一株可高产硒代半胱氨酸的副干酪乳杆菌及其应用的制作方法

本发明涉及一株可高产硒代半胱氨酸的副干酪乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术：

硒是人类和动物生存的必需微量元素之一，在体内通常以硒蛋白的形态存在。中国营养学会将硒列为人体必需的15种营养素之一，2013版制订的《中国居民膳食营养素参考摄入量(dris)》中明确提出18岁以上者硒元素推荐摄入量为60微克/天。硒摄入不足可能导致心血管疾病、大骨节病，肌肉和免疫功能紊乱。因此，及时补硒对人体健康十分重要。

目前，常见的补硒产品主要分为无机硒和有机硒两类。其中，无机硒一般毒性较大，在低浓度时即表现出细胞毒性作用，如细胞脱壁、细胞内空泡增多、细胞膜破裂、细胞坏死和急性溶解，并且，无机硒还能引起dna损伤和细胞死亡，安全性较低，另外，无机硒的生物利用率很低。因此，不推荐以无机硒作为人用补硒产品。

有机硒则是由无机硒与氨基酸、蛋白质、活性多糖等有机营养成分相结合形成的一类物质，主要包括硒代半胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸三种。与无机硒相比，有机硒的毒副作用大大降低，安全性高，而且，有机硒在人体内更易被消化吸收，生物利用率显著高于无机硒，因此，摄取有机硒是目前需补硒人群主要的补硒形式。

三种有机硒中，硒甲基硒代半胱氨酸主要作为营养素补充剂起到增强免疫力的作用，但是，由于硒甲基硒代半胱氨酸需先被人体的β-裂解酶转化为甲基硒和硒代半胱氨酸后才能被人体吸收，生物利用率与其它有机硒相比较低；硒代蛋氨酸主要起到增加机体抗氧化能力、提高免疫力等作用，由于硒代蛋氨酸是以硒替代硫的方式进入人体，生物利用率较高，但是，由于人体trna无法识别蛋氨酸和硒代蛋氨酸，当蛋氨酸摄入量被限制时，大比例的硒代蛋氨酸代替蛋氨酸被非特异性的参入到体内蛋白中，导致硒在体内大量积蓄，亦存在一定的风险；硒代半胱氨酸主要发挥重建骨量、增强免疫系统、调节甲状腺功能、改善男性生育能力、降低患癌症的风险、减少衰老、减轻疲劳等功能，其和硒代蛋氨酸一样，均是通过以硒替代硫的方式进入人体，但是，由于硒代半胱氨酸不像硒代蛋氨酸一样随机取代氨基酸，而是拥有自己的三联体密码子uga，和其他氨基酸一样，参与蛋白质翻译会受到基因调控，这使得硒代半胱氨酸与硒代蛋氨酸相比具有更高的安全性，且体现出更多地生物活性。因此，成分为硒代半胱氨酸的补硒产品市场前景最为广阔。

利用微生物的生物转化功能将无机硒与氨基酸、蛋白质、活性多糖等有机营养成分相结合以生产得到硒代半胱氨酸是近十几年的研究热点。与现有的植物提取法以及酶拆分法相比，其具有成本低、工艺简单以及安全性高等优势。但是，由于现有微生物转化无机硒生产有机硒的转化效率过低，利用此方法生产有机硒的产量一直不高，这无疑阻碍了有机硒市场的进一步发展。例如，公开号为cn103898163a的专利申请文本中，姜疏君等人筛选得到了一株断乳杆菌cgmccno.6683，此短乳杆菌cgmccno.6683虽然将亚硒酸钠进行了富集，但其大多将亚硒酸钠转化为了红色的单质硒，真正被转化成为有机硒的亚硒酸钠比例十分低；公开号为cn110317757a的专利申请文本中，唐旭等人筛选得到了一株植物乳杆菌cgmccno.17720，此植物乳杆菌cgmccno.17720虽然将亚硒酸钠进行了富集，但其转化的有机硒含量也只有52.31％。

因此，急需找到可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸的微生物。

技术实现要素：

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是提供一株可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸的副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)。

[技术方案]

为解决本发明的技术问题，本发明提供了一株副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089，所述副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089已于2019年11月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno.60880，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

所述副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089是从来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的婴儿粪便样本中分离得到的，该菌株经测序分析，其16srdna序列如seqidno.1所示，将测序得到的序列在ncbi中进行核酸序列比对，结果显示菌株为副干酪乳杆菌，命名为副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089。

所述副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089在mrs固体培养基上的菌落呈圆形、白色、光滑。

本发明还提供了一种生产有机硒的方法，所述方法为先将上述副干酪乳杆菌ccfm1089接种至发酵培养基中进行发酵，得到副干酪乳杆菌菌体，然后将副干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒；所述发酵培养基中含有无机硒。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵培养基中含有丝氨酸。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵培养基为富硒培养基或定向转化培养基；

