本发明一般性涉及多肽或蛋白质的纯化领域。具体而言，本发明涉及样品中水解活性的降低。本文报道了通过在纯化步骤例如色谱步骤之前和/或纯化步骤过程中使包含多肽的样品与聚山梨酯(例如聚山梨酯20或聚山梨酯80)或聚山梨酯样的表面活性剂接触来纯化多肽或蛋白质的方法。发明背景表面活性试剂或表面活性剂已成为可靠和稳定的生物药物制剂不可或缺的成分，以防止活性药物成分(api)不稳定。为此，目前市场上出售的大多数生物治疗剂，例如单克隆抗体(mab)均包含非离子型去污剂/表面活性剂，尤其是聚山梨酯20(ps20或20)或聚山梨酯80(ps80或80)[1]。众所周知，聚山梨酯通过最小化api与表面[2-5]和气液界面[5-7]的接触面积并阻止蛋白质与蛋白质之间的相互作用[8,9]来提高蛋白质的稳定性。这些有利的属性为api提供保护，使其免于聚集、变性和有效蛋白质浓度降低。聚山梨酯可能具有一些杂质和降解物，这些杂质和降解物会在纯净材料中以及在生物药物制剂的静态存储期间产生，因为聚山梨酯易于氧化和水解，导致形成多种聚山梨酯降解产物[1,17,18]。所述氧化途径的主要特征是存在过氧化物、醛、酮和短链的酯化脱水山梨糖醇/异山梨醇-peg类物质，而水解会导致游离脂肪酸(ffa)和非酯化的脱水山梨糖醇/异山梨醇-peg类物质的含量升高。另外，据报道，由于mab制剂在水溶液中的低溶解度，因此在长期保存后mab制剂中可见和亚可见的颗粒的出现可归因为ffa的积累[18,19]。分子完整性的丧失与由降低功能性表面活性剂浓度(其提供保护作用)和直接影响完整的构象结构导致的api的稳定性降低有关[17,20]。聚山梨酯的水解可以通过酶或酸/碱催化机制发生[21]。但是，后者在常规的制剂条件下可以忽略不计。相反，最近的研究揭示了难以去除的cho宿主细胞蛋白(hcp)杂质，该杂质被认为参与了生物药物制剂中聚山梨酯的水解。据报道，假定的磷脂酶b样2(plbl2)和脂蛋白脂酶(lpl)或其他类型的脂肪酶和酯酶的存在可能导致聚山梨酯降解[22-24]。最近的发现建立了与生物制品制造相关的脂肪酶在上游过程中表达。通常情况下，下游纯化过程(例如蛋白质a)能够去除hcp：但是，已显示出某些hcp由于与抗体的特异性相互作用而难以去除(vanderlaan,m.等人,bioprocint.2015,13:18–29)，因此以痕量被保留在原料药和药品中(k.lee等人,achinesehamsterovarycellhostcellproteinthatimpactsps-80degradation.accbioconference(2015))。因此，对于生物药物产品的存储，重要的是控制并最小化聚山梨酯的降解以及例如由游离脂肪酸的积累形成的颗粒的形成。具体而言，需要解决聚山梨酯的酶促降解。例如，目前正在努力从蛋白质药物中鉴别和去除脂肪酶，例如通过工程化具有降低的脂肪酶表达的细胞(wo2015/095568)并努力寻找具有降低聚山梨酯降解的制剂(wo2017/117311)来解决该问题。然而，仍然需要控制/减少表面活性剂如聚山梨酯的酶促降解，并且其仍然是生物药物开发中的重大挑战。在wo2016/057739中，提出了减少药物制剂中亚可见颗粒的方法。发明简述本文报道了一种在纯化步骤中(例如在色谱步骤中)使用聚山梨酯纯化蛋白质或多肽(例如抗体)以降低在样品或制剂中的水解活性的方法。还报道了制备蛋白质或多肽以及蛋白质或多肽制品的方法。本文还报道了在纯化步骤中(例如在色谱步骤中)使用聚山梨酯纯化蛋白质或多肽(例如抗体)以抑制或减少药物制剂中的颗粒形成的方法。本文还报道了在纯化步骤中(例如在色谱步骤中)使用聚山梨酯纯化蛋白质或多肽(例如抗体)以抑制或减少药物制剂中的聚山梨酯降解的方法。已经发现，通过本发明的方法和用途，可以显著降低样品中的水解活性。在将样品上样到色谱材料上之前或在色谱步骤中样品纯化过程中，或者在色谱步骤之前以及纯化过程中两者期间，将包含待纯化蛋白质和具有水解活性的杂质的样品与非离子表面活性剂(如聚山梨酯)接触或混合。在所有这些情况下，水解活性(例如导致聚山梨酯降解的活性)可以降低。当与例如在色谱步骤之前和/或色谱纯化过程中未使用聚山梨酯的色谱步骤所纯化的样品进行比较时，发现在纯化过程中将其与聚山梨酯接触或混合的样品中的水解活性(尤其是对聚山梨酯水解而言)大幅降低。因此，发现可以通过在先前的纯化操作中实施使用聚山梨酯作为添加剂的步骤来减少纯化后的样品(例如抗体制品/制剂)中的聚山梨酯降解(通过水解)。不受此理论的束缚，有趣的是，杂质(例如具有水解活性的酶(如酯酶))的减少因此是通过在纯化操作中/过程中添加杂质的底物或靶标(其可在以后(例如存储过程中)被水解裂解)而实现/达成。因此，本文报道的一个方面是一种用于纯化蛋白质(从包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中)的方法，该方法包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或ii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或iii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。本文报道的一个方面是一种用于降低样品中水解活性的方法，该样品包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质，包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或ii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或iii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。在所有方面的进一步实施方案中，所述杂质是水解酶。在所有方面的进一步实施方案中，所述杂质是酯酶。在所有方面的进一步实施方案中，聚山梨酯选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65或聚山梨酯80。在所有方面的进一步实施方案中，聚山梨酯是聚山梨酯20或聚山梨酯80。在所有方面的进一步实施方案中，聚山梨酯为聚山梨酯20。在所有方面的进一步实施方案中，聚山梨酯是聚山梨酯80。在所有方面的进一步实施方案中，将聚山梨酯添加至至少约0.001％(w/v)的终浓度。在所有方面的进一步实施方案中，将聚山梨酯添加至约0.001％(w/v)至约10％(w/v)的终浓度。在所有方面的进一步实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料、阴离子交换色谱材料、疏水相互作用色谱材料或混合模式色谱材料。在所有方面的进一步实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料或阳离子交换色谱材料。在所有方面的进一步实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料或强阳离子交换色谱材料。在所有方面的进一步实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料，其选自蛋白质a色谱或以骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的色谱材料。在所有方面的进一步实施方案中，亲和色谱材料是captureselectfcxl或mabselectsure。在所有方面的进一步实施方案中，阳离子交换色谱材料是spsepharosefastflow或porosxs或poros50hs。在所有方面的进一步实施方案中，该蛋白质是单克隆抗体。在所有方面的进一步实施方案中，该蛋白质是人源化的ii型抗cd20抗体或抗vegf/ang2抗体或抗her2抗体。本文报道的一方面是通过本文报道的方法获得的具有降低的水解活性(增加的聚山梨酯降解稳定性/降低的聚山梨酯降解)的液体抗体制剂。本文报道的一个方面是通过本文报道的方法获得的具有增加的稳定性的液体抗体制剂。本文报道的一个方面是通过本文报道的方法获得的具有减少的颗粒形成(通过游离脂肪酸聚集)的液体抗体制剂。本文报道的一个方面是包含抗体和聚山梨酯的液体组合物，其中所述聚山梨酯在液体组合物的储存期间每年降解20％或更少。在一个实施方案中，抗体是人源化ii型抗cd20抗体或抗vegf/ang2抗体或抗her2抗体。在一个实施方案中，抗体是奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)、法瑞昔单抗(faricimab)、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗(pertuzumab)。发明详述本文报道了通过在色谱步骤之前和/或过程中使包含蛋白质(和具有水解活性的杂质)的样品与聚山梨酯如聚山梨酯20(ps20)接触来纯化蛋白质的方法。已经发现，在纯化步骤例如色谱步骤中，通过使用聚山梨酯作为添加剂可以从样品中纯化蛋白质。具体而言，可以减少具有水解活性的杂质如水解酶(例如脂肪酶)。因此，本文报道的一个方面是一种从包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质的方法，其包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上(在适合于蛋白质被色谱材料结合的条件下)，b)将包含聚山梨酯/聚山梨酯样的非离子表面活性剂的(洗涤)溶液施加到色谱材料上(在适合于蛋白质被色谱材料结合的条件下)，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或ii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料(在适合于蛋白质通过色谱结合的条件下)，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或iii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料(在适合于蛋白质通过色谱结合的条件下)，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上(在适合于蛋白质被色谱材料结合的条件下)，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。本文报道的一个方面是一种从包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质的方法，包括以下步骤：i)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或ii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。本文报道的一个方面是一种从包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质的方法，包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或ii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。本文报道的一个方面是一种从包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质的方法，包括以下步骤：a)将包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质。本文报道的一个方面是一种从包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质的方法，包括以下步骤：a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质。本文报道的一个方面是一种从包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质的方法，包括以下步骤：a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。已经发现，在纯化过程中/期间，可以通过添加杂质的底物或靶标(其在储存过程中可能随后发生水解裂解)来降低样品中的水解活性。该水解活性可能对聚山梨酯有活性。如果水解活性降低，则聚山梨酯的稳定性增加。本文所报告的一个方面是一种用于降低包含蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中的(例如聚山梨酯)水解活性(增加聚山梨酯降解稳定性)的方法，该方法包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质。或ii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或iii)a)向包含该蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物(即包含含有蛋白质和至少一种具有水解活性的杂质的样品和步骤a)的聚山梨酯的溶液)施加于色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。所述水解活性可归因于水解酶。这些活性可以通过本文报道的方法降低。本文报道的一个方面是减少包含蛋白质和水解酶的样品中水解酶量的方法，包括以下步骤：a)在将包含蛋白质和水解酶的样品施加到色谱材料上之前，将聚山梨酯添加到包含蛋白质和水解酶的样品中，和/或b)在将包含蛋白质和水解酶的样品施加到色谱材料上之后，用包含聚山梨酯的溶液洗涤。已经发现可以通过本文报道的方法产生重组蛋白，例如抗体，其具有例如改善的储存稳定性或降低的水解活性。本文报道的一个方面是一种生产(重组)蛋白质的方法，包括以下步骤：a)培养包含编码(重组)蛋白质的核酸的哺乳动物细胞，b)从细胞或培养基中回收(重组)蛋白质，和c)用本文报道的方法纯化(重组)蛋白质，并由此制备该(重组)蛋白质。