤及血液学恶性肿瘤(例如，淋巴瘤、白血病)等。之前已报道，微卫星不稳定性(microsatelliteinstability,msi)是一种与dna错配修复(mismatchrepair,mmr)基因的失活性改变相关的肿瘤表型，其存在于多达24种类型的肿瘤中。msi通常表现为与正常组织相比，肿瘤组织中某一微卫星由于重复单位的插入或缺失造成该微卫星的长度发生任何改变。越来越多的证据表明免疫检查点抑制对于微卫星不稳定性或错配修复缺陷患者群体是有益的。目前，fda已批准pd-1抗体(药品名：pembrolizumab，商品名：keytruda)用于确定具有微卫星高度不稳定性(msi-h)或错配修复缺陷(dmmr)的不可切除或转移性实体瘤患者，而与该肿瘤起源的身体部位及组织类型无关。根据美国国家癌症研究所(nci)制定的msi检测分类标准(bolandcr,etal.cancerres.1998nov15；58(22):5248-57.)，对于5个微卫星标准位点，bat26、bat25、d2s123、d5s346、d17s250，与正常组织比较，如果肿瘤组织包含2个及以上位点不稳定，则判定为微卫星高不稳定(msi-h)，即错配修复功能缺陷(dmmr)；如果小于2个位点不稳定或无位点不稳定，则判定为微卫星低不稳定(msi-l)或微卫星稳定(mss)，即错配修复功能完整(pmmr)。用于检测微卫星高度不稳定性(msi-h)或错配修复缺陷(dmmr)的方法是本领域技术人员已知的，例如通过pcr或二代测序来检测肿瘤组织中上述5个标准微卫星位点的长度改变，如有2个或以上位点不稳定，则判定为msi-h。另外，也可通过免疫组化(ich)检测肿瘤组织中mlh1、msh2、msh6、psm2的表达情况，如果四个蛋白均表达阳性，则判定为pmmr，任一蛋白阴性表达，则判定为dmmr。因此，在某些优选的实施方案中，本发明所述的肿瘤是具有微卫星高度不稳定性(msi-h)和/或错配修复缺陷(dmmr)的肿瘤。在某些优选的实施方案中，所述肿瘤选自结肠腺癌、食管癌、直肠腺癌、胃腺癌、子宫体及子宫内膜癌等。在本发明中，所述感染是指病毒、细菌、真菌、寄生虫等任何病原微生物所导致的任何感染。所述病毒的非限制性实例包括甲、乙、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、人乳头状瘤病毒或疱疹病毒等；所述细菌的非限制性实例包括衣原体、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌等；所述真菌的非限制性实例包括毛癣菌属、表皮癣菌属、小孢子癣菌属、白假丝酵母菌、新生隐球菌等；所述寄生虫的非限制性实例包括疟原虫、血吸虫、杜氏利什曼原虫、丝虫、钩虫等。本发明的抗体或其抗原结合片段、本发明的缀合物、本发明的药物组合物或者本发明的免疫原性组合物可以配制成医学领域已知的任何剂型，例如，片剂、丸剂、混悬剂、乳剂、溶液、凝胶剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、锭剂、栓剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、吸入剂、喷雾剂等。优选剂型取决于预期的给药方式和治疗用途。本发明的药物组合物应当是无菌的并在生产和储存条件下稳定。一种优选的剂型是注射剂。此类注射剂可以是无菌注射溶液。例如，可通过下述方法来制备无菌注射溶液：在适当的溶剂中掺入必需剂量的本发明的重组蛋白，以及任选地，同时掺入其他期望的成分(包括但不限于，ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，等渗剂、防腐剂、稀释剂，或其任何组合)，随后过滤除菌。此外，可以将无菌注射溶液制备为无菌冻干粉剂(例如，通过真空干燥或冷冻干燥)以便于储存和使用。此类无菌冻干粉剂可在使用前分散于合适的载体中，例如注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。此外，本发明的抗体或其抗原结合片段或本发明的缀合物可以以单位剂量形式存在于药物组合物或免疫原性组合物中，以便于施用。本发明的抗体或其抗原结合片段、缀合物、药物组合物或免疫原性组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法来施用，包括但不限于，口服、口腔、舌下、眼球、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、内胞浆网槽内、腹股沟、膀胱内、局部(如，粉剂、药膏或滴剂)，或鼻腔途径。但是，对于许多治疗用途而言，优选的给药途径/方式是胃肠外给药(例如静脉注射或推注，皮下注射，腹膜内注射，肌内注射)。技术人员应理解，给药途径和/或方式将根据预期目的而发生变化。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段、缀合物、药物组合物或免疫原性组合物通过静脉注射或推注给予。本发明的药物组合物或免疫原性组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或其抗原结合片段或缀合物。“预防有效量”是指，足以预防，阻止，或延迟疾病的发生的量。“治疗有效量”是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。本发明的抗体或其抗原结合片段的治疗有效量可根据如下因素发生变化：待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。在本发明中，可调整给药方案以获得最佳目的反应(例如治疗或预防反应)。例如，可以单次给药，可以在一段时间内多次给药，或者可以随治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。本发明的抗体或其抗原结合片段的治疗或预防有效量的典型非极限范围是0.01～100mg/kg，例如0.1～100mg/kg，0.1～50mg/kg，或1～50mg/kg。应注意的是，剂量可随需要治疗的症状的类型和严重性不同而发生变化。此外，本领域技术人员理解，对于任一特定患者，特定的给药方案应根据患者需要和医生的专业评价而随时间调整；此处给出的剂量范围只用于举例说明目的，而不限定本发明药物组合物或免疫原性组合物的使用或范围。在本发明中，所述受试者可以为哺乳动物，例如人。检测方法和试剂盒本发明的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合pd-1，从而可用于检测pd-1在样品中的存在或其水平。因此，在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段带有可检测的标记。在一个优选的实施方案中，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别本发明的抗体或其抗原结合片段。优选地，所述第二抗体还包括可检测的标记。在本发明中，所述可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。特别优选的是，此类标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。这类标记是本领域熟知的，包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3h、125i、35s、14c或32p)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(fitc)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(tritc)、藻红蛋白(pe)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如cy7、alexa750))、发光物质(例如化学发光物质，如吖啶酯类化合物)、磁珠(例如，)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。教导该标记物的使用的专利包括，但不限于，美国专利3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；及4,366,241(全部通过引用并入本文)。本发明中涵盖的标记物可通过本领域已知的方法检测。例如，放射性标记可使用摄影胶片或闪烁计算器检测，荧光标记物可使用光检测器检测，以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测，及测热标记物通过简单可视化着色标记物来检测。在某些实施方案中，可通过不同长度的接头将如上所述的可检测的标记连接至本发明的抗体或其抗原结合片段，以降低潜在的位阻。