基于链霉亲和素化胶乳的MMP-3抗体复合物及其试剂盒的制作方法

本发明属于体外诊断医学检验试剂领域，具体地本发明涉及一种基于链霉亲和素化胶乳的mmp-3(基质金属蛋白酶3)抗体复合物及其检测试剂盒。
背景技术：
：基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，mmps)是一族需要ca2+、zn2+等金属离子作为辅助因子，具有降解细胞外基质为主功能的蛋白酶。其中基质金属蛋白酶的一个成员mmp-3(matrixmetalloproteinase-3，mmp-3)与其组织抑制剂-1(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1，timp-1)共同维护细胞外基质稳态，达到动态平衡。有研究表明，检测mmp-3的水平与椎间盘突出和退变有关，并可作为检测强直性脊柱炎(as)的有效指标。研究发现ra(类风湿关节炎)患者关节滑膜中mmp-3的含量明显增高，且关节滑膜中mmp-3蛋白和基因均处于过度表达状态，这提示mmp-3是降解软骨的指标之一，mmp-3是能提示ra患者中降解软骨的血清学指标。临床上mmp-3的正常人范围值在男：35.2～123.8ng/ml,女16.1～56.8ng/ml。胶乳增强免疫浊度测定法(简称letia)是近年来免疫检测领域出现的一种新的免疫检测技术，适用在自动、半自动生化分析仪以及荧光层析平台上，其基本原理是通过在高分子胶乳微球表面交联的抗体，而当抗原与交联有抗体的微球结合后，能够在短时间内迅速聚集在一起，改变反应溶液的吸光度。而且，反应液吸光度的改变与被测抗原的浓度在一定范围内具有线性关系，可用来反映被测抗原的浓度，这种凝集反应可以放大信号，便于半定量、定量检测。因此，如何制备出适合的胶乳(免疫胶乳)是胶乳增强免疫浊度测定的关键。目前所用的多数胶乳采用高分子材料加入氨基、羧基等表面官能团修饰的方法，这种单一官能团的胶乳粒子在偶联抗体时往往存在交联定向性差、容易发生凝集、形成试剂后与抗原反应无法形成3d结构等问题。技术实现要素：本发明针对现有技术上的不足，本发明的目的是提供一种稳定性强、非特异性结合降低、表面定向性好的胶乳颗粒。本发明的目的还在于提供一种灵敏度高、稳定性好且精度高的采用胶乳增强免疫比浊法测定mmp-3含量的试剂盒。本发明第一方面提供了一种mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物，所述复合物由链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化mmp-3单克隆抗体通过生物素和链霉亲和素相连得到；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化mmp-3单克隆抗体的质量比为1：3。在另一优选例中，所述聚苯乙烯胶乳颗粒为羧化聚苯乙烯胶乳颗粒。在另一优选例中，所述聚苯乙烯胶乳颗粒为直径为200±30nm的聚苯乙烯胶乳颗粒。较佳地，为直径为200nm的聚苯乙烯胶乳颗粒。本发明第二方面本发明第一方面所述的的mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物的制备方法，所述方法包括步骤：(1)将聚苯乙烯胶乳颗粒溶于在mes缓冲液中，得到胶乳溶液；将edac溶于水中，得到edac溶液；将上述胶乳溶液、edac溶液和链霉亲和素混合后进行反应，反应结束后，收集固体；然后将得到的固体重悬于mes缓冲液中，得到含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的mes缓冲液溶液；(2)用碳酸氢钠缓冲液对mmp-3单克隆抗体进行透析，得到mmp-3抗体溶液；将n-羟基琥珀酰亚胺生物素溶于dmso中，得到n-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