混合八模板印迹聚合物的悬浮聚合制备方法及其应用与流程

本发明属于化学合成、分析化学、超分子化学及食品安全领域
技术领域：
，涉及一种混合八模板印迹聚合物的悬浮聚合制备方法及其应用。
背景技术：
：在我国，三唑类、菊酯类、三嗪类、氨基甲酸酯类、苯基脲类、苯并咪唑类、磺酰脲类和新烟碱类，这八类农药的产量和使用量都很大，与此同时也对生态环境和食品安全造成了很大的危害。为确保我国的生态环境及食品安全，建立针对此八类农药的快速、高效、准确的检测方法是环境及食品安全分析工作者的迫切任务。而由于这些物质在自然环境中的残留浓度很低，并且存在多种干扰物质，常规的检测分析方法难以对其进行有效的测定。另外，复杂基体所带来的基质效应也对此八类农药的分析提出了挑战影响，如何在样品处理过程中尽量减少基质效应对分析效果的影响是研究者面临的重大挑战。因此，探索一种识别性强、干扰小的富集方法具有十分重要的意义。分子印迹技术(molecularimprintedtechnology，mit)就是制备分子印迹聚合物的技术，也叫模板技术，是在模拟生物体内抗原与抗体之间相互作用的基础上发展起来的一种新型技术。通过模板分子、功能单体和交联剂的相互作用从而合成的具有三维空间结构的“受体”，其对模板分子有特异“记忆”功能，体现了高度的选择性、特殊的亲和性及卓越的分子识别能力。分子印迹聚合物(molecularimprintedpolymers，mips)的制备是将模板分子与功能单体、交联剂和引发剂等在特定的分散体系中进行共聚合，制得高交联刚性聚合物。然后通过物理或化学的方法除去mips中的模板分子，得到具有确定空间构型的空穴和功能基团在空穴内精确排布的聚合物。因此，mips具有从复杂样品中选择性提取目标分子或与其结构相似的某一类化合物的能力，适合作为固相萃取填料、固相微萃取涂层以及分子印迹薄膜来分离富集复杂样品中的痕量分析物，克服样品体系复杂、预处理繁琐等不利因素，达到样品分离净化的目的。悬浮聚合是在水性体系中，将模板分子、功能单体、交联剂等有机物分散成小液滴进行聚合，然后制备分子印迹聚合物微球的一种聚合方法。悬浮聚合法操作比较简便，制备的印迹聚合物粒径可控、比表面积大、形貌均一、吸附能力强和易功能化，这使得分子印迹聚合物的应用可以更加广泛。混合模板分子制备的mips可以缩短检测时间并降低检测成本，通过一次聚合可同时测定多类多种物质，因此有望得到更好的应用。然而，在混合多种模板分子制备mips的过程中，模板分子越多，制备的难度就越大，因为不同的模板分子之间存在竞争关系和自聚反应，而要控制上述各种因素，不仅要根据各物质之间的综合反应来选择适合的原料，并且在制备过程中要精确的控制各物质之间的用量，以合成理想的聚合产物。模板分子越多，种类越杂，在对各原料物质的判断选择上就愈加困难。技术实现要素：为解决现有技术中存在的以上不足，本发明旨在提供一种混合八模板印迹聚合物的悬浮聚合制备方法，以期能够合成同时对三唑类物质、菊酯类物质、三嗪类物质、氨基甲酸酯类物质、苯基脲类物质、苯并咪唑类物质、磺酰脲类物质和新烟碱类物质具有特异性识别的分子印迹聚合物，从而达到能够高通量的对食品、饲料以及其它样品中的残留农药进行检测分析的目的。为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：一种混合八模板印迹聚合物的悬浮聚合制备方法，包括依次进行的以下步骤：s1、功能单体及分散介质的选用利用软件构筑模型的方式，针对混合八模板物质来分别选取合适的功能单体和分散介质；其中，所述混合八模板物质由三唑类化合物、菊酯类化合物、三嗪类化合物、氨基甲酸酯类化合物、苯基脲类化合物、苯并咪唑类化合物、磺酰脲类化合物和新烟碱类化合物组成；s2、溶解将聚乙烯醇分散剂与混合八模板物质溶于分散介质