所述富硒培养基的成分包含蛋白胨5～15g/l、酵母提取物5～15g/l、葡萄糖20～50g/l、牛肉浸膏5～15g/l、无水乙酸钠1～5g/l、柠檬酸氢二胺1～5g/l、k2hpo4·3h2o2～5g/l、mgso4·7h2o0.25～0.58g/l、mnso4·h2o0.05～0.30g/l、吐温801g/l、五水亚硒酸钠10～17mg/l；

所述定向转化培养基的成分包含蛋白胨5～15g/l、酵母提取物5～15g/l、葡萄糖20～50g/l、牛肉浸膏5～15g/l、k2hpo4·3h2o2～5g/l、mgso4·7h2o0.25～0.58g/l、mnso4·h2o0.05～0.30g/l、吐温801g/l、五水亚硒酸钠10～17mg/l、丝氨酸0.1～0.4g/l。

在本发明的一种实施方式中，所述方法为先将上述副干酪乳杆菌ccfm1089接种至富硒培养基中，于温度为35～40℃、转速为75～150rpm、ph为5.0～6.0的条件下进行发酵，得到副干酪乳杆菌菌体，然后将副干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒；

在本发明的一种实施方式中，所述方法为先将上述副干酪乳杆菌ccfm1089接种至定向转化培养基中，于温度为35～40℃、转速为75～150rpm、ph为5.0～6.0的条件下进行发酵，得到副干酪乳杆菌菌体，然后将副干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵的时间为6～8h。

在本发明的一种实施方式中，所述方法为先将上述副干酪乳杆菌ccfm1089接种至定向转化培养基中，于温度为37℃、转速为100rpm、ph为6的条件下进行发酵，得到副干酪乳杆菌菌体，然后将副干酪乳杆菌菌体进行提取，得到有机硒。

在本发明的一种实施方式中，所述无机硒为亚硒酸钠、硒酸钠和/或单质硒。

在本发明的一种实施方式中，所述无机硒为亚硒酸钠。

在本发明的一种实施方式中，所述有机硒为硒代半胱氨酸。

本发明还提供了上述副干酪乳杆菌ccfm1089或上述方法在生产有机硒中的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述有机硒为硒代半胱氨酸。

[有益效果]

(1)本发明筛选出了一株副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089，此副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸，将此副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089接种至含有无机硒的培养基中发酵8h，即可使副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089菌体冻干粉中的总硒含量高达400.65mg/kg，总硒中有机硒的含量高达96％，有机硒中硒代半胱氨酸的含量高达89％，因此，本发明的副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089在硒代半胱氨酸的生产中具有极高的应用前景。

(2)本发明提供了一种可高效生产硒代半胱氨酸的方法，利用此方法将可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸的副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089接种至定向转化培养基中发酵8h，即可使副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)菌体ccfm1089冻干粉中的总硒含量高达达400.65mg/kg，总硒中有机硒的含量高达96％，有机硒中硒代半胱氨酸的含量高达89％，因此，本发明的可高效生产有机硒的方法在硒代半胱氨酸的生产中具有极高的应用前景。

生物材料保藏

一株副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089，分类学命名为lactobacillusparacasei，已于2019年11月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno.60880，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

附图说明

图1：副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089的菌落特征。

图2：副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089的菌体特征。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明进行进一步的阐述。

下述实施例中涉及的亚硒酸钠(产品编号：d16-1030015、cas：26970-82-1)购自上海创赛科技有限公司；下述实施例中涉及的丝氨酸(产品编号：d23-a0108、cas：56-45-1)购自上海创赛科技有限公司；下述实施例中涉及的蛋白酶xiv(产品编号：p5147、cas：9036-06-0)购自北京百灵威科技有限公司；下述实施例中涉及的蛋白酶k(产品编号：3375201、cas：39450-01-6)购自北京百灵威科技有限公司；下述实施例中涉及的葡萄糖购于国药集团化学试剂有限公司。

下述实施例中涉及的培养基如下：

mrs固体培养基：蛋白胨10g/l、牛肉膏10g/l、葡萄糖20g/l、乙酸钠2g/l、酵母粉5g/l、柠檬酸氢二铵2g/l、k2po4·3h2o2.6g/l、mgso4·7h2o0.1g/l、mnso40.05g/l、吐温801ml/l、琼脂20g/l、半胱氨酸氨酸盐0.5g/l。

mrs液体培养基：蛋白胨10g/l、牛肉膏10g/l、葡萄糖20g/l、乙酸钠2g/l、酵母粉5g/l、柠檬酸氢二铵2g/l、k2po4·3h2o2.6g/l、mgso4·7h2o0.1g/l、mnso40.05g/l、吐温801ml/l、半胱氨酸氨酸盐0.5g/l。

