一种转瓶细胞传代装置及细胞传代方法与流程

本发明涉及细胞培养传代装置领域，尤其一种转瓶细胞传代装置及细胞传代方法。

背景技术：

现有转瓶细胞的消化传代过程一般为：打开转瓶，倒去瓶内原有的营养液，加入少量pbs洗两次，加入一定量的胰酶消化，然后弃去胰酶加少量营养液后人工抱着转瓶的两端，用力作上下旋转式甩动，利用甩起的液体急速的转动去冲刷细胞使其脱落并分散，甩瓶的过程中劳动强度大，费时费力，且效率低，在细胞甩下分散后需要打开瓶口再次人工倒入剩余所需的液体，然后分装成若干瓶再封口进行培养，本过程需要人工倒液，并逐瓶倒液，费时费力，效率低下，整个过程中需要多次的打开瓶口容易导致细胞污染。总而言之，传统方案的弊端如下：

1、在分散细胞时利用人工甩转瓶，劳动强度大，费时费力，且效率低；

2、逐瓶的人工倒液补加剩余培养液，费时费力，且效率低，在整个过程加胰酶，及加液三次开瓶口，增加污染的机率。

技术实现要素：

针对现有技术的情况，本发明的目的在于提供一种能够节约人工、操作便利且使用灵活和降低细胞污染几率的转瓶细胞传代装置及细胞传代方法。

为了实现上述的技术目的，本发明采用的技术方案为：

一种转瓶细胞传代装置，其包括：

营养液添加罐，其内部设有用于容置营养液的容置腔，其上部设有连通到容置腔的进料口，其顶部中心还通过固定架固定有搅拌电机，搅拌电机的搅拌轴向下穿入到容置腔下部且连接有搅拌叶，营养液添加罐的底部还设有用于输出营养液的出料口，且该出料口上设有第一阀；

若干个转瓶，用于细胞培养，其上部具有可启闭的转瓶瓶口；

第一输送机构，一端与营养液添加罐的出料口连接，另一端用于与转瓶的转瓶瓶口可拆卸连接，且用于将营养液添加罐的营养液输入到转瓶中；

喷淋头，用于与第一输送机构与转瓶连接的一端固定连接且延伸至转瓶内的上部并用于辅助分散附着于转瓶内壁上的细胞；

若干分装瓶，用于分装转瓶中经分散的细胞，其上部具有可启闭的分装瓶瓶口；

第二输送机构，一端与转瓶连接，另一端与分装瓶连接，且用于将转瓶中分散好的细胞分装输入于分装瓶中。

作为一种可能的实施方式，进一步，所述的第一输送机构包括第一输送管、蠕动泵和第一瓶塞，所述的第一瓶塞用于与转瓶的转瓶瓶口可拆卸连接，所述第一输送管的一端与营养液添加罐的出料口连接，第一输送管的另一端穿入到第一瓶塞上且用于延伸至转瓶上部并与喷淋头固定连接，第一瓶塞上还穿设有用于辅助排出转瓶内部空气的第一排气管，所述第一输送管接近第一瓶塞的一端设有第二阀，所述的第一排气管上设有第三阀，所述的蠕动泵连接于第一输送管上，其中，通过蠕动泵的工作转速来调节喷淋头的喷淋压力。

作为一种可能的实施方式，进一步，所述的第二输送机构包括第二瓶塞、气源、气管、第二输送管、第三瓶塞、第二排气管，所述的第二瓶塞用于与转瓶的转瓶瓶口可拆卸连接，所述气管的一端与气源连接，另一端穿入到第二瓶塞并用于将气源内的气体输入到转瓶中，所述的气管上设有第四阀，所述的第三瓶塞用于与分装瓶的分装瓶瓶口可拆卸连接，所述第二输送管的一端穿置在第三瓶塞上且用于连通分装瓶，第二输送管的另一端穿置在第二瓶塞上并用于延伸至转瓶下部，所述第二输送管接近第二瓶塞和第三瓶塞的部分均设有第五阀，所述的第二排气管穿置在第三瓶塞上并用于辅助排出分装瓶的内部空气。

