本发明属于化学药物合成技术领域，具体地，涉及一种瑞德西韦侧链中间体及其制备方法，以及n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯作为合成remdesivir(gs-5734)过程中的中间体的应用。
背景技术：
瑞德西韦：remdesivir(gs-5734)由美国吉利德公司(gileadsciences)开发，是一种核苷类rna依赖的rna聚合酶(rdrp)竞争性抑制剂，其三磷酸核苷酸产物remdesivir-tp可以与rdrp竞争底物atp，因此可以干扰病毒vrna合成。而rdrp是一种广泛分布于正链和双链rna病毒的rna聚合酶。因此，remdesivir对丝状病毒(埃博拉等)、沙粒病毒(lassa热病毒等)、冠状病毒(sars和2019-ncov等)，都具有一定抑制效果，且对以mers为代表的cov具有较高抑制活性。
remdesivir(gs-5734)的结构如下所示：
在专利wo2016069826和专利wo2012012776中报道了remdesivir(gs-5734)的合成方法，其中在专利wo2016069826a1中提到使用侧链和丙酮叉保护的主链进行对接，然后在脱保护得到最终产物，具体的反应式如下所示：
可见，n-[(s)-(对硝基苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸酯是合成remdesivir的重要中间体。而且对硝基苯氧基基团为一个离去基团，在专利wo2016069826中提到，一个好的磷酸保护基团对反应很重要，同时将导致remdesivir的最后化合物的手性构成，产生大量磷酸的手性杂质，目前选择一个好脱去而不发生构型变化的磷酸保护基团是很有必要的，而且也是很关键的问题。
本申请人通过查阅文献，专利国际申请wo2010135569a和文献synthesisofdiastereomericallypurenucleotidephosphoramidates.joc201176(20)8311-8319中报道了sofosbuvir的合成方法，文献中使用n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸异丙酯是合成sofosbuvir的重要中间体。该中间体使用五氟苯酚作为离去官能团，它具有很好的离去性，而且可以保证产品不发生异构体化反应，使对接后的产品中磷酸的空间结构不发生变化，确保最终产品中药效的基团的空间构型得到保证。
本发明旨在解决现有制备remdesivir(gs-5734)产品中存在的技术缺陷。
技术实现要素：
针对上述缺陷，本发明的目的之一是开发了一种制备remdesivir(gs-5734)的关键中间体：n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯。
本发明的目的之一是开发制备关键中间体n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯的方法，具体地：
在一个方面，本发明提供了一种瑞德西韦侧链中间体及其制备方法(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯(化合物d)的方法，该方法包括：二氯磷酸苯酯(化合物a)与五氟苯酚(化合物b)在溶剂中在碱性条件下升温反应1-5小时，反应液降至室温，加入l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯(化合物c)，在碱性条件下升温反应1-3小时，反应后处理，使用有机溶剂精制得到化合物d，反应式如下所示：
作为一种优选方案，所述的碱性条件包括使用有机碱或无机碱。
作为进一步优选方案，所述的有机碱选自三乙胺、吗啡啉、n,n-二甲基氨基吡啶、吡啶，n,n-二异丙基异胺、dbu中的一种或几种。
作为最优选方案，所述的有机碱为三乙胺。
作为进一步优选方案，所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸氢钠中的一种或几种。
作为最优选方案，所述的无机碱为氢氧化钠。
作为一种优选方案，所述的溶剂选自四氢呋喃、乙腈、二甲基亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、二氯甲烷中的一种或几种。
作为进一步优化方案，所述的反应溶剂优选为二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃中的一种或几种。
作为一种优选方案，所述的反应温度为0～50℃，可选自1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃或50℃。
作为进一步优化方案，所述的反应温度优选为20-40℃。
作为更一步优化方案，所述的反应温度优选为25-35℃。
作为可选的实施方案，化合物a和化合物b在溶剂中在碱性条件下升温反应1小时、2小时、3小时、4小时或5小时。
作为可选的实施方案，加入化合物c后在溶剂中在碱性条件下升温反应1小时、2小时或3小时。
作为一种优化方案，二氯磷酸苯酯、五氟苯酚与l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯的摩尔比为1:1:1-1:1.5:1.5。
作为进一步优化方案，二氯磷酸苯酯、五氟苯酚与l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯的摩尔比为1:1:1-1:1.25:1.25。
作为一种优化方案，所述精制溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正己烷、正庚烷中的一种或多种复合溶剂。
作为进一步优化方案，所述精制溶剂选自甲叔醚与正己烷的混合溶剂。
在另一个方面，本发明提供了n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯作为制备remdesivir(gs-5734)过程中的中间体的应用，其中，remdesivir(gs-5734)的结构如下所示：
其中，n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯作为侧链片段，用于remdesivir(gs-5734)的过程。
本发明的有益效果：
在合成remdesivir(gs-5734)的过程中，选择n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯作为侧链片段，对反应有很大的改进，可以提高侧链片段的制备收率，降低侧链片段的成本，进而降低remdesivir的生产成本。
