本发明涉及靶分子技术领域，具体为一种靶分子平行筛选及扩增方法。
背景技术：
分子靶标是以研究疾病发生、发展过程中细胞分子生物学上的差异(包括基因、酶、信号转导等不同特性)为基础，筛选和鉴定与疾病密切相关的蛋白质、核酸、酶、受体等生物分子作为药物作用的靶点，通过研究药物设计和构效关系得到靶向特异性生物分子的先导化合物，通过靶向给药控释系统实现有效靶向给药及个体化治疗。分子靶标新药研究的整个过程由疾病分子靶标筛选鉴定、新药设计、构效关系研究、靶向给药及个体化治疗等阶段组成。随着基因组学、蛋白质组学和结构生物学的飞速发展，疾病分子机制研究的不断深入，以及实验性药物靶标的识别和验证技术的突破，我国在分子靶标新药领域的研究有较大的发展空间。
普通靶分子在平行筛选及扩增时，往往需要对细胞进行处理，细胞在传统的裂解处理时往往不够彻底，因此将会严重影响靶分子的片段化效果，进而影响筛选及扩增效果。
技术实现要素：
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种靶分子平行筛选及扩增方法，解决了普通靶分子在平行筛选及扩增时，往往需要对细胞进行处理，细胞在传统的裂解处理时往往不够彻底，因此将会严重影响靶分子的片段化效果，进而影响筛选及扩增效果的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种靶分子平行筛选及扩增方法，包括如下步骤：
步骤1：工作器皿的处理：将工作器皿使用蒸馏水进行全面清洗，并且采用高温高压蒸汽对其进行消毒杀菌处理，取出后，放置在阴凉通风处，静置待用；
步骤2：靶分子片段化基本处理：使用离心管收集1.5×106细胞，加入细胞裂解液，在细胞裂解液中加入等量的苯酚，离心5-15分钟后加入2.5倍体积的无水乙醇，离心后，加入核酸内切酶对靶分子进行dna的片段化；
步骤3：靶分子末端修复处理：将盛放靶分子的试管里加入端粒酶溶液，在室温下摇晃均匀，然后放置在试管架表面；
步骤4：靶分子标准筛选操作：制备标准筛选溶液，使用靶蛋白配置洗脱液，室温下轻缓摇动10-60分钟，用lb培养基将培养物溶液稀释至20ml，加入未扩增的洗脱液，剧烈摇晃锥形瓶；
步骤5：靶分子的扩增操作：将洗脱物加入培养物中，25-37摄氏度的剧烈摇动孵育4小时，将培养物转入微量离心管中，在4摄氏度时，开启离心机运行10分钟，将上清液转入新的离心管中，再次离心，将上清液转入新的离心管中，加入六分之一体积的peg，然后在4摄氏度时将产品放置6小时；
步骤6：靶分子的扩增滴定：用含有噬菌体的扩增洗脱液进行滴定测试，将滴定浓度逐项记录。
优选的，所述步骤4中，洗脱液贮藏在4摄氏度。
优选的，所述步骤6中，滴定浓度逐项扩大。
优选的，所述步骤1中，阴凉通风处必须干燥。
优选的，所述步骤1中，消毒杀菌处理过程必须采用高温高压蒸汽方法对其进行处理。
优选的，所述步骤3中，室温调节至20-25摄氏度。
优选的，所述步骤4中，轻缓摇动时必须采用相关夹具对其操作。
(三)有益效果
本发明提供了一种靶分子平行筛选及扩增方法。与现有技术相比，具备以下有益效果：
