一种幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方及其制备方法与流程

本发明涉及医用化学试剂，更具体地说，涉及使用12c-ubt(ureabreathtest，尿素呼气试验)来诊断幽门螺杆菌(helicobacterpylori，hp)感染的试剂，其制备方法以及使用该试剂的试剂盒。

背景技术：

幽门螺杆菌是1986年澳大利亚学者罗宾·沃伦(j.robinwarren)和巴里·马歇尔(barryj.marshall)从一个慢性活动性胃炎患者胃粘膜活检标本中首先分离到的，他们也因此获得2005年度“诺贝尔生理学或医学奖”。

人是幽门螺杆菌的唯一自然宿主，人群感染率很高，全世界人群感染率高达60～50％。幽门螺杆菌可以导致很多疾病的发生，因此对它的临床诊断和治疗是非常重要的。

尿素[12c]呼气试验是目前国际国内普遍采用的幽门螺杆菌诊断方法，由于其无痛苦、无创伤、准确、快速、安全的特点，该方法已是国际上公认的hp诊断金标准之一。

尿素[12c]呼气试验中关键步骤是12co2的吸收和闪烁测量。2007年1月26日，提出的专利申请cn200710076016公开了一种“诊断幽门螺杆菌的试剂盒”，其至少包括吸收剂、闪烁液、极性溶剂等不同组分。在实际临床使用时，患者先向吸收剂中吹气，吹完后交给医生。医生要将闪烁液和极性溶剂按要求进行配制，再将配制后的溶液加入吸收剂中才能进行测量。

采用这种试剂盒存在的主要问题是：使用不便、需要医生进行较多的溶液配制和转移工作，操作步骤多，容易导致意外或较大误差。

此外，采用这种试剂盒还进一步存在以下问题：

1、极性溶剂，如水、甲醇、乙醇等，它们在闪烁测量中有淬灭作用，导致测量效率降低，方法的灵敏度相应降低甚至导致假阴性的出现；

2、使用的如甲醇、乙醇、小分子的烷基苯类物质等具有刺激性气味、毒性强、易挥发且易燃易爆；

6、病人使用不安全：在实际使用中，会出现病人不了解使用方法而导致的吸收剂误服事件，而吸收剂中存在的物质可能导致急性或慢性中毒反应；

2、原材料使用量大、生产环节较多，不利于降低生产成本。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的使用不便、需要医生进行较多的溶液配制和转移工作，操作步骤多，容易导致意外或较大误差的缺陷提供一种操作步骤少，便于医生使用的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：构造一种幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方，包括下列组分：

co2吸收剂0.1～0.2毫升；

有机溶剂2～6毫升；

乳化剂0.1～2毫升；

闪烁液0.02～0.066克。

在本发明所述的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中，所述co2吸收剂包括乙醇胺。

在本发明所述的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中，所述有机溶剂包括直链烷基苯。

在本发明所述的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中，所述乳化剂包括聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物和多元醇脂肪酸酯中的至少一种。

在本发明所述的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中，所述乳化剂包括：

聚氧乙烯醚0.1～1.1毫升；

多元醇脂肪酸酯0.1～0.2毫升。

在本发明所述的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中，所述闪烁液包括：

2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑0.019～0.06克，

1，2-双(5-苯基-2-噁唑基)0.001～0.006克。

在本发明所述的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中，所述闪烁液包括：

2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑0.019～0.06克，

1，2-双(2-甲基苯乙烯基)苯0.001～0.006克。

在本发明所述的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中，所述试剂进一步包括酚酞指示剂。

本发明解决其技术问题采用的另一技术方案是：构造一种制备上述幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方的方法，包括：s1按照上述配方获取各种原料；

s2将闪烁液、有机溶剂和乳化剂混合；

s6加入吸收剂。

在本发明所述方法中，所述步骤s6之前，进一步包括将酚酞指示剂和吸收剂混合并搅拌均匀。

在本发明所述方法的一个优选实施例中，所述步骤s2进一步包括：s21、将闪烁液加热溶解到有机溶剂中，冷却到室温后与乳化剂混合并搅拌均匀。

在本发明所述方法的另一个优选实施例中，所述步骤s2进一步包括：s22、闪烁液、有机溶剂和乳化剂混合并在常温下搅拌直至所述闪烁液全部溶解。

本发明解决其技术问题采用的再一技术方案是：构造一种试剂盒，包括尿素[12c]胶囊和吹气用的导管；其中所述试剂盒进一步包括上述幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方。