另外，使用五氟苯酚作为保护基团，可以提供侧链片段反应过程中的选择性，优化整个侧链片段合成的工艺简化，反应操作更加适合工业化生产。这对于目前严峻的新型冠状病毒(2019-ncov)疫情防治工作具有巨大的帮助。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明。实施例中所用原料、试剂和设备均为本领域技术人员熟知，且均为市场上能够购买到或容易获得或制得。
在本发明中，化合物n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯的制备路线如下：
该方法采用二氯磷酸苯酯与五氟苯酚酯在有机溶剂中，碱性条件下反应得到中间态，再加入丙氨酸(2-乙基丁基)酯盐酸盐进行对接反应，反应完，通过水洗除去盐类物质，再使用有机溶剂精制，得到高纯度的目标产物n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯。
在上述反应过程中，术语“二氯磷酸苯酯”(化合物a)，英文名phenyldichlorophosphate，c6h5cl2o2p，分子量210.98。pdcp相比于其它磷酰氯化合物具有非常高的磷酸化作用，是一个在有机合成中应用广泛的用于制备对称磷酸二酯化合物的磷酰试剂。
术语“五氟苯酚”(化合物b)，又称五氟苯酚，2,3,4,5,6-五氟苯酚，五氟酚，英文名pentafluorophenol。白色固体，溶于大多数有机溶剂，尤其是非质子溶剂。用作医药、农药、液晶材料中间体等。
“碱性条件下”是指使用有机碱或无机碱。
术语“有机碱”的定义是很广泛的，一般情况下，有机碱都含有氮原子，例如胺类化合物和含氮杂环化合物。应该理解，本发明并不限于本文举例的有机碱，任何合适的有机碱都在本发明涵盖的保护范围之内。
术语“无机碱”，是基本化学工业中产量最大的产品，是用途十分广泛的基本工业原料。应该理解，本发明并不限于本文给出的无机碱，任何合适的无机碱都在本发明涵盖的保护范围之内。
“有机溶剂”的种类较多，按其化学结构可分为10大类：①芳香烃类：苯、甲苯、二甲苯等；②脂肪烃类：戊烷、己烷、辛烷等；③脂环烃类：环己烷、环己酮、甲苯环己酮等；④卤化烃类：氯苯、二氯苯、二氯甲烷等；⑤醇类：甲醇、乙醇、异丙醇等；⑥醚类：乙醚、环氧丙烷等；⑦酯类：醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯等；⑧酮类：丙酮、甲基丁酮、甲基异丁酮等；⑨二醇衍生物:乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙二醇单丁醚等；⑩其他：乙腈、吡啶、苯酚等。
应该理解，本发明并不限于本文给出的有机溶剂，任何合适的有机溶剂都在本发明涵盖的保护范围之内。
实施例1
将二氯磷酸苯酯(50g,0.24mol)溶于200ml四氢呋喃中，加入五氟苯酚(43.6g,0.24mol)，滴加三乙胺(72.7g,0.72mol)，升温至35℃搅拌反应4小时，分批加入加入l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯盐酸盐(50.4g,0.24mol)，搅拌反应2h；反应完过滤,滤液使用饱和氯化钠溶液洗2次，无水硫酸镁干燥，减压浓缩至粘稠，加入乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂，升温溶清，在降温至0℃析晶2h，过滤，固体真空干燥，经得到化合物d，收率72％(纯度98.3％)
实施例2
将二氯磷酸苯酯(50g,0.24mol)溶于200ml二氯甲烷中，加入五氟苯酚(53.32g,0.288mol)，滴加三乙胺(80.0g,0.792mol)，升温至40℃搅拌反应1小时，分批加入加入l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯盐酸盐(55.4g,0.264mol)，搅拌反应2h；反应完过滤,滤液使用饱和氯化钠溶液洗2次，无水硫酸镁干燥，减压浓缩至粘稠，加入甲基叔丁基和正己烷的混合溶剂，升温溶清，在降温至0℃析晶2h，过滤，固体真空干燥，经得到化合物d，收率74％(纯度99.2％)
实施例3
将二氯磷酸苯酯(50g,0.24mol)溶于200ml乙腈中，加入五氟苯酚(53.32g,0.288mol)，滴加三乙胺(80.0g,0.792mol)，升温至50℃搅拌反应1小时，反应完，降温至10℃，分批加入加入l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯盐酸盐(65.5g,0.312mol)，搅拌反应,4h；反应完过滤，减压浓缩除去大部分溶剂，再加入乙酸乙酯，使用饱和氯化钠溶液洗2次，无水硫酸镁干燥，减压浓缩至粘稠，加入正庚烷，升温溶清，在降温至0℃析晶2h，过滤，固体真空干燥，经得到化合物d，收率65％(纯度99.0％)。
实施例4
将二氯磷酸苯酯(50g,0.24mol)溶于200ml二氯甲烷中，加入五氟苯酚(43.6g,0.24mol)，滴加三乙胺(80.0g,0.792mol)，升温至40℃搅拌反应2小时，反应完，降温至10℃，分批加入加入l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯盐酸盐(65.5g,0.312mol)，搅拌反应,4h；反应完过滤，滤液使用饱和氯化钠溶液洗2次，无水硫酸镁干燥，减压浓缩至粘稠，加入使用甲叔醚带两次残留二氯甲烷，在加甲叔醚和正己烷混合溶剂，升温溶清，在降温至0℃析晶2h，过滤，固体真空干燥，经得到化合物d，收率70％(纯度99.5％)。
实施例5
将二氯磷酸苯酯(50g,0.24mol)溶于200ml乙腈中，加入五氟苯酚(53.32g,0.288mol)，降温至0℃，分批加入碳酸氢钠(60.5g,0.72mol)，加完升温至50℃搅拌反应1小时，反应完，降温至10℃，分批加入加入l-丙氨酸-(2-乙基丁基)酯盐酸盐(65.5g,0.312mol)，搅拌反应,4h；反应完过滤，减压浓缩除去大部分溶剂，再加入乙酸乙酯，使用饱和氯化钠溶液洗2次，无水硫酸镁干燥，减压浓缩至粘稠，加入正庚烷，升温溶清，在降温至0℃析晶2h，过滤，固体真空干燥，经得到化合物d，收率67％(纯度98.1％)。
最后有必要在此说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。