1.一种用于将供体dna束缚至核酸酶的组合物,所述组合物包含核酸,所述核酸包含供体dna和dna结合结构域的共有序列;以及
以下的至少一种:
融合蛋白,其包含偶联至用于结合所述共有序列的dna结合结构域的核酸酶;以及
编码所述融合蛋白的核酸。
2.权利要求1的组合物,其中所述核酸酶是cas蛋白、转录激活物样效应子核酸酶(talen)、大范围核酸酶、锌指或madzyme。
3.权利要求9的组合物,其中所述核酸酶是cas蛋白。
4.权利要求3的组合物,其中所述cas蛋白是cas9。
5.权利要求1-4中任一项的组合物,其中所述融合蛋白进一步包含核定位序列。
6.权利要求2-5中任一项的组合物,其进一步包含与所述cas蛋白和靶dna序列相互作用的向导rna。
7.权利要求1-6中任一项的组合物,其中所述共有序列包含lac操纵子(seqidno:66)、trp操纵子(seqidno:68)、tet操纵子(seqidno67)、gal-4结合位点(seqidno:1)或ihf结合位点(seqidno2)。
8.权利要求7的组合物,其中所述共有序列包含与lac操纵子、trp操纵子、tet操纵子、gal-4结合位点或ihf结合位点具有至少80%、85%、90%、95%或至少99%相同性的序列。
9.权利要求1-8中任一项的组合物,其中所述dna结合结构域包含lac阻遏物、tet阻遏物、trp-阻遏物、gal-4或ihf,或者其足以结合所述共有序列的部分。
10.权利要求1-9中任一项的组合物,其中所述dna结合结构域是lac阻遏物,优选seqidno9的第43-403位氨基酸。
11.权利要求1-10中任一项的组合物,其中将所述核酸酶通过接头偶联至所述dna结合结构域。
12.权利要求8的组合物,其中所述接头包含选自seqidno:3-7、ggs接头或seqidno9的第404-419位氨基酸中任一个的序列。
13.权利要求1-12中任一项的组合物,其中所述融合蛋白包含lac阻遏物和cas9。
14.权利要求1-13中任一项的组合物,其包含载体,其中所述载体包含以下之一或两者:
a.包含供体dna和dna结合结构域的共有序列的核酸;以及
b.编码所述融合蛋白的核酸。
15.权利要求14的组合物,其中所述载体进一步包含编码向导rna的核酸序列,所述向导rna与cas9蛋白和靶dna序列相互作用。
16.权利要求1-15中任一项的组合物,其中所述融合蛋白是核酸酶缺陷的。
17.一种分离的宿主细胞,其包含权利要求1-16中任一项的组合物。
18.一种用于在细胞中编辑dna的方法,所述方法包括:
在适合融合蛋白与靶dna序列相互作用的条件下使所述细胞与权利要求1-15中任一项的组合物接触。
19.一种用于在细胞中编辑dna的方法,所述方法包括:
a)在适合融合蛋白与第一靶dna序列相互作用的条件下使所述细胞与权利要求16的组合物接触;以及
b)在适合核酸编辑的条件下,使所述细胞与适应于在第二靶dna序列上编辑基因组dna的核酸编辑系统接触。
20.权利要求18或19的方法,其中所述靶dna序列选自基因组dna、线粒体dna、病毒dna或外源dna。
21.权利要求18-20中任一项的方法,其中编辑的效率是至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%。
22.权利要求18-21中任一项的方法,其中所述细胞在受试者中,优选人受试者。
23.一种试剂盒,其包含:
核酸,其包含供体dna和dna结合结构域的共有序列;以及
以下的至少一种:
融合蛋白,其包含偶联至用于结合所述共有序列的dna结合结构域的核酸酶;以及
编码所述融合蛋白的核酸。
24.权利要求23的试剂盒,其中所述核酸酶是cas蛋白、转录激活物样效应子核酸酶(talen)、大范围核酸酶、锌指或madzyme。
25.权利要求24的试剂盒,其中所述cas蛋白是cas9。