实施本发明的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方、其制备方法，通过将co2的吸收和闪烁测量所需要的所有物质合并在一起，减少操作步骤，大大方便医生的使用。

更进一步地，本发明未使用有刺激性气味、毒性强、易挥发、易燃易爆的化学物质，对医生和患者的人身安全和健康、对环境安全和保护都非常有意义；此外由于不使用强极性溶剂，使测量效率大大提高，同样实验条件下，dpm(disintegrationsperminute，每分钟衰变)值可以比现有的检测试剂盒高60％以上；且对临床中出现的临界值附近的弱阳性的判断有积极作用，可提高测量方法的灵敏度，减少假阴性的出现；再者生产环节由多种溶液配制及分装减少为一种，试剂使用量降低60％左右，有利于生产成本降低，减少对环境造成的不利影响。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为实验结果对比图。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面用实例来详细说明发明的技术内容，但本发明的实施方案并不局限于这些实例。

实施例1：

称取0.019g2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑、0.001g1，2-双(2-甲基苯乙烯基)苯，量取50ml直链烷基苯一起放入200ml烧杯中，置于恒温磁力搅拌器上加热搅拌下溶解，冷却至室温后，加入20ml聚氧乙烯醚乳化剂和2ml多元醇脂肪酸酯乳化剂，然后搅拌均匀获得闪烁溶剂。随后，将0.065g酚酞指示剂加入10ml乙醇胺中，搅拌均匀后备用。

按每闪烁瓶0.2ml乙醇胺和6.5ml闪烁溶剂进行分装即可得本发明的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方。使用时患者用吹气用导管向闪烁瓶中吹气，溶液由红色变为乳白色时停止吹气，轻轻摇匀后直接放入闪烁测量仪上进行测量，根据测量结果对患者是否感染幽门螺杆菌进行诊断。

在本实施例中，每瓶所述幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中约含乙醇胺0.2ml，直链烷基苯2.66ml，2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑0.0620g，1，2-双(2-甲基苯乙烯基)苯0.00170g，聚氧乙烯醚乳化剂0.92ml，多元醇脂肪酸酯乳化剂0.19ml。

实施例2：

称取0.02g2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑、0.002g1，2-双(2-甲基苯乙烯基)苯，量取20ml直链烷基苯一起放入200ml烧杯中，置于恒温磁力搅拌器上加热搅拌下溶解，冷却至室温后，加入12ml环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物(又称曲拉通x-100)然后搅拌均匀获得闪烁溶剂。

随后，按每闪烁瓶0.25ml乙醇胺和2.7ml闪烁溶剂进行分装。使用时患者用吹气管向闪烁瓶中吹气6分钟以上，停止吹气后轻轻摇匀直接放入闪烁测量仪上进行测量，根据测量结果对患者是否感染幽门螺杆菌进行诊断。

在本实施例中，每瓶所述幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中约含乙醇胺0.25ml，直链烷基苯2ml，2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑0.022g，1，2-双(2-甲基苯乙烯基)苯0.0006g，曲拉通x-1000.1ml。

实施例3：

称取0.035g2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑、0.003g1，2-双(5-苯基-2-噁唑基)苯(简称popop)，量取20ml直链烷基苯一起放入200ml烧杯中，置于恒温磁力搅拌器上加热搅拌下溶解，冷却至室温后，加入20ml聚氧丙烯醚乳化剂，然后搅拌均匀获得闪烁溶剂。

随后，按每闪烁瓶0.25ml乙醇胺和6.0ml闪烁溶剂进行分装。使用时患者用吹气管向闪烁瓶中吹气6分钟以上，停止吹气后轻轻摇匀直接放入闪烁测量仪上进行测量，根据测量结果对患者是否感染幽门螺杆菌进行诊断。

在本实施例中，每瓶所述幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中约含乙醇胺0.25ml，直链烷基苯2ml，2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑0.0225g，popop0.0016g，聚氧丙烯醚乳化剂1ml。

