一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌JYBR-190及其在食品、药品中的应用的制作方法

本发明涉及一种微生物菌种，具体的说是一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌jybr-190及其在食品、药品中的应用。
背景技术：
：乳双歧杆菌，也叫动物双歧杆菌(bifidobacterium)，是人和许多哺乳动物肠道中的优势菌之一。可以在人体肠道内能够合成维生素b1、b2、b6等，由人体缓慢地吸收，也可以分泌多种酶类，促进食品的降解与吸收，还能发酵乳糖产生半乳糖，可提高“乳糖不耐症”患者对乳制品的利用率。随着生活环境的不断恶化，细菌、病毒往往会引发一些疾病，例如感冒、气管炎、肺炎、胃肠炎等，这些疾病虽传染性不强，但也无法彻底从生活中隔离通常会给人们的生活带来不变，这些疾病还常常发生在抵抗力弱的人群中，例如老人、儿童、术后人群。现在人民为了减少发病几率会进补一些提高机体抵抗力的药物或食品，而这些食品并不完全适合老人、儿童、术后人群食用。目前用于提高机体抵抗力的食品，大多为药店购买的营养品或中药材，这些食品对于提高机体免疫力方面，效果差，往往起不到理想效果。技术实现要素：本发明解决的问题是提高机体免疫力，减少疾病发生，增强人群机体体质等问题，本发明提供一种乳双歧杆菌jybr-190，该菌种具有提高nk细胞和吞噬细胞活性，提高红细胞免疫黏附性，从而通过体液免疫提高机体免疫力，提高b淋巴细胞的活化增殖和分泌，从而通过细胞免疫提高机体免疫力，可以有效提高人体的免疫力，同时又减少疾病的发生。本发明提供的一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌jybr-190，乳双歧杆菌的保藏编号为：cgmccno.18092，保藏日期为2019年7月8日，菌种命名为jybr-190，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。本发明的另一个目的在于所述的一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌jybr-190在制备食品、药品中应用进一步，所述食品、药品在提高机体免疫力食品中的应用。进一步，所述食品、药品是以保藏编号为：cgmccno.18092的乳双歧杆菌jybr-190进行制备。进一步，所述食品、药品具有提高nk细胞活性和吞噬细胞活性，提高红细胞免疫黏附性，提高b淋巴细胞的活化增殖和分泌。进一步，所述食品、药品包含乳双歧杆菌jybr-190冻干粉。进一步，所述乳双歧杆菌jybr-190冻干粉的制备方法是体积百分比，将1％的乳双歧杆菌菌种接种到99％的mrs液体培养基中，在37℃条件下，厌氧培养24小时，取mrs菌液，离心、冻干，得到菌粉，按体积比1:1，在菌粉中加入低聚异麦芽糖，混合均匀得到乳双歧杆菌冻干粉，菌种命名为jybr-190；所述培养基的组分为：蛋白胨10g，牛肉粉5g，酵母粉4g，k2hpo4·7h2o2g，柠檬酸三铵2g，醋酸钠·3h2o5g，葡萄糖20g，吐温801ml，mgso4·7h2o0.2g，mnso4·4h2o0.05g，蒸馏水1000ml。进一步，所述乳双歧杆菌jybr-190冻干粉中的活菌数﹥50亿/g。进一步，所述乳双歧杆菌jybr-190冻干粉中的活菌数为50亿/g、150亿/g、250亿/g、500亿/g、1000亿/g。本发明的有益效果为：本发明提供的乳双歧杆菌，其保藏编号为：cgmccno.18092，保藏日期为2019年7月8日，菌种命名为jybr-190，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，其分类均属为乳双歧杆菌bifidobacteriumlactis，即动物双歧杆菌乳亚种，其分类单元为：bacteria；actinobacteria；bifidobacteriales；bifidobacteriaceae；bifidobacterium.。本发明提供的乳双歧杆菌jybr-190，乳双歧杆菌jybr-190对机体的免疫调节作用主要包含体液免疫和细胞免疫两个方面，具体为该菌种具有激活nk细胞和吞噬细胞活性，提高红细胞免疫黏附性，从而通过体液免疫提高机体免疫力，提高b淋巴细胞的活化增殖和分泌从而通过细胞免疫提高机体免疫力，可以有效人群机体的免疫力。本发明制备的含有乳双歧杆菌jybr-190冻干粉的食品，可以有效提高机体免疫力，减少疾病的发生，同时具有增强机体体质。