评估人脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分泌TNF-α的方法与流程

文档序号:20364436发布日期:2020-04-10 23:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,包括以下步骤:

共培养:取t淋巴细胞,加入预先包被cd3抗体的小孔板中,再加入脐带间充质干细胞,加入培养基,共培养t淋巴细胞和脐带间充质干细胞,并向共培养体系加入cd28抗体和白介素2,共培养预定时间后,收集培养上清液,待测;

检测:分别通过elisa法检测tnf-α含量,通过流式细胞术检测不同亚群t淋巴细胞分泌tnf-α的能力,通过qpcr检测tnf-α的表达量;

评价:综合上述三种检测结果,评价间充质干细胞的免疫调节能力。

2.根据权利要求1所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,所述共培养步骤中,所述t淋巴细胞通过以下方法得到:取血液,以生理盐水稀释后加入淋巴细胞分离液,保持血液层在上层,离心,去除上层透明液体,保留中部白色层,吸取出白色层,加入磷酸盐缓冲液,离心,收集细胞,以磁珠分选t淋巴细胞,即得。

3.根据权利要求1所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,所述共培养步骤中,小孔板通过以下方法预先包被cd3抗体,向小孔板中加入4-6μg/ml的cd3抗体,36-38℃孵育1-3小时。

4.根据权利要求1所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,所述共培养步骤中,所述培养基为rpmi-1640培养基,所述cd28抗体的终浓度为4-6μg/ml,所述白介素2的终浓度为150-250u/ml。

5.根据权利要求1所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,所述共培养步骤中,共培养2-4天后,收集培养上清液。

6.根据权利要求1所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,所述共培养步骤中,所述t淋巴细胞和脐带间充质干细胞的比例为100:1~10:1。

7.根据权利要求1-6任一项所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,所述评价步骤中,通过以下公式计算得到综合评估指数index:

index(tnf-α)=value(elisa)×0.5/(1ng/ml)+value(tnf-α+cd3+cells%)×0.4/(1%)+value(qpcr)×0.1

其中:value(elisa)表示elisa检测到的tnf-α分泌量;value(tnf-α+cd3+cells%)表示分泌tnf-α的t细胞百分比;value(qpcr)表示tnf-α基因表达的相对值。

8.根据权利要求7所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法,其特征在于,所述评价步骤中,当index(tnf-α)≥10.6,判定为t细胞高分泌tnf-α;当index(tnf-α)<10.6,判定为t细胞低分泌tnf-α。

9.权利要求1-8任一项所述的评估人脐带间充质干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α的方法在建立干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α检测模型中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述干细胞影响t淋巴细胞分泌tnf-α检测模型应用于科学研究。


技术总结
本发明涉及一种评估人脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分泌TNF‑α的方法,属于干细胞与再生医学技术领域。该方法包括以下步骤:共培养:取T淋巴细胞,加入预先包被CD3抗体的小孔板中,再加入脐带间充质干细胞,共培养T淋巴细胞和脐带间充质干细胞,并向共培养体系加入CD28抗体和白介素2,共培养预定时间后,收集培养上清液;检测:分别通过ELISA法检测TNF‑α含量,通过流式细胞术检测不同亚群T淋巴细胞分泌TNF‑α的能力,通过qPCR检测TNF‑α的表达量;评价:综合评价间充质干细胞的免疫调节能力。该方法能综合全面的评价脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分泌TNF‑α的抑制程度,可以更好的对使用间充质干细胞治疗因TNF‑α含量升高而引起的自身免疫疾病进行指导,或对预后进行评估。

技术研发人员:褚一凡;江嘉豪;何美弟;陈炽峰;刘锐;王进辉
受保护的技术使用者:广东唯泰生物科技有限公司
技术研发日:2019.12.16
技术公布日:2020.04.10
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