一种紫外诱变型盐单胞菌突变株及其诱变方法和应用与流程

文档序号:20030701发布日期:2020-02-28 10:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种紫外诱变型盐单胞菌突变株(halomonascampaniensishu09-32),于2019年10月8日保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为cctccno:m2019777。

2.根据权利要求1所述的紫外诱变盐单胞菌突变株,其特征在于:所述盐单胞菌突变株是由产四氢嘧啶的盐单胞菌菌株(halomonascampaniensisxh26)经紫外线照射诱变得到,其保藏编号为cctccno:m2019776。

3.根据权利要求2所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株的诱变方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

(1)接种:将盐单胞菌接种于100ml液体培养基中,30~35℃富集培养20~24h,制成菌落总数为108cfu/ml的菌悬液;

(2)液体培养:将步骤(1)菌悬液稀释,取5ml稀释液置于培养皿中,搅拌震荡,并在紫外灯下照射40~50s,置于培养箱在30~35℃下培养40~48h,得到突变菌株;

(3)发酵培养:选取步骤(2)得到的长势良好、菌落边缘粘稠且不易拉丝的突变菌株,接种于发酵培养基中在30~35℃下发酵培养40~48h,测定四氢嘧啶的产量;

(4)诱变:筛选四氢嘧啶产量最高的突变株作为下一轮紫外诱变的菌株进行步骤(2)和步骤(3),连续进行多轮循环操作,筛选得到四氢嘧啶产量最高的菌株。

4.根据权利要求3所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株的诱变方法,其特征在于:步骤(1)所述的盐单胞菌是从柴达木盆地小柴旦盐湖分离纯化获得的一株产四氢嘧啶的菌株。

5.根据权利要求3所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株的诱变方法,其特征在于:步骤(1)所述的液体培养基的组成为:50.0g/lnacl,20.0g/lmgso4.7h2o,3.0g/l柠檬酸钠,2.0g/lkcl,0.2g/lcacl2,10.0g/l细菌蛋白胨和2.0g/l酵母抽提物,ph为7.5。

6.根据权利要求3所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株的诱变方法,其特征在于:步骤(3)所述的发酵培养基的组成为:60.0g/lnacl,25.0g/lmgso4.7h2o,55.0g/lkcl,6.5g/ll-谷氨酸钠,7.5g/l酶水解酪素,3.0g/l柠檬酸钠,0.2g/l无水cacl2,2.0g/l酵母提取物,ph为8。

7.根据权利要求3所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株的诱变方法,其特征在于:所述步骤(2)中紫外灯功率为25w,照射距离30cm。

8.根据权利要求3所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株的诱变方法,其特征在于:所述步骤(4)中的循环次数为9轮。

9.根据权利要求4所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株的诱变方法,其特征在于:所述菌株的分离纯化方法如下,将水样于含15%nacl的无菌盐水中进行梯度稀释,将稀释液涂布于平板上,37℃培养2~3天,待大量菌体长出后,挑取菌落特征不同的单个菌落,重新活化培养,进行分区划线,挑取单个菌落增菌培养,重复多次直至获得纯菌,-20℃保存,备用。

10.根据权利要求1所述的紫外诱变型盐单胞菌突变株在四氢嘧啶发酵生产中的用途。

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