一种好氧反硝化菌的现场快速扩培方法与流程

本发明属于微生物培养
技术领域：
，涉及一种好氧反硝化菌的现场快速扩培方法。
背景技术：
：好氧反硝化菌是利用好氧反硝化酶的作用，在有氧条件下进行反硝化作用的一类反硝化菌，是一类好氧或兼性好氧、以有机碳作为能源的异养硝化菌，主要存在于假单胞菌属、产碱杆菌属、副球菌属和芽孢杆菌属等。由于微生物菌剂在应用时必须保持有效活菌数和细菌的活性，但是项目情况随时在发生变化并且微生物菌剂投加具有持续性，若在菌剂厂生产包装好在运往现场则会导致运费高、现场保存时间长等原因增加项目成本和影响细菌质量。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服上述缺陷，提供一种好氧反硝化菌的现场快速扩培方法，为有效菌提供增殖所需的营养物质、氧气与空间，实现在项目所在地进行有效菌现场扩培，保证扩培与应用有效连接，保证有效微生物的活菌数，还能够大幅度降低运输成本、时间成本等。为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种好氧反硝化菌的现场快速扩培方法，包括如下步骤：(1)实验室接种扩培好氧反硝化菌菌液，作为现场扩培的好氧反硝化菌菌种液；(2)将微孔曝气盘连接上曝气管，曝气管上连接调节阀门用于调节曝气量，放在一级培养罐内，利用75％浓度酒精对一级培养罐、曝气盘、曝气管消毒，并用纱布和玻璃绳对桶口进行绑扎，并对纱布进行消毒；(3)将好氧反硝化菌菌液加入一级培养罐内并加入配置好的培养基，加水稀释至20l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(4)将2个二级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(3)得到的菌液分别接入2个二级培养罐内，并将培养基平均装进2个二级培养罐内，每个培养罐加水稀释至50l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(5)将2个三级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(4)得到的菌液接入其中一个三级培养罐内，并将培养基装进三级培养罐内，加水至500l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(6)将步骤(5)得到的菌液转移250l至另外一个三级培养罐，并将培养基装进两个三级培养罐内，加水至1000l，开启微型曝气机对两个三级培养罐进行充氧和搅拌，培养48小时，得到2吨好氧反硝化菌菌液；(7)根据需要，可重复步骤(5)、(6)得到吨级菌液。优选的，所述细菌菌种的接种比≥15％；其中一级扩培接种比为15％，二级扩培和三级扩培接种比为20％，吨级扩培接种比为25％，使目标细菌成为绝对优势细菌。优选的，步骤(3)所述好氧反硝化菌菌液的加入量为3l。优选的，所述一级培养罐、二级培养罐、三级培养罐的体积比为1:3:50。优选的，步骤(2)所述微孔曝气盘是利用微孔曝气管盘成，所述曝气管是具有相同管径的塑料软管，所述曝气管在培养罐外部分配套安装阀门。优选的，步骤(3)所述微型曝气机根据不同培养罐大小选择不同参数的曝气机，所述曝气机进气口用纱布包扎，减少空气中粉尘的进入。优选的，所述一级培养罐、二级培养罐、三级培养罐的罐口均用纱布进行绑扎并定期使用酒精消毒，保证排气和散热。优选的，所述好氧反硝化菌培养基为市场上常用培养基，配制使用时将培养基的各组分用小型容器溶解，配成水剂形态使用。优选的，步骤(7)为利用已扩培好的好氧反硝化菌菌液作为菌种液可持续扩培。上述培养条件为：温度时间ph溶解氧接种比例20-30℃48小时/每级7-7.54-6mg/l≥15％与现有技术相比本发明的有益效果是：(1)本发明扩培方法，以实验室好氧反硝化细菌制剂产品为原始菌种，通过经济的细菌培养基和简易的扩培方法，在项目现场进行扩培，培养后的好氧反硝化菌液可在使用现场立即投加使用，节约运输成本和时间成本，并且可以避免长期保持带来的负面影响。(2)本发明扩培方法通过为有效菌提供增殖所需的营养物质、氧气与空间，实现在项目所在地进行有效菌现场扩培，保证扩培与应用有效连接，保证有效微生物的活菌数，通过本发明方法扩培出的好氧反硝化菌菌液的浓度为每毫升菌液中含菌约108个，还能够大幅度降低运输成本、时间成本。(3)本发明扩培方法通过提高接种比例，一级扩培接种比为15％，二级扩培和三级扩培接种比为20％，吨级扩培接种比为25％，使目标细菌成为绝对优势细菌。(4)本发明扩培方法操作简单，投入经费小，实用性强。附图说明图1为本发明现场快速扩培两吨好氧反硝化菌菌液的工艺流程示意图。