本文报道的一个方面是一种产生抗体的方法，其包括以下步骤：a)培养包含编码抗体的核酸的哺乳动物细胞，b)从细胞或培养基中回收抗体，和c)用本文报道的方法纯化抗体，并由此制备抗体。应当理解，包含蛋白质的样品的范围可以从非常小体积到非常大的体积，并且可以明确地包括在生物治疗药物的大规模生产中的制备型样品。使用本文报道的方法，还可以制备水解活性降低并因此增加稳定性的蛋白质或抗体制剂。已经发现，通过本文报道的方法和用途，从业人员能够生产具有降低的水解活性并因此具有更高的降解稳定性的蛋白质或抗体制剂。由于将聚山梨酯本身添加到液体抗体制剂中以增加蛋白质在制品或制剂中的稳定性，因此，本文报道的方法和用途同样适用于增加液体抗体制品/制剂的稳定性。本文报道的一个方面是通过本文报道的方法获得的具有降低的水解活性(增加的聚山梨酯降解稳定性)的液体抗体制剂(包含可水解裂解的表面活性剂/聚山梨酯)。本文报道的一个方面是通过本文报道的方法获得的具有增加的稳定性的液体抗体制剂。由于可由聚山梨酯的降解或裂解产生的游离脂肪酸的聚集促进蛋白质或抗体制剂中的颗粒形成，因此可以通过使用本文报道的方法降低水解活性来减少这些制剂中的颗粒形成。其可以例如看出，将包含帕妥珠单抗的液体抗体制剂与聚山梨酯一起孵育，然后施加至阳离子交换色谱材料上，并且在用聚山梨酯配制回收后，在5℃下储存36个月后未显示任何可见颗粒。因此，本文报道的一个方面是通过本文报道的方法获得的具有减少的颗粒形成(由游离脂肪酸形成)的液体抗体制剂。本文报道的其它方面是在储存期间具有低的聚山梨酯降解的液体抗体组合物。本发明的一个方面是一种包含抗体/蛋白质和聚山梨酯的液体组合物，其中在该液体组合物的储存/保质期内，聚山梨酯每年降解20％或更少(在一个实施方案中为15％或更少，在一个实施方案中为12％或更少，在一个实施方案中为10％或更少，在一个实施方案中为9％或更少，在一个实施方案中为8％或更少，在一个实施方案中为7％或更少，在一个实施方案中为6％或更少，在一个实施方案中为5％或更少，在一个实施方案中为4％或更少，在一个实施方案中为3％或更少，在一个实施方案中为2％或更少，在一个实施方案中为1％或更少)。在一个实施方案中，在液体组合物的储存期间，聚山梨酯每年降解10％或更少。另一方面是包含抗体和聚山梨酯的液体组合物，其中在一年后，聚山梨酯以初始浓度的至少80％(在一个实施方案中为至少85％，在一个实施方案中为至少88％，在一个实施方案中为至少90％，在一个实施方案中为至少91％，在一个实施方案中为至少92％，在一个实施方案中为至少93％，在一个实施方案中为至少94％，在一个实施方案中为至少95％，在一个实施方案中为至少96％，在一个实施方案中为至少97％，在一个实施方案中为至少98％，在一个实施方案中为至少99％)的浓度存在于该组合物中，其中所述初始浓度是抗体在液体组合物中配制或开始储存时的浓度。在本发明的液体组合物的所有方面的一个实施方案中，该抗体是治疗性抗体。在一个实施方案中，该抗体是igg1同种型的治疗性抗体。在一个实施方案中，该抗体是人源化ii型抗cd20抗体，或抗-vegf/ang2抗体或抗-her2抗体。在一个实施方案中，该抗体特异性结合vegf。在一个实施方案中，该抗体是奥滨尤妥珠单抗、法瑞昔单抗、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。在一个实施方案中，该抗体是奥滨尤妥珠单抗。在一个实施方案中，该抗体是法瑞昔单抗。在一个实施方案中，该抗体是曲妥珠单抗。在一个实施方案中，该抗体是帕妥珠单抗。在一个实施方案中，将抗体配制用于皮下注射。在一个实施方案中，该液体组合物中的抗体浓度为至少50mg/ml。在一个实施方案中，该液体组合物中的抗体浓度为至少80mg/ml。在一个实施方案中，该液体组合物中的抗体浓度为至少100mg/ml。在一个实施方案中，该液体组合物中的抗体浓度为至少120mg/ml。在一个实施方案中，该液体组合物中的抗体浓度为至少150mg/ml。在一个实施方案中，该液体组合物中的抗体浓度为至少200mg/ml。已经发现，在一个或多个纯化步骤之前或之中使用聚山梨酯可降低样品中的水解活性。本文报道的一个方面是聚山梨酯用于降低包含蛋白质的样品中的水解活性(提高聚山梨酯降解稳定性)的用途，其中所述包含蛋白质的样品i)在将包含蛋白质的样品施加到色谱材料之前补充聚山梨酯，和/或ii)在将包含蛋白质的样品施加到色谱材料上之后，用包含聚山梨酯的溶液洗涤。在以下实施方案中提供了本文所报告的各方面。明确指出，该列表也包括单个实施方案的任何组合。杂质在药物制备过程中产生，尤其是由于宿主细胞蛋白从所用的宿主细胞中释放出来，例如中国仓鼠卵巢(cho)细胞。这些hcp可能具有水解活性。示例性的hcp属于水解酶的酶类别，包括水解例如甘油三酯内的酯键的脂肪酶，如脂蛋白脂酶(lpl)。“具有水解活性的杂质”或“水解活性的杂质”(在本文中可互换使用)能够水解化学键，即通过水解即通过添加水来裂解化学键。酸碱水解的一个例子是酰胺或酯的水解。当亲核试剂攻击酯或酰胺的羰基碳时，就会发生水解。水解可以被酶类例如蛋白酶或酯酶催化。在一个实施方案中，杂质(具有水解活性)是一种酶。在另一个实施方案中，杂质是水解酶。在另一个实施方案中，杂质是酯酶。在另一个实施方案中，杂质是脂肪酶。“聚山梨酯”是衍生自被脂肪酸酯化的乙氧基化的脱水山梨糖醇(山梨醇的衍生物)的物质(即，聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯)。聚山梨酯是一类乳化剂(也称为表面活性剂)，聚山梨酯是非离子表面活性剂。聚山梨酯是可水解裂解的表面活性剂。聚山梨酯的实例是例如聚山梨酯20(单月桂酸酯聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇酯)、聚山梨酯40(单棕榈酸聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇酯)、聚山梨酯60(单硬脂酸聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇酯)、聚山梨酯65(三硬脂酸聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇酯)、聚山梨酯80(单油酸聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇酯)。“聚氧乙烯”之后的数字20是指分子中发现的氧乙烯-(ch2ch2o)-基团的总数。“聚山梨酯”之后的数字涉及与分子的聚氧乙烯脱水山梨糖醇部分相关的脂肪酸的类型。单月桂酸酯由20表示，单棕榈酸酯由40表示，单硬脂酸酯由60表示，单油酸酯由80表示。聚山梨酯的常见商标名称包括scattics、alkest、canarcel和tween(吐温)；例如聚山梨酯20的吐温20。“聚山梨酯样的非离子表面活性剂”是显示出与聚山梨酯相似的化学特性或行为的表面活性剂。在另一个实施方案中，聚山梨酯选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯61、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81、聚山梨酯85或聚山梨酯120，或其组合。在另一个实施方案中，聚山梨酯选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯65、聚山梨酯80，或其组合。在另一个实施方案中，聚山梨酯选自聚山梨酯20或聚山梨酯80，或其组合。在另一个实施方案中，聚山梨酯是聚山梨酯20。在另一个实施方案中，聚山梨酯是聚山梨酯80。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.001％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.005％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.005％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.007％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.007％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.01％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.01％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.04％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.04％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约10％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约10％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约5％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约5％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约3％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约3％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约2％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约2％(w/v)。在另一个实施方案中，添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约1％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约1％(w/v)。可以理解的是，在向包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中添加聚山梨酯之后，将混合物孵育一定时间。当在洗涤步骤中使用含聚山梨酯的溶液时，可以进行相同的操作，例如用低流速洗涤或在一定时间内停止流动。常规色谱方法及其用途是本领域技术人员已知的。参见例如heftmann,e.,(编辑),chromatography,第5版,部分a:fundamentalsandtechniques,elseviersciencepublishingcompany,newyork(1992)；deyl,z.,(ed.),advancedchromatographicandelectromigrationmethodsinbiosciences,elseviersciencebv,amsterdam,thenetherlands(1998)；poole,c.f.和poole,s.k.,chromatographytoday,elseviersciencepublishingcompany,newyork(1991)；scopes,proteinpurification:principlesandpractice,springerverlag(1982)；sambrook,j.等人,(编辑),molecularcloning:alaboratorymanual,第二版,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,(1989)；或ausubel,f.m.等人,(编辑),currentprotocolsinmolecularbiology,johnwiley&sons,inc.,newyork(1987-1994)。已经建立了不同的方法，并广泛用于蛋白质的回收和纯化，例如以微生物蛋白质进行的亲和色谱(例如，蛋白质a或蛋白质g或蛋白质l亲和色谱)，以重组蛋白质为配体(例如单链fv为配体，例如kappaselect)的亲和色谱，以骆驼科动物来源的单域抗体片段为配体(例如captureselectfcxl)的亲和色谱，离子交换色谱(例如阳离子交换(羧甲基树脂)、阴离子交换(氨基乙基树脂)和混合模式交换)，嗜硫吸附(例如，使用β-巯基乙醇和其他sh配体)，疏水相互作用或芳香族吸附色谱(例如，使用苯基-琼脂糖、亲氮杂树脂或间氨基苯硼酸)，金属螯合亲和色谱(例如，使用ni(ii)-和cu(ii)亲和性材料)，尺寸排阻色谱法和电泳方法(例如凝胶电泳、毛细管电泳)。这些方法可以在本文报道的不同实施方案中独立地组合。术语“施加于”表示纯化方法的部分步骤，其中使溶液与色谱或层析(术语可以互换使用)材料接触。这表示要么将a)溶液添加到其中包含色谱材料的色谱装置中，要么b)将色谱材料添加到溶液中。在a)的情况下，溶液通过装置，使色谱材料与溶液中包含的物质发生相互作用。取决于条件，例如ph、电导率、盐浓度、温度和/或流速，溶液的某些物质结合到色谱材料上，因此可以在其它步骤中从色谱材料中回收。溶液中残留的物质可以在流穿液(flow-through)中找到。“流穿液”表示在通过装置之后获得的溶液，其可以是施加的溶液或缓冲溶液，用于洗涤柱子或引起与色谱材料结合的物质的洗脱。技术人员理解如何从提供的色谱材料中回收蛋白质。例如，这可以通过施加具有低ph值或增加的盐浓度的溶液，从而使蛋白质不再与色谱材料结合并在该溶液中发现(例如，通过施加洗脱缓冲液获得的洗脱流份)。该装置可以是例如柱子或筒(cassette)。在b)的情况下，可以将色谱材料，例如以固体形式加入溶液中，所述溶液例如含有要纯化的目标物质，使色谱材料与溶液中的物质发生相互作用。相互作用后除去色谱材料，例如通过过滤，与色谱材料结合的物质也随之从溶液中除去，而未与色谱材料结合的物质保留在溶液中。在包含聚山梨酯的(洗涤)溶液实施为该方法的一个步骤的情况下，应当理解，色谱步骤的条件选择方式是保持目标蛋白质与色谱材料结合。如本文所用的色谱“材料”，例如阳离子交换材料或亲和性材料，是指固定相或固相。这也可以称为树脂或基质。在本文中，“材料”提供了使混合物的组分例如目标蛋白质可以与之结合的基质。