中，然后加入功能单体，得溶液b；所述混合八模板物质中三唑类化合物、菊酯类化合物、三嗪类化合物、氨基甲酸酯类化合物、苯基脲类化合物、苯并咪唑类化合物、磺酰脲类化合物和新烟碱类化合物间的摩尔比为1～1.3:1～1.3:1～2:1～2:1～2:1～2:1～1.3:1～1.5；所述混合八模板物质与功能单体的摩尔比为1:0.5～10；所述混合八模板物质与分散介质的摩尔体积比为1mmol:1～15ml；s3、预聚合将溶液b于频率200hz下超声30～60min，然后4℃温度下放置8～16h，得产物c；s4、聚合向产物c中加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯和引发剂偶氮二异丁腈，于频率200hz下超声10～30min后制得混合物，然后将该混合物逐滴加入水相中，混合后得产物d；将产物d置于50～70℃的恒温水浴振荡器中，振荡反应12～24h，得产物e；s5、模板分子的洗脱将产物e静置得到聚合物产物f，用甲醇-乙酸混合溶液脱除混合八模板物质，然后用甲醇浸泡除去过量乙酸，得产物g；s6、干燥将产物g于45℃，真空度为0.04mpa条件下干燥6h，得最终产物h，即为混合八模板印迹聚合物。作为本发明的限定，步骤s1中，利用hyperchem软件模拟的方式，来进行功能单体的选择，其步骤如下所示：a1、利用hyperchem软件构筑模型，采用amber力场分别对功能单体、模板分子、功能单体-模板分子复合物结构进行优化，寻找分子模型的能量最低构象；a2、待收敛结束后，即rms＝0.01时，再采用半经验量化方法进一步拟合，其收敛标准为rms＝0.01，得模板分子与功能单体的单点能；a3、计算功能单体与模板分子之间的结合能，公式如下：δe＝epolymer-efunction-etemplate其中，δe为结合能，epolymer为功能单体-模板分子复合物单点能，efunction为功能单体单点能，etemplate为模板分子单点能；a4、对比各类功能单体与模板分子之间的结合能，选择与模板分子的结合能均在1.9～12.0kcal/mol范围内的作为功能单体。作为本发明的另一种限定，步骤s1中，利用gaussianview软件模拟的方式，来进行分散介质的选择，其步骤如下所示：b1、利用gaussianview软件构筑模型，对模板分子进行结构优化；b2、然后采用iefpcm极化连续介质模型对模板分子进行溶剂化能的计算，计算公式如下：|δe*|＝es-ev；其中，δe*是模板分子在分散介质中的溶剂化能，es是溶剂环境下功能单体与模板分子的相互作用能，ev是气相条件下功能单体与模板分子的相互作用能；b3、以溶剂化能为判断标准，选择溶剂化能小的作为分散介质。作为本发明的第三种限定，步骤s2中，聚乙烯醇分散剂占溶液b总质量的1.51％；每1mmol的混合八模板物质中添加分散介质5.23ml；产物a与混合八模板物质的溶解过程在搅拌条件下进行，其中搅拌速度为350r/min。作为本发明的还有一种限定，所述三唑类化合物为联苯三唑醇；所述菊酯类化合物为三氟氯氰菊酯；所述三嗪类化合物为莠去津；所述氨基甲酸酯类化合物为克百威；所述苯基脲类化合物为丁噻隆；所述苯并咪唑类类化合物为噻菌灵；所述磺酰脲类化合物为苄嘧磺隆；所述新烟碱类化合物为吡虫啉；所述功能单体为α-甲基丙烯酸；所述分散介质为氯仿。作为本发明的进一步限定，所述联苯三唑醇、三氟氯氰菊酯、莠去津、克百威、丁噻隆、噻菌灵、苄嘧磺隆、吡虫啉的摩尔比为1.3：1：2：1.3：1.3：2：1：1.3。