技术特征：
1.一种基于稀土金属的酶响应型探针，所述探针包括稀土金属离子组和磷脂分子。2.根据权利要求1所述酶响应型探针，其特征在于，所述稀土金属离子组为选自镧、铈、镨、钕、钷、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥、钇和钪中的两种或两种以上的稀土离子构成的离子组；例如铈-铽、铈-铕、铈-镝、铽-铕、铈-钕、铈-钆、铈-铒、钆-铕、钆-铽、钆-镝、钆-铽-铕或铈-镱-铒离子组，优选为，铈-铽离子组。3.根据权利要求1所述酶响应型探针，其特征在于，所述磷脂分子为含有磷脂键的分子，所述含有磷脂键的分子为三磷酸腺苷(atp)、二磷酸腺苷(adp)、一磷酸腺苷(amp)、三磷酸鸟苷(gtp)、二磷酸鸟苷(gdp)、一磷酸鸟苷(gmp)中的一种、两种或更多种，示例性的为atp。4.权利要求1-3任一项所述的酶响应型探针的制备方法，包括：1)将稀土金属盐的组合溶解于缓冲溶液中，配制成稀土离子溶液；2)将磷脂分子溶解于缓冲溶液中，配制成磷脂分子溶液；3)将步骤1)中的稀土离子溶液与步骤(2)中的磷脂分子溶液混合，得到所述基于稀土金属的酶响应型探针。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述稀土金属盐组合可以为能够提供组成上述稀土离子组的两种或两种以上的稀土金属盐；所述稀土金属盐为镧、铈、镨、钕、钷、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥、钇或钪的硝酸盐、氯化盐、醋酸盐、硫酸盐、高氯酸盐或其盐类水合物；优选地，步骤1)中，所述稀土离子溶液的总浓度为0.5-32mm；例如，1-30mm，1.5-28mm，2-25mm，2.5-20mm，3-18mm，例如，1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm；优选地，步骤1)中，当所述基于稀土金属的酶响应型探针采用两种稀土离子构成的离子组时，所述稀土离子溶液中两种稀土离子的摩尔比为1:10-10:1；例如，1:9-9:1，1:8-8:1，1:7-7:1，1:6-6:1，1:5-5:1，1:4-4:1，例如，1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1；当所述基于稀土金属的酶响应型探针采用三种稀土离子构成的离子组时，所述稀土离子溶液中三种稀土离子的摩尔比为(1-10):(10-1):(1-10)，例如(1-9):(9-1):(1-9)，(1-8):(8-1):(1-8)，(1-7):(7-1):(1-7)，(1-6):(6-1):(1-6)，(1-5):(5-1):(1-5)，(1-4):(4-1):(1-4)，(1-3):(3-1):(1-3)，如1:1:1，1:2:1，2:1:1，1:1:2。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述缓冲溶液为n-甲基-d-葡萄糖胺(meg)缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(amp)缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸(tris-hcl)缓冲液；示例性地为tris-hcl缓冲液；所述缓冲液的ph为7.0-9.0，优选ph为9.0；优选地，步骤2)中，所述磷脂分子溶液浓度为0.5-32mm；例如，1-30mm，1.5-28mm，2-25mm，例如，1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm；优选地，步骤1)和步骤2)中配制所述溶液所用的溶剂为水。7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述稀土离子溶液与所述磷脂分子溶液混合的体积比为1:5-5:1；例如，1:4-4:1、1:3-3:1、1:2-2:1、1:4、1:3、1:2、1:
1、2:1、3:1、4:1。8.权利要求1-3任一项所述酶响应型探针的用途，其可用于检测碱性磷酸酶。9.一种碱性磷酸酶的检测方法，包括如下步骤：1)将权利要求1-3任一项所述基于稀土金属的酶响应型探针与缓冲液混合，得到探针溶液；2)将碱性磷酸酶与缓冲液混合，得到碱性磷酸酶溶液；3)将步骤1)的探针溶液与步骤2)的碱性磷酸酶溶液混合，恒温振荡，测定待测样品中碱性磷酸酶的荧光强度，根据标准曲线计算待测样品中碱性磷酸酶的浓度。10.权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述恒温振荡的温度为25-40℃，例如为30-39℃，35-38℃，37℃，；所述恒温振荡的时间为0.5-5h，例如为3h；优选地，步骤1)中，所述探针溶液的浓度选自0.5-32mm；例如，1-30mm，1.5-28mm，2-25mm，例如，1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm；优选地，步骤2)中，所述碱性磷酸酶溶液的浓度为0-5000u/l；例如为3000、2500、2000、1500、1250、1000、750、500、250、125、62.50、31.25、15.63、7.81、0u/l。
技术总结
本发明公开了一种基于稀土荧光共振能量传递的酶响应型探针及其制备方法和在碱性磷酸酶检测中的应用。该酶响应型探针利用稀土敏化离子、稀土激活离子与磷脂分子的超分子自聚集，有效缩短了稀土敏化离子和激活离子间的能量传递距离，成功构筑了具备良好荧光特性的纳米探针，并实现了碱性磷酸酶的特异性、高灵敏检测。本发明所提供的酶响应型探针制备简单快捷、安全无毒，并且可以有效避免生物复杂体系中的干扰。检测过程只需将纳米探针与待测样品简单混合即可实现对血清或全血中碱性磷酸酶浓度的检测，具备简捷、灵敏、特异性好、经济实用等优点，为复杂体系中碱性磷酸酶的检测提供了一种简单高效的新方法和相应技术支持。了一种简单高效的新方法和相应技术支持。了一种简单高效的新方法和相应技术支持。
技术研发人员：刘 陈学元 杨颖婕 张云钦 李幸俊 高航
受保护的技术使用者：中国科学院福建物质结构研究所
技术研发日：2020.03.03
技术公布日：2021/9/6