一种用于检测恩诺沙星和环丙沙星的适配体、试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:20371182发布日期:2020-04-14 13:12阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测环丙沙星和恩诺沙星的适配体,其特征在于,所述适配体的核苷酸序列为seqidno:3。

2.一种用于检测环丙沙星和恩诺沙星的试剂,其特征在于,所述试剂包含如权利要求1所述的适配体。

3.如权利要求2所述的试剂,其特征在于,所述试剂为包含纳米金颗粒和适配体的胶体金试剂,其中,适配体与纳米金的质量比为1~15:1,更进一步优选为3~12:1,最优选为3:1。

4.如权利要求2或3所述的试剂,其特征在于,所述试剂中还包含缓冲液,所述缓冲液选自结合缓冲液a、结合缓冲液b、结合缓冲液c或结合缓冲液d中的一种;其中,

结合缓冲液a为ph=7.4的10mm磷酸盐缓冲液,优先地,由10mmna2hpo4、10mmnah2po4、0.5%peg、1%蔗糖、0.1%tween20、0.02%mgso4、0.05%(nh4)2so4配制而成;

结合缓冲液b为ph=7.6的20mmtris-hcl缓冲液:优先地,所述tris-hcl缓冲液由100mmnacl、2mmmgcl2、10mmcacl2、4mmkcl配制而成;

结合缓冲液c为ph7.0的10mmmops缓冲液;

结合缓冲液d为ph7.0的pb缓冲液,优选地,所述pb缓冲液由10mmna2hpo4、10mmnah2po4和1mmmgcl2配制而成

优选为结合缓冲液c。

5.一种快速同时检测恩诺沙星和环丙沙星的方法,其特征在于,所述方法包括:将待测样品与含有如权利要求1所述的适配体的溶液混合,37℃孵育1h,加入纳米金溶液混合后孵育0.5h,离心上清液在激发波长em=480nm,发射波长ex=518nm环境下检测荧光强度;下层液加入氯化钠形成高盐溶液,测量在波长为520nm和620nm处的吸光度,以a650nm/a520nm的比值变化以及荧光强度分别建立标准曲线,以确定样品中恩诺沙星和环丙沙星的浓度。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述高盐溶液nacl浓度不高于41.3mm,优选为28.3~41.3mm,进一步优选为28.3、34.9或41.3mm。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,包括将待测样品用乙腈处理,混合均匀后进行离心,而标准曲线中乙腈含量与实际样品处理后乙腈含量相同。

8.一种用于检测恩诺沙星和环丙沙星的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述适配体、纳米金材料。

9.如权利要求8所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还含有氯化钠和乙腈。

10.如权利要求1所述适配体、如权利要求2-4中任一项所述适试剂或权利要求8-9中任一项所述试剂盒在检测恩诺沙星和环丙沙星中的应用;优选的,所述应用选自食品、环境和医学领域中的一项或多项。


技术总结
本发明提供一种用于快速同时检测恩诺沙星和环丙沙星的适配体、试剂盒及其应用。本发明基于目前已有的长度分别为60‑mer和98‑mer的恩诺沙星和环丙沙星适配体,通过对其二级结构、三级结构进行计算机模拟及与靶标模拟对接,在此基础上找到并对其结合位点进行剪短及拼接,得到一条长度为37‑mer的适配体,通过实验验证其仅对恩诺沙星和环丙沙星具有较高结合特异性。本发明同时对已有的两条适配体建立了适配体纳米金检测法方法,可用于实际样品中恩诺沙星和环丙沙星的检测。

技术研发人员:林洪;沙隽伊;隋建新;安然;王赛;曹立民
受保护的技术使用者:中国海洋大学
技术研发日:2019.12.12
技术公布日:2020.04.14
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