本发明涉及食品安全领域，具体涉及一种热损伤沙门氏菌培养基及其制备方法。
背景技术：
：沙门氏菌(salmonella)是一种常见的食源性致病菌，属肠杆菌科，革兰氏阴性杆菌。感染沙门氏菌后的典型症状包括发热、恶心、呕吐、腹泻及腹部绞痛等，严重甚至会危及生命。在食品生产加工工业中，为了增强产品的安全性和稳定性，热杀菌一直是食品工业中极为重要的杀菌钝酶方式。在热加工过程中一部分细菌会由于受热不均而受到损伤，在检测的过程中如果忽略这一因素，会导致结果失真。而污染了沙门氏菌的食品在热加工后，部分沙门氏菌可能会由于遭受不同程度的热损伤而处于亚致死状态。热损伤菌在适宜的条件下可进行修复，重新具有正常未损伤细菌的生理生化特性和致病性。在适宜条件下可修复的存在于食品中的损伤沙门氏菌对人们的健康造成了巨大的威胁，因此修复热损伤沙门氏菌降低沙门氏菌的漏检率具有非常重要的意义。技术实现要素：基于上述问题，本发明的目的在于提供一种可快速修复富集食品中热损伤沙门氏菌的液体增菌培养基及其制备方法，可以检出按照现有gb4789.4-2016食品安全国家标准沙门氏菌检验方法无法检出的热损伤沙门氏菌，降低漏检率，推进后续沙门氏菌的检测工作。本发明的目的通过下述技术方案实现：一种热损伤沙门氏菌培养基，以质量份数计，其原料配方组成为：蛋白胨3-15份，葡萄糖2-10份，牛胆盐5-30份，磷酸氢二钠1-15份，磷酸二氢钾0.1-10份，煌绿0.001-1份，3，3-硫代二丙酸(tdpa)0.1-10份，氯化镁0.01-5份，丙酮酸钠0.01-15份，catalase(过氧化氢酶)0.001-1份，蒸馏水1000份，ph为7.0-7.4。优选地，一种热损伤沙门氏菌培养基，以质量份数计，其原料配方组成为：蛋白胨5-13份，葡萄糖3-8份，牛胆盐8-25份，磷酸氢二钠5-13份，磷酸二氢钾1-8份，煌绿0.01-0.8份，3，3-硫代二丙酸(tdpa)0.5-8份，氯化镁0.05-4份，丙酮酸钠0.1-13份，catalase0.005-0.8份，蒸馏水1000份，ph为7.0-7.4。在一个实施方案中，所述一种热损伤沙门氏菌培养基，以质量份数计，其原料配方由以下成分组成：蛋白胨10份，葡萄糖5份，牛胆盐20份，磷酸氢二钾8份，磷酸二氢钾2份，煌绿0.015份，3，3-硫代二丙酸(tdpa)0.3份，mgcl2.6h2o0.5份，丙酮酸钠4.3份，catalase0.01份。本发明另一方面还提供一种热损伤沙门氏菌培养基的制备方法，其包括：(1)按照比例将蛋白胨，葡萄糖，牛胆盐，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，煌绿，3，3-硫代二丙酸(tdpa)，丙酮酸钠，加入到蒸馏水中，加热溶解；(2)冷却至室温后，先用10mol/lnaoh后用1mol/lnaoh调节ph至7.0-7.4；(3)115℃高压灭菌20min；(4)将氯化镁和catalase溶解于少量蒸馏水中，过滤除菌后加入高压灭菌后冷却至室温的培养基中。相对于现有的技术，本发明具有以下优点：1、本发明通过对各种配方及其含量进行选择，最终确定选择蛋白胨，葡萄糖为细菌生长提供必须的碳源，氮源，维生素，生长因子等营养成分，配伍一定量的牛胆盐，煌绿，可抑制革兰氏阳性菌及部分革兰氏阴性菌。采用适量的磷酸氢二钠和磷酸二氢钾作为缓冲剂维持培养基的ph为7.0-7.4。2、采用3，3-硫代二丙酸(tdpa)作为抗氧化剂，主要清除代谢过程中产生的自由基，阻止了oh-对损伤细菌的毒害作用。