该材料可以是或可以包括柱，例如扩展床或填充床柱。该材料可以是离散颗粒或珠的形式。该材料可以是膜的形式。该材料可以是多孔的单一材料的形式。该材料可以是官能化的纤维、羊毛或网状物的形式。该材料可以是能够携带官能团或表现出色谱特性的任何其他固体载体的形式。能够与要纯化的蛋白质相互作用的配体共价结合至固相。例如，“蛋白质a色谱材料”表示蛋白质a与之共价结合的惰性固相。在另一个实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料、阴离子交换色谱材料、疏水相互作用色谱材料或混合模式色谱材料。在另一个实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料，阳离子交换色谱材料或阴离子交换色谱材料。在另一个实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料或阳离子交换色谱材料。在另一个实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料或强阳离子交换色谱材料。在另一个实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料。在另一个实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a或蛋白质g或蛋白质l的亲和色谱、单链fv配体亲和色谱、金属螯合亲和色谱或以骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的亲和色谱材料(fcxl)。在另一个实施方案中，色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a色谱或具有骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的色谱材料。在另一个实施方案中，亲和色谱材料是具有醛活化的琼脂糖基质和captureselectfcxl亲和配体[是骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]的材料，其特异性结合所有人igg亚类的ch3结构域，其中配体通过醛经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖基质和碱稳定的proteina衍生配体(mabselecttmsuretm)的材料。在另一个实施方案中，亲和色谱材料是具有醛激活的琼脂糖基质的材料，平均粒径为65μm且具有与所有人igg亚类ch3结构域特异性结合的captureselecttmfcxl亲和配体[骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]，其中所述配体经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖的基质、碱稳定的蛋白a衍生的配体且平均粒径为85μm的材料(mabselecttmsuretm)。在另一个实施方案中，亲和色谱材料是captureselecttmfcxl或mabselecttmsuretm。在另一个实施方案中，色谱材料是阳离子交换色谱材料。在另一个实施方案中，色谱材料是强阳离子交换色谱材料。一旦柱平衡后，“强”离子交换剂将不会损失其基质上的电荷，因此可以使用多种ph缓冲剂。在另一个实施方案中，阳离子交换色谱材料是具有交联的琼脂糖基质和磺丙基作为配体的材料(例如spfastflow)。在另一个实施方案中，阳离子交换色谱材料是具有交联琼脂糖(6％)基质的材料，其粒径为45至165μm(平均90μm)，并且磺丙基为配体(spfastflow)。在另一个实施方案中，阳离子交换色谱材料是spfastflow。在另一个实施方案中，阳离子交换色谱材料是具有交联聚(苯乙烯二乙烯基苯)的基质和磺丙基作为配体(例如porosxs或poros50hs)的材料。在另一个实施方案中，阳离子交换色谱材料是porosxs或poros50hs。在另一个实施方案中，阳离子交换色谱材料是poros50hs。术语“蛋白质”和“多肽”是指氨基酸残基的聚合物，其对聚合物的最小长度没有限制。优选地，蛋白质或多肽至少具有氨基酸。该定义包括全长蛋白质及其片段，以及其修饰(例如，糖基化、磷酸化、缺失、添加和取代)。优选地，蛋白质或多肽是抗体。本文中术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、抗体融合蛋白和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性。该术语还包括例如融合蛋白的分子，其中其他效应子部分与抗体结合。此外，还包括抗体药物缀合物(adc)。如本文所用，术语“效应子部分”是指例如通过信号转导或其他细胞途径影响细胞活性的多肽，例如蛋白质或糖蛋白。因此，本发明的效应子部分可以与受体介导的信号传导相关，其从细胞膜外部传递信号以调节具有对于效应子部分的一种或多种受体的细胞中的应答。效应子部分还可在具有对于效应子部分的一种或多种受体的细胞中引发细胞毒性反应。效应子部分还可以在具有对于效应子部分的一种或多种受体的细胞中引起增殖反应。效应子部分可以在具有效应子部分受体的细胞中引起分化。效应子部分还可以改变具有对于效应子部分的受体的细胞中内源性细胞蛋白的表达(即上调或下调)。效应子部分的非限制性实例包括细胞因子、生长因子、激素、酶、底物和辅因子。“抗体片段”是指除完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的一部分，其结合完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scfv)；由抗体片段形成的多特异性抗体(例如多特异性fab)。fab片段是通过木瓜蛋白酶消化(全长/完全)抗体而获得的抗体片段。“多特异性抗体”是具有两种不同或更多抗原结合特异性的抗体。“双特异性抗体”是具有两种不同的抗原结合特异性的抗体。如本文所用，术语“双特异性”抗体表示具有至少两个结合位点的抗体，每个结合位点结合不同的表位。在现有技术中已知多种抗her2抗体。这样的抗体优选是单克隆抗体。它们可以是所谓的嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。它们可以是全长抗her2抗体；具有相同生物学活性的抗her2抗体片段；包括此类抗体或片段的氨基酸序列变体和/或糖基化变体。人源化抗her2抗体的实例已知是以inn名称曲妥珠单抗和帕妥珠单抗。另一种合适的抗-her2抗体是t-dm1，其是由humab4d5-8(hercepintm)和美登素类(maytansinoide)组成的抗体-毒素缀合物(即dm1＝n2'-脱乙酰基-n2'-(3-巯基-1-(氧代丙基)-美登素；一种高度有效的抗微管剂)，其缀合物(带有mcc接头)目前正在开发用于转移性乳腺癌。其它具有不同特性的her2抗体如以下所述：tagliabue等人,int.j.cancer,47:933-937(1991)；mckenzie等人,oncogene,4:543-548(1989)；cancerres.,51:5361-5369(1991)；bacus等人,molecularcarcinogenesis,3:350-362(1990)；stancovski等人,pnas(usa),88:8691-8695(1991)；bacus等人,cancerresearch,52:2580-2589(1992)；xu等人,int.j.cancer,53:401-408(1993)；wo94/00136；kasprzyk等人,cancerresearch,52:2771-2776(1992)；hancock等人,cancerres.,51:4575-4580(1991)；shawver等人,cancerres.,54:1367-1373(1994)；arteaga等人,cancerres.,54:3758-3765(1994)；harwerth等人,j.biol.chem.,267:15160-15167(1992)；美国专利号5,783,186；和klapper等人,oncogene,14:2099-2109(1997)。最成功的治疗性抗her2抗体是曲妥珠单抗，由genentechinc.和f.hoffmann-larocheltd以商品名hercepintm出售。在许多专利和非专利出版物中描述了关于her2抗原和针对其的抗体的其它细节(关于适当的概述，参见美国专利号5,821,337和wo2006/044908)。术语“曲妥珠单抗”，“帕妥珠单抗”和“t-dm1”涵盖所有相应的抗her2抗体，这些抗体完全满足在选自以下的国家或地区获得作为相同或生物相似产品的销售许可所必需的要求：美国、欧洲和日本。曲妥珠单抗具有ep-b-590058中定义的cdr区。帕妥珠单抗具有wo01/00245中定义的cdr区。已经发现曲妥珠单抗在bt-474抗增殖试验中的活性[nahta,r.等人,“theher-2-targetingantibodiestrastuzumabandpertuzumabsynergisticallyinhibitthesurvivalofbreastcancercells”,cancerres.2004；64:2343.2346]在0.7–1.3x104u/mg之间。t-dm1如wo2005/117986中所述。人源化her2抗体包括humab4d5-1、humab4d5-2、humab4d5-3、humab4d5-4、humab4d5-5、humab4d5-6、humab4d5-7和humab4d5-8或曲妥珠单抗(herceptintm)，如美国专利5,821,337中表3所述；人源化520c9(wo93/21319)和人源化2c4抗体，例如帕妥珠单抗，如下文进一步所述。为了本文的目的，“曲妥珠单抗”、“herceptintm”和“humab4d5-8”是指针对4d5表位的抗her2抗体。该抗体优选包含例如在wo2006/044908的图14中公开的轻链和重链氨基酸序列。“表位4d5”是her2的细胞外结构域中抗体4d5(atcccrl10463)和曲妥珠单抗结合的区域。该表位靠近her2的跨膜结构域，并且在her2的结构域iv内。为了筛选与4d5表位结合的抗体，可以进行常规的交叉阻断测定，例如在antibodies,alaboratorymanual,coldspringharborlaboratory,edharlowanddavidlane(1988)中所述。或者，可以进行表位作图以评估抗体是否结合her2的4d5表位(例如，包括her2约529位到约625位残基之间的任何一个或多个残基)。“表位7c2/7f3”是7c2和/或7f3抗体结合的her2的胞外域的结构域i内的氨基末端的区域。为了筛选与7c2/7f3表位结合的抗体，可以进行常规的交叉阻断测定，如“antibodies,alaboratorymanual”(coldspringharborlaboratory,edharlowanddavidlane(1988))中所述。或者，可以进行表位作图以确定抗体是否结合her2上的7c2/7f3表位(例如，在her2的约残基22至约残基53的区域中的任何一个或多个残基)。本文中，“帕妥珠单抗”和“rhumab2c4”是指与2c4表位结合并且优选包含wo2006/044908中公开的可变轻链和可变重链氨基酸序列的抗体，更特别地是wo2006/044908的图2中公开的人源化2c4版本574。“表位2c4”是her2的细胞外结构域中抗体2c4结合的区域。为了筛选与2c4表位结合的抗体，可以进行常规的交叉阻断测定，例如在antibodies,alaboratorymanual,coldspringharborlaboratory,edharlowanddavidlane(1988)中所述。或者，可以进行表位作图以评估抗体是否结合her2的2c4表位。表位2c4包含来自her2的细胞外结构域中的结构域ii的残基。2c4和帕妥珠单抗在结构域i、ii和iii的交界处结合于her2的细胞外结构域(franklin等人cancercell5:317-328(2004))。术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和从其衍生的后代，而与传代次数无关。后代的核酸含量可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。具有与在原始转化细胞中筛选或选择的功能或生物学活性相同的突变后代包括在本文中。术语“细胞”包括用于表达核酸的细胞。宿主细胞可以是cho细胞(例如chok1、chodg44)，或bhk细胞，或ns0细胞，或sp2/0细胞，或hek293细胞，或hek293ebna细胞，或细胞，或cos细胞。如本文所用，表述“细胞”包括个体细胞及其后代。在另一个实施方案中，蛋白质是重组蛋白质。在另一个实施方案中，蛋白质是抗体。在另一个实施方案中，蛋白质是单克隆抗体。在另一个实施方案中，蛋白质是多特异性抗体、双特异性抗体或单特异性抗体。在另一个实施方案中，该蛋白质是人源化ii型抗cd20抗体、抗vegf/ang2抗体或抗her2抗体。在另一个实施方案中，该蛋白质是人源化的ii型抗cd20抗体。在另一个实施方案中，该蛋白质是抗vegf/ang2抗体。在另一个实施方案中，蛋白质是抗her2抗体。在另一个实施方案中，该蛋白质是人源化的ii型抗cd20抗体，包含(a)seqidno：01的重链可变区和(b)seqidno：02的轻链可变区。在另一个实施方案中，该蛋白质是抗vegf/ang2抗体，其包含seqidno：3至seqidno：6作为可变区。在另一个实施方案中，该蛋白质是奥滨尤妥珠单抗、法瑞昔单抗、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。在另一个实施方案中，蛋白质是奥滨尤妥珠单抗、法瑞昔单抗或曲妥珠单抗。在另一个实施方案中，蛋白质是奥滨尤妥珠单抗。在另一个实施方案中，蛋白质是法瑞昔单抗。在另一个实施方案中，蛋白质是曲妥珠单抗。在另一个实施方案中，蛋白质是帕妥珠单抗。