一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的筛选方法与流程

文档序号:24240843发布日期:2021-03-12 13:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高产dha裂殖壶菌突变菌株的筛选方法,其特征在于:artp诱变处理后的菌悬液,适当稀释后进行烯草酮平板初筛,于培养箱中避光保存,平板上能够生长出来形态大的菌落视为可能高产的菌株,然后以磷酸香草醛法和摇瓶发酵培养测定的dha产量进行复筛,最终筛选出高产新菌株。

2.根据权利要求1所述的一种高产dha裂殖壶菌突变菌株的筛选方法,其特征在于:所述的artp诱变处理是将对数时期的裂殖壶菌置于artp诱变仪内辐照处理,辐射时间为40s,功率设定为120w,气量设定为10slm。

3.根据权利要求1所述的一种高产dha裂殖壶菌突变菌株的筛选方法,其特征在于:所述的烯草酮(clethodim)是一种环己烯酮类除草剂,主要作用于乙酰辅酶a羧化酶(accase),当烯草酮存在时,可以高效抑制accase的活性,使生物脂肪酸合成受阻,导致生物生长缓慢,甚至死亡;在培养基中加入烯草酮后,诱变处理后只有突变体accase活性高的裂殖壶菌才能存活下来。

4.根据权利要求1所述的一种高产dha裂殖壶菌突变菌株的筛选方法,其特征在于:所述烯草酮平板初筛是将野生型裂殖壶菌在液体培养基中培养24-36h,10倍稀释法稀释1000倍后,分别取一定体积菌液均匀涂布在烯草酮浓度为0、20、40、60、80、100μg/ml的固体平板上,放入28℃恒温箱中避光培养2-3d;统计生长出的单菌落个数,计算出不同浓度下烯草酮对裂殖壶菌的致死率,选择致死率在90%-95%之间的浓度进行后续筛选实验。

5.根据权利要求1所述的一种高产dha裂殖壶菌突变菌株的筛选方法,其特征在于:所述的磷酸香草醛法是用发酵液菌体经18mol/lh2so4破壁后,与磷酸香草醛反应生成有色物质,通过比较紫外分光光度计下od530值的相对大小来筛选可能高产的菌株。

6.根据权利要求1所述的一种高产dha裂殖壶菌突变菌株的筛选方法,其特征在于:所述的摇瓶发酵培养测dha产量具体为取冻干的菌体加入4%硫酸甲醇溶液2ml、1.0g/l的十九烷酸内标溶液100μl,混合均匀;置于80℃恒温水浴锅中1h,取出冷却至室温,随后分别加入1ml正己烷和1ml超纯水,混匀离心取上层有机相,过0.22μm滤膜后测气相得dha含量。


技术总结
一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的筛选方法,具体是,将野生型裂殖壶菌菌株经过ARTP诱变处理,经烯草酮平板培养基定向初筛,磷酸香草醛法和摇瓶发酵培养测定的DHA产量为复筛,筛选后获得高产DHA菌株。本发明涉及到的高产DHA筛选方法具有操作简单,筛选成功率高,能快速获取大量目的菌株等诸多优势。

技术研发人员:刘宪华;李建涛;汪光义;叶会科;张赛
受保护的技术使用者:天津大学青岛海洋技术研究院
技术研发日:2019.09.11
技术公布日:2021.03.12
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