一种霉酚酸检测试剂及其制备方法与流程

本发明属于医学检验领域，具体地涉及一种霉酚酸检测试剂及其制备方法。
背景技术：
：霉酚酸(mycophenolicacid,mpa)是免疫抑制药物霉酚酸酯(mycophenolatemofetil,mmf)经代谢产生的活性物质，能抑制嘌呤核苷酸从头合成途径的关键限速酶次黄嘌呤核苷磷酸脱氢酶(inosinemonophosphatedehydrogenase,impdh)活性，减少鸟嘌呤核苷酸的合成，从而选择性抑制t淋巴细胞、b淋巴细胞的增殖和功能。一般情况，口服mmf后约1～2h，mpa含量达到峰值，之后经肝代谢，绝大部分代谢产物随胆汁排入小肠，在肠道细菌作用下重新转化为mpa，约10～12h出现第二次血药浓度高峰，其半衰期为16～17h。由于mpa代谢产物主要经肾排出，严重肾功能不全者应减少mmf用量，另外药代动力学实验显示受患者体质及联用的免疫抑制药物种类可影响mpa代谢，且波动范围较大。临床研究表明同时对mpa和钙调神经磷酸酶抑制剂(环孢霉素或他克莫司)进行药物浓度检测，可以扩大药物治疗效果，并最大程度减少其副作用，同时保证用药安全和疗效。人ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdhii)是核苷酸从头合成过程中一种重要的酶，在体内可以与次黄嘌呤(imp)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)形成复合物，将nad还原为nadh，同时将imp转化为xmp，并先后释放nadh和xmp。mpa存在时，可非竞争地结合impdhii，导致xmp不能释放，抑制酶促反应进行。其反应产物nadh可在340nm波长下被检测，当血清或血浆样本中存在mpa时，nadh的生成受到抑制。mpa的浓度与nadh的生成成反比，通过在340nm处测定nadh吸光度的变化值，即可测得样本中霉酚酸的含量。利用该原理制可以对样本中的霉酚酸进行测定。目前监测霉酚酸血药浓度主要使用高效液相色谱法、酶放大免疫测定法、化学发光法、免疫比浊法等方法，但这些检测方法往往使用昂贵的检测仪器，处理过程复杂，对操作人员专业性要求较高，临床使用有限。例如现有技术中的已有的可用于检测霉酚酸检测的罗氏试剂，虽然能够测定样本中霉酚酸的含量，但该罗氏时间不仅需要保存在特殊的容器(如图1所示)中，而且还需要与特定的仪器(如特定的cobasc501、cobasc502、cobasc311仪器)配合才能用于测定霉酚酸，这种的特殊的容器和特定的仪器价格昂贵，且很多医院、研究所等机构没有适用于罗氏试剂的特定仪器，只有通用型生化仪，因此，很多医院、研究所等机构无法使用罗氏试剂来测定霉酚酸，大大限制了对样本中霉酚酸的测定。因此，本领域需要开发一种霉酚酸检测试剂，该霉酚酸检测试剂可通过通用型生化仪对样品(如血浆中)霉酚酸进行准确、快速和简单的测定。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种霉酚酸检测试剂，该霉酚酸检测试剂可通过通用型生化仪对样品(如血浆中)霉酚酸进行准确、快速和简单的测定。本发明的第一方面，提供一种霉酚酸检测试剂，所述的检测试剂包括试剂r1和试剂r2；所述的试剂r1包括第一缓冲液、次黄嘌呤(imp)、ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdhii)和抗氧化剂；所述的试剂r2包括第二缓冲液和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)；所述的试剂r1和试剂r2的体积比为(3-15)：1，较佳地(5-13)：1，更佳地(6-12)：1，最佳地(8-10)：1。在另一优选例中，所述的试剂r1和试剂r2是各自独立的。在另一优选例中，所述的检测为用生化仪检测。在另一优选例中，所述的生化仪为通用型生化仪。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂为用于在生化仪上检测霉酚酸的检测试剂。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂为用于霉酚酸含量/或浓度的检测试剂。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂为用于在生化仪检测霉酚酸含量/或浓度的检测试剂。在另一优选例中，所述的生化仪为日立7180全自动生化分析仪。在另一优选例中，所述的检测试剂的检测样品为血样。在另一优选例中，所述的检测血样选自下组：血清、血浆、血液。在另一优选例中，所述的血液为外周全血。