已经发现，如果在色谱之前将包含多肽/蛋白质的溶液与聚山梨酯/聚山梨酯样表面活性剂一起孵育/调理，并且在色谱过程中还用包含聚山梨酯样表面活性剂的溶液洗涤该包含多肽/蛋白质的溶液，则纯化程度特别显著。术语“约”表示其后的后续数值的+/-20％的范围。在一个实施方案中，术语“约”表示其后跟随数值的+/-10％的范围。在一个实施方案中，术语“约”表示其后跟随数值的+/-5％的范围。本领域技术人员熟知将氨基酸序列(例如多肽)转换为编码该氨基酸序列的相应核酸序列的步骤和方法。因此，核酸的特征在于其核酸序列由各个核苷酸组成，并且同样地由其编码的多肽的氨基酸序列表征。对于技术人员来说，已知如何制备和储存抗体制剂或液体抗体制剂。例如，液体抗体制剂将在低温下(例如在低于8℃的温度下，例如在5℃下)储存以进行长期储存。技术人员还已知如何确定所给定样品中聚山梨酯的量。聚山梨酯的量可以例如用实施例7中报告的方法来评估。因此，已知样品中起始/初始聚山梨酯浓度的技术人员也可以确定所给定时间间隔内聚山梨酯的降解速率。本发明的特定实施方案1.一种用于从包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质/多肽的方法，包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯/聚山梨酯样的非离子表面活性剂的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽，或ii)a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质，或iii)a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质。2.一种用于从包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质/多肽的方法，包括以下步骤：i)a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽，或ii)a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽。3.一种用于从包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质/多肽的方法，包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽，或ii)a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽。4.一种用于从包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质/多肽的方法，包括以下步骤：a)将包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽。5.一种用于从包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质/多肽的方法，包括以下步骤：a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质。6.一种用于从包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化蛋白质/多肽的方法，包括以下步骤：a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽。7.一种用于降低包含蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品的水解活性(增强聚山梨酯降解稳定性)的方法，包括以下步骤：i)a)将包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品施加到色谱材料上，b)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽，或ii)a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，和c)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽，或iii)a)向包含该蛋白质/多肽和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加到色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收该蛋白质/多肽。8.如实施方案1-7中任一项所述的方法，其中杂质(具有水解活性)是酶。9.如实施方案1-8中任一项所述的方法，其中杂质是水解酶。10.如实施方案1-9中任一项所述的方法，其中杂质是酯酶。11.如实施方案1-10中任一项所述的方法，其中杂质是脂肪酶。12.如实施方案1-11中任一项所述的方法，其中聚山梨酯是选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯61、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81、聚山梨酯85或聚山梨酯120。13.如实施方案1-12中任一项所述的方法，其中聚山梨酯是选自聚山梨酯20或聚山梨酯80。14.如实施方案1-13中任一项所述的方法，其中聚山梨酯是聚山梨酯20。15.如实施方案1-13中任一项所述的方法，其中聚山梨酯是聚山梨酯80。16.如实施方案1-15中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.001％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)。17.如实施方案1-16中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.005％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.005％(w/v)。18.如实施方案1-17中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.007％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.007％(w/v)。19.如实施方案1-18中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.01％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.01％(w/v)。20.如实施方案1-19中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.04％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.04％(w/v)。21.如实施方案1-20中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约10％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约10％(w/v)。22.如实施方案1-21中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料、阴离子交换色谱材料、疏水相互作用色谱材料或混合模式色谱材料。23.如实施方案1-22中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料或阴离子交换色谱材料。24.如实施方案1-23中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料或阳离子交换色谱材料。25.如实施方案1-24中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料。26.如实施方案1-25中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a或蛋白质g或蛋白质l的亲和色谱、单链fv配体亲和色谱、金属螯合亲和色谱或以骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的亲和色谱材料(fcxl)。27.如实施方案1-26中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a色谱或具有骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的色谱材料。28.如实施方案1-27中任一项所述的方法，其中亲和色谱材料是具有醛活化的琼脂糖基质和captureselectfcxl亲和配体[是骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]的材料，其特异性结合所有人igg亚类的ch3结构域，其中配体通过经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖基质和碱稳定的proteina衍生配体(mabselecttmsuretm)的材料。29.如实施方案1-28中任一项所述的方法，其中亲和色谱材料是具有醛激活的琼脂糖基质的材料，平均粒径为65μm且具有与所有人igg亚类的ch3结构域特异性结合的captureselecttmfcxl亲和配体[骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]，其中所述配体经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖基质、碱稳定的蛋白a衍生的配体且平均粒径为85μm的材料(mabselecttmsuretm)。30.如实施方案1-29中任一项所述的方法，其中亲和色谱材料是captureselecttmfcxl或mabselecttmsuretm。31.如实施方案1-24中任一项所述的方法，其中色谱材料是阳离子交换色谱材料。32.如实施方案1-24和31中任一项所述的方法，其中阳离子交换色谱材料是具有交联的琼脂糖基质和磺丙基作为配体的材料(例如spfastflow)。33.如实施方案1-24和31-32中任一项所述的方法，其中阳离子交换色谱材料是具有交联琼脂糖(6％)基质的材料，其粒径为45至165μm(平均90μm)，并且具有磺丙基为配体(spfastflow)。34.如实施方案1-24和31-33中任一项所述的方法，其中阳离子交换色谱材料是spfastflow。35.如实施方案1-34中任一项所述的方法，其中蛋白质/多肽是重组蛋白质/多肽。36.如实施方案1-35中任一项所述的方法，其中蛋白质是抗体。37.如实施方案1-36中任一项所述的方法，其中蛋白质/多肽是单克隆抗体。38.如实施方案1-37中任一项所述的方法，其中蛋白质/多肽是多特异性抗体、双特异性抗体或单特异性抗体。39.如实施方案1-38中任一项所述的方法，其中蛋白质/多肽是人源化的ii型抗cd20抗体。40.如实施方案1-39中任一项所述的方法，其中蛋白质/多肽是人源化的ii型抗cd20抗体，包含(a)seqidno：01的重链可变区，和(b)seqidno：02的轻链可变区。41.如实施方案1-40中任一项所述的方法，其中蛋白质/多肽是奥滨尤妥珠单抗。42.聚山梨酯用于降低包含蛋白质的样品中的水解活性(提高聚山梨酯降解稳定性)的用途，其中所述包含蛋白质的样品i)在将包含蛋白质的样品施加到色谱材料之前补充聚山梨酯，和/或ii)在将包含蛋白质的样品施加到色谱材料上之后，用包含聚山梨酯的溶液洗涤。43.如实施方案42所述的用途，其中聚山梨酯选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯61、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81、聚山梨酯85或聚山梨酯120。44.如实施方案42-43中任一项所述的用途，其中聚山梨酯选自聚山梨酯20或聚山梨酯80。45.如实施方案42-44中任一项所述的用途，其中聚山梨酯选自聚山梨酯20。46.如实施方案42-44中任一项所述的用途，其中聚山梨酯选自聚山梨酯80。47.如实施方案42-46中任一项所述的用途，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.001％(w/v)。48.如实施方案42-47中任一项所述的用途，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.005％(w/v)。49.如实施方案42-48中任一项所述的用途，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.007％(w/v)。50.如实施方案42-49中任一项所述的用途，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.01％(w/v)。51.如实施方案42-50中任一项所述的用途，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.04％(w/v)。52.如实施方案42-51中任一项所述的用途，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.001％(w/v)至约1％(w/v)或从约0.001％(w/v)至约10％(w/v)。53.如实施方案42-52中任一项所述的用途，其中色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料、阴离子交换色谱材料、疏水相互作用色谱材料或混合模式色谱材料。54.如实施方案42-53中任一项所述的用途，其中色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料或阴离子交换色谱材料。55.