富硒培养基：蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、葡萄糖30g/l、牛肉浸膏10g/l、无水乙酸钠2g/l、柠檬酸氢二胺2g/l、k2hpo4·3h2o2.6g/l、mgso4·7h2o0.5g/l、mnso4·h2o0.25g/l、吐温801g/l、亚硒酸钠2～5mg/l。

下述实施例中涉及的检测方法如下：

总硒检测方法：参考《gb5009.93-2017食品安全国家标准食品中硒的测定》中总硒分析方法。

有机硒检测方法：参考《gb1903.21-2016食品安全国家标准食品营养强化剂富硒酵母》中有机硒分析方法。

硒形态检测方法：将样品置于研钵中加入液氮研磨破碎，取研磨后的样品0.15g于离心管中，加入6mltris-hcl(50mmol/l、ph7.2)溶解，超声波细胞破碎器破碎5min；之后每隔12h分别加入蛋白酶k(10mg)及蛋白酶xiv(15mg)，在37℃、100r/min下振荡酶解24h，酶解后，以4000r/min离心10min，取上清液在0.22μm滤膜过滤；通过hplc-icp-ms进行形态分析。

实施例1：副干酪乳杆菌ccfm1089的筛选和鉴定

1、筛选

以来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的婴儿粪便为样本，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10^-6，然后分别取100μl稀释倍数为10^-4、10^-5、10^-6的稀释液于mrs固体培养基上进行平板涂布，37℃倒置培养48h，观察并记录菌落形态；挑取mrs固体培养基上不同形态的菌落进行划线分离，经37℃培养48h后，再次挑取mrs固体培养基上不同形态的单菌落进行划线分离，直至得到形态一致的纯的单菌落；挑取mrs固体培养基上的单菌落接种于5ml富硒培养基中，37℃培养18h；取1ml菌液于无菌离心管中，8000r/min离心3min后弃去上层培养基，将得到的菌泥进行冷冻干燥，检测冻干后菌粉的总硒和有机硒含量，筛选出硒富集较高的菌株，得到菌株ccfm1089。

2、鉴定

提取菌株ccfm1089的基因组，将菌株ccfm1089的16srdna进行扩增和测序(由英潍捷基贸易有限公司进行，其中，菌株ccfm1089的16srdna扩增的核苷酸序列如seqidno.1所示)，将该序列在ncbi中进行核酸序列比对，结果显示菌株为副干酪乳杆菌，命名为副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089。

实施例2：副干酪乳杆菌ccfm1089的观察和保存

1、观察

蘸取实施例1获得的副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089的菌液在在mrs固体培养基上划线，于37℃培养48h后，观察其菌落，发现其菌落呈圆形、白色、光滑(具体可见图1)。

蘸取副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089的菌液在mrs固体培养基上划线，于37℃培养48h，得到单菌落；取洁净载玻片一张，在火焰上微微加热后冷却；待冷却后，在洁净载玻片中央部位滴加一小滴无菌水，用接种环在火焰旁挑取mrs固体培养基上少量菌体与水混合；烧去接种环上多余菌体，在用接种环将菌体途成直径1cm的均匀薄层；待洁净载玻片上的均匀薄层自然干燥后，在微火上加热3～4次固定；在涂片处滴加1～2滴结晶紫溶液，染色1min；用水轻轻洗去染液，用吸水纸轻轻吸去载玻片上水分；干燥后以显微镜进行镜检以观察副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089的菌体，发现其菌体形态符合副干酪乳杆菌的典型特征(具体可见图2)。

2、保存

挑取副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089的单菌落接种于mrs液体培养基中，37℃培养18h，得到菌液；取1ml菌液于无菌离心管中，8000r/min离心3min后弃去上层培养基，菌泥重悬于30％甘油溶液中置于-80℃中保藏。

实施例3：有机硒的生产(副干酪乳杆菌ccfm1089+富硒转化)

以植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3作为对照，从甘油管中蘸取实施例2获得的副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3的菌液分别在mrs固体培养基上划线，于37℃倒置培养36h，得到单菌落；挑取单菌落接种至mrs液体培养基中，于37℃培养12h，得到培养液；将培养液以1％(v/v)的接种量接种至mrs液体培养基中，于37℃培养12h，得到种子液；将种子液以5％(v/v)的接种量接种至富硒培养基中，于温度为37℃、转速为100rpm、ph为6.0的条件下培养8h，得到发酵液；将发酵液在4℃的条件下8000r/min离心15min，得到副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3的菌体；将副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3的菌体纯水洗涤2次，弃去上清液后冻干，得到副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4冻干粉和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3冻干粉；