在另一优选例中，所述的试剂r1的ph为5.0-9.0，较佳地5.5-8.5，更佳地6.0-8.0，，更佳地6.0-7.0，最佳地6.2-7.3。在另一优选例中，所述的试剂r2的ph为5.0-9.0，较佳地5.5-8.5，更佳地6.0-8.0，，更佳地6.5-8.0，最佳地7.0-8.0。在另一优选例中，所述的第一缓冲液选自下组：磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液、mes缓冲液、mops缓冲液，或其组合。在另一优选例中，所述的第一缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm。在另一优选例中，所述的ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdhii)的含量为0.5-20u/l，较佳地1-15u/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8u/l，最佳地3-7u/l。在另一优选例中，所述次黄嘌呤的浓度为0.2-12g/l，较佳地0.5-10g/l，更佳地0.8-8g/l，更佳地1.0-5g/l，最佳地1.5-3g/l。在另一优选例中，所述的抗氧化剂的浓度为0.05-20g/l，较佳地0.1-15g/l，更佳地0.15-10u/l，更佳地0.15-8g/l，最佳地0.2-5g/l。在另一优选例中，所述的第二缓冲液选自下组：磷酸盐缓冲液(pbs缓冲液)、3-(n-吗啉基)丙磺酸缓冲液(mops缓冲液)、2-(n-吗啉)乙磺酸缓冲液(mes缓冲液)、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液，或其组合。在另一优选例中，所述的第二缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm。在另一优选例中，所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的浓度为为0.05-5g/l，较佳地0.08-3g/l，更佳地0.1-2.0u/l，更佳地0.1-1.0g/l，最佳地0.3-0.8g/l。在另一优选例中，所述的第一缓冲液为mops缓冲液。在另一优选例中，所述的第一缓冲液为mops缓冲液，所述的mops的浓度为3-30g/l，较佳地5-20g/l，更佳地5-15g/l。在另一优选例中，所述的第二缓冲液为mes缓冲液。在另一优选例中，所述的第二缓冲液为mes缓冲液，所述的mes的浓度为3-30g/l，较佳地5-20g/l，更佳地5-15g/l。在另一优选例中，所述的第一缓冲液和/或第二缓冲液的重量含量为0.5-10wt％，以试剂r1的总重量计算。在另一优选例中，所述的ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdhii)为天然或重组改造的酶。在另一优选例中，所述次黄嘌呤(imp)为天然或人工合成的imp。在另一优选例中，所述次黄嘌呤(imp)的含量为0.5-10wt％，以所述试剂r1的总重量计。在另一优选例中，所述的第一缓冲液为mops缓冲液。在另一优选例中，所述的mops缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm，以mops在缓冲液的浓度计。在另一优选例中，所述的第二缓冲液为mes缓冲液。在另一优选例中，所述的mes缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm，以mes在缓冲液的浓度计。在另一优选例中，所述的抗氧化剂包括巯基还原剂。在另一优选例中，所述的巯基还原剂选自下组：β-巯基乙醇(bme)、二硫苏糖醇(dtt)、三-(2-甲酰乙基)膦盐酸盐(tcep-hcl)、n-乙酰-l-半胱氨酸、硫代甘油、谷胱甘肽，或其组合。在另一优选例中，所述的抗氧化剂为谷胱甘肽、硫代甘油或β-巯基乙醇。在另一优选例中，所述巯基还原剂的含量0.02-0.2wt％，以所述试剂r1的总重量计。在另一优选例中，所述的谷胱甘肽的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，更佳地0.1-0.5g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的硫代甘油的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l。在另一优选例中，所述的β-巯基乙醇的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l。