如实施方案42-54中任一项所述的用途，其中色谱材料是亲和色谱材料或阳离子交换色谱材料。56.如实施方案42-55中任一项所述的用途，其中色谱材料是亲和色谱材料。57.如实施方案42-56中任一项所述的用途，其中色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a或蛋白质g或蛋白质l的亲和色谱、单链fv配体亲和色谱、金属螯合亲和色谱或以骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的亲和色谱材料(fcxl)。58.如实施方案42-57中任一项所述的用途，其中色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a色谱或具有骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的色谱材料。59.如实施方案42-58中任一项所述的用途，其中亲和色谱材料是具有醛活化的琼脂糖基质和captureselectfcxl亲和配体[是骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]的材料，其特异性结合所有人igg亚类的ch3结构域，其中配体通过经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖基质和碱稳定的proteina衍生配体(mabselecttmsuretm)的材料。60.如实施方案42-59中任一项所述的用途，其中亲和色谱材料是具有醛激活的琼脂糖基质的材料，平均粒径为65μm且具有与所有人igg亚类的ch3结构域特异性结合的captureselecttmfcxl亲和配体[骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]，其中所述配体经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖基质、碱稳定的蛋白a衍生的配体且平均粒径为85μm的材料(mabselecttmsuretm)。61.如实施方案42-55中任一项所述的用途，其中亲和色谱材料是captureselecttmfcxl或mabselecttmsuretm。62.如实施方案42-55中任一项所述的用途，其中色谱材料是阳离子交换色谱材料。63.如实施方案42-55和62中任一项所述的用途，其中阳离子交换色谱材料是具有交联的琼脂糖基质和磺丙基作为配体的材料(例如spfastflow)。64.如实施方案42-55和62-63中任一项所述的用途，其中阳离子交换色谱材料是具有交联琼脂糖(6％)基质的材料，其粒径为45至165μm(平均90μm)，并且具有磺丙基为配体(spfastflow)。65.如实施方案42-55和62-64中任一项所述的用途，其中阳离子交换色谱材料是spfastflow。66.如实施方案42-65中任一项所述的用途，其中蛋白质是重组蛋白质。67.如实施方案42-66中任一项所述的用途，其中蛋白质是抗体。68.如实施方案42-67中任一项所述的用途，其中蛋白质是单克隆抗体。69.如实施方案42-68中任一项所述的用途，其中蛋白质是多特异性抗体、双特异性抗体或单特异性抗体。70.如实施方案42-69中任一项所述的用途，其中蛋白质是人源化的ii型抗cd20抗体。71.如实施方案42-70中任一项所述的用途，其中蛋白质是人源化的ii型抗cd20抗体，包含(a)seqidno：01的重链可变区，和(b)seqidno：02的轻链可变区。72.如实施方案42-71中任一项所述的用途，其中蛋白质是奥滨尤妥珠单抗。73.如实施方案1-41或77-107中任一项所述方法获得的具有降低的水解活性(增加的聚山梨酯降解稳定性)的液体抗体制剂(包含聚山梨酯)。74.如实施方案73中所述的液体抗体制剂，其中抗体是人源化的ii型抗cd20抗体。75.如实施方案73-74中任一项所述的液体抗体制剂，其中抗体是人源化的ii型抗cd20抗体，包含(a)seqidno：01的重链可变区，和(b)seqidno：02的轻链可变区。76.如实施方案73-75中任一项所述的液体抗体制剂，其中抗体是奥滨尤妥珠单抗。77.减少包含蛋白质和水解酶的样品中水解酶量的方法，包括以下步骤：a)在将包含蛋白质和水解酶的样品施加到色谱材料上之前，将聚山梨酯添加到包含蛋白质和水解酶的样品中，和/或b)在将包含蛋白质和水解酶的样品施加到色谱材料上之后，用包含聚山梨酯的溶液洗涤。78.如实施方案77所述的方法，其中聚山梨酯选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯61、聚山梨酯65、聚山梨酯80、聚山梨酯81、聚山梨酯85或聚山梨酯120。79.如实施方案77-78中任一项所述的方法，其中聚山梨酯选自聚山梨酯20或聚山梨酯80。80.如实施方案77-79中任一项所述的方法，其中聚山梨酯选自聚山梨酯20。81.如实施方案77-79中任一项所述的方法，其中聚山梨酯选自聚山梨酯80。82.如实施方案77-81中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.001％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)。83.如实施方案77-82中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.005％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.005％(w/v)。84.如实施方案77-83中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.007％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.007％(w/v)。85.如实施方案77-84中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.01％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.01％(w/v)。86.如实施方案77-85中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为至少约0.04％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.04％(w/v)。87.如实施方案77-86中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约1％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为约0.001％(w/v)至约1％(w/v)或从0.001％(w/v)至约10％(w/v)。88.如实施方案77-87中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料、阴离子交换色谱材料、疏水相互作用色谱材料或混合模式色谱材料。89.如实施方案77-88中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料、阳离子交换色谱材料或阴离子交换色谱材料。90.如实施方案77-89中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料或阳离子交换色谱材料。91.如实施方案77-90中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料。92.如实施方案77-91中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a或蛋白质g或蛋白质l的亲和色谱、单链fv配体亲和色谱、金属螯合亲和色谱或以骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的亲和色谱材料(fcxl)。93.如实施方案77-92中任一项所述的方法，其中色谱材料是亲和色谱材料，选自蛋白质a色谱或具有骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的色谱材料。94.如实施方案77-93中任一项所述的方法，其中亲和色谱材料是具有醛活化的琼脂糖基质和captureselectfcxl亲和配体[是骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]的材料，其特异性结合所有人igg亚类的ch3结构域，其中配体通过经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖基质和碱稳定的proteina衍生配体(mabselecttmsuretm)的材料。95.如实施方案77-94中任一项所述的方法，其中亲和色谱材料是具有醛激活的琼脂糖基质、平均粒径为65μm且具有与所有人igg亚类的ch3结构域特异性结合的captureselecttmfcxl亲和配体[骆驼科动物来源的单结构域抗体片段]的材料，其中所述配体经配体(captureselecttmfcxl)的nh2残基的醛偶联而与基质偶联，或具有交联琼脂糖基质、碱稳定的蛋白a衍生的配体且平均粒径为85μm的材料(mabselecttmsuretm)。96.如实施方案77-95中任一项所述的方法，其中亲和色谱材料是captureselecttmfcxl或mabselecttmsuretm。97.如实施方案77-90中任一项所述的方法，其中色谱材料是阳离子交换色谱材料。98.如实施方案77-90和97中任一项所述的方法，其中阳离子交换色谱材料是具有交联琼脂糖基质和磺丙基作为配体的材料(spfastflow)。99.如实施方案77-90和97-98中任一项所述的方法，其中阳离子交换色谱材料是具有交联琼脂糖(6％)基质的材料，其粒径为45至165μm(平均90μm)，并且具有磺丙基为配体(spfastflow)。100.如实施方案77-90和97-99中任一项所述的方法，其中阳离子交换色谱材料是spfastflow。101.如实施方案77-100中任一项所述的方法，其中蛋白质是重组蛋白质。102.如实施方案77-101中任一项所述的方法，其中蛋白质是抗体。103.如实施方案77-102中任一项所述的方法，其中蛋白质是单克隆抗体。104.如实施方案77-103中任一项所述的方法，其中蛋白质是多特异性抗体、双特异性抗体或单特异性抗体。105.如实施方案77-104中任一项所述的方法，其中蛋白质是人源化ii型抗cd20抗体。106.如实施方案77-105中任一项所述的方法，其中蛋白质是人源化的ii型抗cd20抗体，包含(a)seqidno：01的重链可变区，和(b)seqidno：02的轻链可变区。107.如实施方案77-106中任一项所述的方法，其中蛋白质是奥滨尤妥珠单抗。108.生产(重组)蛋白质的方法，包括以下步骤：a)培养包含编码(重组)蛋白质的核酸的哺乳动物细胞，b)从细胞或培养基中回收(重组)蛋白质，和c)用实施方案1-41中任一项所述的方法纯化(重组)蛋白质，并由此制备该(重组)蛋白质。109.通过实施方案1-41或77-107中任一项所述的方法获得的具有增加的稳定性的液体抗体制剂。110.通过实施方案1-41或77-107中任一项所述的方法获得的具有减少的颗粒形成(由游离脂肪酸聚集)的液体抗体制剂。111.如实施方案1-41或77-107中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约5％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约5％(w/v)。112.如实施方案1-41或77-107或111中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约3％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约3％(w/v)。113.如实施方案1-41或77-107或111-112中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约2％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约2％(w/v)。114.如实施方案1-41或77-107或111-113中任一项所述的方法，其中添加聚山梨酯至终浓度为约0.001％(w/v)至约1％(w/v)和/或包含聚山梨酯的洗涤溶液的终浓度为至少约0.001％(w/v)至约1％(w/v)。115.如实施方案1-41或77-107或111-114中任一项所述的方法，其中所述色谱材料是在柱子中。116.如实施方案1-41或77-107或111-114中任一项所述的方法，其中色谱材料是悬浮于溶液/样品中。117.如实施方案1-38或77-104或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是人源化ii型抗-cd20抗体、或抗-vegf/ang2抗体或抗-her2抗体。118.如实施方案1-38或117或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是抗-vegf/ang2抗体。119.如实施方案1-38或117-118或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是包含seqidno:3至seqidno:6作为可变区的抗-vegf/ang2抗体。120.如实施方案1-38或117或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是抗-her2抗体。121.如实施方案1-40或117-120或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是奥滨尤妥珠单抗，或法瑞昔单抗，或曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。