一种人四种传染病的快速检测方法、液相芯片及试剂盒与流程

文档序号:20916725发布日期:2020-05-29 13:37阅读:387来源:国知局

本发明涉及生命科学和生物技术领域,具体为一种人四种传染病的快速检测方法、液相芯片及试剂盒。



背景技术:

传染病是由各种病原体引起的能在人与人、动物与动物或人与动物之间相互传播的一类疾病,病原体中大部分是微生物,小部分为寄生虫,寄生虫引起者又称寄生虫病,有些传染病,防疫部门必须及时掌握其发病情况,及时采取对策,因此发现后应按规定时间及时向当地防疫部门报告,称为法定传染病,我国目前的法定报告传染病分为甲、乙、丙3类,共39种,此外,还包括国家卫生计生委决定列入乙类、丙类传染病管理的其他传染病和按照甲类管理开展应急监测报告的其他传染病,传染病是一种可以从一个人或其他物种,经过各种途径传染给另一个人或物种的感染病。通常这种疾病可借由直接接触已感染之个体、感染者之体液及排泄物、感染者所污染到的物体,可以通过空气传播、水源传播、食物传播、接触传播、土壤传播、垂直传播等。

现有的传染病中,其中四种传染病传播较广,为艾滋病、梅毒、丙肝和乙肝,人类免疫缺陷病毒即艾滋病(aids,获得性免疫缺陷综合征)病毒,是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒,梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病,主要通过性交传染。本病表现极为复杂,几乎可侵犯全身各器官,造成多器官的损害,丙型病毒性肝炎,简称为丙型肝炎、丙肝,是一种由丙型肝炎病毒(hcv)感染引起的病毒性肝炎,主要经输血、针刺、吸毒等传播,乙型病毒性肝炎系由乙肝病毒引起,以乏力、食欲减退、恶心、呕吐、厌油、肝大及肝功能异常为主要临床表现。

现有的艾滋病、梅毒、丙肝和乙肝在通过检测试剂盒进行检测时,因为在体外操作,在对检测样本进行抽取后,因为外部环境等因素容易导致细胞和病毒活性降低,导致检测反应进行程度较低使得显色结果不明显,不能准确的得到检测结果。



技术实现要素:

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足,本发明提供了一种人四种传染病的快速检测方法、液相芯片及试剂盒,解决了因为在体外操作,在对检测样本进行抽取后,因为外部环境等因素容易导致细胞和病毒活性降低,导致检测反应进行程度较低使得显色结果不明显,不能准确的得到检测结果的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:一种人四种传染病的液相芯片,主要包括有样品稀释液60-100份、hiv检测用寡核苷酸10-20份、hiv阳性对照物5-10份、胰岛素0.1-0.2份、氨基酸20-50份、dna聚合酶0.2-0.5份、逆转录酶0.2-0.5份、rna聚合酶0.2-0.5份、核酸释放剂10-20份、靶向核苷酸检测引物5-10份、tp阳性对照物5-10份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10-20份和pcr扩增反应试剂5-10份。

优选的,所述hiv检测用寡核苷酸经过荧光基团和荧光猝灭剂的标记,所述靶向核苷酸检测引物经过生物显示剂的标记,所述抗乙肝前s1抗原单克隆抗体经过吖啶酯标记,所述pcr扩增反应试剂经过荧光剂标记吗,所述氨基酸为丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、羟脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸和酪氨酸二钠的混合物。

优选的,所述其原料按重量分包括:样品稀释液100份、hiv检测用寡核苷酸20份、hiv阳性对照物10份、胰岛素0.1份、氨基酸50份、dna聚合酶0.5份、逆转录酶0.5份、rna聚合酶0.5份、核酸释放剂10份、靶向核苷酸检测引物5份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10份和pcr扩增反应试剂5份。

优选的,所述其原料按重量分包括:样品稀释液100份、hiv检测用寡核苷酸10份、hiv阳性对照物5份、胰岛素0.2份、氨基酸50份、dna聚合酶0.5份、逆转录酶0.5份、rna聚合酶0.5份、核酸释放剂20份、靶向核苷酸检测引物10份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10份和pcr扩增反应试剂5份。