在另一优选例中，所述的试剂r1还包括增敏剂。在另一优选例中，所述的增敏剂包括聚乙二醇。在另一优选例中，所述的聚乙二醇选自下组：聚乙二醇6000、聚乙二醇8000或聚乙二醇20000，或其组合。在另一优选例中，所述的增敏剂的重量含量为0.5-10wt％，以试剂r1的总重量计算。在另一优选例中，所述的增敏剂的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l。在另一优选例中，所述的聚乙二醇(优选聚乙二醇6000)的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l。在另一优选例中，所述的试剂r1还包括电解质。在另一优选例中，所述的电解质包括氯化钠。在另一优选例中，所述的电解质的重量含量为0.5-5wt％，以试剂r1的总重量计算。在另一优选例中，所述的电解质的浓度为0.5-30g/l，较佳地1-25g/l，更佳地2-20u/l，更佳地5-15g/l，最佳地7-12g/l。在另一优选例中，所述的氯化钠的浓度为0.5-30g/l，较佳地1-25g/l，更佳地2-20u/l，更佳地5-15g/l，最佳地7-12g/l。在另一优选例中，所述的试剂r1还包括防腐剂。在另一优选例中，所述的防腐剂选自下组：叠氮化钠、proclin300，或其组合。在另一优选例中，在试剂r1中，所述的防腐剂的重量含量为0.02-2wt％，以试剂r1的总重量计算。在另一优选例中，所述的防腐剂的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的proclin300的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的试剂r1还包括氧气隔绝剂。在另一优选例中，所述的氧气隔绝剂包括油。在另一优选例中，所述的油包括机油。在另一优选例中，所述的机油选自下组：天然矿物油、合成油，或其组合。在另一优选例中，所述的机油为sae机油。在另一优选例中，所述的sae机油的牌号选自下组：0w、5w、10w、15w、25w，或其组合。在另一优选例中，所述的机油为矿物油10w-40。在另一优选例中，所述的氧气隔绝剂(优选为油)的用量为0.1-10μl/cm2，，较佳地0.5-8μl/cm2，更佳地0.8-5μl/cm2，较佳地1-3μl/cm2，以试剂r1的液体表面积计。在另一优选例中，所述的第一缓冲液的溶剂为水。在另一优选例中，所述的第二缓冲液的溶剂为水。在另一优选例中，所述的试剂r2还包括防腐剂。在另一优选例中，所述的防腐剂选自下组：叠氮化钠、proclin300，或其组合。在另一优选例中，在试剂r2中，所述的防腐剂的重量含量为0.02-2wt％，以试剂r2的总重量计算。在另一优选例中，所述的防腐剂的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的proclin300的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。本发明第二方面，提供一种试剂盒，所述的试剂盒包括如本发明第一方面所述的霉酚酸检测试剂。在另一优选例中，所述的试剂盒还包括第一容积和第二容器，所述的第一容积包括所述的试剂r1，所述的第一容积包括所述的试剂r2；所述的第一试剂瓶和/或所述的第二试剂瓶含有氧气隔绝剂。在另一优选例中，所述的氧气隔绝剂包括油。在另一优选例中，在所述的第一容器中，所述的氧气隔绝剂(优选为机油)的用量为0.1-10μl/cm2，，较佳地0.5-8μl/cm2，更佳地0.8-5μl/cm2，较佳地1-3μl/cm2，以所述第一容器中的试剂r1的液体表面积计。在另一优选例中，在所述的第二容器中，所述的氧气隔绝剂(优选为机油)的用量为0.1-10μl/cm2，，较佳地0.5-8μl/cm2，更佳地0.8-5μl/cm2，较佳地1-3μl/cm2，以所述第二容器中的试剂r2的液体表面积计。在另一优选例中，所述的油包括机油。在另一优选例中，所述的机油选自下组：天然矿物油、合成油，或其组合。在另一优选例中，所述的机油为sae机油。在另一优选例中，所述的sae机油的牌号选自下组：0w、5w、10w、15w、25w，或其组合。在另一优选例中，所述的机油为矿物油10w-40。在另一优选例中，所述的第一容积和/或所述的第二容器为试剂瓶(优选普通的玻璃试剂瓶)。在另一优选例中，所述试剂盒还包括校准品和/或质控品。在另一优选例中，所述的校准品为霉酚酸标准品。在另一优选例中，所述试剂盒还包括还第三容器，所述的第三容器含有校准品。在另一优选例中，所述试剂盒还包括还第四容器，所述的第四容器含有质控品。