本发明涉及一类从瑶药定心藤中提取的吲哚类生物碱类化合物，以及他们在制备治疗高尿酸血症药物中的新应用。具体涉及一种应用于降高尿酸血症的定心藤提取物及其应用。技术背景高尿酸血症(hyperuricemia,hua)是一种因尿酸合成增加和(或)尿酸排泄减少所引起的代谢性疾病，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸肾结石及痛风性肾病的形成。90％的高尿酸血症是由肾脏排泄受损引起的，慢性肾脏疾病在发展进程中往往伴有高尿酸血症，后者会进一步损害肾脏，引起急性尿酸性肾病、慢性尿酸性肾病和尿酸性肾结石等病症。目前治疗高尿酸血症肾病的药物主要以西药为主，主要有黄嘌呤氧化酶抑制剂，例如：别嘌呤醇、非布司他等；或者促进尿酸排泄的药物，例如：丙磺舒、苯溴马隆等。但是上述药物都有严重的副作用，例如：肾毒性、过敏反应、心血管毒性、肝肾毒性等，从而导致这些药物在临床上的使用受到了严重的限制。近年来，由于中药毒副作用小，疗效确切，显示较强优势，因此中药治疗尿酸性肾病得到广泛重视。本发明选用尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾盐作为化学诱导剂，使小鼠产生极性高尿酸血症，另外也可损伤肾功能，使血中尿素氮升高。此方法简便、重现性好。高尿酸血症的发病机制目前认为与嘌呤类物质代谢紊乱和(或)尿酸排泄障碍有关。本发明通过检测化合物高低剂量组血清尿酸(ua)、尿素氮(bun)含量，肝脏黄嘌呤氧化酶(xod)值、腺苷脱氨酶(ada)活力，以及肾脏转运体murat1、moat1、mglut9mrna的表达探讨降尿酸作用机制。定心藤(mappianthusiodoideshand.-mazz.)为茶茱萸科定心藤属(mappianthushand.-mazz.)植物的根及藤茎，又名：甜果藤(广东海南)，麦撇花藤、铜钻、藤蛇总管、黄九牛(广西)，黄马胎(广东)，产于我国福建、湖南、广东、海南、广西、贵州、云南等地，生于海拔800-1800米的疏林、灌丛及沟谷林内。核果椭圆形，被淡黄色，硬伏毛，成熟时呈橙黄或橙红色，果肉薄而甜。定心藤根或老藤药，为瑶药“十八钻”之一，功效为活血调经、祛风除湿，主要治疗跌打损伤、黄疸、关节疼痛等。迄今，学者对定心藤植物化学的研究选取的植物产地主要有广西南宁、金秀、大明山、清凉镇，云南省，分离到的化学成分主要有：单萜吲哚类生物碱、木脂素类、酚类、多糖类、倍半萜醇、其他类等，其中一些生物碱类具有一定的细胞毒性和二氢苯并呋喃木脂素类具有抗炎活性。迄今，未见有关其所含吲哚类生物碱具有降低高尿酸血症的报道。技术实现要素：针对上述发现，本发明提供了一种应用于治疗高尿酸血症的吲哚类生物碱类化合物，，是从定心藤药材中提取的吲哚类生物碱类化合物。所述吲哚类生物碱类化合物的结构母核如结构式(ⅰ)所示：所述吲哚类生物碱类化合物的结构式为：所述吲哚类生物碱类化合物的结构式为：所述吲哚类生物碱类化合物的结构式为：一种应用于降高尿酸血症的定心藤提取物的制备方法，包括以下步骤：1)定心藤的干燥根及藤茎粉粹，用95％乙醇加热回流提取，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；2)浸膏用适量水混悬，氯仿萃取，得水层和氯仿层；3)水层蒸至浸膏状加适量甲醇溶解后，过mci柱，用乙醇和水混合液梯度洗脱得流分；4)将各个流分进一步过反相硅胶柱色谱，用乙睛和水混合液洗脱，得到第二次流分；5)将第二次流分经sephadexlh-20用氯仿和甲醇混合液除色素，得到生物碱混合物；6)将生物碱混合物过半制备液相色谱纯化，得到单体化合物1、2、3。7)上述单体化合物1-3运用ms、1hnmr、13cnmr等波谱学数据和文献数据综合解析，鉴定其结构分别为：化合物1(3α-5α-tetrahydrodeoxycordifolinelactam)、化合物2(5(s)-5-carboxystrictosidine)、化合物3(strictosidinicacid)。本发明有益技术效果为：该发明获得的治疗和预防高尿酸血症的吲哚类生物碱来源于分布广泛的中草药定心藤，植物资源廉价易得；化合物结构确定，作用机制明确；所涉及的制备工艺简单，易于实现工业规模化生产。