优选的,所述其原料按重量分包括:样品稀释液100份、hiv检测用寡核苷酸10份、hiv阳性对照物5份、胰岛素0.1份、氨基酸20份、dna聚合酶0.2份、逆转录酶0.2份、rna聚合酶0.2份、核酸释放剂10份、靶向核苷酸检测引物5份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体20份和pcr扩增反应试剂5份。

优选的,所述其原料按重量分包括:样品稀释液60份、hiv检测用寡核苷酸10份、hiv阳性对照物5份、胰岛素0.1份、氨基酸20份、dna聚合酶0.2份、逆转录酶0.2份、rna聚合酶0.2份、核酸释放剂10份、靶向核苷酸检测引物5份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10份和pcr扩增反应试剂10份。

本发明还公开了一种人四种传染病的试剂盒,包括:权利要求1所述的液相芯片和内参核苷酸。

本发明还公开了一种人四种传染病的快速检测方法,其检测方法具体包括以下步骤:

s1、样本抽取:抽取100ml血清标本加入trizol,室温静置5min,10℃下通过离心机1000g离心10min,将上清液抽取至另一试剂管,在10℃下重新通过离心机1000g离心10min,将上清液去除,将离心后的血清取出备用;

s2、血清的检测:在室温下向权利要求7中的试剂盒内滴入25ml经过离心后的血清,摇匀在25℃下静置5min,通过显色效果判断传染病种类;

s3、后期处理:将经过检测后的试剂盒和血清通过600度高温蒸馏进行杀菌消毒处理,后将其焚烧,灰尘留存深埋。

(三)有益效果

本发明提供了一种高性能磷脂酶a2检测试剂盒。具备以下有益效果:通过将样品稀释液60-100份、hiv检测用寡核苷酸10-20份、hiv阳性对照物5-10份、胰岛素0.1-0.2份、氨基酸20-50份、dna聚合酶0.2-0.5份、逆转录酶0.2-0.5份、rna聚合酶0.2-0.5份、核酸释放剂10-20份、靶向核苷酸检测引物5-10份、tp阳性对照物5-10份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10-20份和pcr扩增反应试剂5-10份混合制备得出液相芯片,通过试剂盒进行封存,然后抽取100ml血清标本加入trizol,室温静置5min,10℃下通过离心机1000g离心10min,将上清液抽取至另一试剂管,在10℃下重新通过离心机1000g离心10min,将上清液去除,将离心后的血清取出备用,在室温下向试剂盒内滴入25ml经过离心后的血清,摇匀在25℃下静置5min,通过显色效果判断传染病种类,将经过检测后的试剂盒和血清通过600度高温蒸馏进行杀菌消毒处理,后将其焚烧,灰尘留存深埋,在对艾滋病、梅毒、丙肝和乙肝进行检测时,通过胰岛素、氨基酸的配合使得细胞和病毒都能保持较高的活性,并且通过dna聚合酶、逆转录酶和rna聚合酶的配合加速催化艾滋病、梅毒、丙肝和乙肝病毒反应的进程,大大增加了检测试剂盒的检测效果,使得检测效果更加的精准。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。

本发明实施例提供四种技术方案:一种人四种传染病的快速检测方法、液相芯片及试剂盒,具体包括以下实施例:

实施例1:将样品稀释液100份、hiv检测用寡核苷酸20份、hiv阳性对照物10份、胰岛素0.1份、氨基酸50份、dna聚合酶0.5份、逆转录酶0.5份、rna聚合酶0.5份、核酸释放剂10份、靶向核苷酸检测引物5份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10份和pcr扩增反应试剂5份混合制备得出液相芯片,通过试剂盒进行封存,然后抽取100ml血清标本加入trizol,室温静置5min,10℃下通过离心机1000g离心10min,将上清液抽取至另一试剂管,在10℃下重新通过离心机1000g离心10min,将上清液去除,将离心后的血清取出备用,在室温下向试剂盒内滴入25ml经过离心后的血清,摇匀在25℃下静置5min,通过显色效果判断传染病种类,将经过检测后的试剂盒和血清通过600度高温蒸馏进行杀菌消毒处理,后将其焚烧,灰尘留存深埋。