附图说明图1为不同剂量的乳双歧杆菌jybr-190菌液对小鼠吞噬功能影响的曲线图；图2为不同剂量的乳双歧杆菌jybr-190对小鼠脾重影响的曲线图；图3为乳双歧杆菌jybr-190对小鼠脾细胞转化影响的柱状图；具体实施方式：为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。本发明提供能提高人体免疫力的乳双歧杆菌，其保藏编号为：cgmccno.18092，保藏日期为2019年7月8日，菌种命名为jybr-190，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，其分类均属为乳双歧杆菌属(bifidobacteriumlactis)，即动物双歧杆菌乳亚种，其分类单元为：bacteria；actinobacteria；bifidobacteriales；bifidobacteriaceae；bifidobacterium.。本发明中所用对照检测菌种均为市售食品；所述低聚异麦芽糖购自保龄宝生物股份有限公司；所述基因组dna试剂盒购自生工生物工程(上海)股份有限公司；改良mrs琼脂培养基：每升difco288210mrs琼脂培养基中加入5ml的sigmad-9016双氯青霉素钠盐溶液、10ml的merckno.5679licl溶液、5ml的merckno.2839盐酸半胱氨酸溶液，混合均匀，制得mrs琼脂培养基；其中sigmad-9016双氯青霉素钠盐溶液(浓度为10g/l)，经过0.45μm孔径微孔滤膜过滤除菌；其中merckno.5679licl溶液(浓度为0.1g/ml),经过0.45μm孔径微孔滤膜过滤除菌；其中merckno.2839盐酸半胱氨酸溶液的浓度为100g/l；lb肉汤培养基：蛋白胨10g、氯化钠5g、酵母膏粉5g，用蒸馏水定容至1升，混合均匀，调节ph值至7.0，得到lb肉汤培养基；emb培养基:称取emb培养基粉37.4g，加热搅拌使其溶解于1000m1蒸馏水中，分装至三角瓶，121℃高压灭菌15min后备用；ec培养基:胰胨2g，葡萄糖2g,酵母浸膏o.5g,na2hp040.4g,琼脂2g,kh2po40.4g，蒸馏水1ooml；加热溶解调ph7.4,121℃高压灭菌15min，冷至45～50℃时，加叠氮钠40mg；bs培养基:称取bs培养基粉68.9g，再吸取吐温-801ml，加热搅拌使其溶解于1000m1蒸馏水中。118℃高压灭菌30min，冷却至50～55℃时倾入平皿；lbs琼脂培养基:称取lbs琼脂84.0g，再吸取吐温-801ml和冰乙酸1.3m1，加热搅拌使其溶解于1ooomi蒸馏水中，当日使用，无需高压灭菌。次日使用，需118℃高压灭菌15min；rpmi1640培养基购自gibco公司；cona(含conai6ug/ml)购自索莱宝公司；1uci3h-tdr购自中国原子能研究院同位素所；闪烁液购自美国pe-perkinelmer公司；实施例1本发明提供的一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌jybr-1901.菌种的来源样本来源于新疆伊犁州牧民家里自然发酵酸奶；2.菌种的分离、纯化1)无菌条件下称取新疆伊犁州牧民家里自然发酵酸奶5g，将酸奶加入到45ml含有玻璃珠的浓度为0.85％的灭菌生理盐水中，混合均匀，制得母液；2)在转速为1500转/分钟，将母液振荡10分钟，在无菌条件下取1ml母液按10倍梯度进行稀释，形成稀释液，选择第7、8、9稀释度的稀释液，取0.1ml稀释液滴加到改良mrs培养基平板上，涂抹均匀，每个稀释度的稀释液做两份，同时以生理盐水做空白对照组，平板倒置于厌氧培养罐中37℃培养72h，观察菌落形态为大而乳白色时，即可初步判定为乳双歧杆菌，既得培养物菌种，命名为jybr-190。3.菌种鉴定1)选取通用引物：27f引物、1492r引物，备用；引物序列为：27f：5'-agagtttgatcmtggctcag-3'1492r：5'-ggttaccttgttacgactt-3'2)利用基因组dna试剂盒提取jybr-190的基因组dna，然后进行pcr扩增16srdna片段，得到扩增产物，随后将扩增产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，通过测序检测16srdna的全长，在eztaxon数据库进行blast比对，进行同源性比较，该菌种属于双歧杆菌属(bifidobacterium)，为动物双歧杆菌乳亚种，其分类单元为：bacteria；actinobacteria；bifidobacteriales；bifidobacteriaceae；bifidobacterium.