附图说明图1化合物1对模型小鼠肾脏murat1、mglut9、moat1mrna表达的影响(,n＝10)注：与空白组比较，##p＜0.01；与模型组比较，***p＜0.001，**p＜0.01，*p＜0.05。kb为空白组，mx为高尿酸血症小鼠模型组，bplc为别嘌呤醇组，dl为化合物1低剂量组，dh为化合物1高剂量组。具体实施方式实施例一定心藤中吲哚类生物碱的提取分离与结构鉴定1.1化合物提取分离定心藤的干燥根及藤茎5kg，粉粹，80％的乙醇加热回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏。浸膏用适量水混悬，氯仿萃取，得水层和氯仿层。水层蒸至浸膏状得定心藤提取物。定心藤提取物加适量甲醇溶解后，过mci柱，用乙醇：水梯度洗脱(0:100，20:80，40:60，60:80，80:20，90:10)，得流分fr.a(37.5g)，fr.b(45.0g)，fr.c(26.2g)，fr.d(11.1g)，fr.e(19.0g)，fr.f(7.3g)，丙酮冲柱。各个流分进一步过反相硅胶柱色谱，乙睛-水洗脱。将fr.a以乙睛-水(0:100，5:95，10:90)梯度洗脱得fr.a1(80.0g)，fr.a2(8.1g)，fr.a3(6.0g)fr.a4(0.2g)，分别经sephadexlh-20用氯仿-甲醇(1:1)除色素。fr.a2过半制备液相色谱纯化，乙睛-水(5:95)等度洗脱，得化合物1。将fr.c以乙睛-水(10:90，15:85，20:80，25:75，30:70)梯度洗脱得fr.c1(14.1g)，fr.c2(5.7g)，fr.c3(3.0g)，fr.c4(1.9g)，fr.c5(0.1714g)，分别经sephadexlh-20用氯仿甲醇(1:1)去除色素。fr.c3过半制备液相色谱纯化，乙睛-水(15：85)等度洗脱，得化合物2，化合物3。1.2化合物结构鉴定运用ms、1hnmr、13cnmr、hsqc、1h-1hcosy、hmbc、noesy和hr-esi-ms等波谱学数据综合解析分离得到的3个化合物，鉴定其结构。结果为：化合物1：白色粉末，可溶于dmso，分子式c27h30n2o10；1h-nmr(600mhz,dmso-d6)。δ:5.04(1h,brs,h-3),5.35～5.32(1h,m,h-5),3.67(1h,d,j＝11.8hz,h-6),2.62～2.58(1h,m,h-6),7.42(1h,d,j＝7.8hz,h-9),6.99(1h,t,j＝7.5hz,h-10),7.10～7.06(1h,m,h-11),7.35(1h,d,j＝8.1hz,h-12),2.48(1h,dd,j＝5.6,3.6hz,h-14),2.02(1h,ddd,j＝13.7,11.9,5.0hz,h-14),3.09～3.05(1h,m,h-15),7.19(1h,d,j＝2.5hz,h-17),5.38(1h,dd,j＝17.1,1.9hz,h-18),5.35～5.32(1h,m,h-18),5.61(1h,dt,j＝17.1,9.9hz,h-19),2.69～2.63(1h,m,h-20),5.40(1h,d,j＝1.9hz,h-21),4.45(1h,d,j＝7.9hz,h-1'),3.15～2.77(c-h-2',3',4',5')；13c-nmr(150mhz,dmso-d6)δ:134.8(c-2),54.4(c-3),58.2(c-5),22.0(c-6),108.5(c-7),126.9(c-8),117.9(c-9),119.0(c-10),121.3(c-11),111.5(c-12),136.1(c-13),26.1(c-14),23.6(c-15),107.4(c-16),147.2(c-17),120.3(c-18),133.2(c-19),42.9(c-20),96.2(c-21),165.6(c-22),171.0(c-23),99.3(c-1′),72.8(c-2′),77.2(c-3′),69.9(c-4′),76.8(c-5′),61.0(c-6′)。经查阅文献该化合物的结构与已知化合物3α-5α-tetrahydrodeoxycordifolinelactam的一致；结构式为：化合物2：白色粉末，可溶于甲醇，c27h32n2o11；1h-nmr(600mhz,methanol-d4)。