本发明属于天然产物提取领域，具体涉及一种山茱萸多肽的制备方法及制备得到的山茱萸多肽。
背景技术：
：山茱萸(cornusofficinalissieb.etzucc.)作为一种中草药材，具有健胃、补肝肾、治贫血、腰痛、神经及心脏衰弱等作用。我国主要产地为豫西、浙江等地。山茱萸果肉营养成分丰富，富含多种人体必需氨基酸，是一种名贵的药食同源植物。但是，山茱萸中的大分子植物蛋白质被纤维素等覆盖包裹，溶解度较低，粘度大且具有一定抗原性，人体的吸收和消化效率远低于动物性蛋白质，极大的限制了山茱萸果肉的开发利用。当前，对于山茱萸的研究主要集中于山茱萸中的皂苷、多糖、苹果酸、酚类、酒石酸、鞣质、糖蛋白等含有生理活性的物质，对山茱萸中蛋白质的提取的相关研究较少，主要集中在提取多糖等生理活性物质时，如何除去蛋白质，这也进一步造成了山茱萸中蛋白质资源的浪费。此外，有研究表明，相对于蛋白质分子，多肽吸收效率高、生物效价好，具有降低胆固醇、降血压、抗氧化等多种生理功能，更适合人体吸收利用。技术实现要素：本发明提供一种用于从山茱萸中提取多肽的酶制剂，该酶制剂可将山茱萸蛋白水解为多肽，以解决现有技术中山茱萸中的蛋白质利用率低的问题。本发明的用于从山茱萸中提取多肽的酶制剂采用如下技术方案：一种用于从山茱萸中提取多肽的酶制剂，所述酶制剂包括复合酶a和复合酶b，所述复合酶a包括植酸酶、纤维素酶和胃蛋白酶，所述复合酶b包括碱性蛋白酶和风味蛋白酶。优选的，所述复合酶a中植酸酶、纤维素酶和胃蛋白酶的质量比为(0.05-1.5):(0.05-3.0):(0.1-2.0)，所述植酸酶用于水解山茱萸中的植酸，消除植酸对矿物元素和山茱萸中植物蛋白质的抗营养作用；所述纤维素酶为β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，用于水解山茱萸果肉中的葡聚糖，降低制得产品的粘度；所述复合酶a用于酶解山茱萸蛋白时酶解温度为25℃～50℃(具体可为25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃等该数据范围内的任意取值)，酶解ph为2.5-5.5；所述复合酶b中的碱性蛋白酶包括木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，所述木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1:1，功能为降解山茱萸植物蛋白质为小分子多肽，使蛋白质易于吸收，提高利用效率；所述风味蛋白酶为食品级复合风味蛋白酶，用于去除水解产物中的苦肽链，改善口感，同时彻底水解蛋白质，提高蛋白有效利用率。所述复合酶b用于酶解山茱萸蛋白时酶解温度为35～50℃(具体可为35℃、40℃、45℃、50℃等该数据范围内的任意取值)，酶解ph为6.5-9.0。其中，优选的，植酸酶、纤维素酶和胃蛋白酶的质量比可为(0.5-1.5):(1.5-2.5):(0.25-0.8)、(0.05-0.5):(0.05-1.5):(0.1-0.25)、(0.05-1.5):(2.5-3.0):(0.8-2.0)等该数据范围内的任意取值；优选的，复合酶a酶解山茱萸蛋白时酶解温度为25～45℃，复合酶a的酶解ph为3.5～5.5；所述复合酶b酶解ph为8.0-9.0。本发明的第二目的在于提供一种山茱萸多肽的制备方法，所述山茱萸多肽的提取方法采用如下技术方案：一种山茱萸多肽的制备方法，包括下述步骤：(1)从山茱萸中提取山茱萸粗蛋白；(2)采用如上述两项中任意一项所述的酶制剂中的复合酶a对所述山茱萸粗蛋白进行第一次酶解，得到第一次酶解液；(3)向所述第一次酶解液中加入复合酶b进行第二次酶解，得到第二次酶解液；所述第二次酶解液中即含所述山茱萸多肽。优选的，所述第一次酶解液中植酸酶的质量浓度为0.05-1.5％，纤维素酶的质量浓度为0.05-3.0％，胃蛋白酶的质量浓度为0.1-2.0％，第一次酶解的时间为1.5～3h；所述第二次酶解液中碱性蛋白酶的质量浓度为0.2-5％，风味蛋白酶的浓度为0.05-0.5％，第二次酶解的时间为3～5h；所述山茱萸粗蛋白的制备包括如下步骤：(1)将山茱萸粉末与氯化钠溶液混合得到山茱萸浆液并保温搅拌；(2)过滤步骤(1)所得混合液并收集滤液；(3)调节步骤(2)所得滤液的ph并加入蛋白絮凝剂沉淀蛋白，分离即得所述山茱萸粗蛋白。