122.如实施方案1-40或117-121或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是奥滨尤妥珠单抗或法瑞昔单抗或曲妥珠单抗。123.如实施方案1-38或117-119或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是法瑞昔单抗。124.如实施方案1-38或117或120-122或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。125.如实施方案1-38或117或120-122或124或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是曲妥珠单抗。126.如实施方案1-38或117或120-122或124或111-116中任一项所述的方法或实施方案42-69中任一项所述的用途或实施方案73或109-110中任一项所述的液体抗体制剂，其中所述蛋白质/多肽是帕妥珠单抗。127.从包含法瑞昔单抗(faricimab)和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化法瑞昔单抗的方法，其包括以下步骤：i)a)向含有法瑞昔单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加于色谱材料上，和c)从色谱材料中回收法瑞昔单抗，或ii)a)向含有法瑞昔单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加于色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收法瑞昔单抗。128.从包含奥滨尤妥珠单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化奥滨尤妥珠单抗的方法，其包括以下步骤：i)a)向含有奥滨尤妥珠单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加于色谱材料上，和c)从色谱材料中回收奥滨尤妥珠单抗，或ii)a)向含有奥滨尤妥珠单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加于色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收奥滨尤妥珠单抗。129.从包含曲妥珠单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中纯化曲妥珠单抗的方法，其包括以下步骤：i)a)向含有曲妥珠单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加于色谱材料上，和c)从色谱材料中回收曲妥珠单抗，或ii)a)向含有曲妥珠单抗和至少一种具有水解活性的杂质的样品中加入聚山梨酯，b)将步骤a)的混合物施加于色谱材料上，c)将包含聚山梨酯的(洗涤)溶液施加到色谱材料上，和d)从色谱材料中回收曲妥珠单抗。130.包含抗体和聚山梨酯的液体组合物，其中在该液体组合物的储存期间聚山梨酯每年降解20％或更少。131.如实施方案130中所述的液体组合物，其中抗体是人源化ii型抗-cd20抗体，或抗-vegf/ang2抗体或抗-her2抗体。132.如实施方案130或131中任一项所述的液体组合物，其中抗体是奥滨尤妥珠单抗、法瑞昔单抗、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。133.如实施方案130或131中任一项所述的液体组合物，其中抗体是奥滨尤妥珠单抗。134.如实施方案130或131中任一项所述的液体组合物，其中抗体是法瑞昔单抗。135.如实施方案130或131中任一项所述的液体组合物，其中抗体是曲妥珠单抗。136.如实施方案130或131中任一项所述的液体组合物，其中抗体是帕妥珠单抗。137.如实施方案1-41或111-129中任一项所述的方法获得的具有增加的稳定性的液体抗体制剂。138.如实施方案1-41或111-129中任一项所述的方法获得的具有减少的颗粒形成(由游离脂肪酸聚集形成)的液体抗体制剂。参考文献[1]kerwin，brucea.(2008)：polysorbates20and80usedintheformulationofproteinbiotherapeutics.structureanddegradationpathways.injournalofpharmaceuticalsciences97(8)，pp.2924-2935.doi：10.1002/jps.21190.[2]wang，wei(2005)：proteinaggregationanditsinhibitioninbiopharmaceutics.ininternationaljoumalofpharmaceutics289(1-2)，pp.1-30.doi：10.1016/j.ijpharm.2004.11.014.[3]jonesls，bamnb，randolphtw.surfactant-stabilizedproteinformulations：areviewofprotein-surfactantinteractionsandnoveianalyticalmethodologies[4]kreilgaard，l.；jones，l.s.；randolph，t.w.；frokjaer，s.；flink，j.m.；manning，m.c.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egf/ang2抗体(法瑞昔单抗)的重链可变区2(vh-2)的氨基酸序列seqidno：06抗-vegf/ang2抗体(法瑞昔单抗)的轻链可变区2(vl-2)的氨基酸序列附图描述图1：针对抗-cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)进行的应用的示例性下游处理工作流程的示意图概述，分别包括任选的预孵育步骤(使用聚山梨酯20(ps20)的hccfload/loadsp调理(conditioning))，用含ps20的溶液洗涤结合的mab，或两个步骤的组合。使用标准色谱条件，将相应的洗脱流份(洗脱液ps20调理、洗脱液ps20洗涤和ps20调理/洗涤)的水解活性(以残留的ps20含量作为时间的函数进行测量)与参考洗脱液进行比较。图2：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.04％(w/v)下孵育时间为238h(a)和317h(b)后，抗cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)的mabselectsure洗脱流份的残余ps20含量，其是指相应参考洗脱液的相对ps20含量。更高的残余ps20含量意味着水解活性降低。图3：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.04％(w/v)下孵育时间为86h(a)和163h(b)后，抗cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)的captureselectfcxl洗脱流份的残余ps20含量，其是指相应参考洗脱液的相对ps20含量。更高的残余ps20含量意味着水解活性降低。图4：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.28％(w/v)下孵育时间为86h(a)和163h(b)后，抗cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)的captureselecttmfcxl洗脱流份的残余ps20含量，其是指相应参考洗脱液的相对ps20含量。更高的残余ps20含量意味着水解活性降低。图5：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.04％(w/v)下孵育时间为238h(a)和317h(b)后，抗cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)的spsepharosefastflow洗脱流份的残余ps20含量，其是指相应参考洗脱液的相对ps20含量。更高的残余ps20含量意味着水解活性降低。图6：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.04％(w/v)下孵育时间为141h后，抗cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)的mabselectsure洗脱流份中的游离月桂酸和肉豆蔻酸的总量，其为相应参考洗脱液的相对量。较低的游离脂肪酸量意味着水解活性降低。图7：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.04％(w/v)下孵育时间为141h后，抗cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)的spsepharosefastflow洗脱流份中的游离月桂酸和肉豆蔻酸的总量，其为相应参考洗脱液的相对量。较低的游离脂肪酸量意味着水解活性降低。图8：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.28％(w/v)下孵育时间为87h(a)和159h(b)后，抗-vegf/ang2抗体(法瑞昔单抗)的captureselectfcxl洗脱流份的残余ps20含量，其是指相应参考洗脱液的相对ps20含量。更高的残余ps20含量意味着水解活性降低。图9：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.28％(w/v)下孵育时间为116h(a)和162h(b)后，抗-vegf/ang2抗体(法瑞昔单抗)的captureselectfcxl洗脱流份中的游离月桂酸和肉豆蔻酸的总量，其为相应参考洗脱液的相对量。较低的游离脂肪酸量意味着水解活性降低。图10：在用于下游处理的所用ps20浓度为0.28％(w/v)下孵育时间为168h后，抗-her2抗体(曲妥珠单抗)的spsepharosefastflow洗脱流份中的游离月桂酸和肉豆蔻酸的总量，其为相应参考洗脱液的相对量。使用缓冲液对照(0.1mmtris/hcl,10mm甲硫氨酸,ph8.0)对所有样品进行空白扣除。较少量的游离脂肪酸意味着降低的水解活性。图11：在孵育时间为140h(a)和235h(b)后，抗-her2抗体(曲妥珠单抗)样品中游离月桂酸和肉豆蔻酸的总量，所述样品处理至未调理的大量水平，包括在阳离子交换色谱(sp-sepharose)纯化之前/期间的任选的下游ps20调理和洗涤步骤(采用的ps20浓度为0.28％(w/v))，所述的总量为相对于相应参考条件的相对量。使用缓冲液对照(0.1mmtris/hcl,10mm甲硫氨酸,ph8.0)对所有样品进行空白扣除。较少量的游离脂肪酸意味着降低的水解活性。实施例通用方法蛋白质纯度测定使用dionexultimate3000hplc系统(thermoscientific)通过尺寸排阻高效液相色谱法(se-hplc)测定蛋白质纯度。使用0.2mk2hpo4/kh2po4,0.25mkcl,ph7.0作为运行缓冲液，在tskgelg3000swxl7.8x300色谱柱(tosohbiosciencellc)上以0.5ml/min的流速进行蛋白质分离。蛋白质浓度测定使用50uv-vis分光光度计(varian)通过uv光谱法测定蛋白质浓度。蛋白质样品在其各自的缓冲液中稀释并一式两份进行测量。根据lambert-beer定律得出的下列方程式确定浓度：c＝(a280nm–a320nm)/ε·d·f，c为蛋白质浓度[mg/ml]，a吸光度,ε消光系数[ml/(mg·cm)],d比色皿长度[cm]和f稀释系数。奥滨尤妥珠单抗-特异性消光系数是1.49ml/(mg·cm)。抗体使用示例性抗体，例如wo2005/044859中所述的人源化ii型抗cd20抗体(奥滨尤妥珠单抗)，举例说明本发明，该抗体包含作为可变区的seqidno:01至seqidno:02，或如wo2014/009465中所述的对抗vegf和ang2的双特异性抗体(抗vegf/ang2抗体；法瑞昔单抗)，其包含作为可变区的seqidno:3至seqidno:6，或如wo2011/012637中所述的对抗her2的抗体(抗-her2抗体；曲妥珠单抗)。纯化概述图1描述了所应用的示例性下游过程的示意图。实施例1蛋白质a色谱法(mabselectsure)中抗cd20抗体的纯化上样(load)制备:依次按照以下步骤进行：1)将含有奥滨尤妥珠单抗(抗-cd20)的未处理的hccf解冻，并使用0.22μm孔径的过滤器(merckmillipore)过滤。2)将hccf分成四个相同的部分。在ps20调理的情况下，将最终浓度为0.04％(w/v)的ps20添加到hccf。通过搅拌(300rpm,10min,rt)将调理溶液均质化，并在4℃下孵育24h，而无需搅拌。所有部分均储存在-20℃下。色谱法:使用mabselecttmsuretm色谱柱(cm，h＝25.5cm，v＝20.3ml)(gehealthcare)在aektaexplorer100系统(gehealthcare)上进行色谱蛋白质纯化，在所有步骤中恒定流速为440cm/h。运行详细信息如下所列：运行1(参考):上样密度:38.2g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf3.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤20.7mtris/hcl,ph7.25.洗涤325mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.06.