液；将mmp-3抗体溶液和n-羟基琥珀酰亚胺生物溶液混合后进行反应，反应结束后，淬灭反应；然后用pbs缓冲液进行透析，得到含有生物素化mmp-3单克隆抗体的pbs缓冲液溶液；(3)将上述步骤得到的含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的mes缓冲液溶液与含有生物素化mmp-3单克隆抗体的pbs缓冲液溶液混合并进行交联，从而得到mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物；其中，链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒与生物素化mmp-3单克隆抗体的质量比为1：3。在另一优选例中，步骤(1)中，mes缓冲液为0.1m、ph为6.2的mes缓冲液。在另一优选例中，步骤(1)中，所述胶乳溶液的质量体积百分比浓度为0.5％。在另一优选例中，步骤(1)中，edac和水的质量体积比为0.03-0.04g/ml。在另一优选例中，步骤(1)中，链霉亲和素和聚苯乙烯胶乳颗粒的质量比为1:15。在另一优选例中，步骤(1)中，含有链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳颗粒的mes缓冲液溶液的质量体积百分比浓度为0.5％。在另一优选例中，步骤(2)中，碳酸氢钠缓冲液为0.1mol/l、ph为8的碳酸氢钠缓冲液。在另一优选例中，步骤(2)中，mmp-3抗体溶液的浓度为5mg/ml。在另一优选例中，步骤(2)中，n-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液的浓度为1mg/ml。在另一优选例中，步骤(2)中，n-羟基琥珀酰亚胺生物素和mmp-3单克隆抗体的质量比为1:25。在另一优选例中，步骤(2)还包括步骤：将得到的含有生物素化mmp-3单克隆抗体的pbs缓冲液溶液经过分子筛柱纯化，得到经纯化的含有生物素化mmp-3单克隆抗体的pbs缓冲液溶液。在另一优选例中，步骤(2)和步骤(3)之间还包括步骤：将经纯化的含有生物素化mmp-3单克隆抗体的pbs缓冲液溶液中加入了防腐剂。优选所述防腐剂为proclin300。优选所述防腐剂的质量体积比浓度为1‰。在另一优选例中，步骤(2)中，经纯化的含有生物素化mmp-3单克隆抗体的pbs缓冲液溶液的浓度为5mg/ml。在另一优选例中，步骤(3)中，在交联反应结束后，还包括步骤：在反应混合物中，加入5％酪蛋白水溶液，使得酪蛋白的终浓度达到1％，进行封闭反应；封闭反应结束后，通过离心收集沉淀固形物，即得到mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物。本发明第三方面提供了一种mmp-3检测试剂盒，所述试剂盒包含试剂r1和试剂r2；其中，所述试剂r1含有缓冲液、电解质、增浊剂和防腐剂；所述试剂r2含有权利要求1所述的mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物、稳定剂、缓冲液、电解质、保护剂和防腐剂。在另一优选例中，所述缓冲液为ph为6.0的mes缓冲液。在另一优选例中，所述电解质各自独立地选自下组：氯化钠、氯化钾或其组合。在另一优选例中，所述电解质各自独立地为氯化钠。在另一优选例中，所述稳定剂选自下组：牛血清白蛋白、酪蛋白、脱脂奶粉或其组合。在另一优选例中，所述稳定剂为酪蛋白。在另一优选例中，所述增浊剂选自下组：聚乙二醇-8000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-4000或其组合。在另一优选例中，所述增浊剂为聚乙二醇-6000。在另一优选例中，所述防腐剂各自独立地选自下组：叠氮钠、proclin300或其组合。在另一优选例中，所述防腐剂各自独立地为叠氮钠。