，保藏中心是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为:cgmccno.18092，保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。实施例2乳双歧杆菌jybr-190冻干粉的制备乳双歧杆菌冻干粉的制备方法是按体积百分比，将1％的乳双歧杆菌菌种接种到99％的mrs液体培养基中，在37℃条件下，厌氧培养24小时，取mrs菌液，离心、冻干，得到菌粉，按体积比1:1，在菌粉中加入低聚异麦芽糖，混合均匀得到乳双歧杆菌冻干粉，菌种命名为jybr-190，其中所述的乳双歧杆菌jybr-190冻干粉中的活菌数为50亿/g、150亿/g、250亿/g、500亿/g、1000亿/g。实施3乳双歧杆菌jybr-190对小鼠细胞免疫的影响1、菌液制备将乳双歧杆菌jybr-190菌种接种于lb肉汤培养基中，37℃条件下，厌氧培养24h,取10ml菌液，用无菌pbs缓冲液洗涤3次，然后用麦氏比浊法调整菌液至107cfu/ml、108cfu/ml、109cfu/ml、1010cfu/ml，制得107cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液、108cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液、109cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液、1010cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液，备用；2、碳粒廓清试验①选取小鼠50只，体重20g，平均分为5组，即pbs对照组、试验组1、试验组2、试验组3、试验组4，每组10只，备用；试验组1每天腹腔注射5ml的107cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液，每天1次，连续注射4天；试验组2每天腹腔注射5ml的108cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液，每天1次，连续注射4天；试验组3每天腹腔注射5ml的109cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液，每天1次，连续注射4天；试验组4每天腹腔注射5ml的1010cfu/ml乳双歧杆菌jybr-190菌液，每天1次，连续注射4天；pbs对照组注每天腹腔注射5ml的的生理盐水，每天1次，连续注射4天；②将墨汁用生理盐水按4倍稀释后,按0.2ml/只的剂量将稀释后的墨汁经尾静脉注入到各组小鼠的体内,然后分别在注入稀释墨汁后的2min、10min、20min、30min后，眼眶取血25ul,并将取出的小鼠血样分别加入到2ml浓度为0.1％的碳酸钠溶液中；用酶标仪测650nm波长的od值,计算吞噬指数k，同时脱颈处死小鼠,取脾称重,计算脾重(mg)/体重(g),结果见表1、图1、图2k＝logod1-logod2/t2-t1结果：表1乳双歧杆菌jybr-190对小鼠碳廓清率的影响注：1.*p＜0.05**p＜0.001如表1所示,小鼠腹腔注射双歧杆菌jybr-190菌液后,血中碳粒廓清速度显著加快。2min时,与pbs组相比，血中碳粒的滞留量相对减少，20min时,与pbs组相比，碳粒已基本廓清,30min时,pbs组血中碳浓度仍显著高于试验组；如图1所示，随着jybr-190剂量的增加，小鼠对碳粒的吞噬能力逐渐增强。如图2所示：乳双歧杆菌jybr-190对小鼠脾重的影响，小鼠腹腔注射乳双歧杆菌jybr-190菌液后,测定小鼠脾重量,计算每克体重中所含脾的毫克数，结果发现乳双歧杆菌jybr-190菌液腹腔注射后,小鼠脾重显著增加,并且随注射剂量增大,脾重增加更加显著。3、淋巴细胞转化试验1)脱颈处死c57bl小鼠,取小鼠脾脏，研磨后用200目的滤网过滤，并加入红细胞裂解液裂解10min后离心，用pbs重悬后，制备c57bl小鼠脾细胞悬液，同时用台盼蓝拒染法测定细胞活力(死亡的细胞会被染成蓝色),调整细胞浓度至8x108/ml，将小鼠脾细胞悬液平均分为9份，备用；2)乳双歧杆菌jybr-190菌悬液的制备以活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液为例，根据活菌数要求，取乳双歧杆菌jybr-190冻干粉和pbs缓冲液，混匀，制得活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液；根据活