在另一个方面，本发明提供了检测pd-1在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段的步骤。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段还带有可检测的标记。在另一个优选的实施方案中，所述方法还包括，使用带有可检测的标记的试剂来检测本发明的抗体或其抗原结合片段。所述方法可以用于诊断目的，或者非诊断目的(例如，所述样品是细胞样品，而非来自患者的样品)。在某些优选的实施方案中，所述pd-1是人pd-1。在另一个方面，提供了本发明的抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测pd-1在样品中的存在或其水平。在某些优选的实施方案中，所述pd-1是人pd-1。术语定义在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、生物化学、核酸化学、免疫学实验室等操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条轻链(lc)和一条重链(hc))组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ(kappa)和λ(lambda)轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为igm、igd、igg、iga和ige。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“j”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“d”区。各重链由重链可变区(vh)和重链恒定区(ch)组成。重链恒定区由3个结构域(ch1、ch2和ch3)组成。各轻链由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，如可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(c1q)的结合。vh和vl区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(cdr))，其间散布有较保守的称为构架区(fr)的区域。各vh和vl由按下列顺序：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4从氨基末端至羧基末端排列的3个cdr和4个fr组成。各重链/轻链对的可变区(vh和vl)分别形成抗原结合部位。氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循kabat,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1987and1991))，或chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901-917；chothia等人(1989)nature342:878-883的定义。如本文中所使用的，术语“互补决定区”或“cdr”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。这些氨基酸残基的精确边界可根据本领域已知的各种编号系统进行定义，例如可按照kabat编号系统(kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.,1991)、chothia编号系统(chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901-917；chothia等人(1989)nature342:878-883)或imgt编号系统(lefrancetal.,dev.comparat.immunol.27:55-77,2003)中的定义。对于给定的抗体，本领域技术人员将容易地鉴别各编号系统所定义的cdr。并且，不同编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(例如，可参见lefrancetal.,dev.comparat.immunol.27:55-77,2003)。在本发明中，本发明的抗体或其抗原结合片段含有的cdr可根据本领域已知的各种编号系统确定。在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段含有的cdr优选地通过kabat、chothia或imgt编号系统确定。在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段含有的cdr优选地通过kabat编号系统确定。如本文中所使用的，术语“构架区”或“fr”残基是指，抗体可变区中除了如上定义的cdr残基以外的那些氨基酸残基。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，igg(例如，igg1，igg2，igg3或igg4亚型)，iga1，iga2，igd，ige或igm抗体。如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。通常参见，fundamentalimmunology,ch.7(paul,w.,ed.,第2版，ravenpress,n.y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组dna技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。抗原结合片段的非限制性实例包括fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、dab和互补决定区(cdr)片段、单链抗体(例如，scfv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)、线性抗体(linearantibody)、纳米抗体(技术来自domantis)、结构域抗体(技术来自ablynx)、probody和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。工程改造的抗体变体综述于holliger等,2005；natbiotechnol,23:1126-1136中。如本文中所使用的，术语“全长抗体”意指，由两条“全长重链”和两条“全长轻链”组成的抗体。其中，“全长重链”是指这样的多肽链，其在n端到c端的方向上由重链可变区(vh)、重链恒定区ch1结构域、铰链区(hr)、重链恒定区ch2结构域、重链恒定区ch3结构域组成；并且，当所述全长抗体为ige同种型时，任选地还包括重链恒定区ch4结构域。优选地，“全长重链”是在n端到c端方向上由vh、ch1、hr、ch2和ch3组成的多肽链。“全长轻链”是在n端到c端方向上由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成的多肽链。两对全长抗体链通过在cl和ch1之间的二硫键和两条全长重链的hr之间的二硫键连接在一起。本发明的全长抗体可以来自单一物种，例如人；也可以是嵌合抗体或人源化抗体。本发明的全长抗体包含分别由vh和vl对形成的两个抗原结合部位，这两个抗原结合部位特异性识别/结合相同的抗原。如本文中所使用的，术语“fd片段”意指由vh和ch1结构域组成的抗体片段；术语“dab片段”意指由vh结构域组成的抗体片段(ward等人,nature341:544546(1989))；术语“fab片段”意指由vl、vh、cl和ch1结构域组成的抗体片段；术语“f(ab’)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个fab片段的抗体片段；术语“fab’片段”意指还原连接f(ab’)2片段中两个重链片段的二硫键后所获片段，由一条完整的轻链和重链的fd片段(由vh和ch1结构域组成)组成。如本文中所使用的，术语“fv片段”意指由抗体的单臂的vl和vh结构域组成的抗体片段。fv片段通常被认为是，能形成完整的抗原结合位点的最小抗体片段。一般认为，六个cdr赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即便是一个可变区(例如fd片段，其仅仅含有三个对抗原特异的cdr)也能够识别并结合抗原，尽管其亲和力可能低于完整的结合位点。如本文中所使用的，术语“fc片段”意指，由抗体的第一重链的第二、第三恒定区与第二重链的第二、第三恒定区经二硫键结合而形成的抗体片段。抗体的fc片段具有多种不同的功能，但不参与抗原的结合。