在另一优选例中，所述保护剂选自下组：蔗糖、甘露醇、海藻糖或其组合。在另一优选例中，所述保护剂为海藻糖。在另一优选例中，试剂r1中，所述缓冲液为mes缓冲液。在另一优选例中，试剂r1中，所述缓冲液的ph为6。在另一优选例中，试剂r1中，所述电解质为氯化钠。在另一优选例中，试剂r1中，所述增浊剂为聚乙二醇-6000。在另一优选例中，试剂r1中，所述防腐剂为叠氮钠。在另一优选例中，试剂r2中，所述稳定剂为酪蛋白。在另一优选例中，试剂r2中，所述缓冲液为mes缓冲液。在另一优选例中，试剂r2中，所述缓冲液的ph为6。在另一优选例中，试剂r2中，所述电解质为氯化钠。在另一优选例中，试剂r2中，所述保护剂为海藻糖。在另一优选例中，试剂r2中，所述防腐剂为叠氮钠。在另一优选例中，所述试剂r1中，各成分的含量如下：所述试剂r2中，各成分的含量如下：mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物1-6g/l在另一优选例中，所述试剂r1中，各成分的含量如下：在另一优选例中，所述试剂r1的配制过程包括步骤：将各组分按照其各自的浓度或含量进行配制。在另一优选例中，所述试剂r2中，各成分的含量如下：在另一优选例中，所述试剂r2的配制过程包括步骤：首先，将缓冲液、电解质、稳定剂、保护剂、防腐剂按照各组分的含量配制于水中，从而得到复合物保护剂溶液；然后，将mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物按照其含量与上述复合物保护剂混合，即得到试剂r2。在另一优选例中，所述试剂盒还包含mmp-3蛋白校准品。在另一优选例中，所述mmp-3蛋白校准品含有ph为7.2；添加基质金属酶-3蛋白，定值范围，单位:ng/ml水平一：0水平二：100水平三：200水平四：400水平五：800水平六：1600。本发明另一方面还提供了一种第一方面所述试剂盒的用途，用于检测mmp-3蛋白含量。本发明另一方面还提供了一种第一方面所述试剂盒的制备方法；所述制备方法包括步骤：将试剂r1中各组分按照其各自的浓度或含量进行配制；从而得到试剂r1；和首先将试剂r2中的缓冲液、电解质、稳定剂、保护剂、防腐剂按照各组分的含量配制于水中，从而得到复合物保护剂；然后，将mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒按照其含量与上述复合物保护剂混合，从而得到试剂r2。本发明的主要优点包括：1、本发明通过在聚苯乙烯胶乳颗粒表面上交联链霉亲和素获得了一种稳定性强、非特异性结合降低、表面定向性好的聚苯乙烯胶乳颗粒原料试剂。然后在mmp-3单克隆抗体表面偶联生物素；再由链霉亲和素与生物素分子的结合，形成的mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒试剂抗干扰和线性均有较大提高。2、本发明的包含mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-聚苯乙烯胶乳颗粒复合物的试剂盒在提高检测灵敏度的同时也改善了试剂盒精密度。应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了链霉素化的聚苯乙烯胶乳颗粒和生物素化目标抗体之间的定向交联。图2为实施例1步骤1制备得到的粒径在200nm左右的表观均一的聚苯乙烯胶乳(羧基)颗粒的扫描电子显微镜照片。图3显示了本发明检测试剂和对比检测试剂的相关性。具体实施方式本发明提供了一种链霉素化的聚苯乙烯胶乳颗粒的制备方法，同时将目标抗体生物素化。利用链霉素和生物素两者之间的高度特异性结合，同时具有定向交联的特性(如图1所示)达到以下改良目的：1.形成了稳定的聚苯乙烯胶乳颗粒-链霉亲和素-生物素-mmp-3单克隆抗体结构，并保证抗体在聚苯乙烯胶乳表面上的构型，有利于与抗原之间的特异性反应。2.