作为一种较优的选择实施方式，优选的，所述的气源为气泵或气瓶。

作为一种较优的选择实施方式，优选的，所述的第一阀、第二阀、第三阀、第四阀和第五阀均为的电控阀。

作为一种较优的选择实施方式，优选的，所述的第一输送管、第二输送管和气管均为软管。

作为一种可能的实施方式，进一步，所述营养液添加罐的底部还设有支脚。

作为一种可能的实施方式，进一步，所述支脚的下端末还均转动连接有滑轮。

根据上述所述的转瓶细胞传代装置的传代方法，其包括如下步骤：

（1）将细胞培养于转瓶中，令细胞贴壁生长于转瓶壁上；

（2）倒去转瓶中的培养液，然后加入pbs清洗液进行清洗，清洗结束后，倒去pbs清洗液，继而加入0.25%的胰酶消化液进行作用于贴壁生长的细胞，当细胞之间的连接断开且间隙变大并出现细胞圆缩时，倒去胰酶消化液；

（3）将第一输送机构的另一端与转瓶的转瓶瓶口连接，然后将营养液添加罐中的营养液通过喷淋头喷淋入转瓶中，令转瓶瓶壁上附着的细胞被喷落至转瓶下部汇集的营养液中，最后将营养液输入补充至预设的加入量后，停止输入营养液；

（4）将转瓶与第一输送机构解除连接，然后将第二输送机构的一端与转瓶瓶口连接，第二输送机构的另一端与分装瓶的分装瓶瓶口连接，通过第二输送机构将转瓶中分散有细胞的营养液分装于分装瓶中。

作为一种可能的实施方式，进一步，步骤（2）中，pbs清洗液的清洗次数为至少1次，且加入转瓶的胰酶消化液还预先经过预热。

采用上述的技术方案，本发明与现有技术相比，其具有的有益效果为：本方案巧妙性利用喷淋方案进行剥离附着于转瓶上的细胞，且还通过第一输送机构、第二输送机构进行稀释分散细胞和辅助分装细胞，其优点归纳如下：

1、本方案通过蠕动泵及喷淋头能够充分的使细胞脱落并分散，降低劳动强度，提高效率；

2、可以自动补加营养液及自动分装细胞液，减少开瓶口次数，降低劳动强度，提高效率，降低污染机率；

3、原方法产业化生产传代操作过程通常需要4个人力或者相当于4人次的操作，而本方案应用只需2人或相当于2人次，操作时间可以减少一半；原有方法在补加营养液及分装细胞液时瓶口暴露在空气中的需间大约需要2min，而应用本发明后瓶口几乎不需暴露在空气中，打开瓶口减少两次，减少细胞污染的机率。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明方案做进一步的阐述：

图1为本发明方案的简要实施状态之一的示意图；

图2为本发明方案的简要实施状态之二的示意图。

具体实施方式

如图1或图2所示，本发明细胞传代装置，其包括：

营养液添加罐1，其内部设有用于容置营养液的容置腔11，其上部设有连通到容置腔11的进料口13，其顶部中心还通过固定架122固定有搅拌电机12，搅拌电机12的搅拌轴向下穿入到容置腔11下部且连接有搅拌叶123，营养液添加罐1的底部还设有用于输出营养液的出料口14，且该出料口14上设有第一阀141；