如本文中所使用的，术语“scfv”是指，包含vl和vh结构域的单个多肽链，其中所述vl和vh通过接头(linker)相连(参见，例如,bird等人,science242:423-426(1988)；huston等人,proc.natl.acad.sci.usa85:5879-5883(1988)；和pluckthun，thepharmacologyofmonoclonalantibodies，第113卷，roseburg和moore编，springer-verlag，纽约，第269-315页(1994))。此类scfv分子可具有一般结构：nh2-vl-接头-vh-cooh或nh2-vh-接头-vl-cooh。合适的现有技术接头由重复的ggggs氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(ggggs)4的接头，但也可使用其变体(holliger等人(1993)，proc.natl.acad.sci.usa90:6444-6448)。可用于本发明的其他接头由alfthan等人(1995)，proteineng.8:725-731，choi等人(2001)，eur.j.immunol.31:94-106，hu等人(1996)，cancerres.56:3055-3061，kipriyanov等人(1999)，j.mol.biol.293:41-56和roovers等人(2001)，cancerimmunol.描述。在一些情况下，scfv的vh与vl之间还可以存在二硫键。如本文中所使用的，术语“di-scfv”是指，由两个scfv连接形成的抗体片段。如本文中所使用的，术语“双抗体”意指，其vh和vl结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如,holligerp.等人,proc.natl.acad.sci.usa90:6444-6448(1993)，和poljakr.j.等人,structure2:1121-1123(1994))。如本文中所使用的，术语“probody”具有本领域技术人员通常理解的含义，其是指一种经掩蔽的抗体，其在健康组织中保持惰性，但在疾病环境中特异性活化(例如，经由疾病环境中富集或特有的蛋白酶的蛋白酶裂解)。其详细教导可参见，例如desnoyers等人,sci.transl.med.,5:207ra144,2013。可对本文所描述的任何抗体或其抗原结合部分使用类似掩蔽技术。上述各个抗体片段均保持了特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组dna技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本发明提供的抗体)获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”、“单抗”、“mab”具有相同的含义且可互换使用可互换，其是指，来自一群高度同源的抗体分子中的一个抗体或抗体的一个片段，也即，除可能自发出现的自然突变外，一群完全相同的抗体分子。单抗对抗原上的单一表位具有高特异性。多克隆抗体是相对于单克隆抗体而言的，其通常包含至少2种或更多种的不同抗体，这些不同的抗体通常识别抗原上的不同表位。此外，修饰语“单克隆”仅表明该抗体的特征为从高度同源的抗体群中获得，不能理解为需要通过任何特定方法来制备所述抗体。本发明的单克隆抗体可以通过多种技术进行制备，例如杂交瘤技术(参见，例如kohler等人.nature,256:495,1975)，重组dna技术(参见，例如美国专利申请4,816,567)，或噬菌体抗体库技术(参见，例如clackson等.nature352：624-628,1991，或marks等.j.mol.biol.222：581-597,1991)。抗体可通过公知的技术，例如使用蛋白a或蛋白g的亲和层析进行纯化。随后或作为替代，可将特异性抗原(该抗体识别的靶分子)或其抗原表位固定在柱上，并通过免疫亲合层析法来纯化免疫特异性抗体。免疫球蛋白的纯化可参考例如d.wilkinson(thescientist,publishedbythescientist,inc.,philadelphiapa.,vol.14,no.8(apr.17,2000),pp.25-28)。如本文中所使用的，术语“嵌合抗体(chimericantibody)”是指，这样的抗体，其轻链或/和重链的一部分源自一个抗体(其可以源自某一特定物种或属于某一特定抗体类或亚类)，且轻链或/和重链的另一部分源自另一个抗体(其可以源自相同或不同的物种或属于相同或不同的抗体类或亚类)，但无论如何，其仍保留对目标抗原的结合活性(u.s.p4,816,567tocabillyetal.；morrisonetal.,proc.natl.acad.sci.usa,81:68516855(1984))。例如，术语“嵌合抗体”可包括这样的抗体(例如人鼠嵌合抗体)，其中抗体的重链和轻链可变区来自第一抗体(例如鼠源抗体)，而抗体的重链和轻链可变区来自第二抗体(例如人抗体)。如本文中所使用的，术语“人源化抗体”是指，经基因工程改造的非人源抗体，其氨基酸序列经修饰以提高与人源抗体的序列的同源性。通常而言，人源化抗体的全部或部分cdr区来自于非人源抗体(供体抗体)，全部或部分的非cdr区(例如，可变区fr和/或恒定区)来自于人源免疫球蛋白(受体抗体)。人源化抗体通常保留了供体抗体的预期性质，包括但不限于，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力、增强免疫应答的能力等。供体抗体可以是有预期性质(例如，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物(例如，食蟹猴)抗体。人源化抗体既能够保留非人源供体抗体(例如鼠源抗体)的预期性质，又能够有效降低非人源供体抗体(例如鼠源抗体)在人受试者中的免疫原性，因此，是特别有利的。然而，由于供体抗体的cdr与受体抗体的fr之间的匹配问题，人源化抗体的预期性质(例如，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)通常低于非人源供体抗体(例如鼠源抗体)。在本发明中，为了使人源化抗体尽可能保留供体抗体的性质(包括例如，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)，本发明的人源化抗体中构架区(fr)可以既包含人源受体抗体的氨基酸残基，也包含相应的非人源供体抗体的氨基酸残基。在本申请中，本发明抗体的预期性质包括：(1)特异性识别/结合pd-1(特别是人pd-1)；(2)阻断pd-1与pd-l1的结合的能力；(3)抑制和/或阻断由pd-1结合pd-l1介导的细胞内信号传导的能力；(4)提高免疫细胞(特别是t细胞，例如抗原特异性t细胞)活性的能力；(5)增强免疫应答(特别是t细胞介导的免疫应答)的能力；(6)预防和/治疗肿瘤的能力；(7)预防和/治疗感染的能力。本发明的人源化抗体保留了亲本抗体(鼠源抗体或鼠-人嵌合抗体)的上述预期性质中的一项或多项。本发明的嵌合抗体或人源化抗体可以根据上述制备的鼠单克隆抗体的序列进行制备。编码重链和轻链的dna可以从目标鼠杂交瘤中获得，并且使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。为制备嵌合抗体，可使用本领域已知的方法将鼠免疫球蛋白可变区连接至人免疫球蛋白恒定区(参见例如cabilly等人的美国专利no.4,816,567)。例如，将编码vh的dna可操作的连接至编码重链恒定区的另一dna分子以获得全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如kabat,e.a.等人(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,fifthedition,u.s.departmentofhealthandhumanservices,nihpublicationno.91-3242)，包含这些区的dna片段可以通过标准pcr扩增获得。重链恒定区可以是igg1、igg2、igg3、igg4、iga、ige、igm或igd恒定区，但是通常优选为igg1或igg4恒定区。例如，将编码vl的dna可操作的连接至编码轻链恒定区cl的另一dna分子以获得全长轻链基因(以及fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如kabat，e.a.等人(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，fifthedition，u.s.departmentofhealthandhumanservices，nihpublicationno.91-3242)，包含这些区的dna片段可以通过标准pcr扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区，但通常优选为κ恒定区。