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液的制备方法，依次制备活菌数为5×107cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液、活菌数为5×108cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液、活菌数为5×109cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液，其中制备方法只需调整乳双歧杆菌jybr-190冻干粉与pbs缓冲液的加入量，分别制得活菌数为5×107cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液、活菌数为5×108cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液、活菌数为5×109cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液；3)制备待检菌液制备活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190的待检测菌液取步骤1)中的c57bl小鼠脾细胞悬液100ul加入96孔板中,再在各孔中加入活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液50ul，最后用rpmi1640细胞培养基补充至各孔总体积为200ul，将96孔板置于5％co2,37℃培养箱内，培养56h,再于各孔中加入1uci3h-tdr,继续在5％co2,37℃培养箱内培养至72h,收集96孔板细胞培养板中细胞置于49型玻纤滤纸上,待干燥后加入闪烁液(加入量按照说明书中的加入量进行操作)，制得活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190的待检测菌液；根据活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190待检测菌液的制备方法，依次制备活菌数为5×107cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190待检测菌液、活菌数为5×108cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190待检测菌液、活菌数为5×109cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190待检测菌液，其中制备方法中只需调整不同活菌数的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液，其他均相同；制备活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190+cona混合待检测菌液的制备在步骤1)中的c57bl小鼠脾细胞悬液100ul加入96孔板中,再在各孔中加入活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液50ul和50ul的cona(含conai6ug/ml)，最后用rpmi1640细胞培养基补充至各孔总体积为200ul，将96孔板置于5％co2,37℃培养箱内，培养56h,再于各孔中加入1uci3h-tdr,继续在5％co2,37℃培养箱内培养至72h,收集96孔板细胞培养板中细胞置于49型玻纤滤纸上,待干燥后加入闪烁液(加入量按照说明书中的加入量进行操作)，制得活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190+cona混合待检测菌液；根据活菌数为5×104cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190+cona混合待检测菌液的制备方法，依次制备活菌数为5×107cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190+cona混合待检测菌液、活菌数为5×108cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190+cona混合待检测菌液、活菌数为5×109cfu/ml的乳双歧杆菌jybr-190+cona混合待检测菌液，其中制备方法中只需调整不同活菌数的乳双歧杆菌jybr-190菌悬液，其他均相同；其中对照组1中菌悬液用生理盐水代替；4)用beckman液闪仪测定各组待检测菌液中掺入细胞中的3hcpm值，乳双歧杆菌jybr-190对小鼠脾脏淋巴细胞转化的影响见图3；通过图3可知：jybr-190单独与小鼠脾脏淋巴细胞混合培养时,与对照组(由于对照组数据为0，因此图中未显示)相比，其脾细胞内3h-tdr掺入量显著增加，加入jybr-190的剂量不同,对脾细胞的刺激程度也不同,其中以jybr-190菌浓度为108cfu/孔的刺激作用最大，大于cona(0.8ug/孔,即最终浓度4ug/ml)的刺激指数；此外,将不同浓度的乳双歧杆菌jybr-190和cona同时与脾细胞混合培养时,脾细胞的刺激指数均大于两者单独应用时的刺激指数，总结：乳双歧杆菌jybr-190能够非特异性活化巨噬细胞和增强淋巴细胞的转化功能。实施例4双歧杆菌对小鼠体液免疫的影响1、小鼠肠道菌群的检测1)材料和方法选取8周龄，体重约18-22g的小鼠30只,雌雄各半，平均分为2组，即对照组2、乳双歧杆菌jybr-190组，每组15只；分别选取emb培养基、ec培养基、bs培养基、lbs培养基，其中emb培养基用于培养分离肠杆菌、ec培养基培养分离肠球菌、bs培养基培养分离双歧杆菌、lbs培养基培养分离乳杆菌；2)试验方法乳双歧杆菌jybr-190组小鼠每天灌胃乳双歧杆菌jybr-190菌液(菌液的活菌数为109cfu/ml)，1次/天，5ml/次，连续灌胃10天；对照组2小鼠每天灌胃等量的生理盐水，1次/天，连续10天，10天后所有小鼠均采用脱颈法处死，取盲肠内容物，按体积比为1％的接种量分别将盲肠内容物接种在emb培养基、ec培养基、bs培养基、lbs培养基中，厌氧培养48-72h(主要是对盲肠内容物进行双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌及肠球菌的培养分离)，观察各个培养基中的菌落特征(双歧杆菌的菌落特征：在培养基上菌落光滑凸圆，边缘完整，乳白色，有光泽，质地柔软；乳杆菌的菌落特征：菌落中等大小，凸起，微白色，湿润，边缘整齐，菌落呈圆形；肠杆菌的菌落特征：菌落为紫色；肠球菌的菌落特征：肠球菌为革兰阳性菌，圆形或椭圆形，直径约0.5-1.0μm，无芽孢，呈单、双个或短链状排列，其菌落呈乳白色圆形，表面湿润光滑，边缘整齐，直径1-2mm)，并取特征菌落进行革兰氏染色、计算菌落个数(以log的菌落形成单位/克cfu/g表示)，结果如表2所示。表2乳双歧杆菌jybr-190对小鼠肠道正常菌群的影响如表2所示,灌胃乳双歧杆菌jybr-190菌液10天后,与对照组2相比。乳双歧杆菌jybr-190组小鼠肠道正常菌群中的肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌的细菌数显著减少。2、溶血空斑试验(pfc)试验1)材料和方法选取8周龄，体重约18-22g的小鼠10只,平均分为2组，即对照组3、乳双歧杆菌jybr-190组，每组15只；2)试验方法脾细胞混悬液的制备方法以乳双歧杆菌jybr-190为例制备乳双歧杆菌jybr-190组脾细胞混悬液的制备方法乳双歧杆菌jybr-190组小鼠每日灌胃乳双歧杆菌jybr-190菌液(菌液的活菌数为109cfu/ml)，每日1次，每次5ml，连喂6天，然后腹腔注射400ul的绵羊红细胞进行免疫，连续注射4天，脱颈处死小鼠，取出脾脏，将脾脏研磨后，用pbs液洗涤两次，然后按重量份数比为1:6，在1份脾脏中加入6份pbs液混匀，形成乳双歧杆菌jybr-190组脾细胞混悬液；根据乳双歧杆菌jybr-190组脾细胞混悬液的制备方法，制备对照组脾细胞混悬液，其中将对照组3中将乳双歧杆菌jybr-190菌液替换为等量的生理盐水，其他制备方法均一样；试验处理以乳双歧杆菌jybr-190组脾细胞混悬液中的一只小鼠的脾细胞混悬液为例计算溶血空斑数：在24孔板中的各孔内依次加入50μl的豚鼠补体、180μl的pbs液、50μl的浓度为10％的绵羊红细胞、20μl的脾细胞混悬液，混匀，密封，37℃条件下，孵育1.5h，然后观察24孔板中的空斑数；依照上述计算乳双歧杆菌jybr-190组中一只小鼠的脾细胞混悬液的溶血空斑数的方法，依次计算乳双歧杆菌jybr-190组中其他小鼠的平均脾细胞混悬液溶血空斑数和对照组小鼠的平均脾细胞混悬液溶血空斑数，结果见表3；3、脾脏称重计算1)材料和方法选取8周龄，体重约18-22g的小鼠10只,平均分为2组，即对照组4、乳双歧杆菌jybr-190组，每组15只；2)试验方法以乳双歧杆菌jybr-190一只小鼠为例计算乳双歧杆菌jybr-190组小鼠脾脏的重量乳双歧杆菌jybr-190组小鼠每日灌胃乳双歧杆菌jybr-190菌液(菌液的活菌数为109cfu