δ:4.61(1h,d,j＝11.6hz,h-3),3.92(1h,dd,j＝12.1,5.0hz,h-5),3.03(1h,ddd,j＝16.2,12.2,2.5hz,h-6),3.44～3.39(1h,m,h-6),7.30(1h,dd,j＝8.2,1.0hz,h-9),7.11(1h,ddd,j＝8.2,7.0,1.1hz,h-10),7.03(1h,ddd,j＝8.0,7.0,1.0hz,h-11),7.45(1h,dd,j＝8.0,1.0hz,h-12),2.43(1h,ddd,j＝15.1,12.5,3.0hz,h-14),2.23(1h,ddd,j＝14.4,12.2,3.8hz,h-14),3.08(1h,dt,j＝12.5,4.2hz,h-15),7.81(1h,s,h-17),5.37(1h,dt,j＝17.4,1.4hz,h-18),5.25(1h,dt,j＝10.6,1.3hz,h-18),5.88～5.80(1h,m,h-19),2.78～2.73(1h,m,h-20),5.91(1h,d,j＝9.2hz,h-21),3.79(3h,s,h-cooch3),4.82(1h,d,j＝7.9hz,h-1'),4.01(1h,dd,j＝11.8,2.1hz,h-6'),3.67(1h,dd,j＝11.8,7.0hz,h-6')；13c-nmr(150mhz,methanol-d4)。δ:130.4(c-2),52.9(c-3),59.5(c-5),24.0(c-6),108.3(c-7),127.5(c-8),119.2(c-9),120.6(c-10),123.4(c-11),112.2(c-12),138.5(c-13),34.6(c-14),32.6(c-15),108.6(c-16),157.2(c-17),119.8(c-18),135.2(c-19),45.3(c-20),97.4(c-21),171.8(c-cooch3),53.1(c-cooch3),173.5(c-cooh),100.4(c-1'),74.6(c-2'),78.0(c-3'),71.8(c-4'),78.8(c-5'),63.1(c-6')。经查阅文献该化合物的结构与已知化合物5(s)-5-carboxystrictosidine的一致，由此确定该化合物为5(s)-5-carboxystrictosidine。结构式为：化合物3：白色粉末，可溶于甲醇，c27h32n2o11；1h-nmr(600mhz,methanol-d4)。0δ:4.45(1h,d,j＝11.9hz,h-3),7.47(1h,d,j＝8.0hz,h-9),7.05(1h,ddd,j＝8.0,7.1,1.0hz,h-10),7.16～7.12(1h,m,h-11),7.33(1h,d,j＝8.2hz,h-12),2.17～2.10(1h,m,h-14),2.41～2.34(1h,m,h-14),3.01～2.98(1h,m,h-15),7.58(1h,s,h-17),5.33(1h,d,j＝17.3hz,h-18),5.22(1h,d,j＝10.7hz,h-18),5.88(1h,ddd,j＝17.6,10.5,7.4hz,h-19),2.77～2.66(1h,m,h-20),5.84(1h,d,j＝9.4hz,h-21),4.84(1h,d,j＝7.9hz,h-1'),3.72～3.22(6h,m,sugerproton)；13c-nmr(150mhz,methanol-d4)。δ:131.8(c-2),52.3(c-3),43.1(c-5),19.8(c-6),107.4(c-7),127.6(c-8),119.0(c-9),120.5(c-10),123.3(c-11),112.2(c-12),138.2(c-13),35.3(c-14),34.1(c-15),113.7(c-16),153.2(c-17),118.9(c-18),136.3(c-19),45.8(c-20),96.6(c-21),174.7(c-22),100.3(c-1),78.7(c-2),78.0(c-3),71.8(c-4),74.7(c-5),63.1(c-6)。