作为本发明的再进一步限定，所述交联剂的摩尔量,与所述混合八模板物质总量间的摩尔比为15～40:1；当交联剂用量较低时，制备出来的聚合物交联度太低，没有一定的刚性，难以形成稳定的识别空穴，导致吸附容量降低；相反，交联度过高，进入孔穴的通道就会过于坚硬，无一定的弹性，造成模板分子难于进入孔穴，同时也不利于模板分子的洗脱；所述引发剂的摩尔量，与所述混合八模板物质总量间的摩尔比为0.4～1.2:1。若引发剂的用量过大，则浪费试剂，引发剂的用量过小，则不能引发聚合反应。作为本发明的更进一步限定，所述甲醇-乙酸混合溶液中，甲醇与乙酸的体积比为9:1。本发明还提供了一种混合八模板印迹聚合物的应用，它用于特异性吸附三唑类物质、菊酯类物质、三嗪类物质、氨基甲酸酯类物质、苯基脲类物质、苯并咪唑类物质、磺酰脲类物质、新烟碱类物质中的任意一种或多种。作为本发明的限定，它用于净化样品中的三唑类、菊酯类、三嗪类、氨基甲酸酯类、苯基脲类、苯并咪唑类、磺酰脲类、新烟碱类化合物中的任意一种或多种；或用于富集提取样品中残留的三唑类、菊酯类、三嗪类、氨基甲酸酯类、苯基脲类、苯并咪唑类、磺酰脲类、新烟碱类化合物中的任意一种或多种。由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的有益效果是：(1)本发明中所制备出来的混合八模板印迹聚合物稳定性好，耐酸碱，聚合物上具有多种特异性的空间位点，可同时实现对三唑类、菊酯类、三嗪类、氨基甲酸酯类、苯基脲类、苯并咪唑类、磺酰脲类和新烟碱类这八类化合物的特异性吸附，且吸附效率高、吸附量较大，从而有效解决了在对农药残留分析时的高通量问题，提高了检测效率，降低了检测成本。(2)本发明中在对功能单体、分散介质进行选择时，采用软件模拟的方式来实现，减少了研究人员的操作实验的次数，能够避免因不能保证每次实验条件完全一致以及研究人员在实验中的某些失误而导致的结果偏差，还减少了对实验原材料的浪费(选择实验一般需要进行多次不同实验，并对结果进行对比分析)。在降低成本、保证可靠性的前提下，能够针对采用的不同模板分子来精确选择相应的功能单体以及分散介质，从而确保制备过程的简单可操作性，为制备稳定高效的聚合物打下良好基础。(3)本发明中所制得的混合八模板印迹聚合物在使用时分散性好不需要研磨、过筛等繁琐的过程。综上所述，本发明本发明的制备方法作为一个整体，制备过程简单、条件易于控制、所制聚合物稳定性好，耐酸碱，分散性好，不需要研磨，可同时特异性吸附三唑类物质、菊酯类物质、三嗪类物质、氨基甲酸酯类物质、苯基脲类物质、苯并咪唑类物质、磺酰脲类物质和新烟碱类物质，且吸附效率高，选择性强，稳定性好，操作简便。本发明适用于制备混合八模板印迹聚合物，所制产品可进一步应用于食品、饲料、环境样品及其它样品中三唑类、菊酯类、三嗪类、氨基甲酸酯类、苯基脲类、苯并咪唑类、磺酰脲类和新烟碱类物质残留分析时样品的分离和富集。附图说明下面结合附图及具体实施例对本发明作更进一步详细说明。图1为联苯三唑醇化学结构式；图2为三氟氯氰菊酯化学结构式；图3为莠去津化学结构式；图4为克百威化学结构式；图5为丁噻隆化学结构式；图6为噻菌灵化学结构式；图7为苄嘧磺隆化学结构式；图8为吡虫啉化学结构式；图9为不同比例功能单体与混合八模板物质对预组装体系紫外光谱的影响曲线图；图10为转速和聚乙烯醇质量浓度对mip比表面积影响的立体图和等高面图；图11为混合八模板分子印迹固相萃取柱竞争性吸附性能图；图12分子印迹微球的扫描电镜图；图13混合标准溶液色谱分离图；图14玉米样品提取液色谱分离图；图15样品提取液经mip处理的洗脱液色谱分离图；图16样品加标提取液经mip处理的洗脱液色谱分离图；上述图11、图13和图16中：1、2-氨基苯并咪唑，2、噻菌灵，3、灭多威，4、西玛津，5、吡虫啉，6、啶虫脒，7、丁噻隆，8、灭草隆，9、克百威，10、莠去津，11、苄嘧磺隆，12、吡嘧磺隆，13、联苯三唑醇，14、烯唑醇，15、胺菊酯，16、三氟氯氰菊酯。