1.一种脂肪酶rolip,其特征在于,所述脂肪酶rolip的氨基酸序列如seqidno:1所示。
2.一种脂肪酶基因rolip,用于编码权利要求1所述的脂肪酶,其特征在于,所述脂肪酶基因rolip的碱基序列与seqidno:2所示的碱基序列具有95%以上的同一性,优选地,所述脂肪酶基因rolip的碱基序列如seqidno:2所示。
3.权利要求2所述的脂肪酶基因rolip的获取方法,其特征在于,包括如下步骤:通过定点突变的方法将原始脂肪酶第158位的丝氨酸突变为苏氨酸,第247位的谷氨酰胺突变为亮氨酸,第294位的谷氨酰胺突变为组氨酸。
4.一种重组表达载体,其特征在于,包括如权利要求2所述的脂肪酶基因rolip。
5.权利要求4所述的重组表达载体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:
将权利要求2所述的脂肪酶基因rolip通过限制性内切酶ecori和noti双酶切,得到具有粘性末端的脂肪酶基因rolip片段;
将毕赤酵母表达载体ppiczαa分别用限制性内切酶ecori和noti双酶切,得到具有粘性末端的载体ppiczαa片段;
将所述具有粘性末端的脂肪酶基因rolip片段和所述具有粘性末端的载体ppiczαa片段通过t4dna连接酶连接,获得脂肪酶重组表达载体ppiczαa-rolip。
6.一种重组表达菌株,其特征在于,包括如权利要求4所述的重组表达载体。
7.根据权利要求6所述的重组表达菌株,其中,所述重组表达菌株的宿主细胞为毕赤酵母。
8.权利要求6或7所述的重组表达菌株的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
将脂肪酶重组表达载体ppiczαa-rolip通过酶切位点将其线性化;
将线性化的重组表达载体ppiczαa-rolip导入宿主细胞中,获得重组表达菌株。
9.权利要求1所述的脂肪酶的生产方法,其特征在于,培养权利要求6或7所述的重组表达菌株,从培养物中获得脂肪酶。
10.权利要求1所述的脂肪酶的应用,其特征在于,将权利要求1中所述的脂肪酶与含脂肪物料接触。