经查阅文献该化合物的结构与已知化合物strictosidinicacid的一致，由此确定该化合物为strictosidinicacid；其结构式为：实施例二化合物1-3降尿酸活性实验2.1实验方法2.1.1药液的制备将分离得到的含量最高的化合物1、2、3(h1组、h2组、h3组)加水分别配成低剂量20mg/kg，高剂量50mg/kg溶液放于4℃冷藏待用。2.1.2小鼠分组及给药90只小鼠适应环境1周后，按体重随机分为9组，每组10只，即空白对照组、高尿酸血症模型组、阳性药组(别嘌呤醇10mg·kg-1)、化合物1(h1)高/低剂量组(50mg·kg-1、20mg·kg-1)。对照组和模型组给予对应体积纯净水，小鼠按照15ml·kg-1每天灌胃1次，连续7天，最后1次造模0.5h后给药。2.1.3高尿酸血症小鼠模型建立末次给药前0.5h腹腔注射350mg·kg-1氧嗪酸钾盐造模。空白组(对照组)腹腔注射相同浓度的0.8％cmc-na溶液，其它组均按2.2.2项说明给药。给药0.5h后，小鼠眼眶后静脉丛采血，并快速分离小鼠肾脏和肝脏，放置于-80℃超低温冰箱保存。全血于4℃、5000r·min-1离心10min，取上层血清置于4℃冰箱冷藏。2.1.4血清中尿酸(ua)、尿素氮(bun)水平检测取待测血清分别按照试剂说明书操作测定并计算血清ua、bun水平值。2.1.5肝脏xod检测肝脏组织称重后，加入预冷生理盐水制成10％肝组织匀浆。4℃、3500r·min-1离心10min，取上清液，按照试剂盒说明书测定组织匀浆中xod和总蛋白含量，计算xod活性。2.1.6rt-pcr检测肾脏3种尿酸转运体mrna表达取出每组10个冻存肾脏，切取50mg肾脏皮质，用trizol法提取总rna。鉴定完整性后，取2μl总rna,按照反转录试剂盒说明书合成cdna。用引物对cdna模板进行rt-pcr扩增(引物序列信息具体见表1)。94℃热启动3min、变性30s、55℃30s退火、72℃延伸1min进行30个循环后，延伸5min。在1.2％琼脂糖凝胶中电泳，经溴化乙啶染色，置于凝胶影像分析仪进行成像，并分析条带的吸光度,计算待测基因和内参gapdh表达量，求得oat1、urat1、glut9的基因相对表达值。2.1.7数据统计分析用spss19.0软件统计分析，结果以均数±标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验。以p＜0.05为有统计学意义。表1pcr引物序列/table1pcrprimersequence2.2实验结果2.2.1化合物1-3对高尿酸血症小鼠血清中尿酸及尿素氮的影响由表2可见，与空白组相比，模型组的小鼠尿酸和尿素氮水平显著升高(p＜0.01)。给药一周后，与模型组相比，阳性药别嘌呤醇组、定心藤中分离的化合物1-3高/低剂量组均能显著降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸和尿素氮水平(p＜0.01)。表2化合物1、2、3对高尿酸血症小鼠血清中尿酸及尿素氮的影响(,n＝10)注：与空白组比较，##p＜0.01；与模型组比较，**p＜0.05，*p＜0.01。2.2.2化合物1-3对高尿酸血症小鼠肝脏xod及ada活力的影响由表3可见，与空白组相比，模型组肝脏xod和ada活力显著升高(p＜0.01)。给药1周后，与模型组相比，别嘌呤醇组，化合物1-3高/低剂量组高尿酸血症小鼠肝脏xod活力均极显著下降，且对xod的抑制率超过了阳性药组，但随着化合物剂量升高，抑制率均出现下降趋势。表3h1对肝脏xod及对肝脏ada活力的影响(,n＝10)注：与空白组比较，##p＜0.01；与模型组比较，**p＜0.05，*p＜0.01。2.2.3化合物1对模型小鼠肾脏murat1、mglut9、moat1mrna表达的影响如图1所示，与空白组比较，模型组小鼠肾脏转运体murat1mrna表达显著升高(##p＜0.01)，mglut9mrna表达显著升高(###p＜0.01)，oat1表达显著下降(p＜0.01)。与模型组比较，别嘌呤醇组与化合物1低剂量组均显著下调高尿酸血症小鼠肾脏murat1mrna表达和mglut9mrna表达(***p＜0.001)；化合物1高剂量组均能显著下调模型小鼠肾脏murat1mrna表达(**p＜0.01)，别嘌呤醇组与化合物1高/低剂量组可显著上调高尿酸血症小鼠oat1的mrna表达(p＜0.001)。当前第1页12当前第1页12