本发明涉及生物提取技术领域，具体涉及一种金银花亚麻酸的制备方法。
背景技术：
金银花为忍冬科多年生半常绿缠绕性木质藤本植物忍冬lonicerajaponicathund的花蕾，含亚麻酸、异绿原酸、绿原酸、肌醇、挥发油等成分。α-亚麻酸(α-linolenicacid，α-lna，全顺式9,12,15-十八碳三烯酸)对于人类决不是可有可无的，而是绝对不可缺少的，它对于人类的健康有着极其重要的作用。α-亚麻酸是一种多不饱和脂肪酸，是一种必需脂肪酸。α-亚麻酸是一种生命核心物质，是构成人体脑细胞和组织细胞的重要成分，是人类一生中每天都需要的一种营养素。α-亚麻酸是人体自身不能合成的，也是无法由其他营养来合成的，必须要依靠膳食来获得。α-亚麻酸属于ω-3系列(或n-3系列)脂肪酸，它进入人体后，在酶(脱氢酶和碳链延长酶)的催化下，转化成epa(eicosapentaenoicacid，epa，二十碳五烯酸)和dha(docosahexaenoicacid，dha，二十二碳六烯酸)，这样才会被吸收。α-亚麻酸、epa和dha统称为ω-3系列(或n-3系列)脂肪酸，α-亚麻酸是前体或母体，而epa和dha是α-亚麻酸的后体或衍生物。α-亚麻酸，存在于食用油中的时候是一种食品，而制做成胶囊时却是一种保健品。α-亚麻酸主要存在于亚麻籽油、紫苏籽油之中。许多科学家研究证明：人体饱和脂肪酸过剩和摄入过多的反式脂肪酸是导致癌症、心脑血管病等许多疾病的直接原因，增加摄入α-亚麻酸可以显著地改变这种状态。α-亚麻酸基本功能主要表现为：增强智力，增强免疫力，保护视力，降低血脂，降低血压，降低血糖，抑制出血性脑疾病和血栓性疾病，抑制癌症的发生和转移，预防心肌梗塞和脑梗塞，预防过敏性疾病，预防炎症以及减缓人体衰老等。α-亚麻酸有益于预防和治疗癌症、心脑血管病、糖尿病、类风湿病、皮炎症、抑郁症、精神分裂症、老年痴呆症、过敏、哮喘、肾病和慢性塞性肺炎等。人体一旦缺乏α-亚麻酸，就会引起人体脂质代谢紊乱，导致免疫力降低、健忘、疲劳、视力减退、动脉粥样硬化等症状的发生。尤其是婴幼儿、青少年，如果缺乏α-亚麻酸，就会严重影响其智力和视力的发育。
技术实现要素：
本发明的目的在于提出一种金银花亚麻酸的制备方法，具有工艺先进、操作简便、过滤容易、成本低、无有害溶剂、纯度高、得率高，适用于工业化大批量生产等优点。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种金银花亚麻酸的制备方法，包括以下步骤：
s1.原料的处理：将金银花洗净、干燥、粉碎后通过超微粉碎机粉碎至1000目以下，得到金银花粉，备用；
s2.超临界流体萃取：将金银花粉经过超临界流体萃取得到萃取液；
s3.提取：向萃取液中加入石油醚/二甲亚砜混合溶剂，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，水相继续加入等体积二甲亚砜，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，合并2次有机相，得到提取物；
s4.脱色：向提取物中加入活性炭，搅拌脱色后，过滤，得到透明提取液；
s5.再提取：向透明提取液中加入乙酸乙酯/甲醇溶液，充分振荡后，静置，过滤，分液留用水相；
s6.浓缩：将水相低温浓缩后得到浓缩液；
s7.纯化：将浓缩液通过大孔树脂吸附柱进行饱和吸附，吸附后用乙酸乙酯/石油醚溶液洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥后制得亚麻酸。
作为本发明的进一步改进，步骤s1中所述超微粉碎机参数为：进料粒度小于10mm，总功率为10-15kw，主轴转速5000-5800r/min。
作为本发明的进一步改进，步骤s2中所述超临界流体萃取的条件为：萃取压力：20-25mpa；萃取温度：42-55℃；co2流量：5-10l/h；萃取时间：1-3h；夹带剂：石油醚和乙酸乙酯。
作为本发明的进一步改进，所述夹带剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为1：(1-2)。