优选的，所述步骤(1)中山茱萸粉末与氯化钠溶液的质量体积比为1:5～1:10(具体可为1:5、1:6～1:10、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10等该数据范围内的任意取值)，所述山茱萸粉末的质量以g计，所述氯化钠溶液的体积以ml计；所述氯化钠溶液的质量浓度为5～10％；所述山茱萸浆液的ph为8.0～10.0；所述保温的温度为50-75℃(具体可为50℃、55-70℃、60℃、65℃、70℃、75℃等该数据范围内的任意取值)；所述搅拌的时间为2～4小时(具体可为2h、2.5～4h、3h、3.5h、4h等该数据范围内的任意取值)；所述步骤(3)中将ph调节至4.0～6.0(具体可为4.0、4.5～5.5、4.5、5.0、5.5、6.0等该数据范围内的任意取值)；所述蛋白絮凝剂为包括但不限于壳聚糖或β-环糊精等食品级专用絮凝剂。优选的，所述山茱萸粉末通过将山茱萸洗净、去果核、干燥后粉粹过筛制备得到；所述山茱萸多肽的制备方法还包括将第二次酶解液加热使酶灭活后，用脱色剂脱色、浓缩、干燥制备得到山茱萸多肽固体粉末的步骤；所述脱色剂为活性炭。本发明的第三目的在于提供一种山茱萸多肽，所述山茱萸多肽采用如下技术方案：所述山茱萸多肽按照如上述任意一项所述的山茱萸多肽的制备方法制备得到。优选的，所述山茱萸多肽的主要成分为组氨酸、苏氨酸和谷氨酸；所述山茱萸多肽的分子量为3400-5000da。本发明的第四目的在于提供一种营养添加剂，所述营养添加剂采用如下技术方案：所述营养添加剂的原料包括如上述两项中任意一项所述的山茱萸多肽。本发明的目的还在于提供一种食品/饮料/保健品，所述食品/饮料/保健品采用如下技术方案：所述食品/饮料/保健品包括如上述两项中任意一项所述的山茱萸多肽或如上所述的营养添加剂。本发明的有益效果是：本发明的用于从山茱萸中提取多肽的酶制剂可用于酶解山茱萸蛋白，将山茱萸蛋白酶解为多肽，进而可解决山茱萸蛋白质利用率低的问题。本发明的用于从山茱萸中提取多肽的酶制剂可将山茱萸蛋白酶解为分子量为3400-5000da的多肽，更有利于被生物体吸收利用。采用本发明的山茱萸多肽制备方法制备过程简单、成本低、制备过程中不会用到化学添加物、对环境和人体无污染、安全性好。本发明采用二次酶解法将山茱萸果肉中的植物蛋白充分释放出来，并且通过分步酶解有效去除了山茱萸中植酸和矿物元素对蛋白质的抗营养作用，充分水解山茱萸果肉中的葡聚糖，降低产品粘度以及糖蛋白的含量，制备得到的山茱萸多肽蛋白质含量高，可达88％以上。本发明的山茱萸多肽的制备方法提取效率高，采用方法绿色温和，最大限度的保持了山茱萸中的有效成分。本发明的山茱萸多肽富含组氨酸、苏氨酸和谷氨酸，适用于单独或与其他营养成分调配制成营养添加剂后，加入食品、饮料或保健品等中，可以提高人体对蛋白质的有效利用和吸收效率，增强机体免疫能力，增强食品、饮料或保健品的营养价值。具体实施方式下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1用于从山茱萸中提取多肽的酶制剂的制备1.1酶制剂包括复合酶a和复合酶b，其中复合酶a包括植酸酶0.05重量份、纤维素酶1重量份、胃蛋白酶0.1重量份；复合酶b包括木瓜蛋白酶0.2重量份、胰蛋白酶0.1重量份、风味蛋白酶0.3重量份。1.2酶制剂包括复合酶a和复合酶b，其中复合酶a包括植酸酶0.2重量份、纤维素酶0.05重量份、胃蛋白酶1.5重量份；复合酶b包括木瓜蛋白酶1重量份、胰蛋白酶1重量份、风味蛋白酶0.5重量份。1.3酶制剂包括复合酶a和复合酶b，其中复合酶a包括植酸酶0.8重量份、纤维素酶3重量份、胃蛋白酶2重量份；复合酶b包括木瓜蛋白酶0.1重量份、胰蛋白酶2.5重量份、风味蛋白酶0.05重量份。上述3种酶制剂仅示出了本发明的酶制剂中的部分实施例，不用于限制本发明。本领域技术人员根据本申请
发明内容部分的记载所得到的其他各组分比例不同的酶制剂也均属于本发明保护的范围。此外，在实际应用中，本发明的酶制剂可根据实际需要制成液体酶制剂或固体酶制剂等多种常见剂型使用。实施例2(1)山茱萸清水清洗干净除去果核，干燥后粉碎后100目过筛备用；(2)按1:8(g:ml)料液比加入山茱萸粉末与9％氯化钠溶液，用氢氧化钠调节溶液ph值为9.0，制得山茱萸浆液；(3)将山茱萸浆液在55℃下搅拌反应2.5小时后过滤收集上清液；(4)调节上清液ph值为4.5，加入食品级壳聚糖，待溶液澄清后离心分离得到山茱萸粗蛋白；(5)用去离子水洗涤山茱萸粗蛋白三次，然后用去离子水溶解，调节山茱萸粗蛋白溶液ph值为4.0，加入质量浓度为0.5％的植酸酶、2.0％的纤维素酶和0.25％的胃蛋白酶35℃下进行水解2小时(上述植酸酶、纤维素酶和胃蛋白酶的浓度均为终浓度)；(6)收集步骤(5)的水解液，调节溶液ph值为9.0，加入质量浓度均为1.0％的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶、质量浓度为0.1％风味蛋白酶在50℃下水解4小时(上述木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶的浓度均为终浓度)；(7)合并酶解液，加热灭活，活性炭过滤脱色后旋蒸浓缩；(8)真空干燥，粉碎100目过筛制备得到山茱萸多肽粉末。