一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测大豆根腐病的引物探针组合物、试剂盒及其应用与流程

文档序号:19952384发布日期:2020-02-18 10:50阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测终极腐霉的引物探针组合物,其特征在于,该引物探针组合物由正向引物purpa-f、反向引物purpa-r和探针puprobe组成,所述的正向引物purpa-f具有如seqidno.1所示的核苷酸序列,反向引物purpa-r具有如seqidno.2所示的核苷酸序列,探针puprobe具有如seqidno.3所示的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的引物探针组合物在制备用于检测终极腐霉的试剂盒中的应用。

3.一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测终极腐霉的试剂盒,其特征在于,该试剂盒中包含权利要求1所述的引物探针组合物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,该试剂盒中各试剂的浓度和用量为:2.1μl10μm的正向引物purpa-f、2.1μl10μm的反向引物purpa-r、0.6μl10μm的探针puprobe、29.5μlrehydrationbuffer、12.2μldepc处理水、2.5μl280mmmgac和酶干粉,配成49μl的反应体系。

5.权利要求3或4所述的试剂盒在检测终极腐霉中的应用。

6.权利要求1所述的引物探针组合物在检测终极腐霉中的应用。

7.一种基于重组酶聚合酶扩增方法检测终极腐霉的方法,其特征在于:提取待检测样品的基因组dna作为反应模板,采用权利要求1所述的引物探针组合物进行重组酶聚合酶扩增,然后使用侧流层析试纸条检测扩增产物,判断检测结果:当检测线和控制线上都出现指示带时,则表示待测病菌为终极腐霉。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:该方法的具体工艺参数为:提取待检测样品的基因组dna,取1μl待检微生物的dna作为反应模板,加入49μl权利要求3或4所述的试剂盒中的检测溶液进行重组酶聚合酶扩增,反应程序为:39℃反应扩增20min。

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