本发明第三方面，提供一种体外非治疗性和非诊断性检测霉酚酸的方法，所述的方法包括步骤：用如本发明第一方面所述的霉酚酸检测试剂或如本发明第二方面所述的试剂盒对样品中的霉酚酸含量或浓度进行检测。在另一优选例中，所述的检测为辅助检测。在另一优选例中，所述的样品为血样。在另一优选例中，所述的血样选自下组：血清、血浆、血液。在另一优选例中，所述的血液为外周全血。在另一优选例中，所述的检测为用生化仪检测。在另一优选例中，所述的生化仪为通用型生化仪。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂通过使用生化仪检测对样品中的霉酚酸含量或浓度进行检测。本发明第四方面，提供一种如本发明第一方面所述的霉酚酸检测试剂或如本发明第二方面所述的试剂盒的用途，用于制备检测样品中的霉酚酸含量或浓度的试剂盒。另一优选例中，所述的样品为血样。在另一优选例中，所述的血样选自下组：血清、血浆、血液。在另一优选例中，所述的血液为外周全血。在另一优选例中，所述的检测为用通过生化仪检测。在另一优选例中，用于通过生化仪检测检测样品中的霉酚酸含量或浓度。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂通过使用生化仪检测对样品中的霉酚酸含量或浓度进行检测。应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1为现有技术中罗氏试剂使用的特定试剂瓶示意图。图2为实施例1-3中试剂r1和试剂r2的放置的试剂瓶。具体实施方式本发明人经过广泛而深入地研究，首次意外的开发了一种霉酚酸检测试剂，所述的包括试剂r1和试剂r2。本发明所述的霉酚酸检测试剂可通过开放平台通用型生化仪对血浆中的霉酚酸进行检测，具有抗干扰能力强、线性良好、稳定性强和测定结果准确等优点，且操作简单，能够进行大批量工业化生产。在此基础上，完成了本发明。术语除非另有定义,否则本文中所用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域普通技术人员普遍理解的含义相同。如本文所用，术语“包含”、“包括”、“含有”可互换使用，不仅包括封闭式定义，还包括半封闭、和开放式的定义。换言之，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。术语“mops缓冲液”与“3-(n-吗啉基)丙磺酸缓冲液”可互换使用。术语“mes缓冲液”与“2-(n-吗啉)乙磺酸缓冲液”可互换使用。在本发明中，术语“hepes缓冲液”与“4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲液”可互换使用。术语“次黄嘌呤”与“imp”可互换使用。术语“ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶”与“impdhii”可互换使用。术语“烟酰胺腺嘌呤二核苷酸”与“nad”可互换使用。霉酚酸检测试剂本发明提供一种霉酚酸检测试剂，所述的检测试剂包括试剂r1和试剂r2；所述的试剂r1包括第一缓冲液、次黄嘌呤(imp)、ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdhii)和抗氧化剂；所述的试剂r2包括第二缓冲液和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)；所述的试剂r1和试剂r2的体积比为(3-15)：1，较佳地(5-13)：1，更佳地(6-12)：1，最佳地(8-10)：1。在一个优选例中，所述的试剂r1和试剂r2是各自独立的。本发明所述的霉酚酸检测试剂可通过开放平台通用型生化仪(如日立生化仪、贝克曼生化仪系列)对血浆中的霉酚酸进行检测，具有抗干扰能力强、线性良好、稳定性强和测定结果准确等优点，且操作简单，能够进行大批量工业化生产。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂为用于在生化仪上检测霉酚酸的检测试剂。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂为用于霉酚酸含量/或浓度的检测试剂。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂为用于在生化仪检测霉酚酸含量/或浓度的检测试剂。在一个优选例中，所述的试剂r1的ph为5.0-9.0，较佳地5.5-8.5，更佳地6.0-8.0，，更佳地6.0-7.0，最佳地6.2-7.3；和/或所述的试剂r2的ph为5.0-9.0，较佳地5.5-8.5，更佳地6.0-8.0，，更佳地6.5-8.0，最佳地7.0-8.0。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂具有选自下组的一种或多种特征：所述的第一缓冲液选包括(但不限于)：磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液、mes缓冲液、mops缓冲液，或其组合；所述的第一缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm；所述的ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdhii)的含量为0.5-20u/l，较佳地1-15u/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8u/l，最佳地3-7u/l；所述次黄嘌呤的浓度为0.2-12g/l，较佳地0.5-10g/l，更佳地0.8-8g/l，更佳地1.0-5g/l，最佳地1.5-3g/l；所述的抗氧化剂的浓度为0.05-20g/l，较佳地0.1-15g/l，更佳地0.15-10u/l，更佳地0.15-8g/l，最佳地0.2-5g/l；所述的第二缓冲液包括(但不限于)：磷酸盐缓冲液(pbs缓冲液)、3-(n-吗啉基)丙磺酸缓冲液(mops缓冲液)、2-(n-吗啉)乙磺酸缓冲液(mes缓冲液)、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液，或其组合；所述的第二缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm；和/或所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的浓度为为0.05-5g/l，较佳地0.08-3g/l，更佳地0.1-2.0u/l，更佳地0.1-1.0g/l，最佳地0.3-0.8g/l。在另一优选例中，所述的第一缓冲液为mops缓冲液。在另一优选例中，所述的mops缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm，以mops在缓冲液的浓度计。在另一优选例中，所述的第二缓冲液为mes缓冲液。在另一优选例中，所述的mes缓冲液的浓度为10-200mm，较佳地25-150mm，更佳地25-100mm，更佳地30-80mm，最佳地40-60mm，以mes在缓冲液的浓度计。在本发明的另一优选例中，所述的抗氧化剂包括(但不限于)巯基还原剂。优选地，所述的巯基还原剂包括(但不限于)：β-巯基乙醇(bme)、二硫苏糖醇(dtt)、三-(2-甲酰乙基)膦盐酸盐(tcep-hcl)、n-乙酰-l-半胱氨酸、硫代甘油、谷胱甘肽，或其组合。在另一优选例中，所述的抗氧化剂为谷胱甘肽、硫代甘油或β-巯基乙醇。在另一优选例中，所述巯基还原剂的含量0.02-0.2wt％，以所述试剂r1的总重量计。在另一优选例中，所述的谷胱甘肽的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，更佳地0.1-0.5g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的硫代甘油的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l。在另一优选例中，所述的β-巯基乙醇的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l在本发明的另一优选例中，所述的试剂r1还包括增敏剂。在另一优选例中，所述的增敏剂包括(但不限于)聚乙二醇。在另一优选例中，所述的聚乙二醇包括(但不限于)：聚乙二醇6000、聚乙二醇8000或聚乙二醇20000，或其组合。在另一优选例中，所述的增敏剂的重量含量为0.5-10wt％，以试剂r1的总重量计算。在另一优选例中，所述的增敏剂的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l。在另一优选例中，所述的聚乙二醇(优选聚乙二醇6000)的浓度为0.5-20g/l，较佳地1-15g/l，更佳地2-10u/l，更佳地2-8g/l，最佳地3-7g/l。在本发明的另一优选例中，所述的试剂r1还包括电解质。在另一优选例中，所述的电解质包括(但不限于)氯化钠。在另一优选例中，所述的电解质的重量含量为0.5-5wt％，以试剂r1的总重量计算。在另一优选例中，所述的电解质的浓度为0.5-30g/l，较佳地1-25g/l，更佳地2-20u/l，更佳地5-15g/l，最佳地7-12g/l。