/ml)，每日1次，每次5ml，连喂10天，脱颈处死小鼠，取出脾脏，用75％酒精浸泡2min，取出脾脏、称重；根据乳双歧杆菌jybr-190组一只小鼠脾脏的处理方法，依次对乳双歧杆菌jybr-190组其他小鼠的脾脏进行处理，称重，同时对对照组4各小鼠的脾脏进行处理，得到脾脏、进行称重，计算其平均值，结果见表4，表3乳双歧杆菌jybr-190对溶血空斑的影响对照组3乳双歧杆菌jybr-190组p空斑数(/脾)462.020±35.670236.630±30.624<0.01脾脏0.124±0.070.093±0.012<0.01表3所示,与对照组相比，乳双歧杆菌jybr-190组小鼠脾细胞的溶血空斑数及脾脏的重量均显著低于正常对照组。表4乳双歧杆菌与免疫指标间的相关性分析r(相关指数)p空斑数(/脾)0.957<0.01脾脏0.825<0.01如表4所示，乳双歧杆菌jybr-190数量与溶血空斑细胞数、脾脏重量呈显著正相关；乳双歧杆菌jybr-190的数量与溶血空斑细胞数、脾脏重量呈显著正相关。在免疫学中，机体在外来抗原的刺激下b淋巴细胞被激活为活化的b细胞,细胞经过增殖、抗原选择、免疫球蛋白类型转换、细胞表面某些标志的改变以及细胞体突变，最终分化为浆细胞，此时机体产生高亲和力抗体，即可进行体液免疫功能。因此，抗体形成的细胞数量的多少可以反映机体体液免疫状态。经常采用溶血空斑试验来测定抗体形成细胞的数量，发现菌群失调后的小鼠脾细胞悬液中的溶血空斑数量减少，这表明能释放抗srbc抗体的细胞减少,即抗体形成细胞减少，这说明缺少正常菌群作为抗原刺激物，活化的b细胞减少，机体体液免疫功能下降。脾脏是各类免疫细胞居住的场所,也是对外来抗原物质产生免疫应答及产生免疫效应物质(如抗体等)的重要基地。国外学者研究发现乳双歧杆菌可促进小鼠脾脏重量增加,脾细胞增殖,促进b淋巴细胞的转化等。我们对乳双歧杆菌jybr-190处理后小鼠的脾脏称重后发现,菌群失调小鼠脾脏重量显著低于正常小鼠，这表明由于缺乏正常菌群作为免疫原性物质的刺激,导致外周免疫器官的脾脏发育萎缩,不能够执行正常的免疫功能。乳双歧杆菌是机体肠道内含量最多的有益菌,它具有生物学屏障作用、调整肠道菌群、营养功能、增强免疫及抗肿瘤等效应,是人体健康的重要标志之一。我们将乳双歧杆菌与免疫指标溶血空斑细胞数和脾脏重量进行了相关性分析,发现双歧杆菌与其均有显著的正相关,说明乳双歧杆菌jybr-190在调节机体的体液免疫中发挥了重要的作用。实施例5以乳双歧杆菌jybr-190冻干粉作为主料制备乳酸菌饮料，步骤如下：1)按重量份数计，在50份水中加入百合2份、维生素b10.1份、维生素b20.1份、维生素b60.1份、维生素b120.1份、维生素c0.1份、赖氨酸氨酸0.5份、蛋氨酸0.5份、胶原蛋白6份、膳食纤维5份、卵磷脂2份、锌0.15份、铁0.15份、叶酸0.4份、脱脂乳粉2份，混合均匀，制得混合液ⅰ；2)按重量份数计，在混合液ⅰ中加入柠檬酸0.7份、果胶0.5份、海藻酸钠1份，混合均匀，煮沸10分钟，制得混合液ⅱ；3)按重量份数计，在混合液ⅱ中加入乳双歧杆菌jybr-190冻干粉5份、蜂蜜2份、酶制剂1份，混合均匀，分装、制得成品；在乳酸菌饮料中乳双歧杆菌jybr-190的活菌数为250亿/g。实施例6以乳双歧杆菌jybr-190冻干粉作为主料制备乳酸菌颗粒剂，步骤如下：1)按重量份数计，在8份水中加入百合2份、维生素b10.1份、维生素b20.1份、维生素b60.1份、维生素b120.1份、维生素c0.1份、赖氨酸氨酸0.5份、蛋氨酸0.5份、胶原蛋白5份、膳食纤维3份、卵磷脂2份、锌0.15份、铁0.15份、叶酸0.5份、脱脂乳粉2份，混合均匀，制得混合物ⅰ；2)按重量份数计，在混合液ⅰ中加入柠檬酸0.5份、果胶0.5份、海藻酸钠1份，混合均匀，煮沸10分钟，制得混合物ⅱ；3)按重量份数计，在混合物ⅱ中加入乳双歧杆菌jybr-190冻干粉8份、蜂蜜5份、酶制剂1份，混合均匀，过筛，经过制粒机，形成乳酸菌颗粒剂；在乳酸菌颗粒剂中乳双歧杆菌jybr-190的活菌数为1000亿/g。对比例1对比例1与实施例6不同的是，缺少乳双歧杆菌jybr-190冻干粉，其他技术特征均相同。对比例2对比例2与实施例6不同的是，缺少乳双歧杆菌jybr-190冻干粉、赖氨酸氨酸、蛋氨酸、胶原蛋白，其他技术特征均相同。