通过调节链霉亲和素的添加比例，达到了控制反应灵敏度的目的，在随后的应用中可以根据需求调整试剂的灵敏度性能。与现有技术相比，本发明的技术方案实现了一种制备简便、非特异性结合影响小，且较稳定的mmp-3蛋白检测试剂盒以及用这种检测试剂盒来检测mmp-3蛋白的方法，适合体外诊断试剂企业进行放大生产。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。实施例1聚苯乙烯胶乳-链霉亲和素-生物素-mmp-3抗体的制备1.平均粒径200nm左右的聚苯乙烯胶乳(羧基)制备：实验材料：胶乳原料的合成制备：1)往反应釜中加7.7kg升纯化水，盖好盖子后通氮气，开冷却水，开始加热至反应釜内的温度至室温，80-100r/min搅拌至少1h后再升高温度至50度。2)称7g十二烷基苯磺酸钠于烧杯中并用200ml水充分溶解，乳化40min。后再加100g甲基丙烯酸，隔5min后再加568g苯乙烯；转速调到280rpm后，乳化60min。3)60min后，将油浴的温度升到70℃，称9g过硫酸钾溶于100ml水中，当温度升到60℃时，开始缓慢滴加到反应釜中，搅拌反应8h，在反应时间到后将转速降到200r/min；4)搅拌时间到后，停止加热，温度冷却至室温时停止通氮气并关闭冷却水循环，然后将反应得到的胶乳抽出；5)缓冲液配制:称取21.3g一水吗啉乙磺酸用900ml纯化水溶解，用0.1m的naoh溶液调整ph至6.0。再定容至1000ml；6)胶乳洗涤，取100ml合成好的胶乳通过中空纤维膜，循环回流2-3min，慢慢加压浓缩，排除废液，待罐内液面低于警示值时，加入缓冲液循环回流2-3min，再加压浓缩排除废液，重复4次，过程中应在加入缓冲液后收集到等量的废液再重新加入缓冲液，每次加入缓冲液的量不低于200ml；直至过滤出的上清液的电导率与缓冲液的相似为止，然后用缓冲液稀释，以乳液形式保存。7)取已经过洗滤处理的胶乳，用超声波破碎仪进行分散，参数750w，超声时间1.5秒，超声间隔3秒。制备好的胶乳存放在2-8℃环境中保存。根据扫描电子显微镜分析，得到粒径在200nm左右的表观均一的聚苯乙烯胶乳(羧基)颗粒，浓度为5％(质量体积百分比)。(如图2所示)2.聚苯乙烯胶乳的链霉亲和素化标记实验材料：一水吗啉乙磺酸：购自国药集团，分析纯链霉亲和素：购自thermoedac(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)：购自sigma酪蛋白：购自sigma将上述步骤得到的200nm左右的聚苯乙烯胶乳颗粒，用0.1m的一水吗啉乙磺酸缓冲液(mes缓冲液，ph6.2)稀释到终浓度为0.5％(质量体积百分比)，室温搅拌10min，得到稀释后的胶乳溶液。取稀释后的胶乳溶液10ml，称取edac0.1g并用3ml纯化水溶解后，与稀释后的胶乳溶液混匀10min；然后加入链霉亲和素，使其比例为链霉亲和素：胶乳量为1:15，(胶乳量：胶乳溶液中含胶乳颗粒的质量，根据质量体积比换算)，即10ml胶乳溶液按0.5％质量体积百分比换算为50mg，则所需链霉亲和素的量为50/15＝3.33mg。加入链霉亲和素后，混合物室温混匀反应1h。然后用离心机10000rpm，10min离心，弃上清，收集离心后的沉淀固形物(即得到链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳)，沉淀用0.1m的一水吗啉乙磺酸缓冲液(mes缓冲液，ph6.2)重悬至10ml，超声3min，得到链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳溶液，浓度为0.5％(质量体积百分比)。3.抗体生物素化标记实验材料：nhsb：n-羟基琥珀酰亚胺生物素纯化水：通过ro反渗透处理，电导率在0.8～1.4μs/cm。dmso：二甲亚砜防腐剂：proclin300分子筛柱(如g25)电磁搅拌器透析袋(mwco30kd)微量移液器1).