本发明发现4份以上的丙酮酸钠对修复损伤沙门氏菌有显著效果；而加入少量氯化镁能补偿亚致死状态沙门氏菌代谢酶系统的金属离子的流失，配合催化量的catalase进一步分解了沙门氏菌代谢过程产生的h2o2。3.本发明通过对配方组分和含量进行调配最终获得一种可快速修复富集食品中热损伤沙门氏菌的液体增菌培养基，其生长效果好，修复效率高。将经热处理后致死率99.99％的沙门氏菌分别接种至营养肉汤、改良ec肉汤、ec肉汤、肠道菌增菌肉汤、志贺氏菌增菌肉汤、缓冲蛋白胨水、bhi肉汤和本发明培养基中，结果发现本发明培养基的增菌速度和修复效果明显优于其他培养基。4.具有较好的选择性。本发明培养基最适培养温度为42℃±1℃，该温度下该培养基能较好地抑制革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌以及杂菌。5.降低漏检率。将热处理后致死率99.99％的沙门氏菌分别接种至缓冲蛋白胨水、bhi肉汤和本发明培养基中，结果发现按gb4789.4-2016方法本发明培养基能检测出沙门氏菌，而缓冲蛋白胨水中检测不出沙门氏菌。具体实施方式为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施例的内容并非对本发明的限定。本发明所用的原料和试剂均可以从商业途径购买获得。以下实施例1g代表1份。实施例一称取蛋白胨10.0g，葡萄糖5.0g，牛胆盐20.0g，磷酸氢二钾8.0g，磷酸二氢钾2.0g，煌绿0.015g，3，3-硫代二丙酸(tdpa)4.6g，mgcl2.6h2o0.01g，丙酮酸钠0.02g，catalase0.01g，蒸馏水1000ml。将蛋白胨，葡萄糖，牛胆盐，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，煌绿，3，3-硫代二丙酸(tdpa)，丙酮酸钠加入到蒸馏水中加热溶解，冷却至室温后，先用10mol/lnaoh后用1mol/lnaoh调节ph至7.0-7.4，115℃高压灭菌20min，常温下保存，临用前分别用5ml无菌水溶解mgcl2.6h2o和catalase，过滤除菌后加入灭菌后的培养基中混匀。实施例二称取蛋白胨10.0g，葡萄糖5.0g，牛胆盐20.0g，磷酸氢二钾8.0g，磷酸二氢钾2.0g，煌绿0.015g，3，3-硫代二丙酸(tdpa)0.3g，mgcl2.6h2o0.5g，丙酮酸钠0.02g，catalase0.01g，蒸馏水1000ml。将蛋白胨，葡萄糖，牛胆盐，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，煌绿，3，3-硫代二丙酸(tdpa)，丙酮酸钠加入到蒸馏水中加热溶解，冷却至室温后，用1mol/lnaoh调节ph至7.0-7.4，115℃高压灭菌20min，常温下保存，临用前分别用5ml无菌水溶解mgcl2.6h2o和catalase，过滤除菌后加入灭菌后的培养基中混匀。实施例三称取蛋白胨10.0g，葡萄糖5.0g，牛胆盐20.0g，磷酸氢二钾8.0g，磷酸二氢钾2.0g，煌绿0.015g，3，3-硫代二丙酸(tdpa)0.3g，mgcl2.6h2o0.01g，丙酮酸钠11.2g，catalase0.01g，蒸馏水1000ml。将蛋白胨，葡萄糖，牛胆盐，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，煌绿，3，3-硫代二丙酸(tdpa)，丙酮酸钠加入到蒸馏水中加热溶解，冷却至室温后，用1mol/lnaoh调节ph至7.0-7.4，115℃高压灭菌20min，常温下保存，临用前分别用5ml无菌水溶解mgcl2.6h2o和catalase，过滤除菌后加入灭菌后的培养基中混匀。