(1)、该靶分子平行筛选及扩增方法，通过步骤1：工作器皿的处理：将工作器皿使用蒸馏水进行全面清洗，并且采用高温高压蒸汽对其进行消毒杀菌处理，取出后，放置在阴凉通风处，静置待用；步骤2：靶分子片段化基本处理：使用离心管收集1.5×106细胞，加入细胞裂解液，在细胞裂解液中加入等量的苯酚，离心5分钟后加入2.5倍体积的无水乙醇，离心后，加入核酸内切酶对靶分子进行dna的片段化，通过步骤2的设置，在离心管加入细胞裂解液后再加入等量的苯酚，可以进一步的对细胞进行裂解，提升了细胞裂解效果，并且在离心后加入无水乙醇，可以提升核酸内切酶的片段化效果，并且通过步骤1的设置，能够有效保证产品的合格率。
(2)、该靶分子平行筛选及扩增方法，通过步骤3：靶分子末端修复处理：将盛放靶分子的试管里加入端粒酶溶液，在室温下摇晃均匀，然后放置在试管架表面；步骤4：靶分子标准筛选操作：制备标准筛选溶液，使用靶蛋白配置洗脱液，室温下轻缓摇动10-60分钟，用lb培养基将培养物溶液稀释至20ml，加入未扩增的洗脱液，剧烈摇晃锥形瓶，通过步骤3和步骤4的联合设置，使得装置可以通过对靶分子试管添加端粒酶，然后后快速稳定的对靶分子末端进行修复，通过对靶分子筛选时的摇晃，提高了靶分子之间的接触面积，进而提高了筛选效果。
(3)、该靶分子平行筛选及扩增方法，通过步骤5：靶分子的扩增操作：将洗脱物加入培养物中，37摄氏度的剧烈摇动孵育4小时，将培养物转入微量离心管中，在4摄氏度时，开启离心机运行10分钟，将上清液转入新的离心管中，再次离心，将上清液转入新的离心管中，加入六分之一体积的peg，然后在4摄氏度时将产品放置6小时；步骤6：靶分子的扩增滴定：用含有噬菌体的扩增洗脱液进行滴定测试，将滴定浓度逐项记录，通过步骤5和步骤6的联合设置，使得靶分子在剧烈摇动孵育，并且后续处理时进行离心可以进一步提高靶分子扩增的生产效率，通过对靶分子的扩增滴定能够快速有效的确定扩增量。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附表，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅表1，本发明实施例提供三种技术方案：一种靶分子平行筛选及扩增方法，具体包括以下实施例：
实施例1
步骤1：工作器皿的处理：将工作器皿使用蒸馏水进行全面清洗，并且采用高温高压蒸汽对其进行消毒杀菌处理，取出后，放置在阴凉通风处，静置待用；
步骤2：靶分子片段化基本处理：使用离心管收集1.5×106细胞，加入细胞裂解液，在细胞裂解液中加入等量的苯酚，离心5分钟后加入2.5倍体积的无水乙醇，离心后，加入核酸内切酶对靶分子进行dna的片段化；
步骤3：靶分子末端修复处理：将盛放靶分子的试管里加入端粒酶溶液，在室温下摇晃均匀，然后放置在试管架表面；
步骤4：靶分子标准筛选操作：制备标准筛选溶液，使用靶蛋白配置洗脱液，室温下轻缓摇动10分钟，用lb培养基将培养物溶液稀释至20ml，加入未扩增的洗脱液，剧烈摇晃锥形瓶；
步骤5：靶分子的扩增操作：将洗脱物加入培养物中，25摄氏度的剧烈摇动孵育4小时，将培养物转入微量离心管中，在4摄氏度时，开启离心机运行10分钟，将上清液转入新的离心管中，再次离心，将上清液转入新的离心管中，加入六分之一体积的peg，然后在4摄氏度时将产品放置6小时；
步骤6：靶分子的扩增滴定：用含有噬菌体的扩增洗脱液进行滴定测试，将滴定浓度逐项记录。
实施例2
