本发明涉及生物医药技术领域，更具体地说，尤其涉及一种提高低分子量肝素钙中钙含量的方法。
背景技术：
低分子量肝素钙是从猪的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钙盐，系多糖类物质，具有延长血凝时间的作用。其临床试验结果显示，低分子量肝素钙局部副作用如疼痛、硬结、瘀点瘀斑等明显少于低分子量肝素钠注射液。此外，低分子量肝素钠的抗凝作用不如低分子量肝素钙稳定，贮存过程中效价易变化，国外已有用低分子量肝素钙取代低分子量肝素钠的趋势。
低分子量肝素钠皮下注射后使局部钙离子浓度下降，因此，注射局部的毛细血管通透性增加，易产生出血点和血肿。经研究表明，低分子量肝素钙所致的局部出血倾向比低分子量肝素钠轻的多。肝素的钙盐形式在减轻注射疼痛等局部副作用方面比肝素钠稍显优势。目前肝素钙与肝素钠等效性研究结果不完全一致，从减轻注射局部副作用的角度来说，选用肝素钙具有一定优势。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种提高低分子量肝素钙中钙含量的方法，是在低分子量肝素钙生产过程中以最优化的工艺提高产品的钙含量，且保证收率和其他需检测指标均合格，该方法具有条件温和、操作简便、成本低、效果好的优点，适于低分子量肝素钙工业化生产。
本发明的目的通过如下技术方案来实现：
一种提高低分子量肝素钙中钙含量的方法，具体操作步骤如下：
（1）一次转钙阶段
向浓度5-20%的低分子量肝素钠水溶液中加入饱和氯化钙溶液，用盐酸调ph至6.0，搅拌反应8-18h，经微孔滤膜过滤后，向滤液中加入2.5倍药用95%乙醇沉淀；
（2）二次转钙阶段
去除上清液，加入沉淀物10倍量纯化水溶解，加入饱和氯化钙溶液，用盐酸调ph至6.0，搅拌反应2-4h，经微孔滤膜过滤后，向滤液中加入2.5倍药用95%乙醇沉淀；
（3）三次转钙阶段
去除上清液，加入沉淀物10倍量纯化水溶解，加入饱和氯化钙溶液至溶液体系电导率为26-30ms/cm，用盐酸调ph至6.0，搅拌反应1-2h，经微孔滤膜过滤后，向滤液中加入2.5倍药用95%乙醇沉淀；
（4）末次醇沉阶段
去除上清液，加入沉淀物10倍量纯化水溶解，用盐酸调ph至6.0，经微孔滤膜过滤后，向滤液中加入2.5倍药用95%乙醇沉淀，得到低分子量肝素钙成品。
在步骤（1）中，肝素钠水溶液浓度优选10%，若浓度超过20%，则转钙效率会大大下降；若浓度低于5%，转钙效率会有少许提升，但是醇沉用95%乙醇用量会大大增加，经申请人长期研究，最终确定肝素钠水溶液浓度在10%为最佳。
在步骤（1）中，应将饱和氯化钙溶液加入到肝素钠水溶液中，经申请人实验研究发现，若反过来将肝素水溶液加入到饱和氯化钙溶液中，会使转钙过程反应不均匀，而且因开始局部转钙过量易在体系溶液中形成小型颗粒物。
在步骤（1）中调ph至6.0，是避免在碱性条件下，钙离子以ca(oh)2形式析出，影响转钙效率。
在步骤（1）中控制转钙时间8-18h，优选8h，经申请人研究，转钙过程在8h时基本已反应完全，后续转钙反应对钙含量的增长效果很小。转钙结束后体系溶液需用微孔滤膜过滤，以去除加入饱和氯化钙溶液时所引入的外源性杂质和细菌内毒素。
在步骤（1）中，肝素醇沉一般采用药用95%乙醇或者接近95%的药用回收乙醇，经申请人研究对比，使用药用95%乙醇收率更高且引入外源性杂质更少。
在步骤（2）中控制转钙时间2-4h，随着转钙次数的增加，转钙效率逐渐减少，优选转钙时间为4h。
在步骤（3）中以饱和氯化钙溶液调电导率为28ms/cm为最适条件，得到的低分子量肝素钙中钙含量在9.5%-11.5%。
在步骤（4）中再次醇沉，是用以去除溶液体系中多余的游离钙离子。
本发明以加入饱和氯化钙溶液的形式调节钙含量，能达到我国现行药典对肝素钙盐的钙含量要求，相比阳离子树脂交换法操作更加简便，且不受树脂容量限制，更加适用于工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1
（1）一次转钙阶段
称取低分子肝素钠300g加入到3l纯化水中，搅拌使固体全部溶解，然后转移至不锈钢罐内，加入常温饱和氯化钙溶液，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应8h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀10h。
（2）二次转钙阶段
除去上清液，加入3l纯化水溶解，加入常温饱和氯化钙溶液，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应2h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀10h。
（3）三次转钙阶段