具体实施方式以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明。应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和理解本发明，并不用于限定本发明。实施例1一种混合八模板印迹聚合物的悬浮聚合制备方法本实施例中混合八模板印迹聚合物的制备，图1至图8分别为模板物质的化学结构式，它按照如下的步骤顺序进行：s1、聚乙烯醇分散剂的制备将一定量的聚乙烯醇先放入凉的纯净水中溶胀6h。逐渐使水温升高到90℃后，保持60min，直到其完全溶解，溶解过程不断搅拌，使聚乙烯醇在水中充分分散，得产物a。s2、溶解分别将50ml产物a、0.1mol的联苯三唑醇、0.1mmol的三氟氯氰菊酯、0.1mmol莠去津、0.1mmol克百威、0.1mmol丁噻隆、0.1mmol噻菌灵、0.1mmol苄嘧磺隆和0.1mmol吡虫啉组成的混合八模板物质溶于分散介质中，再加入3.2mmol的功能单体，溶解过程在搅拌条件下进行，其中搅拌速度为350r/min，得溶液b；s3、预聚合将溶液b置于频率200hz下超声30min，放在4℃冰箱中12h，得产物c；s4、聚合向产物c中加入8mmol交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯和0.25mmol引发剂偶氮二异丁腈，在频率200hz下超声脱气15min制得混合物，然后将混合物逐滴加入水相中，混合后得产物d；将产物d置于65℃恒温水浴振荡器中振荡反应24h，得产物e；s5、模板分子的洗脱将产物e静置得到聚合物产物f，再用体积比为9:1的甲醇-乙酸混合溶液脱除混合八模板物质，然后用甲醇浸泡除去过量乙酸，得产物g；s6、干燥将产物g于45℃，真空度为0.04mpa条件下干燥6h，然后放入干燥器中备用，得最终产物h，即为混合八模板印记聚合物。其中，为了能够高效的制备出稳定性高、分散性好的印迹聚合物，在步骤s2进行之前，需要根据所具体采用的模板分子，来选取最合适的功能单体和分散介质。本实施例中，采用hyperchem软件模拟从理论上分析模板分子与功能单体的作用机制，进而选择功能单体，其具体步骤如下所示：a1、利用hyperchem软件构筑模型，采用amber力场分别对功能单体、模板分子、功能单体-模板分子复合物结构进行优化，寻找分子模型的能量最低构象。a2、待收敛结束后(rms＝0.01)，再采用半经验量化方法(pm3)进一步拟合，收敛标准也是rms＝0.01，待这两步计算完成后，分别得到功能单体、模板分子以及功能单体-模板分子复合物的单点能。a3、计算功能单体与模板分子之间的结合能(δe)，计算结果见表1。力场参数设置为：介电常数、范德华力、静电范围均为0.5。其具体公式如下所示:δe＝epolymer-efunction-etemplate(1)其中，δe为结合能,epolymer为功能单体-模板分子复合物单点能，efunction为功能单体单点能，etemplate为模板分子单点能。表1模板分子与功能单体结合能(δe,kcal/mol)注：maa为α-甲基丙烯酸，hema为甲基丙烯酸羟乙酯,am为丙烯酰胺,mam为甲基丙烯酰胺,4-vp为4-乙烯基吡啶,2-vp为2-乙烯基吡啶。a4、对比分析以上各类功能单体与模板分子之间的结合能，进行功能单体的选择。从表1数据可以看出，8种模板分子与mam、am和maa均有较强的结合能力，但由于聚乙烯醇(pva)和水与mam和am酰胺键之间形成氢键的能力太强，大大降低了分散剂的分散作用，导致油水分离的现象，聚合时形成块状聚合物，所以综合考虑选择maa作为功能单体。本实施例中，采用gaussianview软件模拟方式，以溶剂化能为依据来选择合适的分散介质。