一种β-葡萄糖醛酸酶的纯化方法与流程

文档序号:20116012发布日期:2020-03-17 19:54阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种β-葡萄糖醛酸酶的纯化方法,其特征在于:包括下述步骤:

第一步,取成年蜗牛,饥饿1-2天排出消化道内的食物后,从壳口顺着贝壳螺旋的方向沿缝合线剪开贝壳,直至壳顶,然后将旋绕在壳轴上的软体部分取下来;

第二步,将剪下的软体部分置于培养皿中,剪开内脏团外包裹的体壁,将卷曲的内脏轻轻拉伸,裸露出充盈红棕色消化液的消化腺;用手术钳夹住消化腺的一端拉出使其与其他内脏组织分离后,立即放入搁置在冰板上的培养皿中;

第三步,用针头刺穿消化腺,将里面流出的粘稠液体和消化腺分别收集起来,并在4℃条件下,经8500-15000r/min离心15-45min,除去沉淀,然后将两者的上清合并;

第四步,将合并的上清过0.22-0.45μm的滤膜过滤,得到含β-葡萄糖醛酸酶粗提物;

第五步,将第四步得到的粗提物过deae离子交换柱进行线性梯度洗脱,得到的洗脱液首先测定酶活性,然后将酶活性较高的洗脱液合并,得到β-葡萄糖醛酸酶纯化物,加入防腐剂及抗氧化剂后低温保存。

2.根据权利要求1所述的β-葡萄糖醛酸酶的纯化方法,其特征在于:所述成年蜗牛为白玉蜗牛、罗曼蜗牛、华蜗牛、玛瑙蜗牛或散大蜗牛,其体重为30~50g。

3.根据权利要求1所述的β-葡萄糖醛酸酶的纯化方法,其特征在于:所述第二步中,当消化腺与其他内脏组织分离的同时在消化腺上滴加保护缓冲液。

4.根据权利要求3所述的β-葡萄糖醛酸酶的纯化方法,其特征在于:所述保护缓冲液中含有浓度0.1m-0.2m的抗氧化剂,所述抗氧化剂为维生素c、异维生素c、还原性谷胱甘肽中的一种或两种以上混合物。

5.根据权利要求3或4所述的β-葡萄糖醛酸酶的纯化方法,其特征在于:所述保护缓冲液为ph6.5-7.50.01m的磷酸盐缓冲液、tris-hcl、goods、heps中的任意一种。

6.根据权利要求1所述的β-葡萄糖醛酸酶的纯化方法,其特征在于:所述第五步对粗提物过deae离子交换柱进行线性梯度洗脱时,所用的洗液为含有0.01-1mnacl的ph7.4-8.00.01m的磷酸盐缓冲液或tris-hcl。

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