实施例2:将样品稀释液100份、hiv检测用寡核苷酸10份、hiv阳性对照物5份、胰岛素0.2份、氨基酸50份、dna聚合酶0.5份、逆转录酶0.5份、rna聚合酶0.5份、核酸释放剂20份、靶向核苷酸检测引物10份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10份和pcr扩增反应试剂5份混合制备得出液相芯片,通过试剂盒进行封存,然后抽取100ml血清标本加入trizol,室温静置5min,10℃下通过离心机1000g离心10min,将上清液抽取至另一试剂管,在10℃下重新通过离心机1000g离心10min,将上清液去除,将离心后的血清取出备用,在室温下向试剂盒内滴入25ml经过离心后的血清,摇匀在25℃下静置5min,通过显色效果判断传染病种类,将经过检测后的试剂盒和血清通过600度高温蒸馏进行杀菌消毒处理,后将其焚烧,灰尘留存深埋。

实施例3:将样品稀释液100份、hiv检测用寡核苷酸10份、hiv阳性对照物5份、胰岛素0.1份、氨基酸20份、dna聚合酶0.2份、逆转录酶0.2份、rna聚合酶0.2份、核酸释放剂10份、靶向核苷酸检测引物5份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体20份和pcr扩增反应试剂5份混合制备得出液相芯片,通过试剂盒进行封存,然后抽取100ml血清标本加入trizol,室温静置5min,10℃下通过离心机1000g离心10min,将上清液抽取至另一试剂管,在10℃下重新通过离心机1000g离心10min,将上清液去除,将离心后的血清取出备用,在室温下向试剂盒内滴入25ml经过离心后的血清,摇匀在25℃下静置5min,通过显色效果判断传染病种类,将经过检测后的试剂盒和血清通过600度高温蒸馏进行杀菌消毒处理,后将其焚烧,灰尘留存深埋。

实施例4:将样品稀释液60份、hiv检测用寡核苷酸10份、hiv阳性对照物5份、胰岛素0.1份、氨基酸20份、dna聚合酶0.2份、逆转录酶0.2份、rna聚合酶0.2份、核酸释放剂10份、靶向核苷酸检测引物5份、tp阳性对照物5份、抗乙肝前s1抗原单克隆抗体10份和pcr扩增反应试剂10份混合制备得出液相芯片,通过试剂盒进行封存,然后抽取100ml血清标本加入trizol,室温静置5min,10℃下通过离心机1000g离心10min,将上清液抽取至另一试剂管,在10℃下重新通过离心机1000g离心10min,将上清液去除,将离心后的血清取出备用,在室温下向试剂盒内滴入25ml经过离心后的血清,摇匀在25℃下静置5min,通过显色效果判断传染病种类,将经过检测后的试剂盒和血清通过600度高温蒸馏进行杀菌消毒处理,后将其焚烧,灰尘留存深埋。

对比实验

某生物医学检验中心分别抽取四百份血清样本,其中100份为hiv病毒携带者,100份为梅毒病毒携带者,100份为乙肝病毒携带者,100份丙肝病毒携带者,将以上四百十份血清样本分别对由实施例1、实施例2、实施例3和实施例4同时进行试剂检测工作,并在相同的时间以及条件下进行操作,在检测的过程中,同时统计检测结果数据并制作统计表,结果如下表所示:

如表所知实施例1对hiv病毒携带血清检测效果最好,实施例2对梅毒病毒携带血清检测效果最好,实施例3对丙肝病毒携带血清检测效果最好,实施例4对丙肝病毒携带血清检测效果最好。

需要说明的是,在本文中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

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