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1如图1所示，一种好氧反硝化菌的现场快速扩培方法，培养条件：温度20℃；ph＝7；溶解氧4mg/l；包括如下步骤：(1)实验室接种扩培好氧反硝化菌菌液，作为现场扩培的好氧反硝化菌菌种液；(2)将微孔曝气盘连接上曝气管，曝气管上连接调节阀门用于调节曝气量，放在20l的一级培养罐内，利用75％浓度酒精对一级培养罐、曝气盘、曝气管消毒，并用纱布和玻璃绳对桶口进行绑扎，并对纱布进行消毒；(3)将3l好氧反硝化菌菌液加入一级培养罐内并加入配置好的培养基，加水稀释至20l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(4)将2个60l的二级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(3)得到的20l菌液分别接入2个二级培养罐内，并将培养基平均装进2个二级培养罐内，每个培养罐加水稀释至50l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(5)将2个1000l的三级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(4)得到的100l菌液接入其中一个三级培养罐内，并将培养基装进三级培养罐内，加水至500l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(6)将步骤(5)得到的菌液转移250l至另外一个三级培养罐，并将培养基装进两个三级培养罐内，加水至1000l，开启微型曝气机对两个三级培养罐进行充氧和搅拌，培养48小时，得到2吨好氧反硝化菌菌液。实施例2如图1所示，一种好氧反硝化菌的现场快速扩培方法，培养条件：温度25℃；ph＝7.5；溶解氧5mg/l；包括如下步骤：(1)实验室接种扩培好氧反硝化菌菌液，作为现场扩培的好氧反硝化菌菌种液；(2)将微孔曝气盘连接上曝气管，曝气管上连接调节阀门用于调节曝气量，放在20l的一级培养罐内，利用75％浓度酒精对一级培养罐、曝气盘、曝气管消毒，并用纱布和玻璃绳对桶口进行绑扎，并对纱布进行消毒；(3)将3l好氧反硝化菌菌液加入一级培养罐内并加入配置好的培养基，加水稀释至20l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(4)将2个60l的二级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(3)得到的20l菌液分别接入2个二级培养罐内，并将培养基平均装进2个二级培养罐内，每个培养罐加水稀释至50l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(5)将2个1000l的三级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(4)得到的100l菌液接入其中一个三级培养罐内，并将培养基装进三级培养罐内，加水至500l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(6)将步骤(5)得到的菌液转移250l至另外一个三级培养罐，并将培养基装进两个三级培养罐内，加水至1000l，开启微型曝气机对两个三级培养罐进行充氧和搅拌，培养48小时，得到2吨好氧反硝化菌菌液；(7)利用上述步骤扩培好的好氧反硝化菌菌液作为菌种液重复步骤(5)、(6)一次，得到4吨好氧反硝化菌菌液。实施例3如图1所示，一种好氧反硝化菌的现场快速扩培方法，培养条件：温度25℃；ph＝7.5；溶解氧6mg/l；包括如下步骤：(1)实验室接种扩培好氧反硝化菌菌液，作为现场扩培的好氧反硝化菌菌种液；(2)将微孔曝气盘连接上曝气管，曝气管上连接调节阀门用于调节曝气量，放在20l的一级培养罐内，利用75％浓度酒精对一级培养罐、曝气盘、曝气管消毒，并用纱布和玻璃绳对桶口进行绑扎，并对纱布进行消毒；(3)将3l好氧反硝化菌菌液加入一级培养罐内并加入配置好的培养基，加水稀释至20l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(4)将2个60l的二级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(3)得到的20l菌液分别接入2个二级培养罐内，并将培养基平均装进2个二级培养罐内，每个培养罐加水稀释至50l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(5)将2个1000l的三级培养罐进行步骤(2)处理，将步骤(4)得到的100l菌液接入其中一个三级培养罐内，并将培养基装进三级培养罐内，加水至500l，开启微型曝气机进行充氧和搅拌，培养48小时得到菌液；(6)将步骤(5)得到的菌液转移250l至另外一个三级培养罐，并将培养基装进两个三级培养罐内，加水至1000l，开启微型曝气机对两个三级培养罐进行充氧和搅拌，培养48小时，得到2吨好氧反硝化菌菌液；(7)利用上述步骤扩培好的好氧反硝化菌菌液作为菌种液重复步骤(5)、(6)一次，得到4吨好氧反硝化菌菌液。对于本领域技术人员而言，显然本发明专利不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明专利的精神或基本特征的情况下，能够以其它的具体形式实现本发明专利。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明专利的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明专利内，不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。以上所述仅为本发明专利的较佳实施例，并不用以限制本发明专利，凡在本发明专利的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明专利的保护范围之内。当前第1页12