去亚甲基小檗碱的制备方法及其应用与流程

本发明涉及药物技术领域，特别涉及一种去亚甲基小檗碱的制备方法及其应用。

背景技术：

1966年，cava课题组首次报道了从盐酸小檗碱到去亚甲基小檗碱的化学转化(j.org.chem.1967,32,1640–1641)。从小檗碱出发，在60％硫酸和间苯三酚的作用下，脱去亚甲基保护，得到去亚甲基小檗碱。由于产物去亚甲基小檗碱在反应体系中非常不稳定，因此收率非常不稳定，反应最理想时，收率可以达到30％，并且反应较难重复，经常得不到产物或者收率很低(低于10％)。

在随后的长达半个世纪的研究中，去亚甲基小檗碱的合成工艺一直没有突破，国内已有文献报道对于该转化的优化，金伟平(巴马汀的制备方法cn100999622b)报道的方法需要使用大量的浓盐酸，反应条件剧烈，可控性差，不适用于工业生产。相比于盐酸小檗碱的市场售价为700元/千克，最大包装的去亚甲基小檗碱的市场售价为2090元/10mg，这也说明去亚甲基小檗碱的制备难度很大。

近年来，关于盐酸小檗碱的生物学研究引起了广泛的关注，而关于去亚甲基小檗碱的研究却十分稀少，主要由于去亚甲基小檗碱极难分离和制备，导致难以开展相关的生物学研究。关于去亚甲基小檗碱的生物活性研究比较少，仅在防治肝纤维化和脂肪肝方面有报道，但在抑制mao-b酶活防治帕金森病方面尚无报道。

技术实现要素：

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种去亚甲基小檗碱的制备方法及其应用。所述技术方案如下：

第一方面，一种去亚甲基小檗碱的制备方法，包括以下步骤：

取盐酸小檗碱加入二甲苯中，然后再加入三氟甲磺酸，室温搅拌进行反应，之后加入盐酸至不再产生黄色沉淀，抽滤反应液，将得到的沉淀进行洗涤，洗涤后的沉淀用乙醇重结晶，然后通过强碱型阴离子交换树脂转化为盐酸盐，浓缩后得到黄色固体去亚甲基小檗碱。

进一步的，所述盐酸小檗碱的用量为0.54mol，所述三氟甲磺酸的用量为3.17mmol。

进一步的，所述室温搅拌30min。

进一步的，于0℃加入1m的盐酸至不再产生黄色沉淀。

第二方面，一种去亚甲基小檗碱在制备mao-b酶抑制药物中的应用。

第三方面，一种去亚甲基小檗碱在制备治疗帕金森病药物中的应用。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本发明实现了去亚甲基小檗碱的高效制备，是目前为止针对去亚甲基小檗碱最为高效的合成方法。该合成路线收率高，条件温和，并且所用试剂毒性较小成本低、分离纯化简单方便、可用于大量制备。本发明还首次发现去亚甲基小檗碱具有抑制mao-b酶活性的作用，表明在防治帕金森病及其他mao-b酶活性异常引起疾病方面，去亚甲基小檗碱还具有开发潜力。

附图说明

为了更清楚地说明本发明施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1是本发明实施例中去亚甲基小檗碱抑制mao-b酶活性图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。

实施例

一、去亚甲基小檗碱的制备方法

取盐酸小檗碱(200g，0.54mol)加入至3l的三口烧瓶中，安装好机械搅拌装置，再向三口烧瓶中继续加入二甲苯(1.3l)，三氟甲磺酸(tfoh，280ml，3.17mmol)，室温搅拌30分钟，然后在0℃下加入1m的hcl至不再产生黄色沉淀。将反应液进行抽滤，抽滤后得到的沉淀先用少量水洗涤，然后再用少量石油醚洗涤，洗涤后将所得沉淀用乙醇溶解后重结晶，最后将重结晶得到的沉淀溶解于丙酮/水(体积比1：1)中，通过强碱型阴离子交换树脂(cl^-)转化为盐酸盐，浓缩后得到黄色固体去亚甲基小檗碱(174g，90％)。

rf＝0.4(dcm/meoh,10:1)；mp:220-222℃；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)

δ10.04(s,1h,oh-2),9.81(s,1h,h-8),9.26(s,1h,oh-3),8.74(s,1h,h-13),8.16(d,j＝9.1hz,1h,h-11),8.04(d,j＝9.1hz,1h,h-12),7.50(s,1h,h-1),6.80(s,1h,h-4),4.88(t,j＝6.3hz,2h,h-6),4.08(s,3h,och3-10),4.05(s,3h,och3-9),3.11(t,j＝6.3hz,2h,h-5)；¹³cnmr(100mhz,dmso)δ150.0(c-10),149.2(c-12),145.6(c-9),145.1(c-3),143.5(c-8),138.3(c-13a),133.3(c-12a),127.2(c-4a),126.7(c-12),123.5(c-11),121.2(c-13b),119.1(c-8a),117.8(c-13),114.9(c-4),112.7(c-1),61.9(och3-10),57.1(c-6),55.6(och3-9),25.8(c-5)；hrms(esi):m/zcalcdforc19h18no4cl[m-cl]⁺:324.1230,found:324.1239.纯度：98.4％(高效液相色谱)。

谱图(¹hnmr,¹³cnmrandhmrs)与文献报道一致(li,y.h.；li,y.h.；yang,p.；kong,w.j.；you,x.f.；ren,g.；deng,h.b.；wang,y.m.x.；wang,y.m.x.；jiang,j.d.；song,d.q.bioorg.med.chem.2010,18,6422.)。

二、去亚甲基小檗碱的应用

1.实验材料

biovision公司的mao-b检测试剂盒(#797-100)和去亚甲基小檗碱。

2.实验方法

利用biovision公司的试剂盒，取96孔黑板，在每个孔中加入10μl去亚甲基小檗碱溶液(0.1μm、1μm、3μm、10μm、30μm、100μm、300μm、1mm、2mm)和50μlmao-b纯酶，在37℃共同孵育30分钟。而后加入40μl底物反应液(含mao-b底物、developer和oxired^tm探针)，混匀后立即于ex/em＝535/587nm处检测动态荧光数值，观测10-40分钟内的反应动力学过程。以反应时间为x轴，荧光数值为y轴，做图，在线性范围内，选取两个不同时间点(t1和t2)，获取时间点对应的荧光数值(rfu1和rfu2)，计算斜率。如，在反应时间为495秒时(t1)和1005秒(t2)时，对照组荧光数值(rfu1和rfu2)分别为72500和100703，其斜率为(100703-72500)/(1005-495)＝55.3，此时的斜率可看作是mao-b酶相对活性。然后，以去亚甲基小檗碱浓度对数为x轴，mao-b相对活性为y轴，绘制量效曲线，计算半数抑制浓度。

3.实验结果

去亚甲基小檗碱和mao-b酶以及底物等充分反应，检测荧光强度，计算半数抑制浓度，结果如图1所示，去亚甲基小檗碱可显著抑制mao-b酶活，其半数抑制浓度(ic50)为9.06μm。

本发明实现了去亚甲基小檗碱的高效制备，是目前为止针对去亚甲基小檗碱最为高效的合成方法。该合成路线收率高，条件温和，并且所用试剂毒性较小成本低、分离纯化简单方便、可用于大量制备。本发明还首次发现去亚甲基小檗碱具有抑制mao-b酶活性的作用，表明在防治帕金森病及其他mao-b酶活性异常引起疾病方面，去亚甲基小檗碱还具有开发潜力。

上述本发明实施例序号仅仅为了描述，不代表实施例的优劣。5

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。