洗脱30mm乙酸(pool0.25au–0.25au(1cmuv-比色皿))运行2(调理的hccf，包含0.04％(w/v)ps20):上样密度:37.45g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf调理的hccf包含0.04％(w/v)ps203.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤20.7mtris/hcl,ph7.25.洗涤325mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.06.洗脱30mm乙酸(pool0.25au–0.25au(1cmuv-比色皿))运行3(附加的洗涤-条带0.04％(w/v)ps20):上样密度:38.2g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf3.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤20.04％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤30,7mtris/hcl,ph7.26.洗涤425mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.07.洗脱30mm乙酸(pool0.25au–0.25au(1cmuv-比色皿))运行4(调理的hccf，包含0.04％(w/v)ps20+附加的洗涤-条带0.04％(w/v)ps20):上样密度:37.45g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf调理的hccf，包含0.04％(w/v)ps203.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤2:0.04％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤30.7mtris/hcl,ph7.26.洗涤425mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.07.洗脱30mm乙酸(pool0.25au–0.25au(1cmuv-比色皿))mss运行池总结(参见图2和6):用1.5mtris-氨基将mabselect洗脱液(含奥滨尤妥珠单抗)的ph值调节至6,0±0,2，并使用0.45μm和0.22μm孔径的过滤器(sartoriusstedim)连续过滤。将过滤的洗脱液在-20℃冷冻并用作后续分析的起始材料。实施例2使用具有骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的材料(captureselecttmfcxl)在抗iggfc色谱/色谱中纯化抗cd20抗体上样制备：依次按照以下步骤进行：1)将含有奥滨尤妥珠单抗(抗-cd20)的未处理的hccf解冻，并使用0.22μm孔径的过滤器单元(merckmillipore)过滤。2)将hccf分成七个相同的部分。在ps20调理的情况下，将最终浓度为0.04％(w/v)的ps20或0.28％(w/v)添加到hccf。通过搅拌(300rpm,10min,rt)将调理溶液均质化，并在4℃下孵育24h，而无需搅拌。所有部分均储存在-20℃下。色谱法：使用captureselectfcxl色谱柱(cm,h＝20.5cm,v＝16.1ml)(thermofisher)在aektaavant150系统(gehealthcare)上进行色谱蛋白质纯化，在所有步骤中恒定流速为200cm/h。运行详细信息如下所列：运行1(参考):上样密度:19.81g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf3.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤2纯净水(ii型)5.洗涤325mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.06.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))运行2(调理的hccf，包含0.04％(w/v)ps20):上样密度:19.75g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf调理的hccf，包含0.04％(w/v)ps203.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤2纯净水(ii型)5.洗涤325mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.06.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))运行3(附加的洗涤-条带0.04％(w/v)ps20):上样密度:19.81g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf3.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤20.04％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤3纯净水(ii型)6.洗涤425mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.07.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))运行4(调理的hccf，包含0.04％(w/v)ps20+附加的洗涤-条带0.04％(w/v)ps20)上样密度:19.77g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf调理的hccf，包含0.04％(w/v)ps203.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤2:0.04％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤3纯净水(ii型)6.洗涤425mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.07.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))运行5(调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps20):上样密度:19.82g/l树脂色谱步骤：1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps203.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤2纯净水(ii型)5.洗涤325mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.06.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))运行6(附加的洗涤-条带0.28％(w/v)ps20):上样密度:19.81g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf3.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤20.28％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤3纯净水(ii型)6.洗涤425mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.07.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))运行7(调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps20+附加的洗涤-条带0.28％(w/v)ps20)上样密度:19.86g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.02.上样hccf调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps203.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.04.洗涤20.28％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤3纯净水(ii型)6.洗涤425mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.07.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))抗igg-fc(captureselecttmfcxl)运行池总结(参见图3和4):用1.5mtris-氨基将captureselecttmfcxl洗脱液(含奥滨尤妥珠单抗)的ph值调节至6,0±0,2，并使用0.45μm和0.22μm孔径的过滤器单元(sartoriusstedim)连续过滤。将过滤的洗脱液在-20℃冷冻并用作后续分析的起始材料。实施例3在阳离子交换色谱(sp-sepharosefastflow)中纯化抗cd20抗体上样制备：依次按照以下步骤进行：1)将两个未经处理的含不同浓度的奥滨尤妥珠单抗的sp上样物(“probe4.1上样spff“；g002.01e)解冻，并用0.22μm孔径的过滤器单元(merckmillipore)分别过滤。2)将第一个sp上样物流份分成三个相同的部分(用于运行1-3)，第二个sp上样物用于运行4。在ps20调理的情况下，将最终浓度为0.04％(w/v)的ps20添加到sp上样物中。通过搅拌(300rpm,10min,rt)将调理溶液均质化，并在4℃下孵育24h，而无需搅拌。所有部分均储存在-20℃下。色谱法：使用阳离子交换spsepharosefastflow柱(cm,h＝27.3cm,v＝21.4ml)(gehealthcare)在aektaexplorer系统(gehealthcare)上进行色谱蛋白质纯化，在所有步骤中恒定流速为160cm/h。运行详细信息如下所列：运行1(参考):上样密度:51.04g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/乙酸盐ph5.02.上样spff3.洗涤110mmtris/乙酸盐ph9.04.洗涤225mmtris/乙酸盐ph5.05.洗脱25mmtris/乙酸盐,150mmnacl,ph5.0(pool0.25au–0.88au(1cmuv-比色皿)运行2(调理的sp上样物，包含0.04％(w/v)ps20):上样密度:49.02g/l树脂色谱步骤1.平衡25mmtris/乙酸盐ph5.02.上样spffsp上样物，包含0.04％(w/v)ps203.洗涤110mmtris/乙酸盐ph9.04.洗涤225mmtris/乙酸盐ph5.05.洗脱25mmtris/乙酸盐,150mmnacl,ph5.0(pool0.25au–0.88au(1cmuv-比色皿)运行3(附加的洗涤-条带0.04％(w/v)ps20):上样密度:49.68g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/乙酸盐ph5,02.上样spff3.洗涤110mmtris/乙酸盐ph9,04.洗涤20.04％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤325mmtris/乙酸盐ph5.06.洗脱25mmtris/乙酸盐,150mmnacl,ph5.0(pool0.25au–0.88au(1cmuv-比色皿)运行4(调理的sp上样物，包含0.04％(w/v)ps20+附加的洗涤-条带0.04％(w/v)ps20)上样密度:28.93g/l树脂色谱步骤：1.平衡25mmtris/乙酸盐ph5.02.上样spffsp上样物，包含0.04％(w/v)ps203.洗涤110mmtris/乙酸盐ph9.04.洗涤20.04％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤325mmtris/乙酸盐ph5.06.洗脱25mmtris/乙酸盐,150mmnacl,ph5.0(pool0.25au–0,88au(1cmuv-比色皿)sp-sepharosefastflow运行池总结(参见图5和7):sp-sepharosefastflow洗脱液(含奥滨尤妥珠单抗)在-20℃冷冻，并用作后续分析的起始材料。实施例4使用具有骆驼科动物来源的单结构域抗体片段作为配体的材料(captureselecttmfcxl)在抗iggfc色谱/色谱中纯化抗vegf/ang2抗体(法瑞昔单抗)上样制备：依次按照以下步骤进行：1)将含有法瑞昔单抗(抗-vegf/ang2)的未处理的hccf解冻，并使用0.22μm孔径的过滤器单元(merckmillipore)过滤。2)将hccf分成两个相同的部分。在ps20调理的情况下，将最终浓度为0.28％(w/v)的ps20添加到hccf。通过搅拌(300rpm,10min,rt)将调理溶液均质化，并在4℃下孵育24h，而无需搅拌。所有部分均储存在-20℃下。色谱法：使用captureselecttmfcxl柱(cm,h＝21.3cm,v＝16.73ml)(thermofisher)在aektaavant150系统(gehealthcare)上进行色谱蛋白质纯化，在所有步骤中恒定流速为200cm/h。