为制备人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠cdr区插入人源框架序列(参见winter的美国专利no.5,225,539；queen等人的美国专利nos.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370；以及lo,benny,k.c.,editor,inantibodyengineering:methodsandprotocols,volume248,humanapress,newjersey,2004)。或者，还可以利用转基因动物，其能够在免疫后不产生内源性免疫球蛋白、并且能够产生完整人抗体库。例如，已有报道在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(jh)基因的纯合缺失可以完全抑制了内源性抗体产生，然后将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到所述种系突变小鼠中将导致该小鼠在遇到抗原刺激时产生人抗体(参见例如，jakobovits等，1993，proc.natl.acad.sci.usa90：2551；jakobovits等，1993，nature362：255-258；bruggermann等，1993，yearinimmunology7：33；和duchosal等，1992，nature355：258)。上述转基因动物的非限制性实例包括，humab小鼠(medarex,inc.)，其含有编码未重排的人重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微型基因座(miniloci)，加之使内源μ和κ链基因座失活的靶向突变(参见例如lonberg等人(1994)nature368(6474):856-859)；或携带人重链转基因和人轻链转染色体的“km小鼠tm”(参见专利申请wo02/43478)。其他抗体人源化改造的方法还包括噬菌体展示技术(hoogenboom等，1991，j.mol.biol.227：381；marks等，j.mol.biol.1991，222：581-597；vaughan等，1996，naturebiotech14：309)。如本文中所使用的，术语“人源化程度”是用于评价人源化抗体中非人源氨基酸残基的数量的指标。人源化抗体的人源化程度例如可通过下述来进行计算：人源化程度＝(fr区氨基酸个数-fr区保留的非人源氨基酸个数)/fr区氨基酸个数×100％。如本文中所使用的，术语“胚系抗体基因(germlineantibodygene)”或“胚系抗体基因片段(germlineantibodygenesegment)”是指，存在于生物体的基因组中的编码免疫球蛋白的序列，其没有经历过能够导致表达特异性免疫球蛋白的遗传学重排及突变的成熟过程。在本发明中，表述“重链胚系基因”是指，编码免疫球蛋白重链的胚系抗体基因或基因片段，其包括v基因(variable)、d基因(diversity)、j基因(joining)和c基因(constant)；类似地，表述“轻链胚系基因”是指，编码免疫球蛋白轻链的胚系抗体基因或基因片段，其包括v基因(variable)、j基因(joining)和c基因(constant)。在本发明中，由所述胚系抗体基因或胚系抗体基因片段所编码的氨基酸序列也称为“胚系序列(germlinesequence)”。胚系抗体基因或胚系抗体基因片段及其相应的胚系序列是本领域技术人员熟知的，并且可从专业数据库(例如，imgt、unswig、ncbi或vbase2)获得或查询。如本文中所使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以该相互作用的平衡解离常数(kd)表示。在本发明中，术语“kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体-抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。在某些实施方式中，特异性结合某抗原的抗体(或对某抗原具有特异性的抗体)是指，抗体以小于约10-9m，例如小于约10-9m、10-10m、10-11m或10-12m或更小的亲和力(kd)结合该抗原。两分子间的特异性结合性质可使用本领域公知的方法进行测定，例如使用表面等离子体共振术(spr)在biacore仪中测定。如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac)；噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如s2果蝇细胞或sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，cho细胞，cos细胞，nso细胞，hela细胞，bhk细胞，hek293细胞或人细胞等的动物细胞。如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个dna分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，dna序列ctgact和caggtt共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如align程序(dnastar,inc.)方便地进行的needleman等人(1970)j.mol.biol.48：443-453的方法来实现。还可使用已整合入align程序(版本2.0)的e.meyers和w.miller(comput.applbiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用pam120权重残基表(weightresiduetable)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入gcg软件包(可在www.gcg.com上获得)的gap程序中的needleman和wunsch(jmoibiol.48:444-453(1970))算法，使用blossum62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gapweight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。如本文中所使用的，术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和pcr介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见，例如，brummell等人，biochem.32:1180-1187(1993)；kobayashi等人proteineng.12(10):879-884(1999)；和burks等人proc.natlacad.setusa94:412-417(1997)，其通过引用并入本文)。本文涉及的二十个常规氨基酸的编写遵循常规用法。参见例如，immunology-asynthesis(2ndedition,e.s.golubandd.r.gren,eds.,sinauerassociates,sunderland,mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。在本发明中，术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用a或ala表示。如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如remington'spharmaceuticalsciences.editedbygennaroar,19thed.pennsylvania:mackpublishingcompany,1995)，并且包括但不限于：ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，稀释剂，维持渗透压的试剂，延迟吸收的试剂，防腐剂。例如，ph调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如tween-80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、nacl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水，水性缓冲液(如缓冲盐水)，醇和多元醇(如甘油)等。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如硫柳汞，2-苯氧乙醇，对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。