耳念珠菌的实时荧光定量PCR检测试剂盒及其专用引物、TaqMan探针的制作方法

文档序号:19952379发布日期:2020-02-18 10:49阅读:来源:国知局

技术特征:

1.rdna基因作为耳念珠菌生物标志物的用途;

任选地,所述rdna基因包括其its1-its4核苷酸序列;

任选地,所述rdna基因包括其250-349位碱基序列。

2.一种用于pcr检测的引物组合物,其特征在于,包括:

正向引物,所述正向引物具有seqidno:1所示的核苷酸序列,

反向引物,所述反向引物具有seqidno:2所示的核苷酸序列。

3.一种试剂盒,其特征在于,包括:权利要求2所述的引物组合物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,进一步包括:探针,所述探针具有seqidno:3所示的核苷酸序列。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述探针的3’端标记有阻抑聚合酶延伸或扩增的基团,所述探针的5’端标记有荧光基团,所述探针的3’端标记有淬灭基团;

任选地,所述阻抑聚合酶延伸或扩增的基团为磷酸基团;

任选地,所述荧光基团为hex或fam;

任选地,所述淬灭基团为eclipse或tamra。

6.根据权利要求3~5任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述正向引物与所述反向引物的摩尔浓度比为1:1;

任选地,所述探针与所述正向引物的摩尔浓度比为1:1。

7.一种检测耳念珠菌的方法,其特征在于,包括:

1)以待测样品dna为模板,利用权利要求2所述的引物组合物或权利要求3~6任一项所述的试剂盒对所述待测样品dna进行pcr检测;

2)基于检测结果,确定待测样品中是否含有耳念珠菌。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,进一步包括:

步骤1)之前,预先将携带耳念珠菌rdna基因的质粒作为标准品,以不同浓度的标准品作为模板,并利用权利要求2所述的引物组合物或权利要求3~6任一项所述的试剂盒对所述标准品进行pcr检测;

步骤2)是通过如下方式进行的:

基于待测样品与所述标准品的检测结果,确定待测样品中耳念珠菌的浓度;

任选地,所述携带耳念珠菌rdna基因的质粒为pmd19-t-its1-its4;

任选地,所述pmd19-t-its1-its4质粒中,its1-its4位于pmd19-t质粒的431bp位点和432bp位点之间;

任选地,所述pmd19-t-its1-its4质粒具有如图2所示的物理图谱。

9.根据权利要求7或8所述的方法,其特征在于,所述待测样品dna来源于包括选自分离的菌体,痰、肺泡灌洗液,血液和咽拭子的至少之一;

任选地,所述pcr检测条件为:首先95℃30s;然后95℃5s,58℃30s,共40个循环。

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