其具体步骤如下所示：b1、借助gaussianview软件构建模型，使用b3lyp密度泛函理论，以6-31g(d,p)为基组，对模板分子进行结构优化。b2、然后采用iefpcm极化连续介质模型对其进行溶剂化能的计算，计算结果见表2，其计算公式如下所示：|δe*|＝es-ev(2)其中，es是溶剂环境下功能单体与模板分子的相互作用能，ev是气相条件下功能单体与模板分子的相互作用能。b3、以溶剂化能为判断标准，选择分散介质。通常用δe*来反映分散介质与模板分子-功能单体预聚体之间的作用强度，而强的溶剂作用会减弱模板分子与功能单体之间的相互作用，从而降低分子印迹聚合物分子识别能力，不利于分子印迹聚合物的制备。由表2数据可知，八种模板分子与分散介质相互作用的强度为：二甲基亚砜>乙腈>甲醇>丙酮>四氢呋喃>氯仿>甲苯，但因为甲苯的毒性较大，后期处理较为麻烦，因此选择氯仿作为分散介质。表2模板分子在分散介质中的溶剂化能(kcal/mol)需要说明的：以上所提到的模板分子均选自联苯三唑醇、三氟氯氰菊酯、莠去津、克百威、丁噻隆、噻菌灵、苄嘧磺隆、吡虫啉八种农药中的任意一种。实施例2-6一种混合八模板印迹聚合物的悬浮聚合制备方法本实施例2-6分别为一种混合八模板印迹聚合物的悬浮聚合制备方法，制备过程与实施例1相同，不同之处仅在于：相应的技术参数有所不同，具体结果见表3。表3实施例7模板分子与功能单体比例确定试验本实施例对聚合过程中，混合八模板物质与功能单体的比例确定进行了探究。本实施例采用了紫外光谱法分别对不同配比的混合八模板物质-maa体系进行了紫外光谱扫描。分别配制一定浓度的maa-乙腈溶液以及混合八模板物质-乙腈溶液，同时配制功能单体与模板物质的混合乙腈溶液，使其摩尔比分别为1:0,1:2,1:4,1:6,1:8,1:10，在波长190-400nm之间进行紫外光谱扫描。图9中图a为不同比例f与t混合物的紫外扫描图；图b为图a中混合物最大吸收波长和对应吸光值变化曲线；其中：图a中t为混合八模板物质，f为功能单体，图a右上角标注为摩尔比；图b中1-5分别是t与f摩尔比为1:2～1:10。由图9中a图可知，混合物的最大吸收波长发生了红移，原因为混合八模板物质与功能单体形成了氢键。当吸光值变化趋近于平缓时，这就说明体系在平缓区域所对应的混合物在这个范围内趋向于稳定，这时进入平缓区域的转折点所对应的混合物比例是最优的比例。从图9中b图可知混合八模板物质与maa在摩尔比为1:4(图中对应点为2)之后吸光值和波长变化比较平缓。由此可以推断混合八模板物质:maa为1:4是聚合时最优浓度比。实施例8不同比例的混合八模板物质试验八种模板物质比例合适时，才能与功能单体形成能量更低，更稳定的聚合体系，从而使聚合物在洗脱目标物后拥有更多的特异性吸附位点。通过表4可知，混合八模板物质比例为2:2:1.3:1.3:1.3:1.3:1:1时吸附量大，吸附目标物效果较好。表4混合八模板不同比例对聚合物吸附性能的影响注：a为噻菌灵，b为莠去津，c为克百威，d为丁噻隆，e为吡虫啉，f为联苯三唑醇，g为苄嘧磺隆，h为三氟氯氰菊酯。实施例9悬浮聚合法制备分子印迹聚合物的优化试验一、单因素优化试验(1)分散剂质量浓度的优化分散剂质量浓度大，聚合物粒径小，单分散性好，粒径分布窄；分散剂浓度小，不但得不到理想的粒径，而且体系的稳定性也会变差。分别以0.5％pva、1％pva、1.5％pva、2％pva、2.5％pva为分散剂，maa为功能单体，氯仿为分散介质，乙二醇二甲基丙烯酸酯(edma)为交联剂，在一定搅拌速度下采用悬浮聚合热引发的方式合成mip，比较不同质量分数的分散剂对mip比表面积的影响。