稳定剂具有本领域技术人员通常理解的含义，其能够稳定药物中的活性成分的期望活性，包括但不限于谷氨酸钠，明胶，spga，糖类(如山梨醇，甘露醇，淀粉，蔗糖，乳糖，葡聚糖，或葡萄糖)，氨基酸(如谷氨酸，甘氨酸)，蛋白质(如干燥乳清，白蛋白或酪蛋白)或其降解产物(如乳白蛋白水解物)等。在某些示例性实施方案中，所述药学上可接受的载体或赋形剂包括无菌可注射液体(如水性或非水性悬浮液或溶液)。在某些示例性实施方案中，此类无菌可注射液体选自注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。如本文中所使用的，术语“预防”是指，为了阻止或延迟疾病或病症或症状(例如，肿瘤或感染)在受试者体内的发生而实施的方法。如本文中所使用的，术语“治疗”是指，为了获得有益或所需临床结果而实施的方法。为了本发明的目的，有益或所需的临床结果包括但不限于，减轻症状、缩小疾病的范围、稳定(即，不再恶化)疾病的状态，延迟或减缓疾病的发展、改善或减轻疾病的状态、和缓解症状(无论部分或全部)，无论是可检测或是不可检测的。此外，“治疗”还可以指，与期望的存活期相比(如果未接受治疗)，延长存活期。如本文中使用的，术语“受试者”是指哺乳动物，例如灵长类哺乳动物，例如人。在某些实施方式中，所述受试者(例如人)患有肿瘤或感染，或者，具有患有上述疾病的风险。如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病(例如，肿瘤或感染)有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病(例如，肿瘤或感染)的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。如本文中所使用的，术语“免疫细胞”包括具有造血的起源并在免疫应答中起作用的细胞，例如淋巴细胞，例如b细胞和t细胞；天然杀伤细胞；髓样细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、嗜曙红细胞、肥大细胞、嗜碱细胞和粒细胞。在某些优选的实施方案中，所述免疫细胞是t细胞，例如细胞毒性t细胞(ctl)、抗原特异性t细胞或肿瘤浸润性t细胞(til-t)。如本文中所使用的，术语“免疫应答”是指，免疫细胞(例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞或粒细胞)以及由免疫细胞或肝脏所产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子、以及补体)的作用，该作用导致对侵入性病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌细胞、或者在自身免疫或病理炎症情况下的正常人类细胞或组织的选择性损害、破坏或将它们从人体中清除。在某些优选的实施方案中，所述免疫应答是指t细胞介导的免疫应答，该应答产生于当该t细胞特异的抗原对该t细胞的刺激之时。由t细胞在抗原特异性刺激时产生的反应的非限制性实例包括t细胞的增殖以及细胞因子(例如il-2)的产生。发明的有益效果与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下有益效果：(1)本发明的抗体不仅能够特异性识别/结合pd-1，阻断pd-1与pd-l1的结合，并且能够在体外/体内增强免疫细胞活性，刺激免疫应答。因此，本发明的抗体具有用于预防和/或治疗肿瘤或感染的潜力。(2)本发明的抗体(特别是人源化抗体)不仅保留了亲本鼠源抗体的功能和性质，从而具有用于预防和治疗肿瘤或感染的潜力；而且具有较高的人源化程度，从而可安全地施用给人受试者，而不引发免疫原性反应。尤其令人意外的是，本发明的抗体相比于商业化抗pd-1抗体具有明显提高的阻断活性及诱导t细胞活化的能力。因此，本发明的抗体(特别是人源化抗体)具有重大的临床价值。下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得可实施。附图说明图1a示意性地示出了elisa法检测抗体与pd-1/his之间结合活性的原理。图1b示意性地示出了facs法检测抗体与细胞表面所表达的人pd-1之间结合活性的原理。图1c示意性地示出了elisa法检测抗体阻断人pd-1/his与pd-l1/fc结合的能力的原理。图2显示了实施例1中通过elisa法检测鼠源抗体(16f2、10d6、48g7和17d5)与人pd-1及鼠pd-1的结合活性的检测结果。图3显示了实施例2中通过facs法检测鼠源抗体(16f2、10d6、48g7和17d5)与细胞表面表达的人pd-1的结合活性的检测结果。图4显示了实施例2中通过cleia法检测鼠源抗体(16f2、10d6、48g7和17d5)阻断人pd-1/his和pd-l1/biotin之间结合能力的检测结果。control是指以pbs代替抗pd-1单抗的阳性对照组。图5显示了实施例2中鼠源抗体(16f2、10d6、48g7和17d5)对人pd-1/his和pd-l1/biotin之间结合的抑制率曲线。control是指以pbs代替抗pd-1单抗的阳性对照组。图6显示了实施例4中鼠源抗体(16f2、10d6、48g7和17d5)诱导il-2分泌水平的检测结果，其中control是指未加入抗pd-1抗体的阴性对照组。图7显示了实施例5中通过elisa法检测嵌合抗体17d5-cab和48g7-cab的抗原结合活性的检测结果。图8显示了实施例6中通过cleia法检测人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2的结合活性的检测结果。其中，pem是指pembrolizumab，niv是指nivolumab。图9显示了实施例6中通过cleia法检测人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2的阻断活性的检测结果。其中，pem是指pembrolizumab，niv是指nivolumab。图10显示了实施例6中人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2诱导il-2分泌水平的检测结果。其中，pem是指pembrolizumab，niv是指nivolumab，control是指未加入抗pd-1抗体的阴性对照组。序列信息本发明涉及的部分序列的信息提供于下面的表1中。表1：序列的描述具体实施方式现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。除非特别指明，本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法，基本上参照j.sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，1989，以及f.m.ausubel等人，精编分子生物学实验指南，第3版，johnwiley&sons,inc.，1995中所述的方法进行；限制性内切酶的使用依照产品制造商推荐的条件。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。实施例1：鼠源抗pd-1单克隆抗体的产生在本实施例中，通过常规杂交瘤融合技术获得抗人pd-1单克隆抗体；利用酶联免疫吸附测定法(elisa)及流式分选法(facs)筛选具有高结合活性的单克隆抗体；利用化学发光酶联免疫测定法(cleia)筛选能高阻断pd-1和pd-l1之间相互作用的单克隆抗体。1.1pd-1表达质粒的构建通过pcr、使用表2所示的引物扩增人全长pd-1序列(genbank：nm_005018.2)，并将其连接入plv载体(addgene公司)中，构建成表达pd-1的质粒，命名为plv-pd-1。另外，通过相同的方法获得表达人全长pd-l1的质粒(命名为plv-pd-l1)，该人全长pd-l1的序列参见genbank：nm_014143.3。表2：引物序列1.2稳定表达pd-1的细胞系的构建利用lipofectamine2000转染试剂将plv-pd-1质粒和包装质粒pspax2(addgene公司，货号12260)和pmd2.g(addgene公司，货号12259)共转染入293t细胞(购买于美国atcc公司，货号crl-3216tm)。48小时后，收集病毒上清过滤收集，将病毒上清感染u-2os(购买于美国atcc公司，货号htb-96)，用含有1μg/ml嘌呤霉素(invitrogen公司，货号a11138-03)的培养基加压筛选稳定表达人pd-1的细胞系。藉由有限稀释法获得单个克隆。最后利用抗pd-1抗体(ebioscience公司，货号16-9989-82)筛选高表达pd-1的u-2os细胞克隆株(以下简称为u-2os/pd-1)用于后续试验。