试验1本发明中含有乳双歧杆菌jybr-190冻干粉的食品用于提高机体免疫力的试验试验成员来源：70岁男性老人，均为感冒初愈患者，每组各5人，分为7组，即2个试验组、1个空白组，4个对比组，试验组服用实施例5-6中的乳酸菌食品10g/天、对比组1为对比例1组中食品口服10g/天，对比组2为对比例2组中食品口服10g/天，对比组3为口服汤臣倍健蛋白粉10g/天(保健食品(食健字)g20140134，购自京东商城)，对比组4为口服北京同仁堂蜂王浆口服液10ml/天(保健食品(食健字)g20040736，购自京东商城)，空白组口服牛奶，200ml/天，连续服用1个月，然后检测各组内成员的免疫五项(包括iga、igd、ige、igg、igm)、补体检测(包括补体c3、c4)，并记录结果，结果见表；表5：实施例5-6、对比组1-3、空白组提高机体免疫力的试验组别igaigdigeiggigm补体c3补体c4实施例52.4±0.215.3±0.11.4±0.313.2±0.42.2±0.1654.32±23.1055.32±4.6实施例63.1±0.516.5±0.31.9±0.415.6±0.72.5±0.4712.12±71.3258.32±3.6对比组11.4±0.514.1±0.40.9±0.111.0±0.11.0±0.3531.32±23.1251.12±3.6对比组21.3±0.413.4±0.60.8±0.410.2±0.31.5±0.4435.62±32.1653.32±6.5对比组31.6±0.212.2±0.60.8±0.49.5±0.40.9±0.4466.34±23.2150.23±4.5对比组41.4±0.613.3±0.40.9±0.49.7±0.60.9±0.7543.35±12.3553.21±2.5空白组0.8±0.211.8±0.20.5±0.37.5±0.30.6±0.4375.45±46.0150.31±6.35由表5可知，本发明制备的食品可以有效提高机体免疫力。sequencelisting<110>山东中科嘉亿生物工程有限公司<120>一株能提高人体免疫力的乳双歧杆菌jybr-190及其在食品、药品中的应用<130>2019<160>3<170>patentinversion3.3<210>1<211>950<212>dna<213>乳双歧杆菌bifidobacteriumlactis<400>1ggcccgggaacgcattcaccgcggcgttgctgatccgcgattactagcgactccgccttc60acgcagtcgagttgcagactgcgatccgaactgagaccggttttcagcgatccgccccac120gtcaccgtgtcgcacgcgttgtaccggccattgtagcatgcgtgaagccctggacgtaag180gggcatgatgatctgacgtcatccccaccttcctccgagttgaccccggcggtcccacat240gagttcccggcatcacccgctggcaacatgcggcgagggttgcgctcgttgcgggactta300acccaacatctcacgacacgagctgacgacgaccatgcaccacctgtgaaccggccccga360agggaaaccgtgtctccacggcgatccggcacatgtcaagcccaggtaaggttcttcgcg420ttgcatcgaattaatccgcatgctccgccgcttgtgcgggcccccgtcaatttctttgag480ttttagccttgcggccgtactccccaggcgggatgcttaacgcgttggctccgacacggg540acccgtggaaagggccccacatccagcatccaccgtttacggcgtggactaccagggtat600ctaatcctgttcgctccccacgctttcgctcctcagcgtcagtgacggcccagagacctg660ccttcgccattggtgttcttcccgatatctacacattccaccgttacaccgggaattcca720gtctcccctaccgcactccagcccgcccgtacccggcgcagatccaccgttaggcgatgg780actttcacaccggacgcgacgaaccgcctacgagccctttacgcccaataaatccggata840acgctcgcaccctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccggtgcttattcga900acaatccactcaacacggccgaaaccgtgccttgcccttgaacaaaagcg950<210>2<211>20<212>dna<213>人工合成<400>2agagtttgatcmtggctcag20<210>3<211>19<212>dna<213>人工合成<400>3ggttaccttgttacgactt19当前第1页1 2 3