用0.1mol/l碳酸氢钠缓冲液(ph8.0)作为透析液，对mmp-3单克隆抗体充分透析，得到mmp-3抗体溶液，浓度为5mg/ml。2).用1mldmso溶解nhsb1mg，得到nhsb溶液。3).向1mlmmp-3抗体溶液内(浓度5mg/ml)加入200μlnhsb溶液(即含nhsb200μg)。4).在室温下持续搅拌，反应2～4小时。5).加入8.0μl1mol/lnh4cl(每25μgnhsb加1μl)，在室温下搅拌10分钟。6).在4℃，用pbs充分透析，以除去游离的生物素。7).将产物上1ml的分子筛柱，以pbs缓慢洗脱，收集含有生物素化的mmp-3抗体的溶液，经浓缩后，浓度为5mg/ml。8).最后，在上述步骤得到的抗体溶液中加入proclin-300使其终浓度达到1‰(质量体积比)。将该生物素化的mmp-3抗体溶液置4℃，避光保存；亦可加入50％重蒸甘油，置-20℃保存。4.聚苯乙烯胶乳-链霉亲和素-生物素-mmp-3抗体的交联取生物素化的mmp-3抗体溶液按抗体胶乳比例3mg：1mg加入上述链霉亲和素化聚苯乙烯胶乳溶液中，室温搅拌反应2h。聚苯乙烯胶乳颗粒-链霉亲和素-生物素-单克隆抗体的交联完成。反应2h后加入5％酪蛋白水溶液，使终浓度到1％，室温搅拌反应1h。实施例2检测试剂盒的制备本发明试剂盒为液体双试剂，双试剂分别为试剂r1和试剂r2，其中，试剂r1与试剂r2的比例为3:1。其中，试剂r1的配方如下：ph为6.0。试剂r2中含有以下组分：ph值为6.0。试剂的配制：1、所述r1的配制：将各组分按照上述含量溶于纯化水中，混匀，定容。2、所述试剂r2的制备：保护剂配制：将酪蛋白、氯化钠、海藻糖、叠氮钠按照各自的目标含量溶于20mmol/l的mes缓冲液中(ph6.0)中，混匀，定容至1l，作为mmp-3单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-胶乳颗粒保护剂备用，该保护剂的作用是，抢占已被活化但仍没接上目标抗体的位点，避免自交联的情况发生。取实施例1步骤4中的已交联胶乳溶液10ml，离心12000rpm，20min。弃上清，保留固形物，用20ml该保护剂分散，并超声均匀，所述试剂r2制备完成。实施例3试剂盒的性能检测1.试剂相关信息本发明检测试剂：名称为mmp-3-实验；参照上述实施例制备；对比检测试剂：名称为mmp-3-对比；为日本藤仓(tc)mmp-3试剂。表1试剂名称批号效期mmp-3-对比w9bm012020.2mmp-3-实验19--012020.5表2实验-c1成分及含量：ph为7.2。添加基质金属酶-3蛋白，含量:100ng/ml实验-c2成分及含量：ph为7.2。添加基质金属酶-3蛋白，含量:200ng/ml表3实验-ctl校准成分及含量：ph为7.2。添加基质金属酶-3蛋白，定值范围，单位:ng/ml水平一：0水平二：100水平三：200水平四：400水平五：800水平六：16002.定标信息采用表4所述条件进行定标信息检测。表4注：需要说明的是，mmp-3-对比中r1和r2是指日本tc生产的mmp-3-对比试剂中的试剂r1和r2，而不是本发明所述的试剂r1和r2。检测结果如表5、表6和表7所示。表5空白吸光度：表6项目mmp-3-对比mmp-3-实验均值1020412128标准<16000<16000结论合格合格分析灵敏度：表7浓度(ng/ml)mmp-3-对比mmp-3-实验100453299标准>100>100结论合格合格表5为试剂定标信息，定标是在规定条件下，建立测量装置与一可追溯且已知参考值不确定度的标准之间关系的一整套操作活动。定标就是要找出一个参考点，一个k值(或f值)。它是由仪器与试剂状态确定下来的。在生化仪上就是用标准品(其值可溯源至国际标准)来测试其吸光度，得出标准曲线，用于标本检测。表6为空白吸光度标准要求，标准为小于16000，两家试剂空白都符合。试剂本身的吸光度就是试剂空白吸光度。