另外，通过相同的方法将plv-pd-l1质粒和包装质粒共转染入293t细胞，然后将病毒上清感染293t细胞，并通过相同的方法获得单个克隆，最后利用抗pd-l1抗体(bd公司，货号558017)筛选高表达pd-l1的293t细胞克隆株(以下简称为293t/pd-l1)用于后续试验。1.3抗原免疫及细胞融合对6周龄的balb/c小鼠(获得自北京维通利华实验动物技术有限公司)采用脾脏免疫注射100μg上述1.1中获得的plv-pd-1质粒，进行初次免疫。第2周将1×106u-2os/pd-1细胞经腹腔注射给初次免疫后的balb/c小鼠。第3周、第4周、第5周和第6周再以相同剂量进行免疫加强，第6周采集血清利用elispot法在u-2os/pd-1细胞上检测多抗血清效价，然后选择效价高的小鼠进行脾脏免疫，注射1×106u-2os/pd-1细胞。三天后，使用标准技术(gefterml,marguliesdh,etal.asimplemethodforpolyethyleneglycol-promotedhybridizationofmousemyelomacells[j].somaticcellgenet,1977,3:231-236)进行细胞融合及筛选。1.4阳性克隆的检测将人pd-1/his蛋白(sinobiologicalinc.,货号10377-h08h)用cb缓冲液稀释，以100ng/孔包被于辐照过的聚苯乙烯96孔板中，封闭液进行封闭后，抽干并于4℃保存备用。将稀释后的融合的杂交骨髓瘤细胞培养液上清加入已包被的板中，37℃反应1h，洗板5次，甩干，加入hrp标记的gam二抗(novus，货号nbp1-73693)，37℃反应0.5h，洗板5次，甩干。加入化学发光显色底物，立即置于酶标仪(安图实验仪器公司，phomo)中进行数据读取。以细胞培养基为阴性对照，凡od值大于阴性对照2倍以上者，初步判定为阳性克隆。1.5单克隆化及抗体表达纯化阳性细胞株可以通过(goding,monoclonalantibodies:principlesandpractice,pp.59-103,academicpress,1996)所描述的标准的有限稀释法进行亚克隆化。取出抗体阳性孔细胞，用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘，细胞含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔，培养7-14天后选择只有一个集落生长的孔，检测培养液抗体与u-2os/pd-1细胞的结合活性。将抗体阳性孔细胞扩大培养并建成克隆株。另外，杂交瘤细胞还可以腹水瘤的形式在动物体内生长。利用传统的免疫球蛋白纯化方法，如蛋白a琼脂糖凝胶、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析等，可以将亚克隆细胞分泌的单抗从细胞培养液、腹水或血清中分离出来。从产生腹水瘤小鼠中收集腹水，3000rpm离心20min去除细胞碎片，上清以0.22μm的一次性滤器去除颗粒物后进行亲和层析纯化，igg抗体用proteina层析介质(gehealthcare，货号17-1279-03)纯化，均严格按照产品说明书的指引在explorer液相色谱纯化系统上完成。纯化后抗体纯度均在95％以上，抗体浓度藉由bradford法测定。1.6鼠源抗pd-1单抗的序列分析按照上述方法共制备获得了4株特异性结合pd-1的鼠源抗体，分别命名为16f2、10d6、48g7和17d5。四株抗体的vh和vl序列如下表3所示。进一步，还使用kabat等人描述的方法(kabat等，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第五版，publichealthservice，美国国立卫生研究院，贝塞斯达、马里兰州(1991)，第647-669页)，确定了四株鼠源单抗的cdr序列(表4)。表3:鼠源抗体轻重链可变区氨基酸序列表4:鼠源抗体cdr的序列1.7elisa法检测pd-1抗体与pd-1/his蛋白的反应性elisa法检测pd-1抗体结合活性的原理如图1a所示。将人pd-1/his蛋白(sinobiologicalinc.,货号10377-h08h)或鼠pd-1/his蛋白(sinobiologicalinc.,货号50124-m03h)用cb缓冲液稀释，以100ng/孔包被于辐照过的聚苯乙烯96孔板中，封闭液进行封闭后，抽干并于4℃保存备用。将经pbs稀释至0.1μg/ml的鼠源抗体(16f2、10d6、48g7和17d5)分别加入已包被的板中，37℃反应1h，洗板5次，甩干，加入hrp标记的二抗，37℃反应0.5h，洗板5次，甩干。加入化学发光显色底物，立即置于酶标仪(安图实验仪器公司，phomo)中进行数据读取。以pbs为阴性对照。结果如图2所示，四株抗人pd-1鼠源抗体(16f2、10d6、48g7和17d5)均能结合人pd-1蛋白，而不与鼠pd-1蛋白结合。实施例2：鼠源抗pd-1单克隆抗体的性质鉴定2.1facs法检测pd-1抗体结合活性facs法检测pd-1抗体结合活性的原理如图1b所示。将待检测的u-2os/pd-1细胞消化，并吹散制成单细胞悬液，离心后用含3％胎牛血清的pbs重悬。细胞悬液经200目的筛网过滤供检测使用，每份细胞样品收集约1×105个细胞。将待检抗体稀释成1μg/ml与上述细胞进行孵育，用fitc标记的山羊抗小鼠igg抗体(sigma公司，货号f9006)及利用流式细胞术在流式细胞仪(bd公司，facsariaii)检测pd-1抗体的结合活性。横坐标表示检测细胞的荧光值。结果如图3所示，四株鼠源的抗人pd-1抗体均与表达pd-1蛋白的u-2os细胞100％结合。阳性对照为商业化抗人pd-1抗体(ebioscience公司，货号16-9989-82)，fitc标记的山羊抗小鼠igg抗体为二抗，阴性对照为pbs。2.2cleia法检测pd-1抗体的阻断活性cleia法检测抗体阻断人pd-1/his和pd-l1/biotin之间结合能力的作用原理图分别如图1c所示。将pd-1/fc蛋白(bpsbioscience公司，货号71106)用cb缓冲液稀释，以100ng/孔包被于辐照过的、不透光的聚苯乙烯96孔板中，封闭液进行封闭后，抽干并于4℃保存备用。将抗pd-1单抗进行梯度稀释，起始浓度60μg/ml，连续3倍稀释七个梯度，即20μg/ml、6.67μg/ml、2.22μg/ml、0.74μg/ml、0.25μg/ml、0.082μg/ml、0.027μg/ml。将稀释成不同梯度的抗pd-1单抗或pbs与100ng/孔生物素化的pd-l1蛋白pd-l1/biotin(bpsbioscience公司，货号71105)加入已包被的板中，待其充分反应后，将未结合的游离蛋白或抗体洗去，加入辣根过氧化物酶标记的亲和素streptavidin-hrp(ge公司，货号rpn4401)作为二抗进行反应，将未结合的酶标亲和素洗去后，最终加入化学发光显色底物，通过化学发光仪(berthod公司，orionii)读取发光值(rlu,relativechemiluminescencevalue)。阳性对照为未加抗pd-1单抗，而以pbs代替的检测组。化学发光仪读取的值表示pd-1抗体阻断pd-1与pd-l1之间相互作用的强弱。其中，以rlu值为纵坐标，以抗体浓度的log10为横坐标，绘制反应曲线。同时，通过公式可计算出相应的抗体阻断率，阻断率＝(log10阳性对照-log10反应值)/(log10阳性对照-log10空白对照)。利用prism6软件(graphpad公司)计算半抑制浓度(或称半抑制率)，即ic50。结果分别如图4及图5所示。图4显示了鼠单抗阻断人pd-1/his和pd-l1/biotin之间结合能力的剂量依赖型反应曲线，结果显示，鼠源抗体10d6、48g7、16f2和17d5均能在体外有效阻断pd-1和pd-l1蛋白间的相互结合。图5显示了抗体阻断pd-1和pd-l1蛋白之间相互作用的半抑制率(ic50)，17d5、48g7、16f2、10d6的ic50分别为5.019μg/ml、7.99μg/ml、11.23μg/ml、7.412μg/ml，表明其对pd-1和pd-l1蛋白间的相互结合均具备良好的抑制活性。实施例3：表面等离子共振法(spr)检测抗体的抗原亲和活性利用biacoretm仪器(gehealthcare公司，型号biacore3000)进行抗体的抗原亲和力测定。使用标准伯胺偶联规程产生抗鼠fccm5生物传感器芯片(gehealthcare公司)。以10μl每分钟的流速在抗鼠fc表面捕捉鼠源抗体1分钟。以30μl每分钟的流速在抗体结合表面注射自3.3nm连续稀释至120nm的pd-1/fc达3分钟，然后经历10分钟解离阶段。使用eia评估软件(gehealthcare公司)一对一郎缪(langmuir)结合模型计算结合速率(ka或kon)及解离速率(kd或koff)。