一种一管检测血浆游离DNA中KRAS和BRAF基因突变的试剂盒的制作方法

文档序号:20278944发布日期:2020-04-07 14:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于检测人类kras基因7个热点突变的引物探针组,其特征在于,所述引物包括:核苷酸序列如seqidno:1所示的kras-g12s-f、核苷酸序列如seqidno:2所示的kras-g12r-f、核苷酸序列如seqidno:3所示的kras-g12c-f、核苷酸序列如seqidno:4所示的kras-g12s-r、核苷酸序列如seqidno:6所示的kras-g12d-r、核苷酸序列如seqidno:7所示的kras-g12a-r、核苷酸序列如seqidno:8所示的kras-g12v-r和核苷酸序列如seqidno:9所示的kras-g12d-f;

所述探针包括seqidno:5所示核苷酸序列5’端标记荧光基团、3’端标记猝灭基团的kras-probe1和seqidno:10所示核苷酸序列5’端标记荧光基团、3’端标记猝灭基团的kras-probe2;

所述探针包括经锁核苷酸和磷酸化修饰的阻滞剂探针kras-blocker1,所述kras-blocker1的核苷酸序列如seqidno:10所示,所述kras-blocker1的第7位的g和第14位的g经锁核苷酸修饰,3’端的t经磷酸化修饰。

2.根据权利要求1所述的引物探针组,其特征在于,所述荧光基团包括fam,所述淬灭基团包括bhql。

3.用于检测人类braf基因1个热点突变的引物探针组,其特征在于,

所述引物包括核苷酸序列如seqidno:12所示的braf-v600-f和核苷酸序列如seqidno:13所示的braf-v600-r;

所述探针包括seqidno:14所示核苷酸序列5’端标记荧光基团、3’端标记猝灭基团的braf-probe。

4.根据权利要求3所述的引物探针组,其特征在于,所述荧光基团包括vic,所述淬灭基团包括bhql。

5.一种基于权利要求1或2所述引物探针组和权利要求3或4所述引物探针组的检测人类血浆游离dna中kras基因7个热点突变和braf基因1个热点突变的试剂盒,所述的试剂盒包括:权利要求1或2所述引物探针组和权利要求3或4所述引物探针组。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括:其它配合所述探针和/或引物的检测试剂。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒的反应体系每50μl包括:taq酶和ung酶共5个单位、l0mm的dntps和2.5mm的dutp各0.4μl、100mm的mg2+0.75μl、20×pcr缓冲液2.5μl、10μm的引物序列各自1~2μl、10μm的探针序列3~4μl,enhancer2μl、牛血清白蛋白2μl、山梨糖醇水溶液2μl、二甲基亚枫1.25μl和余量的水。


技术总结
本发明涉及一种一管检测血浆游离DNA中KRAS和BRAF基因突变的试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明所述试剂盒包括:KRAS‑G12S‑F、KRAS‑G12R‑F、KRAS‑G12C‑F、KRAS‑G12S‑R、KRAS‑G12D‑R、KRAS‑G12A‑R、KRAS‑G12V‑R、KRAS‑G12D‑F、KRAS‑Probe1、KRAS‑Probe2、KRAS‑Blocker1、BRAF‑V600‑F、BRAF‑V600‑R和BRAF‑Probe。本发明试剂盒能够一管同时对外周血游离DNA样本中的人KRAS基因和BRAF基因突变进行快速检测。

技术研发人员:张伟;付亚成;邬麟
受保护的技术使用者:中南大学湘雅医院
技术研发日:2020.01.06
技术公布日:2020.04.07
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