实施例4称取蛋白胨10.0g，葡萄糖5.0g，牛胆盐20.0g，磷酸氢二钾8.0g，磷酸二氢钾2.0g，煌绿0.015g，3，3-硫代二丙酸(tdpa)0.3g，mgcl2.6h2o0.01g，丙酮酸钠0.02g，catalase0.153g，蒸馏水1000ml。将蛋白胨，葡萄糖，牛胆盐，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，煌绿，3，3-硫代二丙酸(tdpa)，丙酮酸钠加入到蒸馏水中加热溶解，冷却至室温后，用1mol/lnaoh调节ph至7.0-7.4，115℃高压灭菌20min，常温下保存，临用前分别用5ml无菌水溶解mgcl2.6h2o和catalase，过滤除菌后加入灭菌后的培养基中混匀。实施例五称取蛋白胨10.0g，葡萄糖5.0g，牛胆盐20.0g，磷酸氢二钾8.0g，磷酸二氢钾2.0g，煌绿0.015g，3，3-硫代二丙酸(tdpa)0.3g，mgcl2.6h2o0.5g，丙酮酸钠4.3g，catalase0.01g，蒸馏水1000ml。将蛋白胨，葡萄糖，牛胆盐，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，煌绿，3，3-硫代二丙酸(tdpa)，丙酮酸钠加入到蒸馏水中加热溶解，冷却至室温后，用1mol/lnaoh调节ph至7.0-7.4，115℃高压灭菌20min，常温下保存，临用前分别用5ml无菌水溶解mgcl2.6h2o和catalase，过滤除菌后加入灭菌后的培养基中混匀。实施例六将热致死率99.99％的沙门氏菌分别接种至缓冲蛋白胨水、bhi肉汤和本发明培养基中，并按照gb4789.4-2016食品安全国家标准沙门氏菌检验方法进行检测。测试例一至五用生理盐水配置1mfc浓度的沙门氏菌菌悬液，并将菌悬液在60℃下水浴5min后冷却待用，热致死率为99.99％。分别取10ml热处理后的1mfc浓度的菌悬液分别添加到90ml肠道菌增菌肉汤、bhi肉汤、营养肉汤、志贺肉汤、mec肉汤、ec肉汤、bpw肉汤和90ml本发明培养基中，于42℃±1℃下培养，每2h测一次麦氏浓度，观察热损伤沙门氏菌的修复情况，记录最快达到3.0m浓度的数据。2h4h6h7h测试例一00.161.864.2测试例二00.183.988.2测试例三00.162.986.50测试例四00.171.904.50测试例五00.636.2010.8肠道菌增菌肉汤00.151.803.81bhi肉汤00.455.36.2营养肉汤00.511.992.65志贺肉汤00.222.162.71mec肉汤00.201.571.79ec肉汤00.161.111.13bpw肉汤00.250.430.60由表可见，测试例五的增菌效果最好，增菌效果是测试例五＞测试例二＞测试例三＞测试例四＞测试例一＞肠道菌增菌肉汤＞志贺肉汤＞营养肉汤＞mec肉汤＞ec肉汤＞bpw肉汤。测试例六取在bhi肉汤中培养18h的新鲜沙门氏菌菌悬液0.4ml，加入9ml生理盐水管中混匀，稀释10倍后60℃下水浴5min后冷却，并重复一次60℃下水浴5min后冷却备用。以此热处理后的菌液为原液，进行10倍稀释后分别按照gb4789.4-2016食品安全国家标准沙门氏菌检验方法进行检测。沙门氏菌在tsa上的平板计数结果热处理沙门氏菌的检测结果由表可见，对于含量极少且损伤严重的沙门氏菌，bpw可能会出现漏检情况，而本发明培养基的修复能力较好，降低了漏检率。当前第1页12