表5分散剂质量浓度对比表面积的影响聚合物分散剂用量(％)比表面积(m2/kg)mip10.517.63mip21.020.54mip31.525.44mip42.023.96mip52.522.54(2)分散介质用量的优化分散介质用量增加，即相比(分散介质与单体相的比)增大，单体液滴不易聚集，平均粒径变小，但分布变宽，且从经济角度考虑，应将分散介质用量控制在一定范围。分别以3ml、5ml、7ml、9ml的氯仿为分散介质，maa为功能单体，edma为交联剂，在一定搅拌速度下采用悬浮聚合热引发的方式合成mip，比较不同用量的分散介质对mip比表面积的影响。表6分散介质用量对比表面积的影响聚合物分散介质用量(ml)比表面积(m2/kg)mip62不规则块状mip7528.32mip8722.73mip9920.56(3)搅拌速度的优化改变搅拌速度可控制聚合物微粒的大小。搅拌速度增大，聚合物粒径变小，但当搅拌速度过高时，液滴碰撞聚并几率增加，使得聚合物颗粒粒径变大，因此，应选择合适的搅拌速度，减小粒径，提高比表面积。分别设置搅拌速度为100r/min、200r/min、300r/min、400r/min，maa为功能单体，氯仿为分散介质，edma为交联剂，采用悬浮聚合热引发的方式合成mip，比较不同搅拌速度对mip比表面积的影响。表7转速高低对比表面积的影响聚合物转速(r/min)比表面积(m2/kg)mip10100不规则块状mip1120020.54mip1230025.44mip1340023.65二、响应面法优化mip合成工艺条件通过单因素试验发现分散剂质量浓度、分散介质用量和搅拌速度等因素对聚合物比表面积都有一定的影响，而且这几者之间可能存在一定的交互影响。本试验采用design-expert8.0.6软件中的box-behnken中心设计方法，对悬浮聚合制备mip的合成过程进行优化，试验因素水平设计见表8。把试验方案输入软件中，试验设计及结果见表9。表8试验因素水平表表9试验设计和结果表10试验方差分析表对模型进行方差分析，见表10，结果表明y1模型p＜0.01，响应面模型达到显著水平。影响表面积因素的主次顺序为c＞a＞b，其中因素a(分散剂含量(％))、因素b(分散介质(ml))和因素c(搅拌速度(r/min))影响均非常显著(p＜0.01)；所有交互项的p均大于0.05，说明交互作用不显著；失拟项不显著，表明二次方程预测值与实际值吻合度较高。由图10可知，比表面积随着转速的增大而增加，而随着聚乙烯醇质量浓度的增加先增加后减小；响应曲面沿x3方向变化较快，而沿x1方向变化较慢，说明在试验水平下转速对比表面积的影响要比聚乙烯醇显著。应用design-expert8.0.6软件对影响聚合物比表面积(y1)综合分析得到最佳工艺：聚乙烯醇1.51％，氯仿5.23ml，搅拌速度350r/min，比表面积为35.0014m2/kg。以该工艺参数进行3次验证试验取其平均值为34.8800m2/kg与模型预测值偏差为1.44％，说明模型优化结果为可信确定的最优工艺。实施例10竞争性吸附试验本实施例考察分子印迹聚合物的特异性吸附能力，用制备好的聚合物对八类农药及其结构类似物的吸附性能进行了测试。取20mgmip放入25ml具塞比色管中，然后加入5ml一定浓度的2-氨基苯并咪唑、噻菌灵、灭多威、西玛津、吡虫啉、啶虫脒、丁噻隆、灭草隆、克百威、苄嘧磺隆、吡嘧磺隆、莠去津、烯唑醇、联苯三唑醇、胺菊酯和三氟氯氰菊酯乙腈溶液，混合物在25℃下恒温振荡24h，收集上清液过膜，供hplc分析。由图11可知，聚合物对16种农药均有吸附，但吸附大小存在差异，一般情况下模板分子较其结构类似物吸附效果好；小分子农药较大分子吸附量大。其原因为印迹聚合物的特异吸附性能，小分子物质在吸附过程中空间位阻较小。