一种高产的碱性脂肪酶及基因与菌株和应用的制作方法

文档序号:20946846发布日期:2020-06-02 19:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种脂肪酶rolip,其特征在于,所述脂肪酶rolip的氨基酸序列如seqidno:1所示。

2.一种脂肪酶基因rolip,用于编码权利要求1所述的脂肪酶,其特征在于,所述脂肪酶基因rolip的碱基序列与seqidno:2所示的碱基序列具有95%以上的同一性,优选地,所述脂肪酶基因rolip的碱基序列如seqidno:2所示。

3.权利要求2所述的脂肪酶基因rolip的获取方法,其特征在于,包括如下步骤:通过定点突变的方法将原始脂肪酶第158位的丝氨酸突变为苏氨酸,第247位的谷氨酰胺突变为亮氨酸,第294位的谷氨酰胺突变为组氨酸。

4.一种重组表达载体,其特征在于,包括如权利要求2所述的脂肪酶基因rolip。

5.权利要求4所述的重组表达载体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:

将权利要求2所述的脂肪酶基因rolip通过限制性内切酶ecori和noti双酶切,得到具有粘性末端的脂肪酶基因rolip片段;

将毕赤酵母表达载体ppiczαa分别用限制性内切酶ecori和noti双酶切,得到具有粘性末端的载体ppiczαa片段;

将所述具有粘性末端的脂肪酶基因rolip片段和所述具有粘性末端的载体ppiczαa片段通过t4dna连接酶连接,获得脂肪酶重组表达载体ppiczαa-rolip。

6.一种重组表达菌株,其特征在于,包括如权利要求4所述的重组表达载体。

7.根据权利要求6所述的重组表达菌株,其中,所述重组表达菌株的宿主细胞为毕赤酵母。

8.权利要求6或7所述的重组表达菌株的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

将脂肪酶重组表达载体ppiczαa-rolip通过酶切位点将其线性化;

将线性化的重组表达载体ppiczαa-rolip导入宿主细胞中,获得重组表达菌株。

9.权利要求1所述的脂肪酶的生产方法,其特征在于,培养权利要求6或7所述的重组表达菌株,从培养物中获得脂肪酶。

10.权利要求1所述的脂肪酶的应用,其特征在于,将权利要求1中所述的脂肪酶与含脂肪物料接触。


技术总结
本发明属于基因工程技术领域,涉及一种高产的碱性脂肪酶及基因与菌株和应用。本发明的脂肪酶ROLIP的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的脂肪酶ROLIP在原有脂肪酶基础上通过人工定向改造而来,具有显著提高的结构稳定性和表达水平。

技术研发人员:杨江科;张奕昀;魏子翔
受保护的技术使用者:武汉轻工大学
技术研发日:2020.02.27
技术公布日:2020.06.02
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