若干个转瓶4，用于细胞培养，其上部具有可启闭的转瓶瓶口41；

第一输送机构，一端与营养液添加罐1的出料口14连接，另一端用于与转瓶4的转瓶瓶口41可拆卸连接，且用于将营养液添加罐1的营养液输入到转瓶4中；

喷淋头21，用于与第一输送机构与转瓶4连接的一端固定连接且延伸至转瓶4内的上部并用于辅助分散附着于转瓶4内壁上的细胞；

若干分装瓶，用于分装转瓶4中经分散的细胞，其上部具有可启闭的分装瓶瓶口61；

第二输送机构，一端与转瓶4连接，另一端与分装瓶10连接，且用于将转瓶4中分散好的细胞分装输入于分装瓶10中。

其中，作为一种可能的实施方式，进一步，所述的第一输送机构包括第一输送管2、蠕动泵3和第一瓶塞5，所述的第一瓶塞5用于与转瓶4的转瓶瓶口41可拆卸连接，所述第一输送管2的一端与营养液添加罐1的出料口14连接，第一输送管2的另一端穿入到第一瓶塞5上且用于延伸至转瓶4上部并与喷淋头21固定连接，第一瓶塞5上还穿设有用于辅助排出转瓶4内部空气的第一排气管51，所述第一输送管2接近第一瓶塞5的一端设有第二阀22，所述的第一排气管51上设有第三阀511，所述的蠕动泵3连接于第一输送管2上，其中，通过蠕动泵3的工作转速来调节喷淋头21的喷淋压力。

另外，作为一种可能的实施方式，进一步，所述的第二输送机构包括第二瓶塞6、气源61、气管62、第二输送管9、第三瓶塞10、第二排气管71，所述的第二瓶塞6用于与转瓶4的转瓶瓶口41可拆卸连接，所述气管62的一端与气源61连接，另一端穿入到第二瓶塞6并用于将气源61内的气体输入到转瓶4中，所述的气管62上设有第四阀621，所述的第三瓶塞7用于与分装瓶10的分装瓶瓶口101可拆卸连接，所述第二输送管9的一端穿置在第三瓶塞7上且用于连通分装瓶10，第二输送管9的另一端穿置在第二瓶塞7上并用于延伸至转瓶4下部（即具有延伸部91），所述第二输送管9接近第二瓶塞6和第三瓶塞7的部分均设有第五阀91、92，所述的第二排气管71穿置在第三瓶塞7上并用于辅助排出分装瓶10的内部空气。

作为一种较优的选择实施方式，优选的，所述的气源61为气泵或气瓶，其用于输入洁净的气体使得转瓶4内的空气充入，将分散在营养液中的细胞被推入到第二输送管9中并流入到分装瓶10中；另外，为了便于控制和操作，所述的第一阀141、第二阀22、第三阀511、第四阀621和第五阀91、92均为的电控阀；所述的第一输送管2、第二输送管9和气管均为软管。

为了便于移动营养液添加罐1进行灵活操作，作为一种可能的实施方式，进一步，所述营养液添加罐1的底部还设有支脚15；所述支脚15的下端末还均转动连接有滑轮151。

根据上述所述的转瓶细胞传代装置的传代方法，其包括如下步骤：

（1）将细胞培养于转瓶4中，令细胞贴壁生长于转瓶4壁上；

（2）倒去转瓶4中的培养液，然后加入pbs清洗液进行清洗，清洗结束后，倒去pbs清洗液，继而加入0.25%的胰酶消化液进行作用于贴壁生长的细胞，当细胞之间的连接断开且间隙变大并出现细胞圆缩时，倒去胰酶消化液，本步骤中，pbs清洗液的清洗次数为至少1次，且加入转瓶4的胰酶消化液还预先经过预热；

（3）将第一输送机构的另一端与转瓶4的转瓶瓶口41连接，然后将营养液添加罐1中的营养液通过喷淋头21喷淋入转瓶4中，令转瓶4瓶壁上附着的细胞被喷落至转瓶4下部汇集的营养液中，最后将营养液输入补充至预设的加入量后，停止输入营养液；

（4）将转瓶4与第一输送机构解除连接，然后将第二输送机构的一端与转瓶瓶口41连接，第二输送机构的另一端与分装瓶10的分装瓶瓶口101连接，通过第二输送机构将转瓶4中分散有细胞的营养液分装于分装瓶10中。

需要说明的是，这里所披露的实施例的变形和改变是可能的，对于本领域的技术人员来说，实施例的替换和等效的各种部件是公知的。本领域技术人员应该清楚的是，在不脱离所附权利要求所限定的本发明的精神和范围内，在形式上和细节上对本发明所做出的各种变化，均为本发明的保护范围。