一种小麦千粒重和粒长基因TaGS3-4A的分子标记及其应用的制作方法

文档序号:21198754发布日期:2020-06-23 19:04阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种小麦千粒重和粒长基因tags3-4a的分子标记,其特征在于,该分子标记是小麦增加千粒重和粒长优异单倍型的分子标记,由分子标记caps-4a-357/713和分子标记indel-4a-351一对成套的分子标记组成;

所述分子标记caps-4a-357/713,其上游引物caps-4a-357/713-f如seqidno:2所示、下游引物caps-4a-357/713-r如seqidno:3所示,以分子标记caps-4a-357/713的上下游引物对小麦基因组dna进行pcr扩增,将扩增产物分别用hpy188i和bsri酶切,酶切产物分别进行电泳检测,扩增产物在hpy188i酶切后获得分子量大小分别为537bp和265bp的两条目的条带或540bp和265bp的两条目的条带;且扩增产物在bsri酶切后获得分子量大小分别为181bp和621bp的两条目的条带或184bp和621bp的两条目的条带;

所述分子标记indel-4a-351,其上游引物indel-4a-351-f如seqidno:4所示、下游引物indel-4a-351-r如seqidno:5所示,以分子标记indel-4a-351的上下游引物对小麦基因组dna进行pcr扩增,将扩增产物电泳分离,获得扩增产物的分子量大小为198bp、200bp或201bp的一条目的条带。

2.根据权利要求1所述的小麦千粒重和粒长基因tags3-4a的分子标记,其特征在于,所述分子标记caps-4a-357/713和所述分子标记indel-4a-351中pcr扩增的体系均为20µl,分别包括2×taqpcrmastermix10µl、上下游引物各1µl、dna模板1µl、其余用ddh2o补足。

3.根据权利要求1所述的小麦千粒重和粒长基因tags3-4a的分子标记,其特征在于,所述分子标记caps-4a-357/713的pcr扩增的程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸1min,33个循环;72℃终延伸10min,4℃保存。

4.根据权利要求1所述的小麦千粒重和粒长基因tags3-4a的分子标记,其特征在于,所述分子标记indel-4a-351的pcr扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,33个循环;72℃终延伸10min,4℃保存。

5.一种权利要求1-4所述的分子标记在分子辅助育种中的应用。

6.根据权利要求5所述的分子标记在分子辅助育种中的应用,其特征在于,利用所述分子标记鉴定基因tags3-4a是否为增加千粒重和粒长优异单倍型的小麦品种或品系,其方法包括以下步骤:

(1)提取待鉴定小麦样品的基因组dna;

(2)以分子标记caps-4a-357/713的上、下游引物对小麦基因组dna进行pcr扩增,将扩增产物用hpy188i酶切,电泳检测,获得分子量大小分别为537bp和265bp的两条目的条带或540bp和265bp的两条目的条带,或获得分子量大小为802bp、804bp或808bp的一条目的条带;将扩增产物用bsri酶切,电泳检测,获得分子量大小为181bp和621bp的两条目的条带或184bp和621bp的两条目的条带或187bp和621bp的两条目的条带,或获得分子量大小为804bp的一条目的条带;

(3)以分子标记indel-4a-351的上、下游引物对小麦基因组dna进行pcr扩增,将扩增产物电泳分离,获得扩增产物的分子量大小为198bp、200bp、201bp或204bp的任意一条目的条带;

(4)在扩增结果中,若待测样品采用分子标记caps-4a-357/713检测,用hpy188i酶切检测后获得分子量大小为537bp和265bp的两条目的条带或540bp和265bp的两条目的条带,且用bsri酶切检测后获得分子量大小为181bp和621bp的两条目的条带或184bp和621bp的两条目的条带,以及采用分子标记indel-4a-351检测后获得扩增产物的分子量大小为198bp、200bp或201bp的一条目的条带,则该样品为基因tags3-4a增加千粒重和粒长优异单倍型的小麦品种或品系。

7.根据权利要求6所述的分子标记在分子辅助育种中的应用,其特征在于,步骤(2)所述分子标记caps-4a-357/713的上游引物caps-4a-357/713-f如seqidno:2所示、下游引物caps-4a-357/713-r如seqidno:3所示。

8.根据权利要求6或7所述的分子标记在分子辅助育种中的应用,其特征在于,步骤(3)中所述分子标记indel-4a-351的上游引物indel-4a-351-f如seqidno:4所示、下游引物indel-4a-351-r如seqidno:5所示。

9.根据权利要求8所述的分子标记在分子辅助育种中的应用,其特征在于,步骤(2)和(3)中所述分子标记caps-4a-357/713和所述分子标记indel-4a-351中pcr扩增的体系均为20µl,分别包括2×taqpcrmastermix10µl、上下游引物各1µl、dna模板1µl、其余用ddh2o补足。

10.根据权利要求8所述的分子标记在分子辅助育种中的应用,其特征在于,步骤(2)中分子标记caps-4a-357/713的pcr扩增的程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸1min,33个循环;72℃终延伸10min,4℃保存;步骤(3)中分子标记indel-4a-351的pcr扩增的程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,33个循环;72℃终延伸10min,4℃保存。


技术总结
本发明公开了一种小麦千粒重和粒长基因TaGS3‑4A的分子标记及其应用,该分子标记由分子标记CAPS‑4A‑357/713和分子标记InDel‑4A‑351一对成套的分子标记组成;所述分子标记CAPS‑4A‑357/713的上游引物CAPS‑4A‑357/713‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示、下游引物CAPS‑4A‑357/713‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;所述分子标记InDel‑4A‑351的上游引物InDel‑4A‑351‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示、下游引物InDel‑4A‑351‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。本发明所公开的TaGS3‑4A基因的等位变异和成套分子标记CAPS‑4A‑357/713和分子标记InDel‑4A‑351能够有效筛选出基因TaGS3‑4A为增加小麦千粒重和粒长优异单倍型的小麦品种或品系,在小麦分子辅助育种中具有较大的应用空间。

技术研发人员:张玮;支丽雅;李俊明;纪军;苏倩男
受保护的技术使用者:中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心;河北经贸大学
技术研发日:2020.03.07
技术公布日:2020.06.23
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