实施例11悬浮聚合微球表征—扫描电镜分析本实施例将真空干燥保存样品用导电胶粘贴在扫描电镜样品台上，然后进行离子溅射喷金，厚度60nm，再进行电镜观察，其在微米级范围内呈现规则球形，粒径为85μm左右，形态均匀圆润，结果见图12。实施例12混合八模板分子印迹聚合物微球在玉米样品检测中的应用一、样品处理(1)样品的前处理称取3.000g样品，研碎或切碎，置于50ml离心管中，果蔬样品中加入过量无水硫酸钠，除去过多的水分，谷物中不加，用20ml乙腈作为提取剂(分两次提取)，搅拌，超声20min，然后离心(7000r/min，5min)，吸取1ml上清液用印迹聚合物进行萃取，用10ml水淋洗，再用5ml10％乙酸-甲醇溶液洗脱，离心收集洗脱液，经0.45μm微孔滤膜过滤后供hplc分析。(2)hplc的测定条件色谱柱：xbridgec18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相是乙腈-0.02％磷酸水溶液；采用了溶剂梯度和波长梯度相结合的方式，具体见表11和表12；柱温为30℃；进样量为20μl。表11梯度洗脱程序表12波长梯度参数程序组分保留时间/min程序时间/min检测波长/nm通道2-氨基苯并咪唑5.810210a噻菌灵7.006.25300a灭多威7.837.20235a西玛津9.128.50210a吡虫啉11.5410.30270a啶虫脒12.6011.98245a丁噻隆16.4913.50255a灭草隆15.3716.90250a克百威16.3615.90210a莠去津16.8416.66225a苄嘧磺隆17.3617.20235a吡嘧磺隆18.1517.78245a联苯三唑醇19.3118.35255a烯唑醇19.9719.70250a胺菊酯24.6521.00225a三氟氯氰菊酯25.6525.36210a其中，玉米样品提取液的高效液相色谱图如图14所示，玉米提取液经mip处理后的洗脱液高效液相色谱图如图15所示，玉米加标提取液经mip处理后的洗脱液高效液相色谱图见图16。分子印迹萃取材料利用非共价键对目标物特异性吸附，通过淋洗将样品中杂质成分去除，然后用洗脱剂将目标物洗脱下来。从图14和15中对比可知，分子印迹萃取材料对杂质不具有吸附能力，样品净化效果好。从图16可知，分子印迹萃取材料只对模板物质及其结构类似物有吸附能力，表明聚合物从组成复杂的样品中特异性分离富集目标物的优越性能。二、线性关系与检出限将2-氨基苯并咪唑、噻菌灵、灭多威、西玛津、吡虫啉、啶虫脒、丁噻隆、灭草隆、克百威、苄嘧磺隆、吡嘧磺隆、莠去津、烯唑醇、联苯三唑醇、胺菊酯和三氟氯氰菊酯分别配制成质量浓度为0.01-50mg/l的一系列标准溶液，绘制标准曲线。线性关系和检出限如表13所示。表1316种农药的线性关系及检出限由表13可知，16种农药有良好的线性相关性。16种农药的线性范围在0.03-50mg/l之间，检出限(由s/n＝3确定)在0.01-0.06mg/l之间，16种农药的线性相关系数在0.9967-1.0000之间。三、八模板分子印迹聚合物的回收率和精密度试验对黄瓜、玉米、柑橘、香蕉和花生仁样品进行1mg/l和10mg/l两个水平的加标回收率试验，结果见表14所示，16种农药平均回收率(ar)在82.3％-98.7％之间，相对标准偏差(rsd)≤5.35％。由此说明制备的混合八模板分子印迹聚合物对三唑类、菊酯类、三嗪类、氨基甲酸酯类、苯基脲类、苯并咪唑类、磺酰脲类和新烟碱类农药的回收率高，精密度好。表14样品回收率和精密度试验需要说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域技术人员来说，其依然可以对上述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12