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把样本换成蒸馏水来测量。由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。表7为分析灵敏度。分析灵敏度指单位浓度(或活性)的测定物反应所产生的反应度，反应度越高，灵敏度越大。表7中是样品浓度为100ng/ml时的特定吸光度，标准要求大于100，本发明的检测试剂和对比检测试剂该点灵敏度都符合。3.准确度质控品是一种已知测量范围的稳定的物质，用于检查分析仪器或检测方法的性能，其分析特性与患者样本相似。准确度即用全自动生化分析仪两点终点比浊法检测已知值的样本(质控)，看值是否落在其标识的范围内，这里对本发明和对比的质控进行互测。准确度检测结果如表8所示。表8由表8可知，对比检测试剂在测定对比质控及实验质控时，测量值均在范围内，但与靶值的偏差对比检测试剂对对比质控较小，与实验质控偏差较大。本发明检测试剂在测定对比质控及实验质控时，测量值均在范围内，而且偏差更小。4.精密度精密度，表示在相同条件下，同一样本的重复测定值之间的符合程度。精密度即用全自动生化分析仪两点终点比浊法检测某两点的样本，通过计算cv值标识其偏离度，cv值越小说明精密度高，重复性好。精密度检测结果如表9所示。表9对比检测试剂和本发明检测试剂的检测浓度不一样，对比检测试剂的是100ng/ml、300ng/ml，本发明检测试剂的是120ng/ml、340ng/ml。由表9可知，在检测标识值100ng/ml左右的样本时，对比检测试剂的测值均值110.7左右，cv3.3％，本发明检测试剂的测值均值121.4左右，cv3.0％。同理测定300ng/ml左右的样本，两者的测值均值不同，cv小于2％。通过数据可知，对比检测试剂与本发明检测试剂在精密度方面的测值都能满足要求，但本发明检测试剂的测值会比对比检测试剂的要高。5.相关性相关性即用全自动生化分析仪两点终点比浊法检测较多的样本(50例以上)，通过测值的结果来判断两种试剂在实测样本时的结果是否一致(主要是阴阳性结果)，男：35.2～123.8ng/ml，女：16.1～56.8ng/ml。相关性结果如表10和图3所示。图3是相关性结果，将两种试剂所测结果做比较，给出了趋势线，相关系数r2＞0.99。表10根据表10，本发明检测试剂的数据整体略高于对比数据，结合图3结果，两者的相关性满足r2＞0.99。6.线性线性试验是衡量一个方法的检测范围的一种实验。通过线性试验，可以了解该方法的最高检测值和最低检测值，可确定该方法的检测范围，以防止含量过低或过高样品的检测误差。线性即用全自动生化分析仪两点终点比浊法检测一个高值及高值通过固定稀释倍数如原倍(1)，1/2(0.5)，1/4(0.25),1/8(0.125)……等，然后在用测值乘以稀释倍数，看所得数值与理论值之间的偏差度。线性结果如表11所示。表11mmp3-对比测值1理论值绝对偏差相对偏差0.0312532.936.33.4-9％0.062574.272.6-1.62％0.125129.2145.115.9-11％0.25243.2290.247.0-16％0.5495.9580.584.6-15％110691160.991.9-8％mmp3-实验测值1理论值绝对偏差相对偏差0.0312534.536.31.8-5％0.062578.872.6-6.29％0.125148.6145.1-3.52％0.25278.5290.211.7-4％0.5540.5580.540.0-7％11178.61160.9-17.72％根据结果，将一个已知值样本从原倍开始测，分别用两种试剂测其1/2、1/4、1/8、1/16、1/32稀释倍数下的值，所测值与理论值(即实际值)做比较，发现本发明检测试剂相比对比检测试剂，偏差更小。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。当前第1页12