在另一优选例中，所述的氯化钠的浓度为0.5-30g/l，较佳地1-25g/l，更佳地2-20u/l，更佳地5-15g/l，最佳地7-12g/l。在另一优选例中，所述的试剂r1还包括防腐剂。在另一优选例中，所述的防腐剂包括(但不限于)：叠氮化钠、proclin300，或其组合。在另一优选例中，在试剂r1中，所述的防腐剂的重量含量为0.02-2wt％，以试剂r1的总重量计算。在另一优选例中，所述的防腐剂的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的proclin300的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的第一缓冲液的溶剂为水。在另一优选例中，所述的第二缓冲液的溶剂为水。在另一优选例中，所述的试剂r2还包括防腐剂。在另一优选例中，所述的防腐剂包括(但不限于)：叠氮化钠、proclin300，或其组合。在另一优选例中，在试剂r2中，所述的防腐剂的重量含量为0.02-2wt％，以试剂r2的总重量计算。在另一优选例中，所述的防腐剂的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的proclin300的浓度为为0.05-3g/l，较佳地0.05-2g/l，更佳地0.08-1.0u/l，更佳地0.1-0.8g/l，最佳地0.1-0.3g/l。在另一优选例中，所述的试剂r1还包括氧气隔绝剂。在另一优选例中，所述的氧气隔绝剂包括油。在另一优选例中，所述的油包括机油。在另一优选例中，所述的机油选自下组：天然矿物油、合成油，或其组合。在另一优选例中，所述的机油为sae机油。在另一优选例中，所述的sae机油的牌号选自下组：0w、5w、10w、15w、25w，或其组合。在另一优选例中，所述的机油为矿物油10w-40。在另一优选例中，所述的氧气隔绝剂(优选为油)的用量为0.1-10μl/cm2，，较佳地0.5-8μl/cm2，更佳地0.8-5μl/cm2，较佳地1-3μl/cm2，以试剂r1的液体表面积计。在发明中，应当理解的是，在试剂r1中，第一缓冲液、次黄嘌呤(imp)、ii型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(impdhii)和抗氧化剂的浓度(如mm、g/l和u/l)或含量(如wt％)是以试剂r1的体积或重量计算。同样地，在试剂r2中，第二缓冲液和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)的浓度(如mm、g/l和u/l)或含量(如wt％)是以试剂r2的体积或重量计算在另一优选例中，在所述的试剂r1中，各个组合的重量百分比为100wt％。在另一优选例中，在所述的试剂r2中，各个组合的重量百分比为100wt％。在另一优选例中，所述的检测试剂包括试剂r1和试剂r2；试剂r1和试剂r2mes缓冲液40-60mm烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)0.1-1.0g/l任选地防腐剂(如proclin300)0.1-0.8g/l其中，氧气隔绝剂(如油)以试剂r1的液体表面积计；试剂r1的ph为6.0-7.0，试剂r2的ph为6.5-8.0；试剂r1和试剂r2的体积比为(6-12)：1。试剂盒本发明提供一种试剂盒，所述的试剂盒包括本发明所述的霉酚酸检测试剂。发明所述的霉酚酸检测试剂如上所述。在一个优选例中，所述的试剂盒还包括第一容积和第二容器，所述的第一容积包括所述的试剂r1，所述的第一容积包括所述的试剂r2；所述的第一试剂瓶和/或所述的第二试剂瓶含有氧气隔绝剂。在另一优选例中，所述的氧气隔绝剂如上所述。在另一优选例中，所述试剂盒还包括校准品和/或质控品。所示的质控品用于评价霉酚酸检测试剂是否符合质量要求。在实际测定过程中，由于霉酚酸检测试剂一般不会一次用完，在存放期间受存储环境等外界情况，在下次使用霉酚酸检测试剂之前，可通过霉酚酸检测试剂测定质控品，来判断霉酚酸检测试剂是否能够对霉酚酸进行准确测定。优选地，所述的质控品为霉酚酸标准品溶液(如0.5μg/ml、3.5μg/ml、12μg/ml)在另一优选例中，所述的校准品为霉酚酸标准品。在另一优选例中，所述试剂盒还包括还第三容器，所述的第三容器含有校准品。在另一优选例中，所述试剂盒还包括还第四容器，所述的第四容器含有质控品。检测霉酚酸的方法本发明还提供一种体外非治疗性和非诊断性检测霉酚酸的方法，所述的方法包括步骤：用如本发明所述的霉酚酸检测试剂或如本发明所述的试剂盒对样品中的霉酚酸含量或浓度进行检测。在另一优选例中，所述的检测为辅助检测。