技术特征：
1.一种高效裂解性噬藻体，其特征在于：该噬藻体命名为yongm，于2020年1月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.18383。2.根据权利要求1所述的一种高效裂解性噬藻体，该噬藻体具有如下生物学特征：yongm是以念珠藻fachb-596为靶标分离获得的噬藻体；yongm具有呈二十面体近似球形的头部，直径62nm(
±
5nm)，以及可收缩的尾部，尾部长度为93nm(
±
10nm)。3.根据权利要求1所述的一种高效裂解性噬藻体，该噬藻体具有如下生物学特征：yongm高效裂解念珠藻，在念珠藻藻平板上形成大而透明的噬藻斑，24小时即可使念珠藻藻液黄化、澄清化；yongm的宿主范围具有广谱性，除裂解念珠藻外，还能感染、裂解多种微囊藻、色球藻、颤藻；yongm的dna聚合酶基因序列不存在于已有数据库中，是一株未被报导的新的噬藻体。4.一种根据权利要求1所述的高效裂解性噬藻体的分离纯化方法，其特征在于具体包括如下步骤：(1)念珠藻nostoc sp.fachb-596的培养取5ml念珠藻nostoc sp.fachb-596的藻液，以1∶100的体积比稀释至装有500ml bg11液体培养基的锥形瓶中，放置于温度25℃，光照强度为2000lx，光暗周期为12h∶12h的光照培养箱中，10天左右即得到对数期fachb-596藻液；(2)噬藻体的富集、筛选水样处理：采集云南滇池各处表层水样，并尽快带回实验室处理；水样在4℃条件下12000g离心20分钟去除沉淀，取上清液进行实验；取与样品数对应数量的无菌锥形瓶，每个锥形瓶中加入：80ml经上述处理的水样上清液+20ml的5
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的bg11培养基+20ml对数期fachb-596藻液。混匀后光照培养箱中培养，每天手动摇藻2-3次，同时用纯水机取的水代替水样上清作为对照；将黄化的培养液经12000g离心10分钟，取上清，依次经0.45μm和0.22μm硝酸纤维素滤膜过滤，取滤液加到10倍体积的对数生长期的fachb-596藻液中混匀、培养至出现明显黄化现象，即得到初筛感染液；(3)噬藻体的初步纯化制备浓缩藻液：取对数期fachb-596藻液，10000g离心10分钟，保留相当于原体积的1/20-1/40的上清液悬浮沉淀；在超净台中将融化后的含0.7％琼脂的bg11培养基分装成8ml/管，置于45℃恒温水浴中30min至温度恒定。取步骤(2)获得的初筛含有病毒的感染液用bg11液体培养基做系列梯度稀释成10-1-10-6
，取各稀释度的稀释液按体积比1∶9的比例添加到0.9ml浓缩的fachb-596藻液中，混匀，置于转速约70rpm摇床中，25℃孵育20-30分钟，使病毒充分吸附到藻细胞；从45℃恒温水浴中取一份8ml/管的含0.7％琼脂的bg11培养基，立即用纸搽干净管外的水，将上述病毒-藻混合液倒入管中，迅速用旋涡振荡器震荡3-5s使其充分混匀后，立即倒至含1.5％的琼脂的bg11培养基底层平板上，其中平板直径为110mm左右，待其凝固后用封口膜封口，在皿和盖交界处的封口膜处戳孔后，倒置于2000lx，25℃，光照周期12h/12h的培养箱中培养，并观察噬藻斑的形成；挖取最大稀释度下所形成的独立的噬藻斑，悬浮于500μl的bg11培养基中，放置于4℃冰箱过夜或25℃避光孵育1小时，使其彻底释放出噬藻体，12000g离心10分钟，取上清即得到第一代噬藻体；
(4)噬藻体的进一步纯化取上述步骤(3)得到的第一代噬藻体，用bg11培养基系列梯度稀释成10-1
至10-6
，重复进行上述步骤(3)噬藻斑实验至少3次，得到形状、大小均一的噬藻斑，挖取单个噬藻斑，将其悬浮于1ml bg-11培养基中，置于4℃冰箱过夜或25℃避光孵育1小时，10000g离心10-20分钟，取上清，即为噬藻体yongm的悬浮液；(5)噬藻体的扩大培养取上述步骤(4)得到的纯化的噬藻体yongm的悬浮液1ml加入9ml新鲜培养的对数期或平台期的fachb-596藻液中，混匀，光照培养箱中培养24小时后藻液黄化即得到噬藻体yongm-藻培养裂解液，取裂解液12000g离心10分钟，取上清。将上清按照1∶10的比例添加到新鲜培养的对数期的fachb-596藻液中，混匀，光照培养箱中培养24小时后藻液黄化，如此重复扩大培养；(6)噬藻体悬液制备取步骤(5)制备的噬藻体-藻培养裂解液离心4℃、10000g、10min，取上清液，依次经过0.45μm、0.22μm孔径硝酸纤维素滤膜过滤，即为噬藻体yongm悬液。5.权利要求1所述的一种高效裂解性噬藻体的应用，其特征在于：yongm对念珠藻fachb-596、微囊藻microcystis aeruginosa fachb-905、fachb-915、m.wesenbergii fachb-908、fachb-929、m.viridis fachb-979、m.flos-aquae fachb-1028、色球藻fachb-193、水华鱼腥藻anabaena flos-aquae fachb-245、浮游颤藻oscillatoria planctonica fachb-708、阿氏浮丝藻planktothrix agardhii fachb-920具有裂解作用，其中对念珠藻fachb-596、水华鱼腥藻anabaena flos-aquae fachb-245、色球藻fachb-193、浮游颤藻oscillatoria planctonica fachb-708具有强而高效的裂解作用。
技术总结
本发明公开了一种念珠藻高效裂解性噬藻体及其分离方法和应用，特点是该噬藻体是一种新的肌尾科Myoviridae噬藻体，命名为YongM，于2020年1月13日保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC NO.18383。YongM具有高效、广谱的特点，除高效裂解念珠藻外，可感染并裂解多种微囊藻、色球藻、水鱼腥藻、浮游颤藻、阿氏浮丝藻。YongM可在24小时内使念珠藻FACHB
技术研发人员：秦伟南 李登峰 许丽华 林威 童贻刚
受保护的技术使用者：宁波大学
技术研发日：2020.05.27
技术公布日：2021/12/2