运行详细信息如下所列：运行1(参考):上样密度:29.47g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.22.上样hccf3.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.24.洗涤2纯净水(ii型)5.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))运行2(调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps20+附加的洗涤-条带0.28％(w/v)ps20)上样密度:28.8g/l树脂色谱步骤:1.平衡25mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.22.上样hccf调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps203.洗涤125mmtris/hcl,25mmnacl,ph7.24.洗涤20.28％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤3纯净水(ii型)6.洗脱30mm乙酸(pool2.5au–2.5au(1cmuv-比色皿))抗igg-fc(captureselecttmfcxl)运行池总结(参见图8和9):用1.5mtris-氨基将captureselecttmfcxl洗脱液(含法瑞昔单抗)的ph值调节至6,0±0,2，并使用0.45μm和0.22μm孔径的过滤器单元(sartoriusstedim)连续过滤。将过滤的洗脱液在-20℃冷冻并用作后续分析的起始材料。实施例5在阳离子交换色谱(sp-sepharosefastflow)中纯化抗-her2抗体(曲妥珠单抗)上样制备：依次按照以下步骤进行：1)将含有曲妥珠单抗的未处理的sp上样物(“probe2.2上样sp-ff“；g299.00p1)解冻，并使用0.22μm孔径的过滤器单元(merckmillipore)过滤。2)将sp上样物分成三个相同的部分。在ps20调理的情况下，将最终浓度为0.28％(w/v)的ps20添加到sp上样物。通过搅拌(300rpm,10min,rt)将调理溶液均质化，并在4℃下孵育24h，而无需搅拌。所有部分均储存在-70℃下。色谱法：使用阳离子交换spsepharosefastflow柱(cm,h＝36.80cm,v＝28.90ml)(gehealthcare)在aektaexplorer系统(gehealthcare)上进行色谱蛋白质纯化，在所有步骤中恒定流速为150cm/h。运行详细信息如下所列：运行1(参考):上样密度:30.00g/l树脂色谱步骤:1.平衡30mmmes,45mmnacl,ph5,62.上样sp3.洗涤130mmmes,45mmnacl,ph5,64.洗涤2平衡缓冲液/洗脱缓冲液梯度(21–71％洗脱缓冲液)5.洗脱30mmmes,95mmnacl,ph5.6(pool0.6au–0.5au(1cmuv-比色皿))运行2(调理的上样sp，包含0.28％(w/v)ps20)上样密度:30.10g/l树脂色谱步骤:1.平衡30mmmes,45mmnacl,ph5,62.上样sp调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps203.洗涤130mmmes,45mmnacl,ph5,64.洗涤230mmmes,45mmnacl,ph5,65.洗涤3平衡缓冲液/洗脱缓冲液梯度(21–71％洗脱缓冲液)6.洗脱30mmmes,95mmnacl,ph5.6(pool0.6au–0.5au(1cmuv-比色皿))运行3(调理的上样sp，包含0.28％(w/v)ps20+附加的洗涤-条带0.28％(w/v)ps20)上样密度:30.10g/l树脂色谱步骤:1.平衡30mmmes,45mmnacl,ph5,62.上样sp调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps203.洗涤130mmmes,45mmnacl,ph5,64.洗涤20.28％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤330mmmes,45mmnacl,ph5,66.洗涤4平衡缓冲液/洗脱缓冲液梯度(21–71％洗脱缓冲液)7.洗脱30mmmes,95mmnacl,ph5.6(pool0.6au–0.5au(1cmuv-比色皿))sp-sepharosefastflow运行池总结(参见图10):sp洗脱液(含曲妥珠单抗)在-20℃冷冻，并用作后续分析的起始材料。实施例6处理到非调理大批量水平的抗her2抗体的纯化处理步骤：用于运行2的上样制备:依次按照以下步骤进行：1)将含有曲妥珠单抗(“probe2.2上样sp-ff“；g403.00p1)的未处理的sp上样物解冻，并使用0.22μm孔径的过滤器单元(sartorius,sartopore-2)过滤。2)将sp上样物用ps20调理，将最终浓度为0.28％(w/v)的ps20添加到sp上样物。通过搅拌(300rpm,10min,rt)将调理溶液均质化，并在4℃下孵育24h，而无需搅拌。所有部分均储存在-20℃下。色谱spsepharosefastflow运行2:使用阳离子交换spsepharosefastflowcolumn(cm,h＝37.0cm,v＝74.39ml)(gehealthcare)在aektaavant150系统(gehealthcare)上进行色谱蛋白质纯化，在所有步骤中恒定流速为102cm/h。运行详细信息如下所列：运行2(调节的上样sp，包含0.28％(w/v)ps20+附加的洗涤-条带0.28％(w/v)ps20)上样密度:35.3g/l树脂色谱步骤:1.平衡30mmmes,45mmnacl,ph5,62.上样sp调理的hccf，包含0.28％(w/v)ps203.洗涤130mmmes,45mmnacl,ph5,64.洗涤20.28％(w/v)ps20(总计5cv:4cv,30min保持,1cv)5.洗涤330mmmes,45mmnacl,ph5,66.洗涤4平衡缓冲液/洗脱缓冲液梯度(21–72％洗脱缓冲液)6.洗脱30mmmes,95mmnacl,ph5.6(pool0,6au–0.5au(1cmuv-比色皿))在非调理大批量水平下的运行池总结:sp洗脱液(含曲妥珠单抗)在-20℃冷冻，并用作后续分析的起始材料。实施例7水解活性测定a)将洗脱流份与ps20孵育，以便随后对剩余完整的ps20含量进行量化，并通过质谱法测定游离脂肪酸对不同纯化设置下的材料进行稳定性研究。例如，对于设置“蛋白a(mabselectsure)”，评估蛋白a色谱后的洗脱流份。对于设置“低规模模型”，评估经过几个纯化步骤后的洗脱流份达到非调理大批量水平的情况。在非调理的大批量情况下，样品被纯化至最终水平。为监测实施例1-6中各洗脱流份中(剩余)水解活性，将样品调整到相同的蛋白质浓度，并使用ps20或超精ps20(sr-ps20)储备溶液和下表中描述的相应的洗脱缓冲液系统或tris缓冲液(ph8)制备用于ps20稳定性研究。此外，添加甲硫氨酸储备液(100mm)作为有效的抗氧化剂，以控制ps20在实验过程中的氧化降解。在不同的时间点提取样品(如例如在附图说明和以下样品制备方案中所示)，以便随后对剩余完整的ps20含量进行量化(见实施例7b)，并通过质谱法测定游离脂肪酸(见实施例7c)。1)蛋白a(mabselectsure)；抗-cd20抗体；奥滨尤妥珠单抗:在孵育238小时和317小时后，取出样品，以便随后对剩余完整的ps20含量进行分析。孵育141小时后取出用于测定游离脂肪酸的样品(参见图2和6)。2)抗igg-fc(captureselecttmfcxl)；抗-cd20抗体；奥滨尤妥珠单抗：在孵育86小时和163小时后，取出样品用于随后分析剩余的完整ps20含量(参见图3和4)。3)cex(spsepharose)；抗-cd20抗体；奥滨尤妥珠单抗：在孵育238小时和317小时后，取出样品用于随后分析剩余的完整ps20含量。孵育141小时后取出用于测定游离脂肪酸的样品(参见图5和7)。4)抗igg-fc(captureselecttmfcxl)；抗-vegf/ang2抗体；法瑞昔单抗:在孵育87小时和159小时后，取出样品用于随后分析剩余的完整ps20含量。孵育116小时后取出用于测定游离脂肪酸的样品(参见图8和9)。5)阳离子交换树脂(sp-sepharose)；抗-her2抗体,曲妥珠单抗:孵育168小时后，取出用于测定游离脂肪酸的样品(参见图10)。6)缩小规模模型(抗-her2抗体,曲妥珠单抗:孵育140小时和235小时后，取出用于测定游离脂肪酸的样品(参见图11)。将所有反应混合物在37℃或40℃的thermomixer中于300rpm振摇下孵育，在规定的时间点后取出样品(如各附图说明中所示，例如，在238和317小时的孵育时间进行蛋白a色谱纯化)并储存在-80℃直至后续分析。b)剩余完整ps20含量的定量与hewitt等人(journalofchromatography.a2011,1218,2138–2145)和lippold等人(journalofpharmaceuticalandbiomedicalanalysis2017,132,24–34)所描述方法相当的方法，用于定量ps20的含量。使用oasismax柱式色谱柱(30μm,2.1x20mm,waters)以及配备了lpg-3400xrs扩展压力范围四元泵的ultimatetm3000rs(thermofisher)、自动样品仪、温度控制的柱室和coronatmveotmrs带电气溶胶检测器(cad)(thermofisher)，通过混合模式hplc，分离样品。cad设置如下；内部氮气压力为50psi(由内部来源提供)，功率函数设置为1.00且范围默认为200pa。柱后切换阀在2.4至6.5分钟之间将流量引导至cad，同时在所有其他时间将流量转移至废弃物。为了进行分析，进样了25μl的标称ps20浓度为0.4mg/ml的样品，并通过建立校准曲线来确定ps20含量，进样体积范围为5(2μg)至40μl(16μg)。将柱温设定为30℃。将溶剂a(纯净水中的2％甲酸)和溶剂b(甲醇中的2％甲酸)用作以下梯度的流动相，流速为1.25ml/min：时间(min)溶剂a溶剂b切换至09010废弃物1.06040废弃物2.46040废弃物3.46040cad3.50100cad5.50100cad5.69010cad6.59010废弃物8-09010废弃物每种样品所获得的ps20浓度(单位：mg/ml)与相应的t＝0值(相对ps20浓度)有关，该值表示在实验开始时加入(spike)到每个样品中的规定量的聚山梨酯。所有样品在预定的时间段内孵育，以使得发生聚山梨酯水解。对于图形表示，参考洗脱(设为100％)与本文报告的方法(ps20处理)处理的样品中的相对ps20浓度相关(见图2至5和8)。因此，给定时间点的剩余ps20含量可与剩余水解活性相关，即孵育后留在洗脱流份样品(包含目标蛋白质和具有水解活性的杂质)内的ps20越多，存在于样品中的残留水解活性越低，即在纯化过程中减少水解活性的杂质更有效。与用聚山梨酯处理后发现的洗脱流份的水解活性较低一致，在各自的洗涤流份也可以检测到较高的水解活性。已进行了补充分析，以检测ps水解降解产生的游离脂肪酸(见下文说明)。对于剩余ps含量的结果，结果显示在纯化过程中用聚山梨酯处理后，可在样品中检测到较低量的游离脂肪酸(降解产物)。可以观察到，如果在色谱步骤之前用聚山梨酯孵育/调理包含蛋白质的溶液，并且在色谱过程中还用含有聚山梨酯的溶液洗涤包含蛋白质的溶液，则纯化程度最明显。这些处理的组合比单独处理使得结果更好。c)经质谱测定游离脂肪酸与m.honemann,等人,journalofchromatographyb,https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2019.03.030)所述方法相当的方法，用于对ps20水解的主要降解产物游离月桂酸和肉豆蔻酸的含量进行定量。从洗脱池中取出样品并与加入的ps20孵育。在不同的时间点从每种样品中提取50μl(详细参见实施例7a)，然后转移到反应管中。添加200μl游离脂肪酸溶剂溶液(溶于乙腈中的500ng/ml2d23-月桂酸和500ng/ml13c14肉豆蔻酸)并使该混合物短暂涡流。将样品以14000rpm离心5分钟，并转移到hplc小瓶中进行ms分析。在thermoscientificvanquishuhplc系统上，使用acquityuplc肽behc18柱(1,7μm2,1x150mm和)，通过反相色谱法分离脂肪酸。将进样体积设置为5μl，柱室保持在60℃。使用溶剂a(纯净水中0.1％氢氧化铵)和溶剂b(100％乙腈)作为流动相，以0.3ml/min的流速进行以下梯度洗脱：时间(min)溶剂a溶剂b030700.230705.510006.010006.1307010.03070质谱仪(tripletof6600,absciex)在负电离模式下操作，离子喷射电压为-4500v。源温度设置为450℃，飞行时间(tof)质量范围为100-1000m/z。去簇电压设置为-120v，碰撞能量设置为-10v。月桂酸和肉豆蔻酸的含量通过使用以下公式将脂肪酸的峰面积与相应的内部标记标准(2d23-月桂酸和13c14肉豆蔻酸)相关：其中∑peakareasofffa和∑peakareasofinternalstandard分别是指提取离子色谱图(xic)的单同位素峰分别与+1/+2或-1/-2处的同位素峰之和。所有测量均重复进行两次。为了进行图形表示，将参考洗脱液(设置为100％)与通过本文报道的方法(ps20处理)处理的样品中的月桂酸和肉豆蔻酸的总量进行关联(参见图6、7、9、10和11)。因此，在给定时间点的月桂酸和肉豆蔻酸的总量可以与残留水解活性相关，即，在洗脱流份样品(包含目标蛋白质和具有水解活性的杂质)中较少的游离脂肪酸孵育后转化为样品中存在的较低的水解活性，即在纯化过程中减少水解活性的杂质更有效。对于实施例5和6，由于在较高ph下升高的(固有的)水解活性，因此使用各个样品的缓冲液组合物进行了额外的缓冲液对照扣除。当前第1页12当前第1页12