在另一优选例中，所述的检测的样品为血样。在另一优选例中，所述的血样选自下组：血清、血浆、血液。在另一优选例中，所述的血液为外周全血。在另一优选例中，所述的检测为用生化仪检测。在另一优选例中，所述的生化仪为通用型生化仪。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂通过使用生化仪检测对样品中的霉酚酸含量或浓度进行检测。用途本发明还提供一种用本发明所述的霉酚酸检测试剂或本发明所述的试剂盒的用途，用于制备检测样品中的霉酚酸含量或浓度的试剂盒。另一优选例中，所述的样品为血样。在另一优选例中，所述的血样选自下组：血清、血浆、血液。在另一优选例中，所述的血液为外周全血。在另一优选例中，所述的检测为用通过生化仪检测。在另一优选例中，用于通过生化仪检测检测样品中的霉酚酸含量或浓度。在另一优选例中，所述的霉酚酸检测试剂通过使用生化仪检测对样品中的霉酚酸含量或浓度进行检测本发明的主要优点包括：1、本发明所述的霉酚酸检测试剂可通过开放平台通用型生化仪对血浆中的霉酚酸进行检测，具有抗干扰能力强、线性良好、稳定性强和测定结果准确等优点，且操作简单，能够进行大批量工业化生产。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。实施例1-3实施例1-3制备霉酚酸检测试剂盒，其中，在实施例1-3制备试剂盒的试剂r1和试剂r2过程中，用盐酸和氢氧化钠调节ph，且制备的试剂r1和试剂r2放置在如图2所示的试剂瓶中。实施例1霉酚酸检测试剂盒1试剂r1配制：先称取9.405gmops用水完全溶解后，调整ph至6.5，再依次加入适量上述各物质，各物质溶解后，定容900ml，再次调ph为6.5。将配制好的试剂r1装入到1号试剂瓶中，且根据1号试剂瓶中试剂r1表液面的大小，加入矿物油10w-40，使最终矿物油添加量为0.2μl/cm2(以所述试剂r1的液体表面积计)。试剂r2配制：mes9.75g/lproclin3000.2g/lnad0.5g/l先称取0.975g用水mes完全溶解后，调整ph至7.4再依次加入适量上述各物质，各物质溶解后，定容100ml，再次调ph为7.4。将配制好的试剂r2装入到2号普通试剂瓶中。1号试剂瓶和2号试剂瓶中试剂r1和试剂r2体积比为r1：r2＝9:1。将1号试剂瓶和2号试剂瓶放入试剂盒1。实施例2霉酚酸检测试剂盒2试剂r1配制：先称取9.405gmops用水完全溶解后，调整ph至6.5，再依次加入适量上述各物质，各物质溶解后，定容900ml,再次调ph为6.5。将配制好的试剂r1装入到1号普通试剂瓶中，且根据1号试剂瓶中试剂r1液面的大小，加入矿物油10w-40，使最终矿物油添加量为0.2μl/cm2(以所述试剂r1的液体表面积计)。试剂r2配制：mes9.75g/lproclin3000.2g/lnad0.5g/l先称取0.975gmes用水完全溶解后，调整ph至7.4再依次加入适量上述各物质，各物质溶解后，定容100ml，再次调ph为7.4。将配制好的试剂r2装入到2号普通试剂瓶中。1号试剂瓶和2号试剂瓶中试剂r1和试剂r2体积比为r1：r2＝9:1。将1号试剂瓶和2号试剂瓶放入试剂盒2。实施例3霉酚酸检测试剂盒3试剂r1配制：先称取9.405gmops用水完全溶解后，调整ph至6.5，再依次加入上述各物质，各物质溶解后，定容900ml,再次调ph为6.5。将配制好的试剂r1装入到1号普通试剂瓶中，且根据1号试剂瓶中试剂r1液面的大小，加入矿物油10w-40，使最终矿物油添加量为0.2μl/cm2(以所述试剂r1的液体表面积计)。试剂r2配制：mes9.75g/lproclin3000.2g/lnad0.5g/l先称取0.975gmes用水完全溶解后，调整ph至7.4再依次加入适量上述各物质，各物质溶解后，定容100ml，再次调ph为7.4。将配制好的试剂r2装入到2号普通试剂瓶中。1号试剂瓶和2号试剂瓶中试剂r1和试剂r2体积比为r1：r2＝9:1。将1号试剂瓶和2号试剂瓶放入试剂盒3。测试例测试例考察实施例1制备的霉酚酸检测试剂盒对霉酚酸的测定效果校准品溶液配制：先将霉酚酸标准品粉末溶于dmso，配成高浓溶液，再用50mmph为7.0的hepes缓冲液稀释至目标校准品浓度：0μg/ml、0.5μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml。样品霉酚酸血浆样本来源北京友谊医院。在日立7180全自动生化分析仪上，用实施例1制备的试剂盒对样本中的霉酚酸进行测定，方法如下：实验仪器：日立7180全自动生化分析仪参数设置：参数1：详见表1：表1参数1参数2：详见表2：表2参数2测试例1测试例1考察实施例1制备的试剂盒线性评估和血浆样品回收率实施例1制备的试剂盒线性评估：用含有15μg/ml霉酚酸的高浓度血浆样本和含有0.40μg/ml霉酚酸的低浓度血浆样本，按比例混合成6个稀释浓度的(xi)。