作为本发明的进一步改进，步骤s3中所述石油醚/二甲亚砜混合溶剂中石油醚和二甲亚砜的体积比为2：(1-4)。
作为本发明的进一步改进，步骤s4中所述活性炭和提取物的质量体积比1：(5-10)。
作为本发明的进一步改进，步骤s5中所述乙酸乙酯/甲醇溶液中乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1：(1-3)。
作为本发明的进一步改进，步骤s6中所述低温浓缩方法为在45-60℃的温度下加热浓缩至相对密度为1.5-2。
作为本发明的进一步改进，步骤s7中所述乙酸乙酯/石油醚中乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：(1-3)。
作为本发明的进一步改进，步骤s7中所述乙酸乙酯/石油醚中乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：(1-3)。
本发明具有如下有益效果：本发明对金银花物料进行超微粉碎机粉碎，得到比普通粉碎更细的粉末，得到的粉末为已破壁的金银花物料粉末，不氧化，粒度分布均匀，破壁率可达92％；并可防止有效待提取成分由于粉碎发热而变质；在粉碎过程中不产生局部过热现象，甚至可在低温或深低温状态下进行，粉碎速度快，因而能最大限度地保留金银花粉体中的生物活性成分，生产过程全密闭，没有粉尘益出，符合gmp要求，金银花物料无损耗。
本发明通过超微粉碎机粉碎得到已打破细胞壁的金银花物料粉末，有效待提取成分直接暴露出来，采用超临界流体萃取出有效挥发油、黄酮等油溶性物质，减少去离子水的消耗，有利于提取有效成分，提高浸提效率。
此外，本发明在超临界流体萃取处理工序中，由于金银花微粉已经破壁，有效挥发油、黄酮等油溶性物质全部溶出。用石油醚/二甲亚砜混合溶剂萃取出亚麻酸后，用活性炭脱色，继续用甲醇水溶液萃取，将大部分亚麻酸萃取出来，浓缩液用强极性大孔型大孔树脂柱进行饱和吸附属于成熟的生物制药除杂技术，应用于本工艺中，能保证本发明产品的纯度。
据上所述，本发明的技术效果是：本发明的方法具有工艺先进、操作简便、过滤容易、成本低、无有害溶剂、纯度高、得率高，适用于工业化大批量生产等优点。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1一种金银花亚麻酸的制备方法
包括以下步骤：
s1.原料的处理：将金银花洗净、干燥、粉碎后通过超微粉碎机粉碎至1000目以下，得到金银花粉，备用；
超微粉碎机参数为：进料粒度小于10mm，总功率为10kw，主轴转速5000r/min；
s2.超临界流体萃取：将金银花粉经过超临界流体萃取得到萃取液；
超临界流体萃取的条件为：萃取压力：20mpa；萃取温度：42℃；co2流量：5l/h；萃取时间：1h；夹带剂：石油醚和乙酸乙酯，体积比为1：1；
s3.提取：向萃取液中加入石油醚/二甲亚砜混合溶剂(石油醚和二甲亚砜的体积比为2：1)，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，水相继续加入等体积二甲亚砜，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，合并2次有机相，得到提取物；
s4.脱色：向50ml提取物中加入10g活性炭，搅拌脱色后，过滤，得到透明提取液；
s5.再提取：向透明提取液中加入乙酸乙酯/甲醇溶液(乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1：1)，充分振荡后，静置，过滤，分液留用水相；
s6.浓缩：将水相低温浓缩后得到浓缩液；低温浓缩方法为在45℃的温度下加热浓缩至相对密度为1.5；
s7.纯化：将浓缩液通过大孔树脂吸附柱进行饱和吸附，吸附后用乙酸乙酯/石油醚溶液(乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：1)洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥后制得亚麻酸，亚麻酸的含量为96.5％。
实施例2一种金银花亚麻酸的制备方法
包括以下步骤：
