一种高密度培养裂殖壶菌发酵生产DHA的方法与流程

文档序号:20057334发布日期:2020-03-06 07:35阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高密度培养裂殖壶菌发酵生产dha的方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤1:制备种子液

将菌种斜面制备菌悬液后、接入一级种子培养基中,在25℃,200rpm培养48h,然后取一级种子液接入二级种子培养基中,接种量10%,在25℃,200rpm培养48h,最后将二级种子液接入种子罐中培养,获得种子液;

步骤2:发酵产生dha

将步骤1中得到的种子液转入发酵罐在发酵培养基中培养,控制残糖、ph和溶氧,促使菌体高密度发酵和dha的产生;

其中,步骤1中所使用的种子培养基配方为:葡萄糖30g/l、酵母粉5g/l、蛋白胨10g/l、消泡剂0.1g/l;

步骤2中所使用的发酵培养基配方为:葡萄糖80g/l、酵母粉10g/l、硫酸铵4.8g/l、磷酸二氢钾3g/l、硫酸镁2g/l、谷氨酸钠20g/l、硫酸钠17g/l、vb10.05g/l、vb120.005g/l、消泡剂0.1g/l、氯化钙20mg/l,氯化锰5.2mg/l,硫酸锌5.2mg/l,硫酸铜0.8mg/l,生物素0.016mg/l,硫酸镍0.8mg/l,硫酸亚铁0.01mg/l,氯化钴0.066mg/l,硫胺素0.76mg/l,泛酸钙25.6mg/l。

2.根据权利要求1所述的一种高密度培养裂殖壶菌发酵生产dha的方法,其特征在于:所述步骤1中将二级种子液接入种子罐中培养,获得种子液包括以下步骤:

①种子罐空消:0.15~0.18mpa,保压30分钟;

②种子培养基实消:121℃,0.12mpa保温20分钟;

③冷却:冷却至26℃;

④接种:零榜法接种;

⑤培养:温度26℃,罐压0.05mpa,风量0.2~0.8vvm,ph7.0,搅拌转速150rpm,溶氧30%以上,培养时间48h,od600=6-9时转罐。

3.根据权利要求1所述的一种高密度培养裂殖壶菌发酵生产dha的方法,其特征在于:所述步骤2中将种子液转入发酵罐生产dha,包括以下步骤:

①发酵罐空消:0.18mpa压力、保压30分钟;

②发酵培养基实消:121℃,压力0.12mpa,保温20分钟,冷却降温至26℃,罐压0.05mpa,调ph7.0,以备接种;

③接种:采用压差法接种;

④培养:温度26℃,罐压0.05mpa,风量0.6~1.2vvm,搅拌转速80~150rpm,当培养时间在0-70h之间时,用50%葡萄糖溶液控制残糖浓度保持在20-30g/l之间,利用30%硫酸铵溶液和20%氢氧化钠调ph7.0,控制溶氧60%以上;70h至发酵结束ph自然,将溶氧调整至3~5%,残糖浓度0.7g/l以下,温度20±1℃。

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