分别用试剂盒在日立7180全自动生化分析仪上对每个稀释浓度测定3次，分别求出测定的霉酚酸浓度均值(yi)。以稀释浓度(xi)为自变量，以测定结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程。按如下的公式计算线性回归的相关系数(r)。r2开根号，求得r值试剂盒线性评估结果如表3、表4所示：表3高：低＝混合比例1：02：11：11：51：91：151：200：13次测值(μg/ml)14.8410.417.992.661.871.341.070.5214.8710.267.682.651.811.321.090.514.9410.457.742.641.851.321.110.51均值(μg/ml)14.8810.377.802.651.841.331.090.51备注：高：低＝混合比例为高浓度血浆样本：低浓度血浆样本的体积混合比例表4霉酚酸的均值(xi)和靶值(yi)yi＝1.0024xi，相关系数为r2＝0.9994从表3-4可以看出，在0.40μg/ml-15μg/ml范围内，实施例1试剂盒对血浆样本的霉酚酸具有良好的的线性。实施例1制备的试剂盒回收率评估：取含有21.2μg/ml霉酚酸高浓度血浆样本和含有6.2μg/ml霉酚酸的低浓度血浆样本，各进行11个梯度比例稀释，计算霉酚酸的理论浓度(xi)。分别用实施例1制备的试剂盒在日立7180全自动生化分析仪上对每个稀释浓度测定3次，分别求出测定的霉酚酸浓度均值即测定浓度(yi)，计算(yi)/(xi)即回收率，回收率结果如表5所示：表5对高浓度血浆和低浓度血浆各进行11个梯度稀释并测试结果(n＝3，均值)：从上表5数据可以看出，试剂盒回收率均良好。测试例2测试例2考察实施例1制备的试剂盒抗干扰能力试剂盒抗干扰能力测试(1)临床样本：含有14μg/ml霉酚酸的高浓度血浆样本和含有0.60μg/ml霉酚酸的低浓度血浆样本，样本用试剂盒在日立7180全自动生化分析仪测定的霉酚酸浓度为xi。(2)基础样本池：向低浓度样本和高浓度血浆样本分别加入对应溶解干扰物的溶剂，作为对照。(3)干扰物质储存溶液：将干扰物质纯品用溶剂溶解后，加入上述低浓度血浆样本和高浓度血浆样本中，制备实验样本，干扰物浓度先采用经验浓度，用实施例1制备的试剂盒在日立7180全自动生化分析仪上测定血浆中霉酚酸浓度为yi。当出现回收率yi/xi不在85％-115％范围内，则继续稀释干扰物浓度，加入到血浆样本中后，测定霉酚酸浓度，直到寻找样本回收率在85％-115％内干扰物的最大干扰溶度，结果如表6所示：表6对72种常见干扰物药物最大干扰浓度(n＝3，均值)从表6中可以看出，实施例1制备的试剂盒对大部分常见药物具有较好的抗干扰能力。测试例3测试例3考察试剂稳定性将实施例1制备的试剂盒在37℃和4℃条件下进行保存，在不同时间点，用日立7180全自动生化分析仪上对各校准品溶液的吸光度进行跟踪测试，并记录测试结果，同时设立对照组，对比显示实施例1制备的试剂盒的影响(由于机油用量过多会造成生化仪取样不准或取样针外壁挂油滴，污染实验环境等问题，本次实验对照组不对比高含量机油组，仅设立试剂r1不含机油为对比)，结果如表7所示。表7实施例1制备的试剂盒在37℃和4℃条件下稳定性考察备注：每个点平行测定3次，测定值为均值。从表7中可以看出，对照组不含防氧化剂，酶氧化失活较为严重，而实施例1制备的试剂盒含有防氧化剂，其在37℃加速9天和4℃放置12个月后，各校准点的吸光度降低幅度均在10％以内，符合试剂盒稳定性要求，可在4℃-8℃稳定存储1年。测试例4将收集到的62例不同临床血浆样本分别在日立7180生化仪用实施例1制备的试剂盒测定血浆中霉酚酸浓度，并与该样本在hplc(高效液相色谱法)上的测定的霉酚酸浓度比对，结果如表8所示：表8实施例1试剂盒和常规hplc对不同临床血浆样本中霉酚酸的测定含量(每个受试者的血浆样品平行测定3次，测定值为均值)y＝0.974x+0.0234相关系数r2＝0.9911从表8中可以看出，实施例1制备的试剂盒与hplc测试值有较好的样本相关性，可以为临床提供较准确的参考值。综上：从上述测试例可以看出，本发明所述的霉酚酸检测试剂通过通用型生化仪用于检测血浆中的霉酚酸具有抗干扰能力强、线性良好、稳定性强和测定结果准确等优点，且操作简单，能够进行大批量工业化生产，有较好的临床应用前景。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。当前第1页12