以比率koff/kon来计算平衡常数(kd)。结果如下表所示。结果显示，17d5、48g7、16f2、10d6均以高亲和力结合至人pd-1蛋白。表5：spr测定结果抗体kd10d66.01×10-1148g74.00×10-1116f28.00×10-1117d55.91×10-12实施例4：鼠源抗pd-1单抗诱导t细胞激活能力的评价在96孔板中包被100ng每孔的anti-cd3抗体(biolegend,货号317302)和100ng每孔的cd28抗体(biolegend,货号302902)，利用ficoll-paqueplus(gehealthcare，货号17-1440-02)密度梯度离心法从健康人全血中分离外周血单核pbmc细胞，将104个细胞加入微孔中，刺激2天后，加入5×104的实施例1获得的293t/pd-l1细胞及不同浓度pd-1抗体(即10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml)刺激2-4天，同时，以不加入pd-1抗体的微孔作为control。收集上清液利用人il-2elisa检测试剂盒(r&dsystems公司，货号d2050)检定il-2的分泌水平。结果如表6及图6所示，与control组相比，10d6、48g7、16f2和17d5处理后il-2分泌水平均显著增加。这一结果表明10d6、48g7、16f2和17d5均能够明显诱导t细胞活化，增强t细胞免疫应答，从而能够杀伤肿瘤细胞，其中17d5诱导t细胞活化的活性最高(il-2分泌基线平均值为26.2ng/ml，峰值为1504.9ng/ml)。由此可见，本发明的抗体能够增强免疫细胞活性，刺激免疫应答，从而特别适用于治疗肿瘤或感染。表6：il-2的分泌水平测定结果抗体浓度control10d648g716f217d50.001μg/ml20.622.121.538.411.20.01μg/ml27.1302.8182.8145.6312.40.1μg/ml13.7757.1708.4729.0821.21μg/ml32.41225.31240.61097.41494.910μg/ml37.11317.11209.91144.91504.9实施例5：鼠源抗pd-1单克隆抗体的人源化将编码小鼠单克隆抗体17d5和48g7的重链和轻链可变区的基因序列分别与编码人抗体的重链和轻链恒定区的基因序列相连接，并在cho细胞中进行重组表达，从而获得嵌合抗体17d5-cab和48g7-cab。并通过1.7中所描述的elisa法检测不同浓度的嵌合抗体与人pd-1的结合活性，结果如图7所示。结果显示，嵌合抗体17d5-cab和48g7-cab保持了良好的针对人pd-1的结合活性。进一步，为了减少异源抗体施用给人受试者时引起的免疫原性，需要通过cdr移植的方法对小鼠单克隆抗体17d5和48g7进行人源化。在大量的分析和实验的基础上，本发明人以人胚系基因序列igvh3-23*04(seqidno：45)及igkv3-11*01(seqidno：46)作为接受小鼠单克隆抗体17d5的cdr的人抗体模板，其能够与17d5的重链和轻链cdr良好地匹配，能够最大程度地保留17d5结合抗原的亲和力；以人胚系基因序列igvh1-2*02(seqidno：47)及igkv1-16*01(seqidno：48)作为接受小鼠单克隆抗体48g7的cdr的人抗体模板，其能够与48g7的重链和轻链cdr良好地匹配，能够最大程度地保留48g7结合抗原的亲和力。上述人胚系基因序列seqidnos：45-48的具体序列还可见于ncbi，kabat和genbank等公共数据库。将小鼠单克隆抗体17d5和48g7的重链和轻链cdr区分别移植到人源化模板(即，人胚系基因序列igvh3-23*04(seqidno：45)及igkv3-11*01(seqidno：46)及igvh1-2*02(seqidno：47)及igkv1-16*01(seqidno：48))的fr框架上。进一步，还结合对序列的分析及以往的人源化经验，对上述人源化模板的fr区氨基酸残基进行了一系列的回复突变，以使人源化抗体尽可能保留鼠源抗体的抗原结合能力。共制备获得2株人源化17d5抗体(分别命名为17d5h1、17d5h2)和2株人源化48g7抗体(分别命名为48g7h1、48g7h2)。人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2的氨基酸序列示于下表。另外，还通过公式：人源化程度＝(fr区氨基酸个数-fr区保留的鼠源氨基酸个数)/fr区氨基酸个数×100％，计算了17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2的人源化程度，结果显示上述4株人源化抗体的人源化程度分别为96.2％，95.6％，85.0％，84.3％。表7：人源化抗体的轻重链可变区氨基酸序列实施例6：人源化pd-1单抗的活性评价本实施例以商业化抗体为参比抗体，评价人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2的抗原亲和活性、阻断活性及诱导t细胞活化能力。商业化抗体使用pembrolizumab和nivolumab。pembrolizumab(商品名keytruda，默克公司)，公开于例如hamid，o等人(2013)newenglandjournalofmedicine369(2)：134-44，wo2009/114335和us8,354,509。pembrolizumab具有例如seqidno：41所示的重链序列和seqidno：42所示的轻链序列。nivolumab(商品名opdivo，百世施贵宝公司)，公开于例如us8,008,449和wo2006/121168中。nivolumab具有例如seqidno：43所示的重链序列和seqidno：44所示的轻链序列。6.1cleia法比较人源化抗体与商业化抗体的结合活性将pd-1/his蛋白(sinobiologicalinc.,货号10377-h08h)用cb缓冲液稀释，以100ng/孔包被于辐照过的、不透光的聚苯乙烯96孔板中，封闭液进行封闭后，抽干并于4℃保存备用。将人源化抗体及参比抗体进行梯度稀释，起始浓度为1μg/ml，连续5倍稀释七个梯度，即0.2μg/ml、0.04μg/ml、0.008μg/ml、0.0016μg/ml、0.00032μg/ml、0.000064μg/ml、0.0000128μg/ml。将稀释成不同梯度的抗pd-1单抗加入已包被的板中，待其充分反应后，将未结合的游离蛋白或抗体洗去，加入hrp标记的gah二抗，将未结合的酶标抗体洗去后，最终加入化学发光显色底物(购自北京万泰生物药业股份有限公司)，通过化学发光仪(berthod公司，orionii)读取发光值(rlu，relativechemiluminescencevalue)。利用prism6软件(graphpad公司)计算半最大效应浓度，即ec50。结果如图8所示，人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2均能较好的和pd-1蛋白相互结合，相应的ed50值如下表所示。结果显示，与pembrolizumab相比，人源化抗体17d5h1、17d5h2具有更强的pd-1结合活性，人源化抗体48g7h1、48g7h2的pd-1结合活性与pembrolizumab相当；与nivolumab相比，人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2均具有更强的pd-1结合活性。这表明，本发明的人源化抗体可以更低剂量用于抗肿瘤治疗，具有更高的安全性。表8：人源化抗体的结合活性测定结果6.2cleia法比较人源化抗体与商业化抗体的阻断活性通过实施例2中描述的cleia法检测四株人源化抗体以及商业化抗体的阻断活性。反应曲线如图9所示，相应的ic50值如下表所示。结果显示，人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2均能显著阻断pd-1和pd-l1蛋白间的相互结合，并且明显优于商业化抗体pembrolizumab和nivolumab。这表明，本发明的人源化抗体用于抗肿瘤治疗具有更高的活性。表9：阻断活性测定结果6.3spr法比较人源化抗体与商业化抗体的抗原亲和活性通过实施例3中描述的spr法检测四株人源化抗体以及商业化抗体的抗原亲和活性。结果如下表所示，与默克公司pembrolizumab相比，人源化抗体17d5h1、17d5h2与pd-1蛋白间的亲和力更强，人源化抗体48g7h1、48g7h2与pembrolizumab相当；与百世施贵宝公司的nivolumab相比，人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2与pd-1蛋白间的亲和力更强。这表明，本发明的人源化抗体可以更低剂量用于抗肿瘤治疗，具有更高的安全性。