s1.原料的处理：将金银花洗净、干燥、粉碎后通过超微粉碎机粉碎至1000目以下，得到金银花粉，备用；
超微粉碎机参数为：进料粒度小于10mm，总功率为15kw，主轴转速5800r/min；
s2.超临界流体萃取：将金银花粉经过超临界流体萃取得到萃取液；
超临界流体萃取的条件为：萃取压力：25mpa；萃取温度：55℃；co2流量：10l/h；萃取时间：3h；夹带剂：石油醚和乙酸乙酯，体积比为1：2；
s3.提取：向萃取液中加入石油醚/二甲亚砜混合溶剂(石油醚和二甲亚砜的体积比为2：4)，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，水相继续加入等体积二甲亚砜，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，合并2次有机相，得到提取物；
s4.脱色：向100ml提取物中加入10g活性炭，搅拌脱色后，过滤，得到透明提取液；
s5.再提取：向透明提取液中加入乙酸乙酯/甲醇溶液(乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1：3)，充分振荡后，静置，过滤，分液留用水相；
s6.浓缩：将水相低温浓缩后得到浓缩液；低温浓缩方法为在60℃的温度下加热浓缩至相对密度为2；
s7.纯化：将浓缩液通过大孔树脂吸附柱进行饱和吸附，吸附后用乙酸乙酯/石油醚溶液(乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：3)洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥后制得亚麻酸，亚麻酸的含量为97.2％。
实施例3一种金银花亚麻酸的制备方法
包括以下步骤：
s1.原料的处理：将金银花洗净、干燥、粉碎后通过超微粉碎机粉碎至1000目以下，得到金银花粉，备用；
超微粉碎机参数为：进料粒度小于10mm，总功率为11kw，主轴转速5200r/min；
s2.超临界流体萃取：将金银花粉经过超临界流体萃取得到萃取液；
超临界流体萃取的条件为：萃取压力：21mpa；萃取温度：45℃；co2流量：7l/h；萃取时间：2h；夹带剂：石油醚和乙酸乙酯，体积比为1：1；
s3.提取：向萃取液中加入石油醚/二甲亚砜混合溶剂(石油醚和二甲亚砜的体积比为1：1)，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，水相继续加入等体积二甲亚砜，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，合并2次有机相，得到提取物；
s4.脱色：向60ml提取物中加入10g活性炭，搅拌脱色后，过滤，得到透明提取液；
s5.再提取：向透明提取液中加入乙酸乙酯/甲醇溶液(乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1：2)，充分振荡后，静置，过滤，分液留用水相；
s6.浓缩：将水相低温浓缩后得到浓缩液；低温浓缩方法为在50℃的温度下加热浓缩至相对密度为1.7；
s7.纯化：将浓缩液通过大孔树脂吸附柱进行饱和吸附，吸附后用乙酸乙酯/石油醚溶液(乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：2)洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥后制得亚麻酸，亚麻酸的含量为96.7％。
实施例4一种金银花亚麻酸的制备方法
包括以下步骤：
s1.原料的处理：将金银花洗净、干燥、粉碎后通过超微粉碎机粉碎至1000目以下，得到金银花粉，备用；
超微粉碎机参数为：进料粒度小于10mm，总功率为14kw，主轴转速5600r/min；
s2.超临界流体萃取：将金银花粉经过超临界流体萃取得到萃取液；
超临界流体萃取的条件为：萃取压力：24mpa；萃取温度：50℃；co2流量：8l/h；萃取时间：2h；夹带剂：石油醚和乙酸乙酯，体积比为1：2；