步骤1：工作器皿的处理：将工作器皿使用蒸馏水进行全面清洗，并且采用高温高压蒸汽对其进行消毒杀菌处理，取出后，放置在阴凉通风处，静置待用；
步骤2：靶分子片段化基本处理：使用离心管收集1.5×106细胞，加入细胞裂解液，在细胞裂解液中加入等量的苯酚，离心10分钟后加入2.5倍体积的无水乙醇，离心后，加入核酸内切酶对靶分子进行dna的片段化；
步骤3：靶分子末端修复处理：将盛放靶分子的试管里加入端粒酶溶液，在室温下摇晃均匀，然后放置在试管架表面；
步骤4：靶分子标准筛选操作：制备标准筛选溶液，使用靶蛋白配置洗脱液，室温下轻缓摇动35分钟，用lb培养基将培养物溶液稀释至20ml，加入未扩增的洗脱液，剧烈摇晃锥形瓶；
步骤5：靶分子的扩增操作：将洗脱物加入培养物中，30摄氏度的剧烈摇动孵育4小时，将培养物转入微量离心管中，在4摄氏度时，开启离心机运行10分钟，将上清液转入新的离心管中，再次离心，将上清液转入新的离心管中，加入六分之一体积的peg，然后在4摄氏度时将产品放置6小时；
步骤6：靶分子的扩增滴定：用含有噬菌体的扩增洗脱液进行滴定测试，将滴定浓度逐项记录。
实施例3
步骤1：工作器皿的处理：将工作器皿使用蒸馏水进行全面清洗，并且采用高温高压蒸汽对其进行消毒杀菌处理，取出后，放置在阴凉通风处，静置待用；
步骤2：靶分子片段化基本处理：使用离心管收集1.5×106细胞，加入细胞裂解液，在细胞裂解液中加入等量的苯酚，离心15分钟后加入2.5倍体积的无水乙醇，离心后，加入核酸内切酶对靶分子进行dna的片段化；
步骤3：靶分子末端修复处理：将盛放靶分子的试管里加入端粒酶溶液，在室温下摇晃均匀，然后放置在试管架表面；
步骤4：靶分子标准筛选操作：制备标准筛选溶液，使用靶蛋白配置洗脱液，室温下轻缓摇动60分钟，用lb培养基将培养物溶液稀释至20ml，加入未扩增的洗脱液，剧烈摇晃锥形瓶；
步骤5：靶分子的扩增操作：将洗脱物加入培养物中，37摄氏度的剧烈摇动孵育4小时，将培养物转入微量离心管中，在4摄氏度时，开启离心机运行10分钟，将上清液转入新的离心管中，再次离心，将上清液转入新的离心管中，加入六分之一体积的peg，然后在4摄氏度时将产品放置6小时；
步骤6：靶分子的扩增滴定：用含有噬菌体的扩增洗脱液进行滴定测试，将滴定浓度逐项记录。
步骤4中，洗脱液贮藏在4摄氏度，4摄氏度为最佳贮藏温度，步骤6中，滴定浓度逐项扩大，逐项扩大可以精确测量，步骤1中，阴凉通风处必须干燥，干燥能够避免潮湿发霉，步骤1中，消毒杀菌处理过程必须采用高温高压蒸汽方法对其进行处理，只有高温高压蒸汽消毒法才能达到预定效果，步骤3中，室温调节至20-25摄氏度，步骤4中，轻缓摇动时必须采用相关夹具对其操作，避免手持能够保证手掌细菌和温度的影响。
对比实验
现有生产厂家根据权利要求1，可以操作出三种靶分子平行筛选及扩增产品，对三种靶分子平行筛选及扩增产品进行全面的后期处理后，将三种靶分子平行筛选及扩增产品与普通的靶分子平行筛选及扩增产品的进行产品合格率和操作时间的对比实验，由表知，经过实验室测试对三个实施例中产品的合格率，得知实施例中最低的是91.6，较对比例合格率提高3％，操作时间最长的是12.5小时，较对比例缩短了5小时。
表1：合格率和操作时间与对比例对比表
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。