除去上清液，加入3l纯化水溶解，用饱和氯化钙溶液调电导率26ms/cm，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应1h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀10h。
（4）末次醇沉阶段
除去上清液，加入3l纯化水溶解，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀10h，得到低分子量肝素钙297.5g，钙含量9.9%。
实施例2
改变三次转钙阶段用饱和氯化钙溶液调电导率28ms/cm，其它同实施例1，得到低分子量肝素钙299.5g，钙含量10.1%。
实施例3
改变三次转钙阶段用饱和氯化钙溶液调电导率30ms/cm，其它同实施例1，得到低分子量肝素钙300.6g，钙含量10.5%。
实施例4
（1）一次转钙阶段
称取低分子肝素钠300g加入到6l纯化水中，搅拌使固体全部溶解，然后转移至不锈钢罐内，加入常温饱和氯化钙溶液，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应10h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀12h。
（2）二次转钙阶段
除去上清液，加入6l纯化水溶解，加入常温饱和氯化钙溶液，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应3h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀12h。
（3）三次转钙阶段
除去上清液，加入6l纯化水溶解，用饱和氯化钙溶液调电导率28ms/cm，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应1h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀12h。
（4）末次醇沉阶段
除去上清液，加入6l纯化水溶解，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀12h，得到低分子量肝素钙301.7g，钙含量10.4%。
实施例5
（1）一次转钙阶段
称取低分子肝素钠300g加入到1.5l纯化水中，搅拌使固体全部溶解，然后转移至不锈钢罐内，加入常温饱和氯化钙溶液，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应16h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀14h。
（2）二次转钙阶段
除去上清液，加入1.5l纯化水溶解，加入常温饱和氯化钙溶液，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应4h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀14h。
（3）三次转钙阶段
除去上清液，加入1.5l纯化水溶解，用饱和氯化钙溶液调电导率28ms/cm，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应2h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀14h。
（4）末次醇沉阶段
除去上清液，加入150l纯化水溶解，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀14h，得到低分子量肝素钙279.7g，钙含量10.6%。
实施例6
（1）一次转钙阶段
称取低分子肝素钠300g加入到3l纯化水中，搅拌使固体全部溶解，将料液加入到常温饱和氯化钙溶液中，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应18h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀16h。
（2）二次转钙阶段
除去上清液，加入3l纯化水溶解，将料液加入到常温饱和氯化钙溶液中，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应4h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀16h。
（3）三次转钙阶段
除去上清液，加入3l纯化水溶解，用饱和氯化钙溶液调电导率28ms/cm，用6mol/l盐酸调ph至6.0，室温搅拌反应2h，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀16h。
（4）末次醇沉阶段
除去上清液，加入3l纯化水溶解，0.22um微孔滤膜过滤，加入2.5倍料液体积的95%药用乙醇沉淀16h，得到低分子量肝素钙298.5g，钙含量10.3%。