一种大量生产玫烟色棒束孢的培养基的制作方法

本发明属于真菌产孢培养基领域，具体涉及一种大量生产玫烟色棒束孢的培养基。

背景技术：

玫烟色棒束孢(isariafumosorosea)是一种重要的昆虫病原真菌，隶属真菌门(eumycota)、子囊菌亚门(ascomycotina)、粪菌纲(sordariomycetes)、肉座菌目(hypocreales)、虫草科(cordycipitaceae)、棒束孢属(isaria)。据研究报道，玫烟色棒束孢能引发半翅目、双翅目、膜翅目、鞘翅目和鳞翅目昆虫群体性流行病的爆发，这使其成为有效的生物防治方式。而在害虫的生物防治过程中，分生孢子是昆虫病原真菌类生物农药的主要有效作用单元。同时，在施用期间，孢子的生存能力会受到各种自然因素的影响，而孢子的质量和产量又是昆虫病原真菌杀虫能力的重要指标，因此，对昆虫病原真菌的培养基成分进行优化，提高孢子产量和质量，可以从某种意义上促进真菌农药的应用。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种大量生产玫烟色棒束孢的培养基，该培养基有利于提高繁殖体的属性如生控效能、产量、存活率及对干燥的抗逆性等的影响，为大规模批量生产玫烟色棒束孢提供科学依据。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种玫烟色棒束孢大量产孢培养基，由淀粉、尿素、k2hpo4∙3h2o、维生素c、nacl、mgso4·7h2o和水组成，其中淀粉9~11g，尿素0.45~0.55g，k2hpo4∙3h2o13~15g，维生素c0.15~0.25g，nacl0.8~1.2g，mgso4·7h2o0.4~0.6g，琼脂20.0g，用水定容至1l。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基为固体产孢培养基。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基可按常规方法配制，灭菌条件为：温度121℃，压力范围0.1mpa~0.15mpa，时间20min。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基在接种前需将其冷却至凝固。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基在接种时接种量要控制在培养基重量的8%以内。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基中，碳源为淀粉，氮源为尿素，其优选的配比为：淀粉10.15g，尿素0.47g，k2hpo4∙3h2o13.97g，维生素c0.2g，nacl1.0g，mgso4·7h2o0.5g，琼脂20.0g，用水定容至1l。

本发明的有益效果是：借助响应面法优化获得玫烟色棒束孢大量产孢培养基，不但避免了培养基成分对繁殖体属性如生控效能、产量、存活率及对干燥的抗逆性等的影响，而且产孢量较高，当接种量为3μl孢子浓度为10⁷spores/ml时，孢子的单位产量可达21.3×10⁷spores/ml，为等量察氏培养基产孢量1.5×10⁷spores/ml的14倍。该培养基为该菌孢子的大规模批量生产提供了科学依据。孢子的产量和质量显著提高，有利于推广应用。

附图说明

图1是本发明玫烟色棒束孢大量产孢培养基的构成示意图。

图2是借助响应面法优化本发明培养基所得urea(x2)和k2hpo4·3h2o(x3)两因素对产孢量影响的响应曲面图。

图3是借助响应面法优化本发明培养基所得urea(x2)和k2hpo4·3h2o(x3)两因素对产孢量影响的等高线图。

图4是借助响应面法优化本发明培养基所得starch(x1)和k2hpo4·3h2o(x3)两因素对产孢量影响的响应曲面图。

图5是借助响应面法优化本发明培养基所得starch(x1)和k2hpo4·3h2o(x3)两因素对产孢量影响的等高线图。

图6是借助响应面法优化本发明培养基所得starch(x1)和urea(x2)两因素对产孢量影响的响应曲面图。

图7是借助响应面法优化本发明培养基所得starch(x1)和urea(x2)两因素对产孢量影响的等高线图。

具体实施方式

本发明的玫烟色棒束孢大量产孢培养基，由淀粉、尿素、k2hpo4∙3h2o、维生素c、nacl、mgso4·7h2o和水组成，其中淀粉9~11g，尿素0.45~0.55g，k2hpo4∙3h2o13~15g，维生素c0.15~0.25g，nacl0.8~1.2g，mgso4·7h2o0.4~0.6g，琼脂20.0g，用水定容至1l。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基为固体产孢培养基。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基可按常规方法配制，灭菌条件为：温度121℃，压力范围0.1mpa~0.15mpa，时间20min。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基在接种前需将其冷却至凝固。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基在接种时接种量要控制在培养基重量的8%以内。

上述玫烟色棒束孢大量产孢培养基中，碳源为淀粉，氮源为尿素，其最优的配比为：淀粉10.15g，尿素0.47g，k2hpo4∙3h2o13.97g，维生素c0.2g，nacl1.0g，mgso4·7h2o0.5g，琼脂20.0g，用水定容至1l。

下面结合具体实施例对利用本发明的玫烟色棒束孢大量产孢培养基培养该菌获得孢子的过程及效果作进一步的说明。

实施例1：从自然侵染玫烟色棒束孢的蜘蛛虫尸上获得该菌，进行分离纯化，并借助形态及分子生物学证据对其进行鉴定。将其接种至上述培养基和察氏培养基对照培养基中，分别按照常规方法进行孢子生产。结果表明玫烟色棒束孢大量产孢培养基的孢子单位产量可达21.3×10⁷spores/ml以上，为等量察氏培养基产量1.5×10⁷spores/ml的14倍左右。其中，玫烟色棒束孢大量产孢培养基按最优配比进行配制。

实施例2：从自然侵染玫烟色棒束孢的蜘蛛虫尸上获得该菌，进行分离纯化，并借助形态及分子生物学证据对其进行鉴定。将其接种至上述培养基和察氏培养基对照培养基中，分别按照常规方法进行孢子生产。结果表明玫烟色棒束孢大量产孢培养基的孢子单位产量可达20.5×10⁷spores/ml以上，为等量察氏培养基产量1.46×10⁷spores/ml的14倍左右。其中，玫烟色棒束孢菌大量产孢培养基配方为：其中淀粉11g，尿素0.45g，k2hpo4∙3h2o14g，维生素c0.2g，nacl1.0g，mgso4·7h2o0.5g，琼脂20.0g，用水定容至1l。

实施例3：从自然侵染玫烟色棒束孢的蜘蛛虫尸上获得该菌，进行分离纯化，并借助形态及分子生物学证据对其进行鉴定。将其接种至上述培养基和察氏培养基对照培养基中，分别按照常规方法进行孢子生产。结果表明玫烟色棒束孢大量产孢培养基的孢子单位产量可达19.8×10⁷spores/ml以上，为等量察氏培养基产量1.4×10⁷spores/ml的14倍左右。其中，玫烟色棒束孢菌大量产孢培养基配方为：其中淀粉9g，尿素0.55g，k2hpo4∙3h2o15g，维生素c0.2g，nacl1.0g，mgso4·7h2o0.5g，琼脂20.0g，用水定容至1l。

以上是本发明的较佳实施例，凡依本发明技术方案所作的改变，所产生的功能作用未超出本发明技术方案的范围时，均属于本发明的保护范围。