表10：spr测定结果抗体kdpembrolizumab2.89×10-11nivolumab3.55×10-917d5h15.71×10-1217d5h21.34×10-1248g7h13.25×10-1148g7h22.91×10-116.4il-2释放检测法比较人源化抗体和商业化抗体的诱导t细胞激活能力通过实施例4中描述的方法检测四株人源化抗体以及商业化抗体的诱导t细胞激活能力。结果如图10所示，il-2分泌基线平均值为22.2ng/ml，17d5h1峰值为1515.1ng/ml，17d5h2峰值为1495.5ng/ml，48g7h1峰值为1250.1ng/ml，48g7h2峰值为1296.2ng/ml，pembrolizumab峰值为1255.8ng/ml，nivolumab峰值为1163.5ng/ml。由此可见，与默克公司pembrolizumab相比，人源化抗体17d5h1、17d5h2激活t细胞和促进t细胞增殖能力更强，人源化抗体48g7h1、48g7h2与pembrolizumab相当；与百世施贵宝公司的nivolumab相比，人源化抗体17d5h1、17d5h2、48g7h1、48g7h2激活t细胞和促进t细胞增殖能力均更强。这表明，本发明的人源化抗体具有明显优于pembrolizumab、nivolumab的活化t细胞的能力，同等剂量下具有更高的抗肿瘤治疗效果。另外，与各自的亲本鼠源抗体17d5、48g7比较可以看出，本发明的人源化抗体基本上保留了亲本抗体的t细胞激活能力。以上结果表明，本发明的人源化抗体不仅具有较高的人源化程度，能够减少免疫排斥反应的可能性，而且展示出与鼠源抗体相当且优于商业化抗体的抗肿瘤活性。这样的技术效果是显著的和出人意料的。实施例7：17d5抗体与抗原结合关键氨基酸的确定为了确定抗体抗原相互作用的关键氨基酸位点，对17d5的6个cdr区hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3进行丙氨酸扫描，将各位氨基酸分别点突变为丙氨酸(a)。关键氨基酸往往具有一定的保守性，比如维持抗体构象的氨基酸残基和被包埋的氨基酸残基，这些氨基酸突变成丙氨酸以后会导致抗体失去活性。通过实施例1.7所述的方法检测突变后的抗体与pd-1的结合活性并计算突变后抗体的rec50(原始抗体测定值/突变抗体测定值，原始抗体ec50相对值为1，完全失去结合活性的用0标示)，并按照rec50＜0.2(活性下降5倍)，0.2≤rec50＜0.5(活性下降2～5倍)，0.5≤rec50＜0.8(活性下降1.25～2倍)，rec50≥0.8(活性不变)进行分类，结果如表11-12所示。表11：17d5重链可变区丙氨酸点突变抗体的rec50表12：17d5轻链可变区丙氨酸点突变抗体的rec50上述结果显示，重链可变区氨基酸g26,f27,s30,d33,i51,g56,r57,t101,d107,y108点突变为丙氨酸后结合活性基本不变；g52,g55,t58,g100,g102,g104,m106点突变为丙氨酸后结合活性稍有下降；f29,r31,r32点突变为丙氨酸后结合活性下降2～5倍；g53,g54,r98,h99,t103点突变为丙氨酸后结合活性下降程度较大，为5倍以上，认为是不可变位点。轻链可变区氨基酸k27,s28,v29,d30,n31,s55,s95,n96,e97,d98,点突变为丙氨酸后结合活性基本不变；g33,s35,q94,t100点突变为丙氨酸后结合活性稍有下降；y32,y34,r54点突变为丙氨酸后结合活性下降2～5倍；f36,q93,p99点突变为丙氨酸后结合活性下降程度较大，为5倍以上，认为是不可变位点。尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公布的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部分为由所附权利要求及其任何等同物给出。序列表<110>厦门大学养生堂有限公司<120>抗pd-1抗体及其用途<130>idc190229<150>cn201810801294.6<151>2018-07-20<160>78<170>patentinversion3.5<210>1<211>119<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5重链可变区<400>1gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly151015serleulysleusercysalaalaserglyphealapheserargphe202530aspmetsertrpvalargglnthrproglulysargleuglutrpval354045alapheileglyglyglyglyglyargthrhistyrproaspalaval505560lysglyargphethrvalserargaspasnalaglugluileleutyr65707580leuglnmetthrserleulysseraspaspthralamettyrtyrcys859095alaarghisglythrglythrglyalametasptyrtrpglyglngly100105110thrservalthrvalserser115<210>2<211>110<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5轻链可变区<400>2aspilevalleuthrglnserproalaserleuthrvalserleugly151015glnargalathrilesercysargalaserlysservalaspasntyr202530glytyrserphemethistrptyrglnglnargproglyglnpropro354045lysleuleuiletyrargseralaasnleualaserglyileprothr505560argpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrileasn65707580provalglualaaspaspphealathrtyrtyrcysglnglnserasn859095gluaspprothrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110<210>3<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5hcdr1<400>3glyphealapheserargpheasp15<210>4<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5hcdr2<400>4ileglyglyglyglyglyargthr15<210>5<211>12<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5hcdr3<400>5alaarghisglythrglythrglyalametasptyr1510<210>6<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5lcdr1<400>6lysservalaspasntyrglytyrserphe1510<210>7<211>3<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5lcdr2<400>7argserala1<210>8<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>17d5lcdr3<400>8glnglnserasngluaspprothr15<210>9<211>117<212>prt<213>人工序列<220><223>48g7重链可变区<400>9gluvalglnleuglnglnserglyalagluleuvalargserglyala151015servallysleusercysthralaserglypheasnphelysasptyr202530tyrvalhistrpmetlysglnargprogluglnglyleuglutrpile354045glytrpilealaproaspasnglyalathrglutyralaprolysphe505560glnasplysalathrmetthralaaspthrserserasnthralatyr65707580leuglnleuserserleuthrsergluaspthralavaltyrtyrcys859095asn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