s3.提取：向萃取液中加入石油醚/二甲亚砜混合溶剂(石油醚和二甲亚砜的体积比为2：3)，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，水相继续加入等体积二甲亚砜，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，合并2次有机相，得到提取物；
s4.脱色：向80ml提取物中加入10g活性炭，搅拌脱色后，过滤，得到透明提取液；
s5.再提取：向透明提取液中加入乙酸乙酯/甲醇溶液(乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1：2)，充分振荡后，静置，过滤，分液留用水相；
s6.浓缩：将水相低温浓缩后得到浓缩液；低温浓缩方法为在55℃的温度下加热浓缩至相对密度为1.8；
s7.纯化：将浓缩液通过大孔树脂吸附柱进行饱和吸附，吸附后用乙酸乙酯/石油醚溶液(乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：2)洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥后制得亚麻酸，亚麻酸的含量为97.0％。
实施例5一种金银花亚麻酸的制备方法
包括以下步骤：
s1.原料的处理：将金银花洗净、干燥、粉碎后通过超微粉碎机粉碎至1000目以下，得到金银花粉，备用；
超微粉碎机参数为：进料粒度小于10mm，总功率为12.5kw，主轴转速5400r/min；
s2.超临界流体萃取：将金银花粉经过超临界流体萃取得到萃取液；
超临界流体萃取的条件为：萃取压力：22.5mpa；萃取温度：50℃；co2流量：7.5l/h；萃取时间：2h；夹带剂：石油醚和乙酸乙酯，体积比为1：1；
s3.提取：向萃取液中加入石油醚/二甲亚砜混合溶剂(石油醚和二甲亚砜的体积比为2：3)，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，水相继续加入等体积二甲亚砜，充分振荡后，静置分层，将有机相分液，合并2次有机相，得到提取物；
s4.脱色：向75ml提取物中加入10g活性炭，搅拌脱色后，过滤，得到透明提取液；
s5.再提取：向透明提取液中加入乙酸乙酯/甲醇溶液(乙酸乙酯和甲醇溶液的体积比为1：2)，充分振荡后，静置，过滤，分液留用水相；
s6.浓缩：将水相低温浓缩后得到浓缩液；低温浓缩方法为在55℃的温度下加热浓缩至相对密度为1.72；
s7.纯化：将浓缩液通过大孔树脂吸附柱进行饱和吸附，吸附后用乙酸乙酯/石油醚溶液(乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：2)洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥后制得亚麻酸，亚麻酸的含量为96.8％。
与现有技术相比，本发明对金银花物料进行超微粉碎机粉碎，得到比普通粉碎更细的粉末，得到的粉末为已破壁的金银花物料粉末，不氧化，粒度分布均匀，破壁率可达92％；并可防止有效待提取成分由于粉碎发热而变质；在粉碎过程中不产生局部过热现象，甚至可在低温或深低温状态下进行，粉碎速度快，因而能最大限度地保留金银花粉体中的生物活性成分，生产过程全密闭，没有粉尘益出，符合gmp要求，金银花物料无损耗。
本发明通过超微粉碎机粉碎得到已打破细胞壁的金银花物料粉末，有效待提取成分直接暴露出来，采用超临界流体萃取出有效挥发油、黄酮等油溶性物质，减少去离子水的消耗，有利于提取有效成分，提高浸提效率。
此外，本发明在超临界流体萃取处理工序中，由于金银花微粉已经破壁，有效挥发油、黄酮等油溶性物质全部溶出。用石油醚/二甲亚砜混合溶剂萃取出亚麻酸后，用活性炭脱色，继续用甲醇水溶液萃取，将大部分亚麻酸萃取出来，浓缩液用强极性大孔型大孔树脂柱进行饱和吸附属于成熟的生物制药除杂技术，应用于本工艺中，能保证本发明产品的纯度。
据上所述，本发明的技术效果是：本发明的方法具有工艺先进、操作简便、过滤容易、成本低、无有害溶剂、纯度高、得率高，适用于工业化大批量生产等优点。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。