实施例3(1)山茱萸清水清洗干净除去果核，干燥后粉碎后100目过筛备用；(2)按1:6(g:ml)料液比加入山茱萸粉末与7％氯化钠溶液，用氢氧化钠调节溶液ph值为8.0，制得山茱萸浆液；(3)将山茱萸浆液在70℃下搅拌反应4小时后过滤收集上清液；(4)调节上清液ph值为5.0，加入食品级壳聚糖，澄清后离心分离后得到山茱萸粗蛋白；(5)用去离子水洗涤山茱萸粗蛋白三次，然后溶解，调节山茱萸粗蛋白溶液ph值为5.5，加入质量浓度为1.0％的植酸酶、1.5％的纤维素酶和0.5％的胃蛋白酶45℃下水解3小时(上述植酸酶、纤维素酶和胃蛋白酶的浓度均为终浓度)；(6)收集步骤(5)的水解液，调节溶液ph值为8.0，加入质量浓度均为1.5％的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶、0.2％的风味蛋白酶在45℃下水解2.5小时(上述木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶的浓度均为终浓度)；(7)合并酶解液，加热灭活，活性炭过滤脱色后旋蒸浓缩；(8)真空干燥，粉碎80目过筛制备得到山茱萸多肽粉末。实施例4(1)山茱萸清水清洗干净除去果核，干燥后粉碎后80目过筛备用；(2)按1:10(g:ml)料液比加入山茱萸粉末与10％氯化钠溶液，用氢氧化钠调节溶液ph值为10.0，制得山茱萸浆液；(3)将山茱萸浆液在55℃下搅拌反应3小时后过滤收集上清液；(4)调节上清液ph值为4.5，加入食品级环糊精，澄清后离心分离后得到山茱萸粗蛋白；(5)用去离子水洗涤山茱萸粗蛋白三次，然后用水溶解，调节山茱萸粗蛋白溶液ph值为3.5，加入质量浓度为1.5％的植酸酶、2.5％的纤维素酶和0.8％的胃蛋白酶在25℃下水解3小时(上述植酸酶、纤维素酶和胃蛋白酶的浓度均为终浓度)；(6)收集步骤(5)的水解液，调节溶液ph值为8.5，加入质量浓度均为1.0％的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶、0.05％的风味蛋白酶在45℃下水解5.0小时(上述木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶的浓度均为终浓度)；(7)合并酶解液，加热灭活，活性炭过滤脱色后旋蒸浓缩；(8)真空干燥，粉碎80目过筛制备得到山茱萸多肽粉末。实施例5分别测定实施例2、3、4制备得到山茱萸植物多肽的酸碱性及溶解性。具体测定条件为：(1)室温下，制备得到的山茱萸多肽溶解于纯水中时的ph值；(2)溶解性：40℃下，制备得到山茱萸多肽在100g水达到饱和时所溶解的质量(g)及溶液透明度。具体结果如表1所示：表1ph值溶解度(g)透明度时间(min)实施例26.719.5澄清2.0实施例36.521.5澄清2.5实施例46.723.0澄清2.0实施例6采用考马斯亮蓝法测定山茱萸多肽的蛋白质含量；山茱萸生物多肽用去离子水溶解后0.45μm滤膜过滤、滤液采用凝胶色谱法测定多肽的分子量。具体色谱条件为：高效液相系统：岛津lc20at色谱柱：tsk-gelg2000sw(300×7.8mm，粒径5μm，)；流动相：0.1mol/lna2so4磷酸盐缓冲液(ph6.5)；流速：0.5ml/min；检测波长：214nm；柱温：30℃；进样量：10μl；检测结果如下表2所示：表2产品蛋白质含量(％)肽分子量(da)富含氨基酸实施例193.44200his、thr、glu实施例288.75000his、thr、glu实施例391.53400his、thr、glu由表1可知，本发明制备得到的山茱萸多肽富含组氨酸、苏氨酸和谷氨酸，且蛋白质含量高、分子量小，有利于人体消化吸收。此外，本发明制备得到的山茱萸多肽可与其他常用添加剂一起用于制作营养添加剂，进而用于食品、饮品、保健品的制作，提高其营养价值或其他功效。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12