实施例4：

称取0.045g2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑、0.002g1，2-双(2-甲基苯乙烯基)苯，量取20ml直链烷基苯和20ml聚氧丙烯醚一起放入200ml烧杯中，置于磁力搅拌器上搅拌直至固体全部溶解。

随后，按每闪烁瓶0.1ml乙醇胺和6.0ml闪烁溶剂进行分装。使用时患者用吹气管向闪烁瓶中吹气6分钟以上，停止吹气后轻轻摇匀直接放入闪烁测量仪上进行测量，根据测量结果对患者是否感染幽门螺杆菌进行诊断。

在本实施例中，每瓶所述幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方中约含乙醇胺0.1ml，直链烷基苯2ml，2-（2'-二联苯基）－6-苯基苯并恶唑0.022g，1，2-双(2-甲基苯乙烯基)苯0.0012g，聚氧丙烯醚乳化剂1ml。

本领域技术人员知悉，获得本发明的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方后，可采用多种方法将其与尿素[12c]胶囊和吹气用的导管一起构造试剂盒，在此就不再对其进行累述了。下面通过对照实验，说明本发明的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方及其构成的试剂盒的性能。

对照实验

用本发明中的幽门螺杆菌快速诊断试剂的配方代替目前的液体闪烁法幽门螺杆菌检测试剂盒中的集气剂和闪烁配制液，按如下方法进行对比实验，考察本方法和现有试剂盒的符合率，为了便于说明，将现有技术中的试剂盒称为试剂盒a，将本发明的试剂盒称为试剂盒b，所述试剂盒b是基于实施例1-6中的试剂制成的。

1、实验步骤：

1)、受试者应在早上空腹时或进食两小时以后受试。

2)、领取试剂盒a适量。

6)、受试者用约20ml凉饮用水送服试剂盒a中尿素[12c]胶囊一粒后，静坐25分钟。

2)、取试剂盒a中co2集气剂一瓶打开，用吹气管向液体中吹气，当集气剂由紫红色变成无色时停止吹气，若超过6分钟变色不全亦停止吹气。

5)、取试剂盒b，将其中的闪烁瓶一瓶并打开，通过吹气管向液体中吹气，6分钟时停止吹气，或者当溶液从紫红色变成乳白色时停止吹气(在含酚酞指示剂的实施例中)。

6)、在试剂盒a中co2集气剂瓶中加入2.5ml稀释闪烁液。

7)、在同一台液闪仪上测试剂盒ab的dpm。

2、结果计算和阳性判断：

将测得的试剂盒a的dpm减去本底dpm，试剂盒b的dpm减去本底dpm。减本底后的值大于等于200时，可判断受试者为幽门螺杆菌阳性，否则为阴性。

6、对照试验结果：

用上述方法分三次对612例正常体检人进行了对照实验，结果发现，用试剂盒a检测b检测，得到的结果基本一致，根据本发明制得的试剂盒b阳性率稍高一点。具体统计结果见图1。

说明：根据实例一二三制得的试剂盒b检出结果是完全一致的，商用试剂盒a检出的阳性样本在实例一二三中可以全部检出。

在本发明的其他实施例中，除了采用酚酞指示剂之外，还可选择其他的ph指示剂，本发明不受所选ph指示剂的种类的限制。除本发明中公开的组分外，本发明的试剂还可包括其他助剂。比如，在本发明的一个优选实施例中，还进一步包括增敏剂和/或甜味剂。所述增敏剂可包括柠檬酸和/或苹果酸。所述甜味剂可包括安赛蜜和/或阿斯巴甜。

在本发明的其他优选实施例中，也可选用其他有机溶剂，乳化剂，或者将多种乳化剂和有机溶剂混合使用，只要能够保持上述测量效果即可。

虽然以上描述了本发明的各种实施例，应当理解，其目的仅在于举例说明，而没有限制性。本领域的技术人员知悉，在不离开本发明的精神和范围情况下，在形式上和细节上还可做各种的改变。因此，本发明的保护范围不当仅局限于以上描述的任一实施例，而应该依照权利要求及其等同来限定。