融合蛋白、其氨基酸序列、编码核苷酸序列、制备方法和应用

文档序号:25422017发布日期:2021-06-11 21:33阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白包含或由至少三个、四个、五个、六个、七个、或八个相同和/或不同的pamp分子多肽组成,任选地,相邻两个pamp分子多肽之间具有至少一个连接子或者没有连接子。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述pamp分子多肽包括激活fls2免疫受体的第一多肽,激活rlp23免疫受体的第二多肽,激活efr免疫受体的第三多肽,激活rlk7免疫受体的第四多肽,激活pepr1免疫受体的第五多肽,激活core1免疫受体的第六多肽,激活fls3免疫受体的第七多肽,激活fer受体的第八多肽,激活植物免疫反应的第九多肽pep13,第十多肽hrp24,第十一多肽sys18。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白,其特征在于,所述第一多肽为flg15及其同源突变体,或flg22及其同源突变体;

所述第二多肽为nlp20及其同源突变体;

所述第三多肽为elf18及其同源突变体;

所述第四多肽为pip1及其同源突变体;

所述第五多肽为pep1及其同源突变体;

所述第六多肽为csp15及其同源突变体,或csp22及其同源突变体;

所述第七多肽为flgii-28及其同源突变体;

所述第八多肽为ralf17及其同源突变体;

所述第九多肽为pep13及其同源突变体;

所述第十多肽为hrp15及其同源突变体,或hrp24及其同源突变体;

所述第十一多肽为sys18及其同源突变体。

4.根据权利要求3所述的融合蛋白,其特征在于,所述第一多肽为flg22,第二多肽为nlp20,第三多肽为elf18,第四多肽为pip1,第五多肽为pep1,第六多肽为csp22,第七多肽为flgii-28,第八多肽为ralf17,第九多肽为pep13,十多肽为hrp24,第十一多肽为sys18。

5.根据权利要求1-4任一项所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白由三个相同和/或不同的pamp分子多肽组成,任选地,相邻两个pamp分子多肽之间具有至少一个连接子或者没有连接子;

优选地,所述融合蛋白由四个相同和/或不同的pamp分子多肽组成,任选地,相邻两个pamp分子多肽之间具有至少一个连接子或者没有连接子;

优选地,所述融合蛋白由五个相同和/或不同的pamp分子多肽组成,任选地,相邻两个pamp分子多肽之间具有至少一个连接子或者没有连接子;

优选地,所述融合蛋白由六个相同和/或不同的pamp分子多肽组成,任选地,相邻两个pamp分子多肽之间具有至少一个连接子或者没有连接子。

6.根据权利要求1-4任一项所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白包含或由七个不同的pamp分子多肽组成,任选地,相邻两个pamp分子多肽之间具有至少一个连接子或者没有连接子;

优选地,所述七个不同的pamp分子多肽选自flg22、nlp20、elf18、pip1、pep1、csp22、flgii-28、ralf17、pep13、hrp24或sys18中的任意七种的组合。

7.根据权利要求6所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的氨基酸序列包含或由如下序列组成:

(1)seqidno.15所示的氨基酸序列;或,

(2)与seqidno.15所示的氨基酸序列具有至少80%序列同一性的功能性同源序列。

8.编码权利要求1-7任一项所述的融合蛋白的核苷酸序列。

9.根据权利要求8所述的编码融合蛋白的核苷酸序列,其特征在于,所述核苷酸序列包含或由如下序列组成:

(1)seqidno.16所示的核苷酸序列;或,

(2)seqidno.16所示的核苷酸序列的互补序列、简并序列或同源序列;或,

(3)在严格条件下与seqidno.16的核苷酸序列杂交,且能够编码所述融合蛋白的核苷酸序列;

优选地,所述同源序列为与seqidno.16所示的核苷酸序列具有至少85%或以上同一性且具有编码所述融合蛋白的多核苷酸序列。

10.导入了权利要求8或9所述核苷酸序列的载体。

11.导入了权利要求8或9所述核苷酸序列,和/或权利要求10所述载体的微生物或细胞。

12.如权利要求11所述的微生物或细胞,其特征在于,所述微生物或细胞包括大肠杆菌、农杆菌、乳酸菌、酵母菌或枯草芽孢杆菌中的一种或几种;优选大肠杆菌。

13.包含权利要求1-7任一项所述融合蛋白,或权利要求10所述的载体,或权利要求11或12所述的微生物或细胞的植物免疫诱抗剂;

优选地,所述植物免疫诱抗剂还包括一种或多种农学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或溶剂;

优选地,植物免疫诱抗剂的剂型选自由粉剂、可溶粉剂、可湿性粉剂、颗粒剂、水剂、微乳剂、悬浮剂和水分散粒剂组成的组。

14.一种权利要求1-7任一项所述的融合蛋白的制备方法,其特征在于,包括培养包含权利要求11或12所述微生物或细胞的步骤,或包括人工合成权利要求1-7任一项所述融合蛋白的步骤;

优选地,所述方法包括以下步骤:

(a)合成权利要求8或9所述核苷酸,优选地在合成之前分析和设计拼接成编码权利要求1-7任一项所述融合蛋白的核苷酸序列;

(b)将合成的核苷酸序列转化(优选通过载体转化)至微生物或细胞中,并培养所述微生物或细胞,以表达融合蛋白;和,

(c)任选地,收集和纯化所表达的融合蛋白。

15.权利要求1-7任一项所述的融合蛋白,或权利要求13所述的植物免疫诱抗剂,或权利要求14所述的融合蛋白的制备方法制备得到的融合蛋白在提高植物抗病性、诱导植物防御反应和/或抵抗病原微生物中的应用;

优选地,所述植物包括拟南芥、玉米、小麦、水稻、番茄、烟草;

优选地,所述病原微生物包括丁香假单胞菌、禾谷镰刀菌、稻瘟病菌、烟草花叶病毒。


技术总结
本发明提供了一种融合蛋白、其氨基酸序列、编码核苷酸序列、制备方法和应用;涉及农业生物技术领域。所述融合蛋白包含或由至少三个、四个、五个、六个、七个、或八个相同和/或不同的PAMP分子多肽组成,任选地,相邻两个PAMP分子多肽之间具有至少一个连接子或者没有连接子。将多个PAMP分子多肽组装成具有多个和/或多种免疫表位的融合蛋白,可以快速诱导植物防御的免疫反应,降低病原微生物侵染能力,明显提高植物抗病性。融合蛋白的制备方法,将PTI免疫机制和基因工程的技术联合运用,获取了自然界不存在的多免疫表位的融合蛋白,有效解决了制备植物免疫PAMP分子多肽生产成本高,长期无法应用于农业生产的问题。

技术研发人员:蔡易;李琦;郭晋雅;李雍;杨苹苹;周鑫琼;张丽梅;张怀渝;汪向荣
受保护的技术使用者:四川农业大学;成都绿信诺生物科技有限公司
技术研发日:2019.12.11
技术公布日:2021.06.11
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1