其中，富硒培养基：蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、葡萄糖30g/l、牛肉浸膏10g/l、无水乙酸钠2g/l、柠檬酸氢二胺2g/l、k2hpo4·3h2o2.6g/l、mgso4·7h2o0.5g/l、mnso4·h2o0.25g/l、吐温801g/l、五水亚硒酸钠8mg/l；

植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610的保藏编号为cgmccno.6077，记载于公开号为cn102586148a的专利申请文本中；干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4以及干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3则为与副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089同批次从来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的婴儿粪便样本中筛选得到的其他乳酸菌。

检测副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4冻干粉和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表1)。

由表1可知，副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸，仅发酵8h，即可使副干酪乳杆菌ccfm1089ccfm1089冻干粉中的总硒含量高达398.64mg/kg，总硒中有机硒的含量高达81％，有机硒中硒代半胱氨酸的含量高达79％；而植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610(保藏编号为cgmccno.6077)、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4以及干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3转化无机硒生产硒代半胱氨酸的转化效率远不如副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089。

表1副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4冻干粉和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布

实施例4：有机硒的生产(副干酪乳杆菌ccfm1089+定向转化)

在实施例2的基础上，将富硒培养基替换为定向转化培养基(蛋白胨5～15g/l、酵母提取物5～15g/l、葡萄糖20～50g/l、牛肉浸膏5～10g/l、k2hpo4·3h2o2～5g/l、mgso4·7h2o0.25～0.58g/l、mnso4·h2o0.05～0.30g/l、吐温801g/l、五水亚硒酸钠8～17mg/l、丝氨酸0.1～0.4g/l)，具体如下：

以植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3作为对照，从甘油管中蘸取实施例2获得的副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3的菌液分别在mrs固体培养基上划线，于37℃倒置培养36h，得到单菌落；挑取单菌落接种至mrs液体培养基中，于37℃培养12h，得到培养液；将培养液以1％(v/v)的接种量接种至mrs液体培养基中，于37℃培养12h，得到种子液；将种子液以5％(v/v)的接种量接种至定向转化培养基中，于温度为37℃、转速为100rpm、ph为6.0的条件下培养8h，得到发酵液；将发酵液在4℃的条件下8000r/min离心15min，得到副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3的菌体；将副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3的菌体纯水洗涤2次，弃去上清液后冻干，得到副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4冻干粉和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3冻干粉；

其中，定向转化培养基：蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、葡萄糖30g/l、牛肉浸膏10g/l、无水乙酸钠2g/l、柠檬酸氢二胺2g/l、k2hpo4·3h2o2.6g/l、mgso4·7h2o0.5g/l、mnso4·h2o0.25g/l、吐温801g/l、五水亚硒酸钠10mg/l、丝氨酸0.2g/l；

植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610的保藏编号为cgmccno.6077，记载于公开号为cn102586148a的专利申请文本中；干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4以及干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3则为与副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089同批次从来源于四川省若尔盖牧场打更沟村的婴儿粪便样本中筛选得到的其他乳酸菌。

检测副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4冻干粉和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表2)。

由表2可知，副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089可高效转化无机硒生产硒代半胱氨酸，仅发酵8h，即可使副干酪乳杆菌ccfm1089ccfm1089冻干粉中的总硒含量高达400.65mg/kg，总硒中有机硒的含量高达96％，有机硒中硒代半胱氨酸的含量高达89％；而植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610(保藏编号为cgmccno.6077)、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4以及干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3转化无机硒生产硒代半胱氨酸的转化效率远不如副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089。

表2副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)ccfm8610冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)fjssz4-l2冻干粉、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)m2-06-f01-l4-1-4冻干粉和干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)34-3冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布

对比例1：亚硒酸钠浓度对有机硒转化效率的影响(富硒转化)

在实施例2的基础上，将富硒培养基中亚硒酸钠的浓度替换为5mg/l、20mg/l。

检测副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表3)。

由表3可知，亚硒酸钠浓度为5mg/l时，副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉中硒代半胱氨酸的转化效率远低于亚硒酸钠浓度为8mg/l时；亚硒酸钠浓度为20mg/l时，副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉中的总硒含量虽有所提升，但硒代半胱氨酸转化效率仍远低于亚硒酸钠浓度为8mg/l时。

表3副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布

对比例2：ph对有机硒转化效率的影响(富硒转化)

在实施例2的基础上，将发酵的ph替换为5.5。

检测副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布(检测结果见表4)。

由表4可知，ph为5.5时，副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉中的总硒含量虽有所提升，但硒代半胱氨酸转化效率远远低于ph为6时。

表4副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)ccfm1089冻干粉中的总硒含量、有机硒含量以及硒形态分布

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

序列表

<110>苏州硒泰克生物科技有限公司

<120>一株可高产硒代半胱氨酸的副干酪乳杆菌及其应用

<160>1

<170>patentinversion3.3

<210>1

<211>424

<212>dna

<213>副干酪乳杆菌

<400>1

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